黏膜是机体抵抗感染的首道防线,因此通过黏膜途径诱发免疫应答以抵御病原感染一直是研究的热点。乳酸杆菌定植在黏膜区域,可以维持微生态系统平衡,具有耐酸碱和诱发抗原特异性分泌性IgA的能力。作为安全等级的微生物(Generally regarded as safe,GRAS)已被广泛用于食品发酵、医药生产、保健药物及饲料添加剂等行业。此外,工程化的乳酸杆菌可以表达蛋白质和其他分子等突出优势,非常适合作为外源蛋白或药物的递呈工具。随着对乳酸杆菌的分子遗传背景及其如何表达外源分子的深入认识,重组乳酸杆菌在防治感染性疾病、治疗Ⅰ型过敏性疾病、自身免疫疾病或其它免疫抑制病等方面已表现出诸多优势。目前利用重组乳酸菌已表达多种病毒抗原,如禽流感H5N1亚型病毒结构蛋白、禽传染性法氏囊病毒VP2蛋白、SARS病毒结构蛋白、轮状病毒VP7和VP8蛋白、猪圆环病毒2型核衣壳蛋白,且体内试验结果显示能够诱导产生特异的体液免疫与细胞免疫,从而增强动物抵抗病原微生物感染的能力。然而重组乳酸杆菌制剂在商品化之前还有许多亟需解决的问题:(1)多数乳酸菌表达载体选择抗性基因作为标记,在应用上存在一定的安全隐患;(2)在动物模型上,尽管重组乳酸菌能够诱导产生特异的免疫应答,达到很好的免疫效果,但是其免疫机制尚未阐明;(3)免疫后,诱导型重组乳酸菌因机体内没有相应的诱导物质而导致增殖的乳酸菌不能继续表达抗原,致使疫苗发挥作用时间不够。总之,随着对重组乳酸杆菌表达系统、免疫机制研究的不断深入,重组乳酸菌将成为黏膜疫苗的有力工具,具有巨大的应用前景和商业潜力。因此,本研究团队从黏膜途径入手,利用乳酸菌作为黏膜疫苗载体的诸多优势,以禽流感为研究靶点,成功构建了靶向树突状细胞的抗H9N2亚型禽流感病毒的重组乳酸菌,为今后探讨黏膜组织DC启动和调控黏膜免疫应答的机制及研制口服DC靶向抗禽流感疫苗提供基础。
戊型肝炎由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起,主要通过粪-口传播,是一种人兽共患传染病。已从猪、鸡、犬、鼠、鹿和灵长类等多种动物中检测到HEV抗体或核酸。为了解云南省猪场戊型肝炎的流行情况及常见基因型,本研究从部分规...
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戊型肝炎由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起,主要通过粪-口传播,是一种人兽共患传染病。已从猪、鸡、犬、鼠、鹿和灵长类等多种动物中检测到HEV抗体或核酸。为了解云南省猪场戊型肝炎的流行情况及常见基因型,本研究从部分规模猪场和散养户采集166份6~8月龄猪的粪便样品进行病毒核酸检测。先从粪样中提取总RNA,进行RT-nPCR扩增。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测,将纯化产物链接到pMD18-T载体上,制备单克隆质粒,送公司测序。结果发现,粪便样品中戊型肝炎病毒阳性率为12.7%。应用MEG4软件对所得基因序列进行遗传进化树分析,检测到的11株流行株与基因1型、2型、3型和4型参考序列的核苷酸同源性分别为85.6%7.8%,85.6%7.8%,85.6%5.6%,92.8%8.9%。表明这些流行株均属于基因4型。Lu在HEV 4个主要基因型的基础上,进一步将其分为24个基因亚型(1a,1b,1c,1e;2a,2b;3a,3b,3c,3d,3e,3f,3g,3h,3i;4a,4b,4c,4d,4e,4f,4R)。我们此前的调查表明,云南省流行的基因亚型包括4c,4d,4b及一些未知的基因型,与Lu的基因型分类相符。由于戊型肝炎病毒基因组具有广泛的遗传异质性和高度的灵敏性,需要从HEV保守基因组区域设计扩增引物和目标探针。王晶晶等经序列分析鉴定的猪HEV至少有基因型3型和4型,同一地区分离所得的人与猪的HEV同源性高度相似,甚至同一亚型间同源性可达95%-100%。表明基因3型及基因4型HEV感染导致的戊型肝炎是人畜共患病。本次调查结果发现HEV在云南省的阳性率为12.7%,和其它省份报道的流行率接近,所分离的11个毒株均为基因型4型。
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