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泌乳期牛乳腺上皮细胞增殖的研究

泌乳期牛乳腺上皮细胞增殖的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：孙斌郑炜武志敏黑龙江八一农垦大学

(目的)本研究旨在观察奶牛正常乳腺上皮细胞在分娩前后的变化。(方法)试验中随机挑选健康黑白花奶牛28头,分别于未妊娠期、分娩第8天、第20天、第120天、第240天、第300天各选取3头,应用外科手术的方法采取奶牛乳腺组织,利用HE染色、PCN... 详细信息

(目的)本研究旨在观察奶牛正常乳腺上皮细胞在分娩前后的变化。(方法)试验中随机挑选健康黑白花奶牛28头,分别于未妊娠期、分娩第8天、第20天、第120天、第240天、第300天各选取3头,应用外科手术的方法采取奶牛乳腺组织,利用HE染色、PCNA染色观察乳腺结构,用流式细胞仪检测增殖乳腺细胞;同时采抗凝血检测血浆中孕酮、雌二醇和催乳素的浓度变化;另选10头用于泌乳量测定。(结论)(1)通过研究奶牛正常乳腺上皮细胞在分娩前后的变化,发现乳腺上皮细胞在分娩后增殖活跃;(2)在整个泌乳期间,随着泌乳量的变化,乳腺上皮PCNA阳性细胞百分率和细胞增殖指数均相应的上升和下降,并且均在分娩后第20天达最大值;(3)PRL的浓度与奶牛的泌乳量正相关;(4)灰色关联度分析表明,细胞增殖指数是对产奶量最大的一个影响因素。

关键词：奶牛乳腺泌乳细胞增殖激素

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广西牛羊BTV不同血清型混合感染的初步调查

广西牛羊BTV不同血清型混合感染的初步调查

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张怡轩吴健敏曹颖颖林俊朱建波李乐广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽医研究所云南省畜牧兽医科学院热带亚热带动物病毒病重点实验室

引言动物蓝舌病(bluetongue disease,BTD)是由蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)引起的反刍动物烈性传染病。本病是世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物卫生法典》规定的上报疫病,也是我国农业部公布的一类动物疫病,是出入境口岸重点检疫... 详细信息

引言动物蓝舌病(bluetongue disease,BTD)是由蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)引起的反刍动物烈性传染病。本病是世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物卫生法典》规定的上报疫病,也是我国农业部公布的一类动物疫病,是出入境口岸重点检疫的外来动物疫病。BTV至少有27个血清型,各型之间没有免疫交叉保护现象,且各地区的优势血清型存在差异。因此,搞清BTV不同血清型在本地区分布情况,明确本地区流行的BTV优势血清型,是防控本病的关键。本研究通过血清中和试验,对广西流行的BTV血清型进行初步调查,为广西BTV的防控积累资料。材料与方法 510份BTV抗体阳性血清(牛17份、羊483份)分别采集自广西11市(百色、崇左、南宁、钦州、北海、钦州、梧州、柳州、桂林、河池、玉林)的73个畜群,均为C-ELISA检测阻断率大于70%的强阳性血清。将这510份阳性血清与BTV-1、4、5、6、8、11、13、14、19、20标准毒株进行中和试验。结果与讨论经检测,发现来自百色、南宁、崇左、桂林、梧州、柳州、玉林的29群羊、3群牛存在BTV-1抗体,30群羊、2群牛存在BTV-4抗体,35群羊、2群牛存在BTV20抗体;以上地区除崇左外,有22群羊、1群牛血清存在BTV-5抗体;百色、南宁、梧州、柳州、玉林6个群羊、2群牛存在BTV-8抗体;百色、玉林2群羊存在BTV-13抗体;百色、南宁8群羊存在BTV-19抗体。以上结果提示,BTV-1、BTV-4、BTV-20可能是广西优势的血清型,在全区广泛分布,这与国内早前的报道有出入,说明当前国内BTV的流行有了新的变化。当然,本研究仅测定了10个血清型的抗体,还需要对其他的血清型进行检测,更全面的分析广西境内BTV的流行分布。本研究还首次发现,广西境内牛羊存在BTV-5、BTV-8、BTV-19、BTV-20的感染,为国内首次报道。特别是南宁、梧州、玉林境内羊血清存在BTV-8抗体。2006年,BTV-8疫情爆发曾对西欧各国畜牧业造成巨大损失。BTV-8也成为我国重点监测的外来动物疫病。同时,研究表明,体外试验时,高效价的某一血清型抗体会对其他血清型病毒的中和试验产生影响,因此,BTV-8等新的血清型是否在广西流行,流行程度如何还需要进一步收集资料,进行研究。

关键词： BTV 阳性血清优势血清型混合感染初步调查

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一株新型蝙蝠腺病毒基因分析

一株新型蝙蝠腺病毒基因分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李兴宇何彪徐琳涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病防控重点实验室

引言腺病毒是一种重要的人兽共患病毒,能造成消化道、呼吸道严重疾病。国际病毒学分类委员会(ICTV)将腺病毒分为Atadenovirus、Aviadenovirus、Ichtadenovirus、Mastadenovirus和Siadenovirus五个属,其中Mastadenovirus有25个种,包括两个蝙蝠腺病毒种。蝙蝠是重要的病毒储存库,目前已至少发现了13种病毒,其中61种是人兽共患病毒。为了进一步了解我国蝙蝠病毒的多样性,本实验对来自广东省4个市的蝙蝠进行病毒宏基因组学分析,结果发现了一株新型的腺病毒。材料与方法 2005-2006年间,本课题组从广东省罗定市、阳春市、云浮市和韶关市等地采集了8种蝙蝠181只。对蝙蝠肠道和肺脏进行收集,依据实验室已建立的病毒宏基因组学分析技术进行研究,设计特异性检测引物对样品进行筛查,并进行全基因组序列的扩增。结果根据宏基因组学结果,其中179条序列注释到腺病毒基因,利用特异性引物从广东省韶关市的26只中蹄蝠中,筛查出了10只蝙蝠携带腺病毒,阳性率为38.4%。根据兼并引物获得6kb的蝙蝠腺病毒基因序列,其中包含了100K、DBP、Protease、Hexon五个蛋白基因,该序列已经提交到GenBank(KT282355)。系统进化分析发现本次分离到的蝙蝠腺病毒与同属已知的腺病毒种均存在较远的亲缘关系;遗传距离分析,与A型蝙蝠腺病毒Bat adenovirus TJM具有最高的相似性,能达到76.9%,与已知蝙蝠腺病毒相似性低的能达到69%。依据ICTV中腺病毒的分类原则,可以归为腺病毒科(Adenoviridae)中Mastadenovirus属一个新种。讨论腺病毒具有非常广泛的感染谱,如蛇、鸟、几乎所有的哺乳动物等。由于其存在的广泛性,加之大多数腺病毒都不致病,所以腺病毒在公共卫生中不被人们重视。然而近年来,陆续有群体性腺病毒病暴发的报道,尤其是在大学和部队中,腺病毒已经成为威胁健康一类重要的病原体,所以研究腺病毒的自然宿主和多样性愈发受到人们的关注。蝙蝠作为多种病毒的自然宿主,在保存和传播病毒中具有重要的作用;数据显示,蝙蝠可能也是腺病毒的自然宿主,几乎所发现的蝙蝠腺病毒都是新型的,这说明蝙蝠携带的腺病毒具有非常丰富的多样性,因而探知腺病毒在蝙蝠体内的增殖和传播动态将对防控人类腺病毒病具有重要的借鉴作用。

关键词：病毒宏基因组学人兽共患相似性病毒病病毒基因

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甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情流行病学分析

甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情流行病学分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：许炜迪刘世基冯烨李文婧于明洋涂忠忠张富林涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室甘肃省庆阳市合水县兽医局

目的通过甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情,了解该省份狂犬病流行的本底,分析狂犬病病毒流行现状及与周边地区的演化关系,指导当地狂犬病的防控工作。方法采用FAT实验和荧光定量RT-PCR方法对甘肃省送检的犬脑组织样品进行检测。使用... 详细信息

目的通过甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情,了解该省份狂犬病流行的本底,分析狂犬病病毒流行现状及与周边地区的演化关系,指导当地狂犬病的防控工作。方法采用FAT实验和荧光定量RT-PCR方法对甘肃省送检的犬脑组织样品进行检测。使用PCR方法扩增该毒株全长N和G基因。使用DNAStar 5.0对该毒株和我国流行毒株进行同源性分析,使用MEGA 6.06绘制G基因系统进化树。结果经检测,该样品为狂犬病病毒（RABV）阳性,毒株命名为GSHSD14,将N和G基因序列上传Genbank,登录号分别为KT221140、KT221103。将该毒株G基因序列与我国流行毒株比较,该毒株与2011年分离自陕西的犬源毒株ShaanxiRa007同源性最高,为99.8%;氨基酸同源性为99.4%。系统进化分析结果表明,我国流行毒株分为亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群。GSHSD14属于亚洲1群,该群毒株在我国分布范围最广,主要分布在我国中部和南部各省市。山西、山西、湖北、重庆、四川和宁夏等甘肃邻近省份分离的毒株均属于该进化群,该进化群的主要传播来源是患病犬。讨论甘肃省地处我国西北,周边省份狂犬病流行情况较为复杂,例如在陕西、青海和四川等省,犬是人和动物狂犬病的主要传播来源,主要流行的毒株属于亚洲1群。甘肃西部的青海省的流行毒株属于北极相关群;位于甘肃西北的新疆,狂犬病的主要传播来源是狐狸、狼等野生动物,该群毒株属于世界群草原型;甘肃北部的内蒙古,流行的RABV毒株特征更为复杂,目前已发现貉引起的北极相关群RABV和野生狐狸引起的世界群草原型RABV在当地传播流行。据报道,甘肃省人狂犬病疫情偶有暴发,但是上述疫情均是由临床症状判断的,均没有进行实验室方法确诊。本研究首次证实了亚洲1型RABV已在甘肃省传播流行,提示甘肃省狂犬病是犬狂犬病流行为主的疫区传播的结果,而非临近省份野生动物狂犬病溢出所致。为了有效的控制甘肃省的狂犬病疫情,建议在全省范围内,特别是在农村地区,开展大规模犬只免疫,提高当地犬狂犬病免疫覆盖率,此外还应加强犬只管理,做好与周边省份的狂犬病联防联控机制,防止不同进化群毒株在当地混合流行。

关键词：狂犬病病毒基因序列甘肃省流行病学分析

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基因Ⅸ型禽1型副黏病毒XBT14株对不同品种雏鸭致死性分析

基因Ⅸ型禽1型副黏病毒XBT14株对不同品种雏鸭致死性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：傅光华程龙飞黄瑜陈翠腾傅秋玲彭春香施少华陈红梅万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所

引言禽1型副黏病毒(Avian Paramyxovirus type 1,APMV-1)又被称为新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),是副黏病毒科副黏病毒亚科Avulavirus病毒属成员,目前仍是威胁家禽业健康养殖的烈性传染性病病原之一。鸡、火鸡等家禽是其易... 详细信息

引言禽1型副黏病毒(Avian Paramyxovirus type 1,APMV-1)又被称为新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),是副黏病毒科副黏病毒亚科Avulavirus病毒属成员,目前仍是威胁家禽业健康养殖的烈性传染性病病原之一。鸡、火鸡等家禽是其易感动物,水禽被认为是其贮存宿主,即多为带毒不发病。然而,自1997年以来,陆续出现水禽(鹅和鸭)因感染禽1型副黏病毒出现死亡的病例,主要为基因Ⅶ型和基因Ⅵ型的毒株。本研究室2002年自17日龄病死番鸭分离获得一株禽1型副黏病毒XBT14,经鉴定该毒株为基因Ⅸ型的分离株,为分析该基因型的病毒是否也出现了类似基因Ⅶ型病毒的致病性变化,本研究测定了该毒株对SPF鸡及不同品种雏鸭的致病性。材料和方法本研究将蚀斑纯化的XBT14株及同为基因Ⅺ型参考毒株F48E8株接种10日龄SPF鸡胚,测定病毒滴度。参照国家标准《新城疫诊断技术》(GB/T 16550)提供的方法,测定病毒的10日龄SPF鸡胚的MDT和1日龄SPF雏鸡的ICPI,评估该毒株的毒力。选取3个品种的雏鸭,测定两株病毒对不同品种雏鸭的致病性,明确病毒的致病特点。结果与讨论毒力测定表明,XBT14z株10日龄SPF鸡胚的MDT为55h,1日龄SPF鸡的ICPI为1.67,表明该毒株是强毒力毒株。不同品种的雏鸭接种XBT14株后均出现死亡,但不同品种鸭的死亡率存在明显差异,其中以雏番鸭最易感,死亡率高达86.7%,其次是麻鸭,樱桃谷鸭死亡率最低,仅为13.3%,其中樱桃谷鸭的死亡率与zhang等报道的北京鸭感染基因Ⅸ型禽1型副黏病毒出现的死亡率比较接近。接种F48E8株的3种雏鸭的发病率和死亡率均高于XBT14毒株感染的相应雏鸭,如感染F48E8的雏番鸭死亡率高达100%。值得注意是尽管F48E8毒株与XBT14毒株的对鸭的致病性存在差异,但对3种雏鸭的致病性同样显示出鸭品种依赖性。另外,shi及傅光华等测定基因Ⅶ型毒株对不同品种鸭的致病性时也发现病毒致病性的鸭品种依赖性。由此可知,禽1型副黏病毒对鸭的致病性除了与病毒毒力相关外,鸭的品种也会影响疾病的发展进程,导致这种致病性差异的分子基础还不清楚。

关键词：副黏病毒 XBT14 不同品种

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改进的两种猪前腔静脉采血法

改进的两种猪前腔静脉采血法

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：雍长福吴月玲滕进礼李瑞宁夏中卫市沙坡头区动物疾病预防控制中心宁夏中卫市迎水桥镇畜牧兽医技术服务站宁夏中卫市动物卫生监督所

前言猪病的血清学诊断和猪瘟等重大动物疫病强制免疫后的免疫抗体水平监测都有赖于通过采集血样进行血清学检验。在长期的采血工作中,我们通过临床实践和不断探索,对传统的猪仰卧保定前腔静脉采血法进行了改进,建立了更为便捷、高效、... 详细信息

前言猪病的血清学诊断和猪瘟等重大动物疫病强制免疫后的免疫抗体水平监测都有赖于通过采集血样进行血清学检验。在长期的采血工作中,我们通过临床实践和不断探索,对传统的猪仰卧保定前腔静脉采血法进行了改进,建立了更为便捷、高效、省事的两种前腔静脉保定采血方法,现介绍于下。正提保定采血法(1)适用范围;适用于体重在15Kg以下的乳猪和断奶仔猪。(2)方法:由助手徒手抓住仔猪两耳,两腿夹住仔猪的腰部以阻止身体的摆动,让其腹部朝外。按常规方法对仔猪胸前窝采血部位进行剪毛、消毒后,另一助手将猪的左前肢抓住,采血者的左手抓住仔猪的右前肢向仔猪纵轴外侧方向拉直,这样仔猪胸前窝的凹陷即可清晰显露出来。采血者的右手持一次性灭菌采血器朝右侧胸前窝凹陷处垂直进针1～2cm,这时血液就呈直线状射入采血器内。若不出血,可调整进针深度和角度,直到采出血液为止。采血完毕后拔出针头,消毒按压采血部位后,解除猪的保定。站立保定采血法(1)适用范围:适用于体重在15Kg以上的断奶猪、保育猪、中等体重的猪、大猪和种猪。(2)方法:由助手用猪鼻捻子或保定绳将猪上颌部向前上方吊起,让其两前肢着地,使其下颌部与两前肢的夹角为135°左右,这样就自然显露出两侧胸前窝的凹陷。按常规方法对猪胸前窝采血部位进行剪毛、消毒后,采血者的右手持一次性灭菌采血器(体重在150Kg以上的大猪需使用人医9号以上的长针头)朝右侧胸前窝凹陷处垂直进针2～5cm左右(进针深度依猪体重大小而定),这时血液就呈直线状射入采血器内。若不出血,可调整进针深度和角度,直到采出血液为止。采血完毕后拔出针头,消毒按压采血部位后,解除猪的保定。体会以上两种采血方法可完全取代传统的仰卧保定采血法,整个采血过程仅需1--2名助手保定,因而可大大减少保定人员数量,降低因采用仰卧保定法前腔静脉采血所付出的劳动强度,提高工作效率;这两种采血方法耗时少且容易被初学者学习和掌握,使得猪的前腔静脉采血工作变得更为简单和容易,适于在各级动物疾病预防控制机构和进出境动物检疫部门的血样采集工作中大力推广应用。

关键词：前腔静脉静脉采血法

来源：评论

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副鸡禽杆菌血凝素蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA诊断方法的初步建立

副鸡禽杆菌血凝素蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA诊断方法的初...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李淑芳徐玉智张培君龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室沈阳农业大学生物科学与技术学院

副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌,该细菌培养条件苛刻、分离及生化鉴定较困难,发病鸡临床症状不典型且病程缓慢,这都加大了临床诊断和实验室检测的难度。本实验的目的在于研制出该菌的种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强... 详细信息

副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌,该细菌培养条件苛刻、分离及生化鉴定较困难,发病鸡临床症状不典型且病程缓慢,这都加大了临床诊断和实验室检测的难度。本实验的目的在于研制出该菌的种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强、敏感性较好的检测方法。本实验以副鸡禽杆菌C型标准菌株Modesto菌株的血凝素蛋白HA为抗原,四次免疫8周龄的BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过间接ELISA和Western进行筛选,将获得的阳性细胞进行亚克隆,筛选稳定分泌单克隆抗体的细胞株。经5次亚克隆后共获得11株针对副鸡禽杆菌血凝素蛋白HA的特异性单抗,分别命名为3D3、1D6、5C9、4C3、4G1、6G2、5D2、1E8、3F5、4F5、4G2,以上单抗腹水的间接ELISA效价在105～3×106之间,直接平板凝集在23～25。免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:3D3、1D6、4C3、4G1、5D2、4F5、4G2属于IgG1亚型,5C9、6G2、1E8属于IgG2b亚型,而3F5属于IgG2a亚型。特异性实验结果表明:11株单抗只与副鸡禽杆菌反应,而不与巴氏杆菌、禽嗜血杆菌、放线杆菌发生交叉反应,显示出比较好的种特异性,本研究在研制出副鸡禽杆菌HA蛋白的特异性单克隆抗体的基础上建立了能检测副鸡禽杆菌的夹心ELISA方法,并应用此方法对几种临床中常见病原菌和已获得的副鸡禽杆菌进行了检测,结果证实,本方法具有较好的特异性和敏感性,而且操作简便、快速,是一种使用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的有效方法。这些都为有效控制该病的暴发提供了必要的生物材料和方法。

关键词：副鸡禽杆菌特异性 ELISA 鸡传染性鼻炎单克隆抗体

来源：评论

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我国动物狂犬病分子流行病学分析

我国动物狂犬病分子流行病学分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：冯烨许炜迪苏南李文婧于明洋涂忠忠涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

引言我国作为狂犬病的重灾区,每年狂犬病发病死亡人数居于世界第二位。近年来我国在狂犬病防控方面采取了多项措施,发病人数呈逐年下降趋势,但是每年新发生狂犬病的县市不断增加。本研究通过对近年来我国动物狂犬病流行毒株N基因系统进... 详细信息

引言我国作为狂犬病的重灾区,每年狂犬病发病死亡人数居于世界第二位。近年来我国在狂犬病防控方面采取了多项措施,发病人数呈逐年下降趋势,但是每年新发生狂犬病的县市不断增加。本研究通过对近年来我国动物狂犬病流行毒株N基因系统进化分析,了解我国毒株流行现状与分布特征。方法使用PCR方法对2004～2015年本实验室获得的53株狂犬病病毒株进行全长N基因序列扩增,使用DNAStar 7.2对上述毒株和近年来我国流行毒株33株N基因序列进行同源性分析,使用MEGA 6.1绘制N基因系统进化树。结果和讨论本研究获得的狂犬病病毒株均为狂犬病病毒(RABV),宿主种类包括犬、牛、羊、骆驼、貉、野生狐狸等,地理来源覆盖了我国28个省市自治区。系统进化分析将我国及周边国家RABV街毒株划分为4个进化群,即亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群。亚洲1群RABV分布最广,主要分布在我国中部和南部的23个省市,包括北京、天津、河北、山东、山西、陕西、甘肃、河南、江苏、上海、安徽、湖北、江西、浙江、重庆、湖南、贵州、四川、宁夏、云南、广西、广东和福建等,该群毒株的主要传播来源是患病犬。亚洲2群RABV在我国南部的11个省份传播流行,包括河南、浙江、福建、江西、湖南、广东、广西、贵州、重庆、云南等,该群毒株的主要传播来源是犬和鼬獾。值得一提的是近年来台湾地区新发的鼬獾狂犬病也是由该群毒株引起的。我国的北极相关群毒株最早在内蒙古的貉体内分离获得,2012年在我国的西藏和青海等省份也发现该群病毒的传播流行。在我国,世界群RABV主要分布在吉林、北京、江苏、河南、湖南、贵州和福建等省,该群毒株的主要传播来源是患病犬。在世界群毒株中,草原型RABV是近几年新出现的进化分支,目前已经发现内蒙古和新疆等地传播流行。该型毒株表现出与内地其他进化分支不同的特点,例如该群毒株的主要传播宿主是狐狸等野生动物,感染动物主要为牛、羊、骆驼等家畜。结论基于全长N基因的系统进化分析,将我国RABV街毒株分为4个进化群(亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群),我国毒株分布有明显地源性特点,不同进化群毒株在地理分布上有一定重叠。

关键词：系统进化分析内蒙古动物狂犬病分子流行病学

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猪瘟病毒通过HSP27/AKT/mTOR途径诱导细胞自噬促进病毒复制的机制研究

猪瘟病毒通过HSP27/AKT/mTOR途径诱导细胞自噬促进病毒复制的机制...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘艳张莉龚文杰贾俊杰谢金鑫涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学动物医学学院

猪瘟病毒是一种重要的致病性RNA病毒,可导致严重的高热、多发性出血及呼吸和消化系统症状,但其在宿主细胞内复制的机制目前尚不十分清楚。自噬是真核生物中高度保守的细胞内容物降解过程,在维持细胞的内环境稳定中发挥重要作用,已有报... 详细信息

猪瘟病毒是一种重要的致病性RNA病毒,可导致严重的高热、多发性出血及呼吸和消化系统症状,但其在宿主细胞内复制的机制目前尚不十分清楚。自噬是真核生物中高度保守的细胞内容物降解过程,在维持细胞的内环境稳定中发挥重要作用,已有报道发现多种病毒能利用或抑制宿主细胞的自噬来为自身的复制提供条件,也有研究认为猪瘟病毒(Shimen)可诱导宿主细胞的自噬,并且自噬参与胞内病毒的复制,但CSFV感染的宿主细胞中哪些关键分子参与细胞自噬进而影响病毒的复制尚不清楚,因此探究CSFV感染后介导细胞自噬的分子机制和有效抑制病毒复制的新方法是亟待解决的问题。我们首先通过透射电镜和免疫印迹方法明确中等毒力猪瘟毒株GD53是否可以有效诱导宿主ST细胞(猪睾丸细胞)的自噬,随后进行细胞全基因组芯片分析筛选GD53毒株感染细胞中差异显著的蛋白,通过Western-blot验证后进一步探讨该蛋白下游通路中可能参与细胞自噬并影响病毒复制的关键信号蛋白。最后,通过过表达质粒和特异性抑制剂处理明确改变以上关键蛋白的表达活性是否可以有效抑制细胞的自噬并抑制猪瘟病毒的复制,为改善猪瘟病毒的治疗提出新的思路。我们的透射电镜结果显示GD53(MOI=1)可显著诱导ST细胞中自噬小体的形成,随后Western-blot显示自噬相关蛋白LC3-II、ATGl2-ATG5、ATG5、Beclin1在病毒感染的ST细胞中显著上调(12-48小时),而自噬降解底物SQSTM1的表达显著下调;同时接种病毒后12 h至36 h病毒复制速度较快,病毒滴度呈指数增长,至72 h病毒滴度达到峰值(108.5 TCID50/mL)。应用Affymetrix猪全基因组芯片分析发现GD53可诱导ST细胞中HSP27蛋白表达显著下调,。随后根据生物信息学分析和Western-blot发现Hsp27下调可导致AKT/mTOR的磷酸化水平下调,而通过在ST细胞中转染HSP27过表达质粒和应用mTOR激活剂Insulin,发现可以有效逆转GD53感染引起的HSP27下调和AKT/mTOR去磷酸化失活,抑制细胞的自噬并抑制病毒的复制。我们的结果明确猪瘟病毒株GD53通过诱导细胞自噬促进病毒复制,并发现CSFV诱导的自噬依赖HSP27/AKT/mTOR途径,但GD53毒株中介导HSP27下调的关键病毒蛋白,以及HSP27/AKT/mTOR下调后宿主细胞的凋亡情况尚不清楚,具体实验仍在进行中。

关键词：病毒复制猪瘟病毒 HSP27/AKT/mTOR 细胞自噬 AKT

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塔里木马鹿原发性肝癌的病理形态学观察

塔里木马鹿原发性肝癌的病理形态学观察

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：孟庆玲乔军陈创夫才学鹏骆学农石河子大学动物科技学院甘肃农业大学动物医学院石河子大学动物科技学院石河子中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

自然患病的塔里木马鹿,表现为食欲不振、消瘦、结膜黄染、腹围增大,对其进行剖检及病理组织学观察,确定其是否是肝脏方面的疾病。对濒死期的塔里木马鹿剖检,采集肝、心、脾、肺、肾、淋巴结、胃、肠等固定后进行切片,H.E染色后进行病理... 详细信息

自然患病的塔里木马鹿,表现为食欲不振、消瘦、结膜黄染、腹围增大,对其进行剖检及病理组织学观察,确定其是否是肝脏方面的疾病。对濒死期的塔里木马鹿剖检,采集肝、心、脾、肺、肾、淋巴结、胃、肠等固定后进行切片,H.E染色后进行病理组织学观察。结果表明:全身渗出液为黄色,肝表面有散在点状出血,质地硬,色淡,有多个散在性灰白色斑块,形状不规则,边缘不十分清楚;病理组织学观察为胆管细胞性肝癌,癌细胞核呈多形性,核仁增大而明显,数量增多,胞浆较少,且多边集;没有发现癌细胞转移。首次发现了塔里木马鹿胆管细胞性肝癌。

关键词：塔里木马鹿胆管细胞性肝癌病理学

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