Thymosinβ4(Tβ4) is an important molecule functioning in angiogenesis,wound healing,cancer metastasis and cardiac repair and so *** Tβ4 is synthesized chemically for research and this is *** order to obtain sufficie...
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Thymosinβ4(Tβ4) is an important molecule functioning in angiogenesis,wound healing,cancer metastasis and cardiac repair and so *** Tβ4 is synthesized chemically for research and this is *** order to obtain sufficient biologically active Tβ4 economically,we cloned and overexpressed this protein in an Escherichia ***.A high level expression of GST-Tβ4 fusion protein was obtained and purified *** biological activity and function of this recombinant Tβ4 was evaluated by cell proliferation assay using prepared spleen *** data indicated that the recombinant Tβ4 could induce lymphocyte proliferation and *** Tβ4 with bioactive is expressed efficiency and purified,becoming the foundation of the further study of Tβ4.
哺乳类睾丸曲细精管基膜上的精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是体内一类既能自我更新,又能定向分化的多潜能原始精原细胞。SSCs的更新和分化是维持雄性精子发生的基础。但目前有关其更新、分化的调控机制仍不清楚。已知干细胞的发育受其内在基因及外部特定微环境的双重调控。干细胞微环境由干细胞周围的体细胞及细胞外基质所组成。对于SSCs而言,其微环境的主要组成成份为支持细胞,能产生多种生长因子,对SSCs的自我更新和分化有重要调控作用。研究表明,Ets转录因子家族中的Ets相关分子(Ets related molecular,ERM)对SSCs的发育有重要调节作用。ERM在支持细胞中表达,ERM缺失鼠的精原细胞能正常分化,但SSCs的更新不能维持,致使曲细精管内生精细胞逐渐耗竭,最终仅存支持细胞。提示ERM在SSCs微环境的转录调控中扮演重要角色。但ERM在支持细胞中表达的作用仍不明确,ERM可能通过干扰支持细胞而发挥作用,也可能对SSCs直接作用,这些尚有待进一步研究。ERM只是Ets家族的成员之一,该家族至少包括26个转录因子,它们都具有一个独特的DNA结构域即Ets结构域,能够结合到含有GGA(A/T)中心序列的相似位点上,广泛参与多种细胞的发育、分化、生长、转化等过程,其功能具有相似性。尤其是与ERM同一亚家族的Pea3和ER81两个转录因子,与ERM的同源性分别为95%和96%。但目前有关Pea3、ER81及Ets家族其它成员在哺乳动物睾丸组织中是否表达及其与SSCs更新、分化的关系尚不清楚。为此,本研究筛选克隆了Ets家族ERM、Pea3、ER81、Ets1、Ets2、ESE3、Elk1及TEL等8个转录因子,采用半定量反转录—聚合酶链反应(SqRT-PCR),初步检测了它们在出生后1、5、10、15、20、25、30、35、40、50、70天等11个不同发育时期小鼠睾丸组织中mRNA的表达量,以β-actin作为对照,统计分析表明,Pea3、ESE3在1到15天内高表达,而在20天以后表达量明显减少;Ets1和Ets2在30天以前高表达,35天以后表达量下降,其中Ets1在第10天表达量达到峰值。这些因子在性成熟前高表达而在性成熟以后表达量明显降低,提示它们可能在小鼠性成熟前对睾丸发育包括生精作用的调控发挥作用。ER81在各时期表达量基本稳定;IEL、ERM和Elk1的表达无明显规律性,有待于在蛋白水平进行进一步检测。本研究结果提示,Ets转录因子上述成员在小鼠睾丸组织中的表达与其发育进程有一定相关性,但其与SSCs的更新与分化究竟有何关联尚有待进一步研究。
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