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鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株减毒机制的初步研究

鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株减毒机制的初步研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张春杰陈松彪程相朝余祖华何雷郁川廖成水贾艳艳河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室

引言鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhmurium)是具有广泛的宿主,是目前世界各国分离率最高的菌型之一。该菌能引起各种哺乳动物以及人类发生全身性感染,具有重要的公共卫生意义。本研究以鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株为研究对象进行... 详细信息

引言鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhmurium)是具有广泛的宿主,是目前世界各国分离率最高的菌型之一。该菌能引起各种哺乳动物以及人类发生全身性感染,具有重要的公共卫生意义。本研究以鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株为研究对象进行生物学特性的检测,进一步对cya基因缺失株的减毒机制进行初步研究。材料与方法本研究以鼠伤寒沙门菌亲本菌株SL1344以及cya基因缺失株为研究对象,对亲本菌株和cya缺失株进行耐酸碱性、耐盐性、运动性、生物生物被膜主要成分以及黏附和入侵等生物学特性的测定。结果与讨论耐酸碱性以及耐盐性结果表明:cya基因缺失后其对酸碱性以及盐的耐受性较亲本菌株相比均发生了下降,有研究表明鼠伤寒沙门菌sipB基因缺失后会影响其细胞膜的耐高渗能力,由此笔者猜测cya基因可能与sipB基因存在调控关系,所以该基因缺失后会影响sipB基因的表达。cya基因缺失株的运动型试验结果表明该基因缺失后细菌失去了运动能力,这与Javie等构建的爱德华菌的crp基因缺失株的结果相一致,说明crp和cya基因缺失后可能会影响细菌的鞭毛的形成,一旦鞭毛的形成受阻势必会影响细菌的运动。生物被膜的主要成分为卷曲菌毛和纤维素,在本试验中cya缺失菌株的生物被膜主要成份测定表明:该基因缺失后影响菌毛和纤维素的表达,故缺失菌株在刚果红平板上呈现白色光滑的菌落形态,从而有可能影响其生物被膜的形成,从而影响其的毒力,这与本实验室的前期出现的结果相一致,即cya基因缺失株可能是通过影响生物被膜的形成从而达到减毒的目的,紧接着我们又进行了该基因缺失株对上皮细胞的黏附和侵入试验,发现cya基因缺失后会影响其对上皮细胞的黏附和入侵能力,从而达到减毒的目的。

关键词：基因缺失株 SL1344 cya 减毒机制鼠伤寒沙门菌初步研究

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猪伪狂犬病毒2013年广东株的分离及gB基因序列分析

猪伪狂犬病毒2013年广东株的分离及gB基因序列分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄元罗振南陈晶赵翠玲王晓虎黄忠向华广东省农业科学院动物卫生研究所广东省兽医公共卫生公共实验室华中农业大学动物医学学院

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种重要动物传染病。2011年以来,我国多个的省份暴发了猪伪狂犬病。临床发病情况表明,在免疫Bartha-K61的区域大面积发生猪伪狂犬病。这提示病毒的抗原性已经... 详细信息

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种重要动物传染病。2011年以来,我国多个的省份暴发了猪伪狂犬病。临床发病情况表明,在免疫Bartha-K61的区域大面积发生猪伪狂犬病。这提示病毒的抗原性已经发生了改变。材料与方法本研究分离了2013年广东流行的3株猪伪狂犬病毒,对其gB基因进行了序列测定。取来自伪狂犬病发病猪场的46份血清(用ELISA检测gE抗体全部阳性),分别用广东2013毒株Heyuan2013、鄂A株和Batha株进行抗体中和试验。结果与讨论核苷酸序列分析表明,2013年广东流行毒株相互之间gB基因核苷酸序列相似性为99.7-100%,而与疫苗株Batha-K61相似性在97.8-98.0%。这表明2013年这几处流行均为同一毒株造成。氨基酸序列比对结果表明,gB基因氨基酸序列与传统疫苗株Bartha-K61相比,已有巨大的差异,尤其是在gB基因的N端,总计有17个氨基酸的变异,其中包括3个氨基酸的缺失,1个氨基酸的插入和15个氨基酸的替换。这17个氨基酸的变异均发生在gB基因的N端,在gB蛋白的第一个抗原表位处。抗体中和试验表明,用3个毒株测得的中和抗体效价呈显著的差异,河源野毒株>鄂A株>Bartha。这表明三个毒株的血清学特性已经有了显著的差异,三种毒株的抗原性已经发生了显著的变化。其中,疫苗株Batha与鄂A株之间的差异较小,而广东流行毒株Heyuan-2013与其余两株之间的差异较大。结论 2013年广东流行毒株与Batha疫苗株相比,gB基因发生了17个氨基酸的巨大变异;流行毒与疫苗株鄂A株及Bartha株的血清学特性已经发生了显著变化:gB基因的变异可能是产生血清学变化的原因之一。

关键词：伪狂犬病毒分离鉴定 gB基因序列分析

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传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响

传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：欧阳伟王永山刘华洁杜希宁张海彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心南京师范大学生命科学学院

为了分析传染性法氏囊病病毒(HBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫的影响,用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h时(12～84h)取3只鸡的法氏囊组织作为一个pool,用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的... 详细信息

为了分析传染性法氏囊病病毒(HBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫的影响,用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h时(12～84h)取3只鸡的法氏囊组织作为一个pool,用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的mRNA水平,同时分析法氏囊组织的病理变化和病毒载量。结果显示:在QL/12组,IFN-α和IFN-βmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,48h达到峰值,随后降低;IFN-γmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,60h达到峰值,随后逐渐降低;p53 mRNA含量迅速升高,60h达到峰值,随后降低。在B87组,IFN-αmRNA水平先降低后升高(48h达到最低值),而IFN-βmRNA水平变化不规则,72h含量最高;IFN-γmRNA水平先逐渐升高后降低(72h达到峰值);p53mRNA含量变化较小,36h含量最高。QL/12组诱导法氏囊组织产生的IFN mRNA(IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA)以及p53 mRNA水平均显著高于B87组。病理组织学检查,QL/12组法氏囊淋巴滤泡呈不同程度的损伤,而B87组法氏囊组织未见明显的组织病变。qRT-PCR检测,QL/12组法氏囊组织中病毒含量48h达到峰(8.4×10～6copies/mg),而B87组法氏囊组织中病毒含量72h达到峰值(6.6×10～4copies/mg)。本研究结果表明IBDV感染严重干扰了鸡体IFN和p53介导的抗病毒天然免疫反应。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 干扰素 p53 天然免疫

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吉林省部分地区活禽市场ClassⅡ新城疫病毒分子流行病学调查

吉林省部分地区活禽市场ClassⅡ新城疫病毒分子流行病学调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：艾立丽张平仄谢光耀徐荣易丁壮尹仁福吉林大学动物医学学院

引言/目的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒感染是危害全球养禽业最严重的急性、烈性病毒病之一,因此该病被OIE列为必须上报的疾病,也是我国农业部规定的一类疫病和《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中优先防治和... 详细信息

引言/目的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒感染是危害全球养禽业最严重的急性、烈性病毒病之一,因此该病被OIE列为必须上报的疾病,也是我国农业部规定的一类疫病和《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中优先防治和重点防治的5种一类动物疫病之一。因此调查地区性新城疫的流行毒株的基因型,可为新城疫的防控和研究提供科学依据。材料和方法 2015年4-6月对吉林省长春市和松原市活禽市场进行活体动物的口腔及泄殖腔棉签取样。棉签样品在9-10日龄的SPF鸡胚中进行增殖,后取HA效价为阳性的样品提取总RNA,用随机引物做反转录后对病毒的F基因全长进行扩增并测序;用DNA star和ClustalX2.1及MEGA6.06等软件对NDV的F基因序列进行系统进化树分析。结果与讨论截至目前为止,一共分离到4株ClassⅡ的新城疫病毒。测序结果表明4株PCR阳性毒株F蛋白裂解位点区(112-117aa)氨基酸均为G-R/K-Q-G-R-L,属于典型新城疫弱毒株特征。基于F基因47-420区域(374bp)及F基因全长(1662bp)核苷酸序列所构建的系统进化树显示,1株属于NDV ClassⅡ中的基因Ⅱ型;另外3株属于NDV ClassⅡ中的基因Ⅰ型,且3株病毒F基因的同源性较高,高达99%。结论我们所分离的毒株与传统的VG/GA、LaSota等疫苗株遗传距离较近,可见这些地区可能存在疫苗毒散毒情况。若对这一现象不加以控制,任由包括疫苗毒株在内的弱毒株在活禽市场、野鸟聚集地区内各种宿主之间交叉传播,这些弱毒株的毒力将有很大几率返强。因此,为了控制当地新城疫疫情,降低家禽及野鸟带毒率,加强家禽饲养管理,减少全病原疫苗尤其是弱毒活疫苗的应用。

关键词：新城疫病毒 NDV 弱毒株活禽市场 Class 分子流行病学调查吉林省

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鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒二重RT-PCR方法的建立

鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒二重RT-PCR方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张艳芳谢芝勋谢丽基刘加波范晴庞耀珊邓显文谢志勤罗思思广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室

引言鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Viru,DTMUV)又名鸭黄病毒,主要引起种鸭和蛋鸭食欲急剧减退、产蛋急剧下降,卵泡变性,卵泡膜出血为主要特征。感染DuCV后的病鸭主要临床表现为发育不良、体重下降及羽毛凌乱等,病理组织表现为法氏囊出现... 详细信息

引言鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Viru,DTMUV)又名鸭黄病毒,主要引起种鸭和蛋鸭食欲急剧减退、产蛋急剧下降,卵泡变性,卵泡膜出血为主要特征。感染DuCV后的病鸭主要临床表现为发育不良、体重下降及羽毛凌乱等,病理组织表现为法氏囊出现坏死淋巴细胞减少和组织细胞增多,导致感染鸭免疫功能下降或免疫反应抑制,因此DuCV与其它病原菌或病毒的混合感染情形非常复杂,常可引起二重或多重感染。由于DTMUV与DuCV均为严重危害养鸭业的传染病,特别是有混合感染时,迫切需要建立一种快速鉴别诊断两种病毒的方法。本研究设计了2对特异性引物,建立了DTMUV与DuCV的二重RT-PCR的检测方法。材料与方法应用本实验室分离到的鸭坦布苏病毒及鸭圆环病毒的核酸为模板,建立同时检测鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒的二重PCR方法。本实验针对GenBank中坦布苏病毒(DTMUV)E基因和鸭圆环病毒(DuCV)REP基因的保守序列,设计合成了两对引物。通过优化反应体系条件及特异性、敏感性评价,建立了鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的二重RT-PCR方法。结果与讨论同时使用该方法对新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒的进行检测,结果全为阴性,特异性良好。该方法对鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒,同时体系能检出100FGDTMUV和DuCV,具有很高的敏感性,完全能够满足这两种疫病检测的要求。用本研究建立的DTMUV和DuCV的二重RT-PCR检测技术,对从2012年10月至2013年4月的采集的40份鸭病料进行检测,与病毒分离鉴定方法得出的结果一致。因此,本研究建立的二重RT-PCR检测方法可用于快速检测的DTVUV和DuCV的混合感染,既可节约时间和成本,又能减少污染,具有很高的使用价值和实践意义。

关键词：鸭圆环病毒鸭坦布苏病毒 DTMUV RT-PCR

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Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制

Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘捷张旭亮马畅尤金炜董敏陈莉恽时锋中国人民解放军南京军区南京总医院比较医学科(实验动物中心)

引言猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype 2,PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应... 详细信息

引言猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype 2,PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应（heat shock response,HSR）,诱导一系列热休克蛋白表达,进而保证病毒基因组复制、病毒蛋白合成及子代病毒组装等。本研究拟通过Hsp90基因过表达和RNA干扰,明确其对PCV2复制的影响及其与PCV2Cap、Rep蛋白的相互作用关系。材料与方法采用Hsp90抑制剂处理细胞,观察其对PCV2在PK-15细胞中复制的影响;分别设计Hsp90过表达质粒和siRNA干扰片段,转染细胞后经定量检测,明确Hsp90在PCV2复制过程中的作用;通过激光共聚焦试验探究Hsp90与病毒Cap、Rep蛋白的细胞定位变化。结果与讨论前期通过iTRAQ定量蛋白组技术结合质谱分析,发现了PCV2感染PK-15细胞过程中,有一系列细胞蛋白表达量发生了显著变化,其中包括Hsp90、Hsp70和Hsp27等,提示这类蛋白可能参与了病毒的感染和复制。本研究首先采用Hsp90特异性抑制剂处理细胞,western blot和TCID检测发现PCV2在细胞中的复制滴度明显下降;同时定量PCR检测显示,特异性抑制剂并非影响病毒侵入细胞这一初始阶段。利用重组真核质粒在PK-15细胞中过量表达Hsp90,可以促进PCV2的复制,相反,使用特异性siRNA干扰细胞中内源性Hsp90,可以抑制PCV2的复制。激光共聚焦试验结果显示,与对照组相比,病毒感染组细胞内的Hsp90β蛋白会在核内呈颗粒状聚集。这些结果表明Hsp90这一伴侣蛋白在PCV2的复制过程中起了重要作用,本研究对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。

关键词：猪肾细胞 PK-15 Hsp90

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广西伪狂犬病毒流行株的分离鉴定及遗传变异分析

广西伪狂犬病毒流行株的分离鉴定及遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：林俊陈冰覃绍敏曹颖颖刘金凤石永胜白安斌赵武吴健敏广西兽医研究所北海市动物疫病预防控制中心

引言 2011年以来,我国各省先后暴发伪狂犬病（AD）疫情,特别是许多已免疫了伪狂犬病毒（PRV）疫苗的猪场仍然发生疫情,提示当前流行的PRV在病原性上发生了新的变化。本研究对采集自广西某猪场疑似PRV感染的动物的样品进行病毒分离鉴定... 详细信息

引言 2011年以来,我国各省先后暴发伪狂犬病（AD）疫情,特别是许多已免疫了伪狂犬病毒（PRV）疫苗的猪场仍然发生疫情,提示当前流行的PRV在病原性上发生了新的变化。本研究对采集自广西某猪场疑似PRV感染的动物的样品进行病毒分离鉴定和序列分析,为广西PRV新流行毒株的防控提供有益参考。材料与方法采集广西北海发生疑似AD疫情猪场的犬和猪样品,进行动物接种试验及病毒分离。对分离毒进行PCR鉴定及电镜观察。参照文献方法扩增PRV gE和gC基因,克隆测序后进行遗传进化分析。结果与讨论本研究成功分离到2株PRV毒株,分别命名为GXBH1（犬源）和GXBH2（猪源）。病毒滴度分别为10TCID50/0.1 mL和10TCID50/0.1 mL。2株分离毒与GenBank上登录的参考毒株gE和gC基因核苷酸序列同源性为97.4～100%和91.3～99.8%;氨基酸序列同源性为95.1～100%和86.6～99.5%。进化分析显示,2株分离毒与国内不同时期的毒株在进化树上共同构成一个进化分支,与欧洲和美洲的毒株亲缘关系较远。2株分离毒在gE蛋白第58位和第495位氨基酸附近均插入了1个天冬氨酸残基（D）,但决定毒力的关键位点第125-126位（VC）未发生突变;2株分离毒gC蛋白在59-69位之间出现一个高变区,导致抗原-抗体结合区域位置后移,并且结合域序列也出现了多处的变异,提示与Bartha株相比,2株分离毒gC蛋白的免疫原性可能发生了改变。基于gE蛋白与gC蛋白的分析,虽然与国外毒株（Rice和Bartha）相比存在多个氨基酸位点的变异,但是国内不同年代的毒株变异情况基本一致。结论本研究分离到2株PRV,通过遗传进化分析发现,2株分离毒与中国境内的PRV一起形成了一个独立的进化群。

关键词：伪狂犬病毒 PRV 变异分析流行株分离鉴定

来源：评论

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猪蓝耳病、猪瘟、流行性乙型脑炎可视化共检基因芯片的构建及初步应用

猪蓝耳病、猪瘟、流行性乙型脑炎可视化共检基因芯片的构建及初步...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张仙黄小波文心田曹三杰文翼平伍锐滑翔马锐赵玉佳杨国淋四川农业大学动物医学院猪病研究中心/动物传染病与基因芯片室

引言猪繁殖障碍性疾病是一大类影响养猪业的常见疾病,如乙脑同时也是人兽共患病。在发病的猪群中,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行性乙型脑炎(JEV)、猪瘟(CSF)是致病性较高的也是较为常见的由RNA病毒引起的发病。病原体混合感染是目前猪... 详细信息

引言猪繁殖障碍性疾病是一大类影响养猪业的常见疾病,如乙脑同时也是人兽共患病。在发病的猪群中,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行性乙型脑炎(JEV)、猪瘟(CSF)是致病性较高的也是较为常见的由RNA病毒引起的发病。病原体混合感染是目前猪场疫病的普遍现象,猪蓝耳病、猪瘟、猪流行性乙型脑炎三种疾病临床症状相似且常常发生混合感染,本研究旨在进行PRRS-JEV-CSF可视化共检基因芯片的构建并进行初步应用评价研究。该研究成功制备PRRS-JEV-CSF可视化共检基因芯片和建立其检测方法,该检测方法检测结果不需扫描仪肉眼即可见。材料与方法本试验针对PRRS、JEV和CSF各设计1对特异性引物。采用文献方法,经PCR扩增和核酸序列测定成功地筛选出3个重组质粒菌。经PCR扩增、乙醇沉淀法纯化制备出探针,稀释至一定浓度,喷样后制备成芯片并进行优化。利用PCR扩增对靶基因进行生物素标记后可与芯片杂交,用肉眼判定结果。结果与讨论应用PRRSV-CSFV-JEV可视化共检基因芯片对四川各地区102份临床样本进行检测,P与RT-PCR方法的符合率是100%;CSFV的检出率为39%,与RT-PCR方法的符合率是97.5%;存在混合感染的现象,与RT-PCR方法的符合率均为100%。结果表明PRRSV-CSFV-JEV可视化共检基因芯片在48℃杂交60min,Nanogold-Streptavidin稀释40倍,银染时间8-10min效果最好。PRRSV-CSFV-JEV可视化共检基因芯片特异性良好,探针之间无交叉反应,灵敏度可达16.2pg/uL,重复性良好,4℃密封至少可保存180d。PRRSV-CSFV-JEV可视化共检基因芯具有特异性强、灵敏度高、高通量和适于临床应用等优点,为基因芯片的推广奠定了方法基础。

关键词：猪蓝耳病 JEV PRRSV 基因芯片可视化流行性乙型脑炎初步应用

来源：评论

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血清1型和3型鸭甲型肝炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立

血清1型和3型鸭甲型肝炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李化东黄显明卢凤英丁美娟张小飞安徽农业大学动物科技学院南京天邦生物科技有限公司

引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3... 详细信息

引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3）引起的鸭肝炎又成为制约我国养鸭生产新的严峻问题。本研究建立的同时检测DHAV-1和DHAV-3二重RT-PCR方法,为临床诊断和检测DHAV-1和DHAV-3感染提供了快速适用的技术手段。材料与方法根据DHAV的基因文库,设计2对特异性引物,建立血清1型和血清3型的双重RT-PCR检测方法,运用此双重RT-PCR方法对2013年8月014年6月,采集于华东部分地区（山东、江苏和安徽）鸭场疑似鸭肝炎的11份肝脏病料进行检测。并同时对上述病料采用抗DHAV-1、DHAV-3单因子血清对分离病毒进行鸭胚中和试验进行病毒鉴定结果通过引物浓度,模板浓度,以及退火温度等试验条件优化,建立了血清1型和血清3型的双重PCR检测方法。运用该方法对11份疑似鸭肝炎病料进行检测,试验结果表明,构建的DHAV二重RT-PCR检测方法与病毒分离鉴定结果具有高度一致性。讨论近年来随着DHAV-3的出现,使DHAV-1和DHAV-3在部分地区的共流行,而且它们的流行病学、临床症状、病理变化极其相似,这些都给国内鸭甲型肝炎的预防和诊断带来了困难,因此建立一种能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR的检测方法具有重要意义,本研究建立的DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR方法,具有良好的特异性和较高的敏感度,可以直接用于临床样品的检测和流行病学调查,为临床上鸭肝炎的鉴别诊断和病原检测提供了快速适用的手段。

关键词：鸭甲型肝炎病毒 RT-PCR 检测方法

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宿主细胞内的小G蛋白Rab1通过与布菌效应蛋白DnaK结合调节布菌在细胞内的早期生长

宿主细胞内的小G蛋白Rab1通过与布菌效应蛋白DnaK结合调节布菌在...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：魏盼王琳孙长江崔桂梅孙万春彭其胜吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室

引言布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)被列为我国法定传染病中的乙类传染病之首,是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体后引起的传染-变态反应性人兽共患细菌病。布鲁氏菌是典型的胞内生存菌,可以在细胞内生存和增殖,这是其致病的关键原因。... 详细信息

引言布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)被列为我国法定传染病中的乙类传染病之首,是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体后引起的传染-变态反应性人兽共患细菌病。布鲁氏菌是典型的胞内生存菌,可以在细胞内生存和增殖,这是其致病的关键原因。虽然国内外进行了许多布鲁氏菌胞内生存机制方面的研究,但是有关布鲁氏菌如何利用其Ⅳ分泌系统分泌的效应蛋白寄生宿主细胞,目前尚不清楚。本研究尝试以宿主细胞小G蛋白Rab1为靶蛋白,筛选出与Rab1互作的Ⅳ型分泌系统分泌的效应蛋白,研究其在调节布鲁氏菌胞内生长中的作用。材料与方法(1)构建GST-Rab1、GST-Rab1(S25N)、GST-Rab1(Q70L)融合蛋白,SDS-PAGE,银染,质谱分析。(2)免疫共沉淀、Western blotting、激光共聚焦及Ⅳ分泌系统分泌验证实验。(3)布菌(*** strain 2308)感染宿主细胞后CFU检测及用慢病毒感染构建Rab1沉默稳转细胞系。结论(1)通过将宿主细胞内的Rab1基因沉默或在宿主细胞内过表达Rab1(S25N)、Rab1、Rab1(Q70L)证明宿主细胞Rab1蛋白促进布菌在胞内的生长。(2)通过GST pull-down实验,分析差异蛋白,然后对其进行质谱分析,鉴定出该差异蛋白为DnaK,(3)共转染DnaK和Rab1于293T细胞,通过免疫共沉淀实验,确定布菌热休克蛋白DnaK与宿主细胞Rab1蛋白特异结合。(4)通过激光共聚焦及Ⅳ分泌系统分泌实验即构建DnaK-CyaA融合蛋白检测宿主细胞内cAMP变化,证明DnaK蛋白为Ⅳ分泌系统分泌的效应蛋白。(5)通过感染布菌后检测细胞内布菌数(即CFU实验)证明宿主细胞Rab1蛋白通过募集布菌热休克蛋白DnaK至布鲁氏菌菌泡(BCV,Brucella-Containing Vacuole)调节布菌在细胞内的早期生长。

关键词：宿主细胞热休克蛋白分泌系统效应蛋白早期生长

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