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鉴别JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT-LAMP检测方法的建立

鉴别JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT-LAMP检测方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：周玉鹏刘洪明冯瑶张亮袁磊曹三杰伍锐文心田黄小波文翼平四川农业大学动物医学院猪病研究中心

引言流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种媒蚊性人兽共患传染病。JEV分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型,我国流行的主要基因型为Ⅰ型和Ⅲ型。本研究建立了JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型特异... 详细信息

引言流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种媒蚊性人兽共患传染病。JEV分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型,我国流行的主要基因型为Ⅰ型和Ⅲ型。本研究建立了JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型特异性RT-LAMP检测方法,能够快速达到对JEV的检测及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别。材料与方法分别设计1套JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型特异性RT-LAMP引物并分别以基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV毒株抽提的RNA为模板,将扩增出的目的片段并克隆至pGEM T-Easy Vector,对得到的重组质粒进行线性化处理,命名为GⅠ-cRNA和GⅢ-cRNA。以GⅠ-cRNA和GⅢ-cRNA为模版与上述引物通过对不同反应条件的不断优化,确定最佳的反应条件,初步建立JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型RT-LAMP检测方法并分别命名为GⅠ-RT-LAMP和GⅢ-RT-LAMP方法。再对该方法的特异性、灵敏性、稳定性和重复性进行验证。结果与讨论通过对引物浓度、dNTP、Mg、Betaine和Bst DNA聚合酶的浓度优化,分别确定了GⅠ-RT-LAMP和GⅢ-RT-LAMP方法的最佳反应体系。以此最佳反应体系进行的特异性试验结果显示,GⅠ-RT-LAMP和GⅢ-RT-LAMP反应分别只能扩增只能扩增基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV毒株RNA,电泳呈明显的梯状条带。在灵敏性检测实验中确定了RT-LAMP-GⅠ和RT-LAMP-GⅢ的最低检出限均为24 copies。经对6份已确定基因型乙脑病毒的3次重复检测,本研究建立的乙脑基因Ⅰ型和Ⅲ型特异性RT-LAMP检测方法检测结果均一致,表明本研究建立的方法是稳定可靠的。本方法的建立为JEV的流行病学调查等提供了一种操作简单、快速、准确的方法,具有良好的应用前景。

关键词：基因Ⅲ型特异性基因Ⅰ型 JEV 检测方法 RT-LAMP

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广西伪狂犬病毒流行株的分离鉴定及遗传变异分析

广西伪狂犬病毒流行株的分离鉴定及遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：林俊陈冰覃绍敏曹颖颖刘金凤石永胜白安斌赵武吴健敏广西兽医研究所北海市动物疫病预防控制中心

引言 2011年以来,我国各省先后暴发伪狂犬病（AD）疫情,特别是许多已免疫了伪狂犬病毒（PRV）疫苗的猪场仍然发生疫情,提示当前流行的PRV在病原性上发生了新的变化。本研究对采集自广西某猪场疑似PRV感染的动物的样品进行病毒分离鉴定... 详细信息

引言 2011年以来,我国各省先后暴发伪狂犬病（AD）疫情,特别是许多已免疫了伪狂犬病毒（PRV）疫苗的猪场仍然发生疫情,提示当前流行的PRV在病原性上发生了新的变化。本研究对采集自广西某猪场疑似PRV感染的动物的样品进行病毒分离鉴定和序列分析,为广西PRV新流行毒株的防控提供有益参考。材料与方法采集广西北海发生疑似AD疫情猪场的犬和猪样品,进行动物接种试验及病毒分离。对分离毒进行PCR鉴定及电镜观察。参照文献方法扩增PRV gE和gC基因,克隆测序后进行遗传进化分析。结果与讨论本研究成功分离到2株PRV毒株,分别命名为GXBH1（犬源）和GXBH2（猪源）。病毒滴度分别为10TCID50/0.1 mL和10TCID50/0.1 mL。2株分离毒与GenBank上登录的参考毒株gE和gC基因核苷酸序列同源性为97.4～100%和91.3～99.8%;氨基酸序列同源性为95.1～100%和86.6～99.5%。进化分析显示,2株分离毒与国内不同时期的毒株在进化树上共同构成一个进化分支,与欧洲和美洲的毒株亲缘关系较远。2株分离毒在gE蛋白第58位和第495位氨基酸附近均插入了1个天冬氨酸残基（D）,但决定毒力的关键位点第125-126位（VC）未发生突变;2株分离毒gC蛋白在59-69位之间出现一个高变区,导致抗原-抗体结合区域位置后移,并且结合域序列也出现了多处的变异,提示与Bartha株相比,2株分离毒gC蛋白的免疫原性可能发生了改变。基于gE蛋白与gC蛋白的分析,虽然与国外毒株（Rice和Bartha）相比存在多个氨基酸位点的变异,但是国内不同年代的毒株变异情况基本一致。结论本研究分离到2株PRV,通过遗传进化分析发现,2株分离毒与中国境内的PRV一起形成了一个独立的进化群。

关键词：伪狂犬病毒 PRV 变异分析流行株分离鉴定

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Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制

Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘捷张旭亮马畅尤金炜董敏陈莉恽时锋中国人民解放军南京军区南京总医院比较医学科(实验动物中心)

引言猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype 2,PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应... 详细信息

引言猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype 2,PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应（heat shock response,HSR）,诱导一系列热休克蛋白表达,进而保证病毒基因组复制、病毒蛋白合成及子代病毒组装等。本研究拟通过Hsp90基因过表达和RNA干扰,明确其对PCV2复制的影响及其与PCV2Cap、Rep蛋白的相互作用关系。材料与方法采用Hsp90抑制剂处理细胞,观察其对PCV2在PK-15细胞中复制的影响;分别设计Hsp90过表达质粒和siRNA干扰片段,转染细胞后经定量检测,明确Hsp90在PCV2复制过程中的作用;通过激光共聚焦试验探究Hsp90与病毒Cap、Rep蛋白的细胞定位变化。结果与讨论前期通过iTRAQ定量蛋白组技术结合质谱分析,发现了PCV2感染PK-15细胞过程中,有一系列细胞蛋白表达量发生了显著变化,其中包括Hsp90、Hsp70和Hsp27等,提示这类蛋白可能参与了病毒的感染和复制。本研究首先采用Hsp90特异性抑制剂处理细胞,western blot和TCID检测发现PCV2在细胞中的复制滴度明显下降;同时定量PCR检测显示,特异性抑制剂并非影响病毒侵入细胞这一初始阶段。利用重组真核质粒在PK-15细胞中过量表达Hsp90,可以促进PCV2的复制,相反,使用特异性siRNA干扰细胞中内源性Hsp90,可以抑制PCV2的复制。激光共聚焦试验结果显示,与对照组相比,病毒感染组细胞内的Hsp90β蛋白会在核内呈颗粒状聚集。这些结果表明Hsp90这一伴侣蛋白在PCV2的复制过程中起了重要作用,本研究对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。

关键词：猪肾细胞 PK-15 Hsp90

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猪支原体肺炎活疫苗佐剂及肌肉注射免疫效力研究

猪支原体肺炎活疫苗佐剂及肌肉注射免疫效力研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：熊祺琰王佳韦艳娜冯志新甘源马庆红华利忠刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

目的猪支原体肺炎是危害世界养猪业的重要疾病之一,疫苗接种是控制该病的最有效手段。猪支原体肺炎168株活疫苗通过肺内免疫接种可高效控制该病的发生。本研究旨在研制猪支原体肺炎活疫苗的免疫佐剂,开发该活疫苗的肌肉注射免疫新途径... 详细信息

目的猪支原体肺炎是危害世界养猪业的重要疾病之一,疫苗接种是控制该病的最有效手段。猪支原体肺炎168株活疫苗通过肺内免疫接种可高效控制该病的发生。本研究旨在研制猪支原体肺炎活疫苗的免疫佐剂,开发该活疫苗的肌肉注射免疫新途径。材料与方法根据疾病及疫苗特点,遴选不同佐剂成分,设计配方,通过体外共同孵育检测自制佐剂对活疫苗的毒性,选择对活疫苗活力无明显影响的佐剂与疫苗一同肌肉注射免疫小鼠,评价细胞及体液免疫水平,选择效果较好的佐剂配合疫苗免疫实验猪,通过细胞、黏膜及体液免疫检测和强毒攻击试验,评价疫苗的免疫保护效力。结果与讨论体外孵育试验结果显示皂角素、油包水佐剂等对支原体活疫苗有较强毒性,遴选其他无明显毒性的佐剂成分制备不同配方佐剂,再次筛选获得无活疫苗毒性的佐剂配方6个。免疫小鼠后发现佐剂A和D可显著提高活疫苗免疫后的血清IgG抗体水平,佐剂A,C和E可显著提高淋巴细胞的特异性增殖能力。在本动物上评价佐剂A、C、D、E配合活疫苗肌肉注射的免疫效果,结果显示佐剂A和C组淋巴细胞增殖应答明显,佐剂C和D组攻毒前血清IgG抗体水平有显著升高,攻毒后所有免疫组抗体均高于未免疫组。各免疫组免疫后在鼻腔及口腔拭子中未检测到明显的SIgA抗体。攻毒后28天剖检,佐剂A和C组动物肺脏病变评分显著低于攻毒对照组。结论本研究结果提示通过遴选合适的佐剂配合168株活疫苗肌肉注射免疫可有效预防猪支原体肺炎,研究数据为猪支原体肺炎活疫苗佐剂及肌肉注射免疫产品的研制提供参考。

关键词：猪支原体肺炎活疫苗免疫效力肌肉注射

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血清1型和3型鸭甲型肝炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立

血清1型和3型鸭甲型肝炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李化东黄显明卢凤英丁美娟张小飞安徽农业大学动物科技学院南京天邦生物科技有限公司

引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3... 详细信息

引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3）引起的鸭肝炎又成为制约我国养鸭生产新的严峻问题。本研究建立的同时检测DHAV-1和DHAV-3二重RT-PCR方法,为临床诊断和检测DHAV-1和DHAV-3感染提供了快速适用的技术手段。材料与方法根据DHAV的基因文库,设计2对特异性引物,建立血清1型和血清3型的双重RT-PCR检测方法,运用此双重RT-PCR方法对2013年8月014年6月,采集于华东部分地区（山东、江苏和安徽）鸭场疑似鸭肝炎的11份肝脏病料进行检测。并同时对上述病料采用抗DHAV-1、DHAV-3单因子血清对分离病毒进行鸭胚中和试验进行病毒鉴定结果通过引物浓度,模板浓度,以及退火温度等试验条件优化,建立了血清1型和血清3型的双重PCR检测方法。运用该方法对11份疑似鸭肝炎病料进行检测,试验结果表明,构建的DHAV二重RT-PCR检测方法与病毒分离鉴定结果具有高度一致性。讨论近年来随着DHAV-3的出现,使DHAV-1和DHAV-3在部分地区的共流行,而且它们的流行病学、临床症状、病理变化极其相似,这些都给国内鸭甲型肝炎的预防和诊断带来了困难,因此建立一种能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR的检测方法具有重要意义,本研究建立的DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR方法,具有良好的特异性和较高的敏感度,可以直接用于临床样品的检测和流行病学调查,为临床上鸭肝炎的鉴别诊断和病原检测提供了快速适用的手段。

关键词：鸭甲型肝炎病毒 RT-PCR 检测方法

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宿主细胞内的小G蛋白Rab1通过与布菌效应蛋白DnaK结合调节布菌在细胞内的早期生长

宿主细胞内的小G蛋白Rab1通过与布菌效应蛋白DnaK结合调节布菌在...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：魏盼王琳孙长江崔桂梅孙万春彭其胜吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室

引言布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)被列为我国法定传染病中的乙类传染病之首,是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体后引起的传染-变态反应性人兽共患细菌病。布鲁氏菌是典型的胞内生存菌,可以在细胞内生存和增殖,这是其致病的关键原因。... 详细信息

引言布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)被列为我国法定传染病中的乙类传染病之首,是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体后引起的传染-变态反应性人兽共患细菌病。布鲁氏菌是典型的胞内生存菌,可以在细胞内生存和增殖,这是其致病的关键原因。虽然国内外进行了许多布鲁氏菌胞内生存机制方面的研究,但是有关布鲁氏菌如何利用其Ⅳ分泌系统分泌的效应蛋白寄生宿主细胞,目前尚不清楚。本研究尝试以宿主细胞小G蛋白Rab1为靶蛋白,筛选出与Rab1互作的Ⅳ型分泌系统分泌的效应蛋白,研究其在调节布鲁氏菌胞内生长中的作用。材料与方法(1)构建GST-Rab1、GST-Rab1(S25N)、GST-Rab1(Q70L)融合蛋白,SDS-PAGE,银染,质谱分析。(2)免疫共沉淀、Western blotting、激光共聚焦及Ⅳ分泌系统分泌验证实验。(3)布菌(*** strain 2308)感染宿主细胞后CFU检测及用慢病毒感染构建Rab1沉默稳转细胞系。结论(1)通过将宿主细胞内的Rab1基因沉默或在宿主细胞内过表达Rab1(S25N)、Rab1、Rab1(Q70L)证明宿主细胞Rab1蛋白促进布菌在胞内的生长。(2)通过GST pull-down实验,分析差异蛋白,然后对其进行质谱分析,鉴定出该差异蛋白为DnaK,(3)共转染DnaK和Rab1于293T细胞,通过免疫共沉淀实验,确定布菌热休克蛋白DnaK与宿主细胞Rab1蛋白特异结合。(4)通过激光共聚焦及Ⅳ分泌系统分泌实验即构建DnaK-CyaA融合蛋白检测宿主细胞内cAMP变化,证明DnaK蛋白为Ⅳ分泌系统分泌的效应蛋白。(5)通过感染布菌后检测细胞内布菌数(即CFU实验)证明宿主细胞Rab1蛋白通过募集布菌热休克蛋白DnaK至布鲁氏菌菌泡(BCV,Brucella-Containing Vacuole)调节布菌在细胞内的早期生长。

关键词：宿主细胞热休克蛋白分泌系统效应蛋白早期生长

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副猪嗜血杆菌分型血清的制备及在病原流行病学调查中的应用

副猪嗜血杆菌分型血清的制备及在病原流行病学调查中的应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：代军刘君黄倩柳瑶周鹏黄毅谭晓婷范小兵文心田文翼平曹三杰黄小波伍锐四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川农业大学人兽共患病与猪病防治研究中心

引言从澳大利亚昆士兰州动物研究所提供副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)15个血清型的标准菌株制备免疫原,通过皮下注射与耳缘静脉注射两种途径免疫2kg左右的健康雄性家兔,免疫结束后心脏采集血液、分离血清,对血清进行特异性与... 详细信息

引言从澳大利亚昆士兰州动物研究所提供副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)15个血清型的标准菌株制备免疫原,通过皮下注射与耳缘静脉注射两种途径免疫2kg左右的健康雄性家兔,免疫结束后心脏采集血液、分离血清,对血清进行特异性与抗体效价检测,15个血清型的分型血清均可用于HPS分离菌株的血清型鉴定。材料与方法家兔免疫程序分为诱导免疫、基础免疫、加强免疫三个部分,按照以上免疫程序每个血清型免疫健康雄性家兔2只。分别将2014年各地分的HPS进行TSA培养,制成热稳定抗原。按照徐引弟等介绍的方法进行琼脂平板的制备,琼脂平板中间孔加入各菌株的分型抗原,周围孔加入HPS各血清型的标准阳性血清并做好对照。37℃培养,以抗原与抗体孔之间出现清晰白色沉淀线为阳性,反之为阴性。结果与讨论HPS田间分离株共80株,琼脂扩散试验结果表明:4型有23株,5型28株,12型5株,13型6株,15型l株,不能分型菌株17株,其它血清型未发现,分型结果表明在四川地区主要流行血清4型、5型、12型、13型,其中血清4型和5型为HPS的优势血清型。琼脂扩散试验结果表明,在四川地区以血清4型(28.750%)、5型(35%)及未定型血清型(21.25%)最为流行,而血清12型(6.25%)、13型(7.5%)、15型(1.25%)次之,分型结果与储岳峰报道略有不同(62株HPS中:5型占22.5%、4型占16.1%、12型占14.5%、不能分型的菌株占16.2%),与日本、美国、德国、西班牙等国家HPS血清型流行规律基本相似(血清型4、5和13最为流行,另有20%以上的分离株不可定型)。

关键词：副猪嗜血杆菌免疫程序流行病学调查琼脂平板

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重组乳酸杆菌在黏膜免疫中的研究进展

重组乳酸杆菌在黏膜免疫中的研究进展

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：陈瑞玲邓颖琦钟颖丛彦龙吉林大学动物医学学院

黏膜是机体抵抗感染的首道防线,因此通过黏膜途径诱发免疫应答以抵御病原感染一直是研究的热点。乳酸杆菌定植在黏膜区域,可以维持微生态系统平衡,具有耐酸碱和诱发抗原特异性分泌性IgA的能力。作为安全等级的微生物(Generally regarded... 详细信息

黏膜是机体抵抗感染的首道防线,因此通过黏膜途径诱发免疫应答以抵御病原感染一直是研究的热点。乳酸杆菌定植在黏膜区域,可以维持微生态系统平衡,具有耐酸碱和诱发抗原特异性分泌性IgA的能力。作为安全等级的微生物(Generally regarded as safe,GRAS)已被广泛用于食品发酵、医药生产、保健药物及饲料添加剂等行业。此外,工程化的乳酸杆菌可以表达蛋白质和其他分子等突出优势,非常适合作为外源蛋白或药物的递呈工具。随着对乳酸杆菌的分子遗传背景及其如何表达外源分子的深入认识,重组乳酸杆菌在防治感染性疾病、治疗Ⅰ型过敏性疾病、自身免疫疾病或其它免疫抑制病等方面已表现出诸多优势。目前利用重组乳酸菌已表达多种病毒抗原,如禽流感H5N1亚型病毒结构蛋白、禽传染性法氏囊病毒VP2蛋白、SARS病毒结构蛋白、轮状病毒VP7和VP8蛋白、猪圆环病毒2型核衣壳蛋白,且体内试验结果显示能够诱导产生特异的体液免疫与细胞免疫,从而增强动物抵抗病原微生物感染的能力。然而重组乳酸杆菌制剂在商品化之前还有许多亟需解决的问题:(1)多数乳酸菌表达载体选择抗性基因作为标记,在应用上存在一定的安全隐患;(2)在动物模型上,尽管重组乳酸菌能够诱导产生特异的免疫应答,达到很好的免疫效果,但是其免疫机制尚未阐明;(3)免疫后,诱导型重组乳酸菌因机体内没有相应的诱导物质而导致增殖的乳酸菌不能继续表达抗原,致使疫苗发挥作用时间不够。总之,随着对重组乳酸杆菌表达系统、免疫机制研究的不断深入,重组乳酸菌将成为黏膜疫苗的有力工具,具有巨大的应用前景和商业潜力。因此,本研究团队从黏膜途径入手,利用乳酸菌作为黏膜疫苗载体的诸多优势,以禽流感为研究靶点,成功构建了靶向树突状细胞的抗H9N2亚型禽流感病毒的重组乳酸菌,为今后探讨黏膜组织DC启动和调控黏膜免疫应答的机制及研制口服DC靶向抗禽流感疫苗提供基础。

关键词：重组乳酸杆菌乳酸菌黏膜免疫

来源：评论

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新城疫强、弱毒感染诱导禽肺泡巨噬细胞极化分型的差异

新城疫强、弱毒感染诱导禽肺泡巨噬细胞极化分型的差异

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张平仄谢光耀艾立丽徐荣易丁壮尹仁福吉林大学动物医学学院

引言/目的新城疫病毒强毒株感染和弱毒疫苗株接种的主要途径是呼吸道感染,肺泡巨噬细胞是肺脏与外界的第一道防线,从而新城疫病毒与肺泡巨噬细胞之间的相互作用成为病毒感染的关键点。前期研究发现肺泡巨噬细胞的极化分型在急性肺炎进... 详细信息

引言/目的新城疫病毒强毒株感染和弱毒疫苗株接种的主要途径是呼吸道感染,肺泡巨噬细胞是肺脏与外界的第一道防线,从而新城疫病毒与肺泡巨噬细胞之间的相互作用成为病毒感染的关键点。前期研究发现肺泡巨噬细胞的极化分型在急性肺炎进程中发挥重要作用,因此,研究不同毒力新城疫感染肺泡巨噬细胞极化分型的差异及机制,将为阐明不同独立新城疫病毒的感染机制和提高弱毒疫苗免疫效果提供理论支持。材料和方法以MOI=0.1剂量的新城疫强鹅源毒株NA-1和传统弱毒疫苗株LaSota分别感染鸡HD11巨噬细胞,并设培养基对照组。分别于2、8、24、48 hours post infection(hpi)后分别提取细胞总RNA;最后采用实时荧光定量PCR方法检测各个时间点巨噬细胞极化的标志性基因水平。结果与讨论感染8h后,强毒组中iNOS等M1相关标志明显高于弱毒组和对照组:感染24h后强毒组中这些M1相关标志的表达水平逐渐降低,但弱毒组则出现缓慢上升的趋势。而感染24h后,无论是强毒组还是弱毒组和对照组,Ym1等M2相关标记的表达水平均呈现升高的趋势,但强毒组的表达水平远高于弱毒组和对照组。结论导致强毒NDV高致死率的一部分原因可能是由强毒NDV引起肺泡巨噬细胞呈现明显且持续时间长的M1极化特点而产生的强烈的炎性细胞因子风暴。而弱毒组在感染24h后才出现较为明显的M1极化特点,促炎性因子的水平缓慢升高,可控的炎性因子水平对对抗病毒的感染发挥了积极的作用。

关键词：弱毒感染肺泡巨噬细胞新城疫弱毒疫苗株巨噬细胞极化

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2012-2014年安徽地区不同规模猪场PR野毒感染血清学调查

2012-2014年安徽地区不同规模猪场PR野毒感染血清学调查

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄晓慧储霞飞李郁孙裴魏建忠安徽农业大学动物科技学院

引言猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种高度接触性传染病,可引起种猪繁殖障碍,仔猪呼吸道综合征、神经症状、腹泻、生长发育受阻等主要症状,同时PRV也是引起猪呼吸系统疾病综合征的重... 详细信息

引言猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种高度接触性传染病,可引起种猪繁殖障碍,仔猪呼吸道综合征、神经症状、腹泻、生长发育受阻等主要症状,同时PRV也是引起猪呼吸系统疾病综合征的重要原发性病原之一。目前,我国主要应用基因缺失苗（如gE缺失苗）进行免疫预防,因此与之相配套的gE-ELISA鉴别诊断试剂盒能够快速、准确检测PR野毒抗体,从而将免疫动物和感染动物区分开来。本试验系采用阻断ELISA方法进行PR血清学调查,旨在了解在现有防控体系下安徽地区不同规模猪场PR野毒感染情况,为有效控制和净化PR提供科学依据。材料与方法血清样品来源于2012年8月014年11月安徽地区合肥、蚌埠、六安等16个市156个不同规模猪场不同批次送检的7039份血清。PRV gE抗体检测试剂盒购自IDEXX公司,并按照使用说明书操作。结果与讨论结果显示,PR野毒抗体阳性猪场61个,占检测猪场总数的39.10%;各猪场送检血清样品PR野毒抗体平均阳性率为7.10%;其中以皖北地区PR野毒抗体阳性率较高。PR野毒感染阳性率呈逐年升高趋势。母猪和育肥猪的PR野毒抗体阳性率较高,分别为27.19%和24.60%。小规模猪场及散养户的PR野毒感染率显著高于中大型规模猪场。结果表明,PR野毒感染在安徽地区猪场中普遍存在,且日趋严重,不同地区、不同规模猪场、不同生长阶段猪群PR野毒感染阳性率存在较大差异,种猪带毒率高是PR野毒感染持续存在的重要原因。使用优质gE基因缺失苗强化免疫仍然是控制和净化PR的重要措施。

关键词：野毒感染抗体阳性率不同规模安徽地区

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