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健康水禽携带病毒情况的调查

健康水禽携带病毒情况的调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘洋顾小雪霍思琪孙晓东刘玉良韩雪张倩杨卫铮王传彬中国动物疫病预防控制中心

引言/目的为初步了解我国表观健康水禽的带毒状况,本研究针对水禽养殖主产区的多个省市,在其水禽养殖的多个环节中,对表观健康鸭鹅中携带鸭瘟病毒、鸭甲型肝炎病毒Ⅰ型、小鹅瘟病毒以及鸭坦布苏病毒的情况进行调查,以期为水禽检疫和科... 详细信息

引言/目的为初步了解我国表观健康水禽的带毒状况,本研究针对水禽养殖主产区的多个省市,在其水禽养殖的多个环节中,对表观健康鸭鹅中携带鸭瘟病毒、鸭甲型肝炎病毒Ⅰ型、小鹅瘟病毒以及鸭坦布苏病毒的情况进行调查,以期为水禽检疫和科学防控水禽疫病提供参考。材料与方法 2014年11月间在浙江、安徽、福建、广东和广西五省,选择21个水禽养殖场、3个屠宰场、13个活禽交易市场以及15个自然村,共采集鸭咽肛拭子1199份、鹅咽肛拭子411份、环境样品242份以及鸭肝脾组织79份,所采动物表观均健康。对鸭拭子、鸭肝脾组织以及环境样品采用荧光定量PCR/RT-PCR进行鸭瘟病毒、鸭坦布苏病毒和鸭甲型肝炎病毒Ⅰ型检测;对鹅拭子和环境样品采用荧光定量PCR/RT-PCR进行小鹅瘟病毒和鸭坦布苏病毒检测。并对阳性样品选取特异性目的片段进行测序分析。结果与讨论检测结果显示,共检出鸭坦布苏病毒阳性样本23份,阳性率为1.19%(23/1931);检出鸭瘟病毒阳性样本4份,阳性率为0.26%(4/1520);未检出鸭甲型肝炎病毒Ⅰ型和小鹅瘟病毒。23份鸭坦布苏病毒阳性样品中21份为鹅咽肛拭子、2份为鸭咽肛拭子。样品来自广东省和广西省的两个鹅规模场(阳性率分别为46.7%、2.9%),两个活禽交易市场(阳性率分别为1.4%、1.8%)以及一个屠宰场(阳性率为19.4%)。上述结果表明表观健康鸭鹅亦可携带鸭坦布苏病毒,且鹅携带率高于鸭,这可能与不同动物宿主对该病毒的易感性存在差异有关。选取广东省鹅规模场的阳性鹅咽肛拭子进行鸭坦布苏病毒全基因组测序,获得10881 nt(GenBank:KT239021)。其中CDS全长序列10278 nt,经比对与2011年分离自广西蛋鸭毒株GX 2011(GenBank:KC990542)同源性最高,可达98.9%(10162/10278);与2012年首次报道鹅源毒株ZJGH.2(GenBank:JQ314465)相比,同源性为98.4%(10115/10278)。4份鸭瘟病毒阳性样品均来自广东省一个活禽交易市场的鸭咽肛拭子(阳性率33.3%)。选取阳性样品对其TK基因进行测序,结果显示所测得的1275bp与1962年分离的CV株(GenBank:JQ673560)同源性最高,达99.9%(1274/1275)。上述结果表明,健康鸭亦可携带鸭瘟病毒,且与已知毒株相似。已有文献报道健康水禽可以携带该病毒,但国内相关研究较少。结论表观健康的鸭鹅亦可携带鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒,且其所携带的毒株与临床分离的相应致病株同源性较高,提示在疫病传播过程中,表观健康的动物也应引起重视,有必要对其进行主动监测和检疫,防止由于表观健康动物携带病原进而造成疫病的扩散传播。

关键词：鸭瘟病毒小鹅瘟病毒鸭坦布苏病毒鸭甲型肝炎病毒

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猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：华耀王玮李郁孙裴魏建忠安徽农业大学动物科技学院

引言猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的高度接触性肠道传染病。自2010年10月以来,PED在我国... 详细信息

引言猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的高度接触性肠道传染病。自2010年10月以来,PED在我国的流行广泛并呈现新的特点,感染PEDV后,哺乳仔猪死亡率达80%00%,而繁殖母猪和公猪则很少表现出临床症状。建立快速、可靠的PEDV抗体检测方法,进行PED流行病学的监测以及猪群免疫过PED疫苗后抗体水平的检测,对于本病的预防具有重要意义。PEDVS蛋白是病毒主要的结构蛋白,可诱导机体产生中和抗体,且产生的抗体水平持续时间长,因此S蛋白可作为可靠的检测抗原。本研究以表达的S蛋白为包被抗原建立间接ELISA检测方法,为PEDV抗体检测试剂盒的研发和应用奠定基础。材料与方法利用生物学软件对PEDV S蛋白进行抗原位点分析,选择S蛋白的主要抗原表位区,利用RT-PCR扩增S基因,然后重组至表达载体pET-32a（+）中,构建重组pET（+）-32a-S原核表达质粒,进行S蛋白的诱导表达和纯化并采用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。用纯化的重组S蛋白作为包被抗原,摸索间接ELISA检测方法的抗原包被浓度、一抗的稀释倍数、一抗的作用时间、封闭液的种类、二抗的稀释倍数、二抗的作用时间及显色时间。并通过特异性试验、重复性试验以及与商品化PEDV抗体检测试剂盒和Western-blot对比试验进一步确定所建立间接ELISA检测方法的可行性。结果与讨论成功表达了重组S蛋白,重组的S蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应,并成功建立一种基于重组S蛋白的间接ELISA检测方法,优化的反应条件为:蛋白包被浓度为8mg/L,一抗的稀释倍数为1:40,一抗的作用时间是30min,最佳的封闭液时2%BSA,二抗的最佳稀释度为1:1500,的作用时间是45 min,显色时间是10 min。组内及组间变异系数均小于10%,重复性较好。建立的间接ELISA方法与商品化的ELISA抗体检测盒对比试验显示两者符合率为86.67%,敏感性为89.83%,特异性为82.62%;建立的间接ELISA方法Western-blot对比试验显示两者符合率为88.89%,敏感性为90.20%,特异性为83.33%。本研究的建立基于PEDV S蛋白的间接ELISA方法,具有良好的重复性,特异性,敏感性,并可能在临床上成为检测猪群中PEDV抗体水平及监测PED流行情况的有效方法。

关键词：主要抗原表位区猪流行性腹泻病毒 ELISA 原核表达检测方法

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肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别效应

肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别效应

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王燕张莎莎张义明李丽敏王家鑫河北农业大学动物医学院免疫学实验室

引言口蹄疫是口蹄疫病毒(FMDV)感染偶蹄动物引起的一种急性接触性传染病,目前仍无有效的预防措施。FMDV的结构蛋白VP1不仅可刺激机体产生中和抗体,而且所诱导的细胞免疫应答可对抗7种血清型FMDV的攻击,VP4含有T细胞表位,并可被牛的多种... 详细信息

引言口蹄疫是口蹄疫病毒(FMDV)感染偶蹄动物引起的一种急性接触性传染病,目前仍无有效的预防措施。FMDV的结构蛋白VP1不仅可刺激机体产生中和抗体,而且所诱导的细胞免疫应答可对抗7种血清型FMDV的攻击,VP4含有T细胞表位,并可被牛的多种单体型MHC分子识别。肥大细胞(MC)一直被认为是超敏反应的效应细胞,但最近发现,病原体可刺激MC脱颗粒释放组胺和细胞因子,藉此启动固有免疫和适应性免疫。由于MC表达Toll样受体(TLR)、甘露糖受体(MR)和清道夫受体(SR),故本实验用重组FMDV VP1-VP4蛋白分别负载经上述受体抑制剂处理的小鼠MC,观察其在不同时间的脱颗粒现象,检测其分泌的TNF-α,以揭示MC对FMDV结构蛋白的模式识别作用。方法按本室报道方法制备重组VP1-VP4蛋白,用TLR2/TLR4抑制剂、MR抑制剂、SR抑制剂分别处理小鼠MC,然后负载VP1-VP4蛋白,分别记为TLR组、MR组和SR组;VP1-VP4蛋白负载的正常MC和未做任何处理的正常MC作为对照,分别记为MC+VP1-VP4组和MC组。分别于15、30、45、60 min时观察其脱颗粒,并在0.5、1、6、12、24 h时收集上清液,用ELISA检测其TNF-α含量。结果与讨论以脱颗粒MC数为指标,SR组在负载VP1-VP4蛋白15 min时显著低于MC+VP1-VP4组(P<0.01),其他组虽然有所减少,但与MC+VP1-VP4组差异不显著,这表明MC在受到VP1-VP4刺激后发生脱颗粒主要是由SR介导的。检测上清液中肝α含量的结果显示,在0.5 h、1 h、6 h和12 h,各抑制剂组与MC+VP1-VP4组及MC组相比差异不显著。但是24 h时各抑制剂组的TNF-α含量均显著低于MC+VP1-VP4组(P<0.01),其中MR组最低,几乎与MC组相同。这表明MC可通过MR、TLR2/TLR4和SR识别VP1-VP4,从而引起MC分泌TNF-α,其中以MR介导作用最强。这表明MC主要通过SR和MR识别重组FMDVVP1-VP4蛋白,其中SR主要介导MC脱颗粒,MR则主要介导MC分泌TNF-α,但启动MC分泌TNF-α的时间却晚于其它病原体对MC的刺激。由于TNF-α可促进树突状细胞的成熟,增强其抗原提呈功能,所以FMDV结构蛋白延迟MC分泌TNF-α的现象可能是灭活FMDV疫苗免疫保护诱导期长的原因之一。

关键词：口蹄疫病毒抑制剂 VP1-VP4 结构蛋白肥大细胞模式识别

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初乳管理方案在猪流行性腹泻防控中的应用

初乳管理方案在猪流行性腹泻防控中的应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李雪平安贺佳何鑫周健强曹立辉广东悦洋生物技术有限公司

引言/目的 2010年冬季以来,PED在我国大多数省份持续爆发;2013年5月以来,PED在美国爆发,给全球养猪业带来了沉重的经济损失。据报道,PEDV可通过患病哺乳母猪的奶水进行传播。含有病原的乳汁饲喂仔猪之后可直接造成感染。另外,母乳中的s... 详细信息

引言/目的 2010年冬季以来,PED在我国大多数省份持续爆发;2013年5月以来,PED在美国爆发,给全球养猪业带来了沉重的经济损失。据报道,PEDV可通过患病哺乳母猪的奶水进行传播。含有病原的乳汁饲喂仔猪之后可直接造成感染。另外,母乳中的sIgA作为局部粘膜免疫抗体,起到主要的抗PEDV作用。基于此,韩国安捷的初乳管理方案聚焦到母猪和初生仔猪最直接的联系—初乳,通过系统检测为仔猪筛选出纯净(无PEDV病原体)和高IgA滴度(有保护力)的母猪初乳,即"魔力奶",旨在为仔猪提供有效的治疗和保健工具。材料与方法(1)样品:采集待产、在产及刚产后母猪初乳和粪便样品。(2)试剂盒:"猪流行性腹泻病毒抗原快速检测试剂盒"、"猪传染性胃肠炎病毒抗原快速检测试剂盒"、"轮状病毒抗原快速检测试剂盒"及猪流行性腹泻IgA抗体ELISA检测试剂盒购自韩国安捷集团。(3)方法:魔力奶制备:母猪分娩当天采集粪便,用快速检测卡现场检测3种主要病毒性腹泻抗原。选择抗原阴性的母猪尽可能多的采集其初乳保存,抽取小样进行PED IgA ELISA检测。根据检测结果,将OD值1.5以上的奶收集在一个容器内混合均匀,分装冻存,制备成"魔力奶"。针对无法大量采集初乳的抗原阴性母猪,如果IgA OD值1.5以上,可作为代乳母猪,为同栋舍内的发病仔猪代乳。治疗和保健方案:治疗:每次15ml,每天2次,共3天,灌服发病仔猪。观察并记录腹泻情况。将发病仔猪带去代乳母猪,代乳1-2天。观察并记录腹泻情况。保健:头胎母猪所产仔猪出生后12小时内灌服魔力奶10ml。观察并记录腹泻情况。结果(1)魔力奶的治疗效果:存活率331/364=90.9%,其中290只仔猪腹泻症状明显好转。(2)魔力奶母猪的代乳效果:治愈率113/130=86.9%,对照组的腹泻情况依旧。(3)魔力奶的保健效果:存活率295/305=96.7%。讨论PED疫情肆虐我国养猪业多年,但目前仍无特别有效的防控措施。初乳管理项目为PED腹泻的防治带来新思路、新方法,其核心在于避免初生仔猪受到带毒初乳的危害并对仔猪提供有效保护。经证实,"魔力奶"对仔猪病毒性腹泻有很好的治疗和保健效果,治愈率均达到90%以上。IgA进入仔猪肠道之后可抑制PEDV在消化道上皮附着,减缓病毒繁殖,对已有病毒起到中和作用。另外,初乳中含有大量的免疫球蛋白、生长因子及激素,能促进肠道功能恢复。建议猪场在腹泻低发期做好魔力奶的储备工作,以在腹泻高发期提高仔猪成活率、增加猪场效益。

关键词：猪流行性腹泻 IgA 保健效果初生仔猪

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参麦注射液对产后奶牛外周淋巴细胞增殖、淋巴细胞亚群及细胞因子表达的影响

参麦注射液对产后奶牛外周淋巴细胞增殖、淋巴细胞亚群及细胞因子...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：谭勋胡松华丁守强浙江大学动物科学学院

将前305天产奶量和体重相近的3～4胎经产健康荷斯坦奶牛分为试验组和对照组。自分娩当日起(产后0天),试验组奶牛每天静脉滴注参麦注射液(每100ml含10g红参和10g麦冬)400m1(用3000ml生理盐水稀释),每天1次,连续注射6天。于产后0、7、14... 详细信息

将前305天产奶量和体重相近的3～4胎经产健康荷斯坦奶牛分为试验组和对照组。自分娩当日起(产后0天),试验组奶牛每天静脉滴注参麦注射液(每100ml含10g红参和10g麦冬)400m1(用3000ml生理盐水稀释),每天1次,连续注射6天。于产后0、7、14、21天尾静脉采血,测定白细胞总数和分类计数、淋巴细胞增殖及白介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)的表达、CD3+、CD4+、CD8+和TCR-N12+淋巴细胞亚群数量。结果表明,试验组奶牛外周淋巴细胞绝对值和相对值于产后21天均较对照组奶牛升高,淋巴细胞刺激指数(SI)于产后14天显著升高(P<0.05)。参麦注射液对产后奶牛外周淋巴细胞表达IL-4和IFN-γ无显著影响(P>0.05),但有促进IFN-γ表达升高的趋势。试验组奶牛外周CD3+、CD4+、CD8+和TCR-N12+细胞亚群数量与对照组相比无显著差异(P>0.05),但TCR-N12+有升高趋势。

关键词：奶牛淋巴细胞参麦注射液

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2012-2014年河南省猪流行性腹泻病毒主要基因遗传变异分析

2012-2014年河南省猪流行性腹泻病毒主要基因遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：赵雪丽吴志明闫若潜周兵强谢彩华王淑娟马震原曹伟伟河南省动物疫病预防控制中心河南科技大学

引言猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea viruses,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,相继在欧洲和亚洲的多个国家爆发... 详细信息

引言猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea viruses,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,相继在欧洲和亚洲的多个国家爆发。自2010年冬季以来,由PEDV引起的猪流行性腹泻疫病在我国大部分养猪省份暴发和流行,给养猪业造成了巨大经济损失。为分析河南省PEDV的遗传变异情况,本研究对2012-2014年检测出的具有代表性的16个PEDV阳性样品的S1、M和ORF3基因进行序列测定和遗传进化分析。材料与方法 16个PEDV阳性样品分别来至2012-2014年河南省不同地区不同饲养管理和免疫背景猪场的样品。反复比对GenBank中登陆的PEDV S1、M和ORF3基因序列分别设计合成3对特异性引物对,分别进行三段基因的RT-PCR扩增,克隆至Peasy-T Vector,进行序列测定。应用DNAStar、ClustalX、MEGA6.0等生物学软件进行基因序列拼接、比对和进化树分析。结果与讨论S1基因系统进化树分析表明,16株PEDV河南株的S1基因的变异情况基本一致,同属于基因Ⅲ群,与2012～2013年国内多数省份以及省内不同地区之间的PEDV流行毒株相比同源性高,没有发生大的变异;与2011年国内基因Ⅰ群流行株相比亲缘关系较远(同源性90%左右),与韩国PEDV代表株的S1基因亲缘关系较近(同源性为94%左右),与日本PEDV代表株的S1基因相比亲缘关系较远(同源性为91%左右),与经典毒株CV777的相比,在不同位点存在核苷酸的缺失与插入,其同源性为92%左右,与我国现用的CV777疫苗株同源性为91%左右,亲缘关系较远。M和ORF3基因的进化树分析显示,M基因可分为4个群,河南PEDV流行毒株主要以基因3群为主,其中CHHeN ZZ-2012毒株属于基因2群;ORF3基因分为3个群,CHHeN DF2-2012毒株和CHHeN ZZ-2012毒株分布于基因2群,其余毒株属于基因3群。表明当前河南主要流行的PEDV毒株M基因和ORF3基因与2010年以后国内流行的大多数毒株同源性较高,与韩国毒株亲缘关系较近;与经典毒株和疫苗株相比,其M基因和ORF3基因发生了变异,且临床出现或与疫苗株相似或与变异株相似的流行毒株,这些毒株S1、M和ORF3基因变异的生物学意义有待于进一步深入研究。

关键词： ORF 疫苗株猪流行性腹泻病毒变异分析基因遗传河南省

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ZHOUK-1株分离鉴定及全基因组序列分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒ZHOUK-1株分离鉴定及全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：崔丹丹郭天准周峰王新港杨霞赵军陈陆常洪涛王川庆河南农业大学牧医工程学院

引言猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的、以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸衰竭为主要症状的一种传染病,该病的广泛传播给全球养猪业带来了巨大的危害。根据基因序列及抗原性差异,可将PRRSV分为以LV为代表的欧... 详细信息

引言猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的、以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸衰竭为主要症状的一种传染病,该病的广泛传播给全球养猪业带来了巨大的危害。根据基因序列及抗原性差异,可将PRRSV分为以LV为代表的欧洲型毒株及以VR 2332为代表的北美洲型毒株,而我国流行的毒株则主要以北美洲型为主。2006年,我国大部分地区暴发"高热病",并分离到PRRSV变异株,最终确定为高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)。目前我国猪群中既存在经典毒株感染,又有高致病性毒株流行发病,因此加大了本病的防控难度。本研究对PRRSV周口郸城分离株进行全基因组序列测定与分析,以期了解PRRSV的变异特征,为新型疫苗研发提供参考。材料与方法采集疑似PRRS病料(肺脏、脾脏、淋巴结等),经RT-PCR鉴定为PRRSV阳性后,接种Marc-145细胞分离病毒。参照NCBI基因数据库设计14对引物,对所得分离毒株进行全基因组序列扩增,克隆至PMD-18T,测序。用DNAstar和MEGA5.0进行同源性和遗传进化分析。结果与讨论从周口郸城某猪场分离到1株PRRSV毒株,暂命名为ZHOUK-1。全基因组Blast比对结果表明,ZHOUK-1为北美洲型毒株。序列分析发现,ZHOUK-1全基因组序列与欧洲型代表毒株LV同源性较低(60.4%),与2006年后分离的北美洲型毒株同源性较高(96.8%-99.5%)。Nsp2基因变异最大,ORF5次之;推倒氨基酸序列中变异最大的亦为Nsp2,其第481和532-560位处共存在30个氨基酸缺失,与JXA1为代表的国内高致病性分离株序列的同源性较高(90.0%),尤其与JXA1的细胞传代株同源性最接近(99.4%-99.5%),结合进化分析将其划为与JXA1类似的HP-PRRSV。但病例资料显示,送检病猪在30日龄时免疫过某厂家生产的致弱的高致病株(JXA1-R)活疫苗,60日龄左右开始发病。综合以上分析结果,推测ZHOUK-1株可能是由疫苗株JXA1-R演变而来,提示弱毒活苗的使用可能存在毒力返强的风险。此外,该毒株增殖力稳定性好,但对于其致病力及免疫原性仍需进一步研究。结论分离到1株HP-PRRSV毒株,其遗传特征相对稳定,但同时也发生了一定的变异,说明PRRSV还在不断地变异和演化;弱毒活苗可能存在毒力返强的风险。

关键词： PRRSV 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列分析 ZHOUK-1 分离鉴定

来源：评论

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广西鸭源禽痘病毒的分离与鉴定

广西鸭源禽痘病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：曹慧慧孙文超郑敏韦显凯苏姣秀梁晟郑列丰李军刘棋广西大学广西动物疫病预防控制中心

引言禽痘(Avian pox)是由禽痘病毒(Avian poxvirus,APV)引起家禽、观赏鸟和野生鸟类的一种急性接触性传染病,目前已经发现其可自然感染大约9000种野禽和家禽中的232种。其典型临床特征是在禽无毛或少毛的皮肤上发生痘疹(皮肤型);或在禽... 详细信息

引言禽痘(Avian pox)是由禽痘病毒(Avian poxvirus,APV)引起家禽、观赏鸟和野生鸟类的一种急性接触性传染病,目前已经发现其可自然感染大约9000种野禽和家禽中的232种。其典型临床特征是在禽无毛或少毛的皮肤上发生痘疹(皮肤型);或在禽口腔、咽喉部粘膜形成纤维素性坏死性痂膜(粘膜型),即所谓的"白喉"。与鸡、鸽、火鸡、麻雀等陆禽相比,鸭和鹅等水禽极少发生禽痘,鸭痘曾经在法国、荷兰、意大利、印度和加拿大的家鸭和德国番鸭发生过。目前主要在北美地区的麻鸭(mallard duck)、黑嘴天鹅(trumpeter swan)、北美斑鸭(mottled duck)、赤头鸭(red head duck)和蓝翅鸭(bhe-winged teal)等野生水禽中被发现,而整个东亚地区,包括东南亚和东北亚从未有从家鸭或者野生水禽分离到禽痘病毒的报道。2013年10月,我们首次从广西大新、田东和西林等3'县分离到同一种鸭源禽痘病毒(暂命名为MDUPV/(GX),并进行病毒的鉴定,为防控禽痘病毒在我国的流行传播提供理论依据。材料与方法采集发病鸭眼痘组织样品,经细菌学和真菌培养排除细菌感染后,通过电镜和病理组织学检查鉴定病毒。同时根据文献分别合成禽痘病毒P4b基因(fpv167)和DNA聚合酶基因(fpv094)特异性引物,分别扩增田东、大新和西林毒株的P4b基因和DNA聚合酶基因部分序列,用MEGA遗传进化分析软件绘制基于P4b基因部分序列(426bp)和DNA聚合酶基因部分序列(555bp)的遗传进化树。将皮肤痘疹病料研磨,按1:5制成悬液,经双抗处理后,采用人工气室法接种于11日龄SPF麻鸭胚绒毛尿囊膜。结果与讨论皮肤痘疹组织,研磨后取少量上清,经磷钨酸负染,在透射电镜下观察,可见330×280×200nm呈砖形的病毒粒子,且表面有不规则的管状结构,符合禽痘病毒粒子形态特征。进一步制备超薄切片在电镜下观察,可见典型的病毒包涵体。取皮肤痘疹组织制备组织切片,经HE染色,在显微镜下观察,发现病变部位有大量角质(棘)细胞增生、水肿、坏死和局部炎性细胞浸润,在许多病变细胞的胞浆中可见巨大、嗜酸性的、呈环状的胞浆包涵体(Bollinger氏小体),符合痘病毒感染的病理学特征。遗传进化结果表明,广西麻鸭毒株与北美野生水禽源禽痘病毒最为接近,属于A5亚群的一个独立新分支。鸭胚分离结果显示,部分鸭胚在接种部位附近的绒毛尿囊膜有灰白色的水肿隆起,且PCR检测病毒P4b基因为阳性。初步证实MDUPV/GX可以在麻鸭胚中增殖,但让需要继续传代使其充分适应。

关键词：禽痘病毒绒毛尿囊膜分离与鉴定

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河南猪群中猪巨细胞病毒感染状况流行病学调查

河南猪群中猪巨细胞病毒感染状况流行病学调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘梅芬拜廷阳闫若潜吴志明赵雪丽谢彩华王淑娟王东方河南省动物疫病预防与控制中心周口市畜禽改良站

引言猪巨细胞病毒病是由致猪发病的猪巨细胞病毒（Porcine Cytomegalovirus,PCMV）引起的一种条件性传染病。长期以来由于对该病研究不够深入,其对猪群的危害性没有得到足够关注。但近年来研究发现该病毒主要在猪肺泡巨噬细胞中增殖破... 详细信息

引言猪巨细胞病毒病是由致猪发病的猪巨细胞病毒（Porcine Cytomegalovirus,PCMV）引起的一种条件性传染病。长期以来由于对该病研究不够深入,其对猪群的危害性没有得到足够关注。但近年来研究发现该病毒主要在猪肺泡巨噬细胞中增殖破坏机体免疫系统,造成机体感染后抵抗力降低,易并发和继发其他病原体（如猪蓝耳病）感染,PCMV对养猪业的危害逐渐引起了行业人士的高度重视。因此,开展猪群中猪巨细胞病毒病的流行病学调查,对降低该病对养猪业的危害具有重要意义。材料与方法本研究于2011年014年从河南省多个地方进行调查和采样,每年均调查20个散养户350头份血清样品,小规模场（母猪存栏50-300头）20个场次600头份样品,大规模场（母猪存栏300头以上）10个场次300头份样品;猪蓝耳病和猪圆环病毒2型RT-PCR/PCR检测方法、猪伪狂犬病gE鉴别酶联免疫吸附试验（gE-ELISA）分别采用的是国家标准和农业行业标准,标准号分别为GB/T 27517-2011（鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR检测方法）、GB/T21674-2008（猪圆环病毒聚合酶链式反应试验）、NY/T 678-2003（猪伪狂犬病免疫酶试验方法）;猪巨细胞病毒检测方法采用本中心建立的猪巨细胞病毒荧光定量PCR方法。结果与讨论对2011年014年河南省部分猪群进行PCMV感染状况的流行病学调查结果显示:PCMV的感染呈逐年增加趋势,其中2014年猪群的阳性率最高（58.7%）,2013年次之（52.6%）,2011年猪群的阳性率较低（44.3%）。对不同饲养模式的猪群进行PCMV感染状况进行流行病学调查显示,PCMV在不同的饲养环境中都有感染,其中散养户猪阳性率最高（60.5%）,小规模场次之（50.6%）,大规模场最低（33.3%）;对不同年龄的猪群进行PCMV感染状况的流行病学调查显示,PCMV在猪群中感染普遍,其中仔猪阳性率最高（65.2%）,母猪次之（47.9%）,育肥猪最低（37.9%）;对PCMV与其他病原的混合感染状况进行流行病学调查结果显示:PCMV与猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒存在二重或三重混合感染现象。该研究结果丰富了我国PCMV流行病学调查内容,加深了对我国PCMV感染现状的了解,对我国PCMV的科学防控将具有重要的指导意义。

关键词：感染状况流行病学调查猪巨细胞病毒感染

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商品肉鸡鸡毒支原体病、大肠杆菌病、肠毒综合症生态防制试验

商品肉鸡鸡毒支原体病、大肠杆菌病、肠毒综合症生态防制试验

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：律祥君崔金良周思德杨俊忠李汝良律海杰河南省淮阳县畜牧局

商品肉鸡鸡毒支原体病、大肠杆菌病、肠毒综合症可以说是除肉鸡病毒性疾病外危害肉鸡养殖业最严重的三大疾病,由于其发病率高、防制难度大亦是困扰肉鸡养殖业发展的三大杀手。鸡毒支原体是造成鸡呼吸道黏膜损伤、气囊炎症的第一罪魁祸首... 详细信息

商品肉鸡鸡毒支原体病、大肠杆菌病、肠毒综合症可以说是除肉鸡病毒性疾病外危害肉鸡养殖业最严重的三大疾病,由于其发病率高、防制难度大亦是困扰肉鸡养殖业发展的三大杀手。鸡毒支原体是造成鸡呼吸道黏膜损伤、气囊炎症的第一罪魁祸首;肠毒综合症是近年来发生的一种新的肠道病,该病造成肠道黏膜损伤使鸡消化力降低,生长速度减慢。可以说鸡毒支原体、肠毒综合症先把鸡的呼吸系统、消化系统两个大门攻破为大肠杆菌进一步破坏创造条件,故为了有效防治这些疫病对肉鸡养殖业的危害,我们根据其发病规律和动物疫病生态防制原理进行试验,本试验应用鸡毒支原体活疫苗(F36株)进行点眼、滴鼻、定期应用微生态制剂饲喂,夏、秋季用小苏打调节鸡体内环境,试验分春、夏、秋、冬四个季节进行防治试验,通过三批203058只鸡试验,综合分析,使用鸡毒支原体活疫苗(F36株)免疫鸡群呼吸道症状发生率明显降低,春季试验组平均发病率比对照组低19.96个百分点、夏季试验组平均发病率比对照组低27.39个百分点、秋季试验组平均发病率比对照组低23.83个百分点、冬季试验组平均发病率比对照组低24.63个百分点,发生气囊炎死亡鸡数量明显减少。使用微生态制剂肠毒综合症发病率,春季试验组平均发病率比对照组低8.39个百分点、夏季试验组平均发病率比对照组低28.90个百分点、秋季试验组平均发病率比对照组低26.87个百分点、冬季试验组平均发病率比对照组低4.61个百分点。从出栏成活率看试验组比对照组高7—16百分点,出栏体重统计试验组比对照组高4—12%。随着肉鸡养殖业的不断发展,一方面疾病也越来越复杂,使用的药物种类也增多,抗生素的过多、过量使用,造成了抗生素药效下降、体内残留和过量的抗生素排泄到环境所造成的污染,使人类的生存环境变得更加恶劣;另一方面人类对生活质量和健康的重视,要求更多的绿色食品供应市场,因此生态方法防治畜禽疾病是一条方便、有效的途径。生态防治动物疫病的推广与应用,能更好的推动我国绿色养殖进程,解决药物残留问题,实现动物源性食品绿色化,提高畜产品的国际市场竞争能力,保障人民身体健康,必将发挥重要作用。笔者认为目前对生态防治的概念没有明显的界定,如我们本次试验用鸡毒支原体活疫苗点眼、滴鼻实际是应用动物细胞受体占位原理,因为鸡毒支原体疫苗免疫主要以细胞免疫为主,对体液免疫效果尚没有确定,我们本次应用鸡毒支原体活疫苗免疫在三个养殖小区均取得了明显的效果,故我们建议应用疫苗免疫接种及调节动物机体内外环境亦应该归为生态学防治研究内容,建议业内人员扩大视野,以利生态防治技术更进一步提高和推广。

关键词：鸡毒支原体肠毒综合症商品肉鸡大肠杆菌病

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