引言白细胞介素-2(IL-2)主要是由T细胞产生的具有重要免疫调节作用的细胞因子。1997年,Sundick等首次获得了鸡IL-2基因。Hilton等的研究表明,鸡IL-2表现了与哺乳动物相似的生物学活性。然而,由于鸡IL-2与哺乳动物的IL-2差异较大,且具有很强的种属特异性,使许多可在哺乳动物中成功应用的技术和方法都无法有效地应用于鸡IL-2的研究,本研究通过制备鸡IL-2单克隆抗体,为深入研究鸡IL-2的生物学功能奠定基础。材料与方法菌株、空载质粒为本实验室保存,标签蛋白His-IL-10、His-IFN-β、His-IFN-β为本实验室保存。从感染球虫的鸡的脾淋巴细胞中克隆到鸡IL-2基因,构建了原核表达载体并诱导表达目的蛋白。以His-chIL-2蛋白免疫小鼠,细胞融合、阳性杂交瘤细胞的亚克隆与筛选过程均参照文献Current Protocol in Immunology进行。将阳性杂交瘤细胞注射BALB/c小鼠腹腔获得腹水,用饱和硫酸铵法进行纯化,以间接ELISA、Western Blot等方法对所获得的单克隆抗体进行抗体型别分析、亲和力测定、抗体识别区域分析等特性鉴定。结果与讨论经过三次亚克和扩繁,最终获得三株可稳定分泌禽IL-2抗体的杂交瘤细胞株,命名为1C2,2F2,4B5。三株单抗的亚型均为IgG1。腹水的效价分别为:1C2:5.12×10~72F2:6.4×10~6,4B5:1.28×10~7。亲和力解离常数(K)分别为1C2:4.81×10,2F2:1.36×10,4B5:4.15×10,均为高亲和力抗体。单抗1C2识别鸡IL-2的1-40位氨基酸,2F2识别鸡IL-2的81-121位氨基酸,4B5识别鸡IL-2的41-80位氨基酸。即共获得三株识别不同位点的单抗。结论本研究成功获得三株高亲和力、高特异性的杂交瘤细胞株,三株单抗亚型均为IgG1,且识别不同的抗原表位区域。
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