引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatits A virus,DHAV-1)引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3...
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引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatits A virus,DHAV-1)引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)引起的鸭肝炎又成为制约我国养鸭生产新的严峻问题。本研究建立的同时检测DHAV-1和DHAV-3二重RT-PCR方法,为临床诊断和检测DHAV-1和DHAV-3感染提供了快速适用的技术手段。材料与方法根据DHAV的基因文库,设计2对特异性引物,建立血清1型和血清3型的双重RT-PCR检测方法,运用此双重RT-PCR方法对2013年8月014年6月,采集于华东部分地区(山东、江苏和安徽)鸭场疑似鸭肝炎的11份肝脏病料进行检测。并同时对上述病料采用抗DHAV-1、DHAV-3单因子血清对分离病毒进行鸭胚中和试验进行病毒鉴定结果通过引物浓度,模板浓度,以及退火温度等试验条件优化,建立了血清1型和血清3型的双重PCR检测方法。运用该方法对11份疑似鸭肝炎病料进行检测,试验结果表明,构建的DHAV二重RT-PCR检测方法与病毒分离鉴定结果具有高度一致性。讨论近年来随着DHAV-3的出现,使DHAV-1和DHAV-3在部分地区的共流行,而且它们的流行病学、临床症状、病理变化极其相似,这些都给国内鸭甲型肝炎的预防和诊断带来了困难,因此建立一种能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR的检测方法具有重要意义,本研究建立的DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR方法,具有良好的特异性和较高的敏感度,可以直接用于临床样品的检测和流行病学调查,为临床上鸭肝炎的鉴别诊断和病原检测提供了快速适用的手段。
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