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儿茶酚胺类激素对胸膜肺炎放线杆菌生长的调节作用及机制

儿茶酚胺类激素对胸膜肺炎放线杆菌生长的调节作用及机制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黎璐陈召辉苏志鹏陈焕春周锐农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

引言微生物能够感应宿主的应激激素,将其作为一种环境信号,调节自身的生长和毒力等行为,进而影响疾病的发生发展过程,这种现象成为了应激能影响感染性疾病发生与发展的一种新的机制,也是病原菌重要的致病机理之一。本人前期的研究发现... 详细信息

引言微生物能够感应宿主的应激激素,将其作为一种环境信号,调节自身的生长和毒力等行为,进而影响疾病的发生发展过程,这种现象成为了应激能影响感染性疾病发生与发展的一种新的机制,也是病原菌重要的致病机理之一。本人前期的研究发现儿茶酚胺类激素能够广泛调控猪的重要病原菌胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)基因的表达,并调节APP一些感染相关特征,说明APP能主动响应宿主的应激激素。本研究从生长调节角度,进一步探索了儿茶酚胺类激素对APP的作用和机制,结果对APP和其它病原菌引起的传染病的发病机制和新型防控策略研究都具有重要意义。材料与方法 APP在人工培养基(CDM)中培养,通过检测OD值和细菌计数检测生长能力。基因缺失突变体由本实验室构建保存。APP全基因组表达谱芯片根据APP已有的基因组序列设计,为Agilent定制芯片。激素及转铁蛋白购自sigma公司。结果与讨论血清抑制了APP在人工培养基(CDM)中的生长,通过添加不同金属离子发现这种抑制与培养基中的铁离子浓度有关。在血清培养基中,三种激素肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺均能显著促进APP的生长,而高等生物的肾上腺素能受体抑制剂和已知的细菌激素受体基因qseB/C的缺失均不能阻断激素对APP生长的促进作用。检测了添加血清和激素后培养的APP基因表达谱,发现有20个铁代谢相关基因在添加血清后显著上调,而在血清培养基中添加了激素后又都显著下调,说明儿茶酚胺类激素解除了血清给APP造成的铁限制环境。在CDM中添加含铁的转铁蛋白或不含铁的转铁蛋白(ATF)替代血清,发现ATF是血清中抑制APP生长的成分之一。在ATF培养基中,激素也能促进APP的生长,其作用也不是由已知的高等动物激素受体和细菌激素受体介导的,而缺失了tonB2基因后,APP生长再不受到激素的影响,说明在ATF的培养基中,TonB2系统在儿茶酚胺类激素促进APP的生长作用中发挥重要功能。结论本研究从宿主分泌的激素小分子对病原微生物的作用这一角度,研究了儿茶酚胺类激素对APP生长的调节作用和机制。发现了儿茶酚胺类激素能够在铁限制环境下促进APP的生长,其作用机制与高等生物的激素信号通路不同,也不由已知的细菌激素受体介导,而是通过调节APP的铁摄取和代谢过程完成的。这些结果为APP的致病机制提供了新的理论,也为应激能够促进病原菌的感染和传播这一现象提供了新的解释。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌应激激素儿茶酚胺类激素 APP

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鸡CH25H催化产生25HC发挥抗ALV-J功能

鸡CH25H催化产生25HC发挥抗ALV-J功能

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第十六次全国畜禽遗传标记学术研讨会

作者：谢婷婷冯敏张细权华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室农业部鸡遗传育种与繁殖重点实验室广东广州510642

引言干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)是宿主体内一群数量庞大的抗病毒基因群,胆固醇-25-羟化酶(Cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)是一个已被鉴定的ISG 基因,然而其抵抗家禽病毒的功能尚不清楚。

关键词： ALV-J 干扰素刺激基因 CH25H 25HC CRISPR/Cas9 RNA-Seq21

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检测通用型和H5亚型禽流感病毒TaqMan-MGB探针复合实时荧光PCR方法的建立

检测通用型和H5亚型禽流感病毒TaqMan-MGB探针复合实时荧光PCR方...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：马震原吴志明闫若潜赵雪丽谢彩华王东方王淑娟曹伟伟河南省动物疫病预防控制中心

引言禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒（Influenza Virus Type A）引起的禽类的一种急性、烈性传染病。目前以H5、H7、H9亚型禽流感病毒的致病性最强,危害最大。其中,由H5N1亚型禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）引... 详细信息

引言禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒（Influenza Virus Type A）引起的禽类的一种急性、烈性传染病。目前以H5、H7、H9亚型禽流感病毒的致病性最强,危害最大。其中,由H5N1亚型禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）引起的高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）被国际兽疫局定为A类传染病,对人类健康和公共卫生安全造成了严重危害。目前检测AIV方法病毒分离、血清学检测以及RT-PCR方法等由于耗时较长、操作复杂、无法区分感染与免抗体等缺陷已无法满足快速诊断需要;因此建立灵敏、特异、快速、高通量的荧光定量PCR方法已势在必行。本研究采用TaqMan-MGB探针建立AIV通用（AIV-T）和H5亚型（AIV-H5）复合实时荧光PCR（FQ-PCR）检测方法,该方法能够检测区分1个碱基差异,可对AIV作出快速准确诊断并判定出是否为H5亚型HPAIV,对AIV的早期快速诊断和采取有效防控措施有重要的意义。材料与方法根据GenBank中公布的禽流感病毒M基因的高度保守序列,设计了1对通用型引物和1条TaqMan MGB荧光探针;根据H5禽流感病毒HA基因的型特异性序列,设计了1对H5亚型特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针;以流感病毒Uni-12引物作为共用反转录引物。用构建好的阳性重组质粒作为标准品绘制标准曲线,通过对反应条件优化,用敏感性试验、特异性试验、稳定性及重复性试验、应用试验对本方法进行验证。结果与讨论本研究对引物与探针浓度进行优化,以提高反应扩增效率与敏感度。以终浓度1.0×10～5拷贝/μL重组质粒作为检测模板,应用荧光PCR仪采用矩阵法筛选不同浓度的引物和探针组合,筛选针对AIV-T/AIV-H5基因复合FQ-PCR最佳引物浓度、探针浓度和最佳反应条件。该方法在1.0×10～1.0×10～7copies/μL检测范围之间具有良好线性关系,最小检出量达到10copies/μL;具有较好的重复性、稳定性;与灭活的AIV H7亚型及H9亚型抗原、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病毒核酸无交叉反应,具有较好的特异性。由国内具有AIV病毒分离培养研究资质的实验室用本研究建立的方法对其保存的36份疑似禽流感病毒样本进行检测,与商品化禽流感病毒通用型、H5亚型2种荧光PCR检测试剂盒同时检测结果相比,本方法显示出操作简便、耗时短、高通量、敏感稳定的特点,从而说明该方法可用于临床样品中微量禽流感病毒病毒定型检测。

关键词：禽流感病毒 AIV PCR TaqMan-MGB 实时荧光

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板蓝根多糖对无初乳仔大鼠免疫功能的影响

板蓝根多糖对无初乳仔大鼠免疫功能的影响

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第五次会员代表大会暨第十六次学术研讨会

作者：赵珊珊河南农业大学牧医工程学院

目的:研究不同浓度的板蓝根多糖对无初乳仔大鼠肠道形态学、系统免疫、肠道黏膜免疫的影响。方法:将30窝0日龄SP仔大鼠随机分成5组,A组:0日龄仔大鼠正常饲养(吃初乳和常乳),同时灌胃0.9%的生理盐水。B组、C组、D组、E组:0日龄仔大鼠由... 详细信息

目的:研究不同浓度的板蓝根多糖对无初乳仔大鼠肠道形态学、系统免疫、肠道黏膜免疫的影响。方法:将30窝0日龄SP仔大鼠随机分成5组,A组:0日龄仔大鼠正常饲养(吃初乳和常乳),同时灌胃0.9%的生理盐水。B组、C组、D组、E组:0日龄仔大鼠由常乳代乳母鼠饲喂,再分别灌胃0.9%的生理盐水、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的板蓝根多糖。连续灌胃7天,21日龄断奶。在0、7、14、21、28日龄取材,应用组织化学、免疫组织化学、免疫浊度法、流式细胞术等方法检测各组仔大鼠小肠各段等形态学指标;各组仔大鼠免疫器官重量和指数;小肠各段组织中SIgA、IgG阳性细胞的分布与含量;外周血中T淋巴细胞亚群及血清中IgA、IgG的含量。结果:①各组仔大鼠小肠长度、重量,各组十二指肠、空肠、回肠绒毛长度、隐窝深度随日龄均呈增加趋势(p<0.05),而V/C值随日龄而减少。A组大鼠小肠长度、重量、十二指肠、空肠、回肠绒毛长度最高,C、D组仔大鼠小肠长度、重量较B、D组高(p<0.05),C组十二指肠、空肠、回肠绒毛长度大于B、D组。②各组仔大鼠脾脏重量和指数、胸腺重量和指数呈"N"变化趋势。A组各日龄四个指标数值最大,28日龄C组脾脏指数、胸腺指数显著高于B、E组。③仔大鼠十二指肠、空肠、回肠中SIgA、IgG阳性细胞数量随日龄呈增加趋势,由十二指肠到回肠呈减少趋势。在十二指肠C、D组SIgA在21、28日龄高于A、B、E组(p<0.05),在空肠A、C组IgG在14、28日龄显著高于其它组。④各组外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群含量随日龄呈"V"变化趋势。C组CD3+、CD8+T淋巴细胞在14、28日龄高于其它组,A组CD4+T淋巴细胞亚群在0、7、显著高于其它组。⑤各组外周血中IgA含量呈"∧"型变化。7日龄A、C、D组IgA含量显著增加,21日龄B组IgA含量最低,28日龄各组IgA含量处于稳定,但A组含量最高。IgG含量呈正"N"型变化。7日龄A组、C组IgG含量最大,14-21日龄各组IgG含量均降低,但A组、C组、D组含量下降较少。28各组显著增加。结论:板蓝根多糖在一定程度上可以促进仔大鼠小肠发育,改善黏膜结构;可以促进免疫器官发育,提高外周血中T淋巴细胞亚群和血清中IgG、IgA及小肠各段组织中SIgA、IgG阳性细胞数量。从而提高小肠对营养物质的吸收功能,增强仔大鼠的系统免疫与黏膜免疫功能。虽然添加板蓝根多糖的组没有初乳组效果好,但比仔大鼠无初乳效果好,所以添加一定剂量的板蓝根多糖可以应用在无初乳仔畜中,可以提高其肠道发育和免疫功能,效果最佳的板蓝根多糖剂量为10 mg/kg。

关键词：板蓝根多糖 T淋巴细胞亚群系统免疫黏膜免疫

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Identification of Phosphoproteomics and Tyrosine Phosphoproteins Analysis in Boar Spermatozoa during Capacitation

Identification of Phosphoproteomics and Tyrosine Phosphoprot...

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会

作者： LI Xin-hong ZHANG Yuan-yuan HU Qi-meng WANG Liang-liang Shanghai Key Laboratory of Veterinary Biotechnology School of Agriculture and BiologyShanghai Jiao Tong University

Mature sperm in mammalian is a kind of highly differentiated cells and only a very small part of proteins are synthesized in ***,post-translational modification,especially spermatozoa protein phosphorylation have important roles during fertilization ***, little is known about the regulation roles of tyrosine-phosphorylated proteins and their function with respect to hyperactivation and acrosome reaction in signaling pathway during capapcitation

关键词： APK Identification of Phosphoproteomics and Tyrosine Phosphoproteins Analysis in Boar Spermatozoa during Capacitation

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副猪嗜血杆菌中毒素蛋白基因hipA的生物信息学分析

副猪嗜血杆菌中毒素蛋白基因hipA的生物信息学分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：车勇良陈如敬王隆柏吴学敏刘玉涛王晨燕周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

(引用与目的) hipBA基因是第一个被发现的与细菌抗生素抗性有关的基因,HipA蛋白是毒素蛋白,预测副猪嗜血杆菌的毒素蛋白HipA的二级结构和B细胞抗原表位,将为进一步研究分析副猪嗜血杆菌毒素蛋白HipA的功能奠定理论基础。(材料与方法)首... 详细信息

(引用与目的) hipBA基因是第一个被发现的与细菌抗生素抗性有关的基因,HipA蛋白是毒素蛋白,预测副猪嗜血杆菌的毒素蛋白HipA的二级结构和B细胞抗原表位,将为进一步研究分析副猪嗜血杆菌毒素蛋白HipA的功能奠定理论基础。(材料与方法)首先从GenBank中查找副猪嗜血杆菌毒素蛋白基因hipA的基因序列;应用ExPASy工具对副猪嗜血杆菌HipA蛋白性质进行分析;应用ProtParam分析酶的氨基酸序列组成、相对分子质量、等电点等理化性质:Signal P4.1进行蛋白信号肽预测;应用EXPASY服务器上的SOPMA方案分析预测副猪嗜血杆菌HipA蛋白的二级结构;采用人工神经网络方法的ABCpred软件对蛋白的B细胞表位进行预测。(结果与讨论)副猪嗜血杆菌属于巴斯德菌科嗜血杆菌属成员,是专性寄生于猪上呼吸道的条件性病原微生物。副猪嗜血杆菌病是当前导致断奶仔猪死亡的首要原因,已成为影响世界养猪业发展的重要病因之一。然而由于该菌的血清型众多,疫苗不能很好地预防该病的发生,抗生素的使用又导致耐药性的产生。因此,为了减少细菌的耐药性,阐明副猪嗜血杆菌的耐药机制迫在眉睫。毒素-抗毒素基因hipBA已经被证明与细菌的抗性相关。在此基础上,运用生物信息学相关软件对毒素蛋白HipA的推导氨基酸序列进行了理化性质、信号肽、二级结构和B细胞表位的预测,以便进一步研究HipA蛋白的功能,为副猪嗜血杆菌耐药机制的研究奠定基础。对于蛋白的B细胞表位预测,已有多种单参数预测模型和相应的分析软件,但为了克服单参数预测模型的局限性,提高预测的准确性,一般对多种参数的预测结果进行综合考虑。而ABCpred软件是结合氨基酸的性质(亲水性、柔韧性、可及性、极性、暴露表面、转角)和隐形马尔可夫模型来预测线性表位,预测结果表明,同那些仅依赖于氨基酸性质的预测方法相比,ABCpred预测结果的准确性有一定程度的提高。通常蛋白质的二级结构与蛋白质的B细胞表位有较大的关系。该研究借助于生物信息软件首次对副猪嗜血杆菌HipA蛋白的二级结构和潜在的B细胞表位进行了预测和分析。该实验运用SOPMA方案预测蛋白质的二级结构,发现该蛋白以主要由α螺旋和无规则卷曲组成,其中,α螺旋有196个、占44.75%,无规则卷曲有128个、占29.22%,延伸链有73个、占16.67%,而β转角只有41个、占9.36%。应用ABCpred软件预测的B细胞表位优势区主要有1个区段(分值在0.8以上)。(结论)副猪嗜血杆菌毒素蛋白HipA的信号肽及抗原表位的预测,将为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌耐药机制二级结构毒素蛋白生物信息学分析

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串联表达Ubiquitin基因与PRRSVM基因DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验

串联表达Ubiquitin基因与PRRSVM基因DNA疫苗的构建及其对小鼠的免...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：张维军林燕王群孙庆歌杨涛童光志吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国农业科学院上海兽医研究所

利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX1-U-M的免疫效果... 详细信息

利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX1-U-M的免疫效果。IFA试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M能够在BHK-21细胞内成功表达目的基因,小鼠免疫试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M能够在小鼠体内诱生PRRSVELISA抗体与细胞免疫反应。但是,ELISA抗体水平比较低,而细胞免疫的水平则相对较高。这说明泛素在一定程度上可以促进PRRSV M基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。本研究的结果为进一步探讨PRRSVM蛋白在免疫中的作用、泛素的功能,也为PRRS新型疫苗的研究提供基础数据。

关键词： PRRSV M基因泛素体液免疫细胞免疫 DNA疫苗

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急性犬瘟热感染组织脏器的研究

急性犬瘟热感染组织脏器的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：岳欣赵德明中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室

临床中的犬瘟热病毒感染多为急性和亚急性型,犬年龄在3月龄左右,其症状和病毒复制的脏器都与慢性病例有很大区别。临床上急性病例的主要病变集中在肺脏和淋巴组织,组织病理学观察到犬淋巴结炎和多核巨细胞性肺炎。根据免疫组织化学染色... 详细信息

临床中的犬瘟热病毒感染多为急性和亚急性型,犬年龄在3月龄左右,其症状和病毒复制的脏器都与慢性病例有很大区别。临床上急性病例的主要病变集中在肺脏和淋巴组织,组织病理学观察到犬淋巴结炎和多核巨细胞性肺炎。根据免疫组织化学染色结果发现在犬瘟热急性病例的淋巴结皮质犬瘟热抗原呈强阳性,且密度很高。而在犬的肺脏虽然表现出严重的肺炎症状,但是犬瘟热病毒抗原阳性反应弱,仅在支气管上皮和少量的巨噬细胞胞浆中观察到。犬瘟热病毒首先在犬的淋巴组织中进行复制增殖,破坏被膜下淋巴窦和淋巴小节中的T淋巴细胞和B淋巴细胞,影响淋巴组织输出到外周血液循环中的淋巴细胞数量。结论:犬瘟热病毒病虽然临床上以肺脏病变最为严重,但是急性型和亚急性型的犬瘟热病毒主要在淋巴组织的T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞中增殖,所以应该以淋巴组织作为犬瘟热病毒的主要分离脏器。

关键词：犬瘟热病毒免疫组织化学淋巴结

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猪LRRC1基因编码区序列及其编码蛋白的生物信息学分析

猪LRRC1基因编码区序列及其编码蛋白的生物信息学分析

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第十六次全国畜禽遗传标记学术研讨会

作者：崔艺佳周晓霞董新星李明丽兰国湘严达伟鲁绍雄云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

引言：富含亮氨酸重复序列蛋白1(leucine rich repeat containing 1,LRRC1)由524 个氨基酸组成,主要定位于细胞质和细胞膜.LRRC1 基因在胎盘和睾丸中呈高度表达,在心脏、肾脏、甲状腺、肺、前列腺、结肠和气管中表达较低.

关键词：猪 LRRC1基因编码区生物信息学分析

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2014.08-2015.06我国猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学分析

2014.08-2015.06我国猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张洪亮冯丽苹冷超粮陈家锃刘春晓白云王倩安同庆彭金美蔡雪辉田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所南阳师范学院中国农业科学院上海兽医研究所

引言猪瘟病毒（CSFV）是一种能引起猪的高热、出血,并最终死亡等特征的猪烈性传染性病毒,一旦爆发将会造成严重的经济损失。CSFV被世界动物卫生组织（OIE）列入必须申报的动物传染病目录,我国将其列为一类动物传染病,并被纳入国家强制... 详细信息

引言猪瘟病毒（CSFV）是一种能引起猪的高热、出血,并最终死亡等特征的猪烈性传染性病毒,一旦爆发将会造成严重的经济损失。CSFV被世界动物卫生组织（OIE）列入必须申报的动物传染病目录,我国将其列为一类动物传染病,并被纳入国家强制免疫计划。1954年,我国成功研制出猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）C株,并获得广泛使用,此后CSF的爆发和流行得到有效控制。然而2014年下半年至今,我国部分规模化养猪场猪瘟发病率明显增加,造成了较大的经济损失。本实验室通过对2014年8月至2015年6月期间全国各地的送检样品中进行CSFV病原检测、病毒分离和测序以及病毒遗传变异分析等,研究CSFV的分子流行病学情况,为CSF的防控提供依据。材料和方法参照GenBank中登陆的CSFV全长序列,应用Oligo6.0设计针对E2全长的引物序列,之后用所测序列的E2基因BLAST,根据相似性最高的毒株zi0801（登录号:FJ529205）设计全长扩增引物。将PCR产物克隆至PMD-18T,进行测序鉴定,应用DNAStar、MEGA5.1等生物学软件进行序列拼接、比对和遗传进化分析。结果与讨论2014年8月至2015年6月期间,本实验室共分离到来自山东、吉林、黑龙江、江苏和河北等省规模化养猪场的35株CSFVs,并对这些新分离株的E2全长和NS5B部分基因进行了测序。序列同源性分析表明,新分离株与之前的CSFV 2.1亚型毒株,特别是2.1b亚亚型毒株,相似性最高,达到93.7-98.1%。基于E2全长（1119nt）、E2部分（190nt）和NS5B部分（409nt）序列的遗传进化树分析表明,除了部分新分离株（7株）属于2.1b亚亚群外,其它新分离株（28株）可以形成一个相对独立的进化分支,命名为2.1d亚亚群。对新分离株E2蛋白的氨基酸序列分析表明,2.1d亚亚群毒株具有独特的分子特征,包括R,K,和A等。JSZL猪瘟毒株（GenBank:KT119352）是本实验室分离的一株2.1d亚亚群毒株,全长12297bp,5'UTR和3'UTR分别为373bp和227bp,基因组中唯一的一个开放阅读框为11697bp,编码3898个氨基酸。JSZL基因组与1.1、1.2、2.1a、2.1b、2.1c、2.1d、2.2、2.3、3.2、3.4亚型的同源性分别为84.6-85.4%、85.2%、93.1-94.4%、94.6-96.5%、92.2-92.4%、96.6-97.4%、87.6-91.8%、88.8-89.9%、84.0%、83.2-83.5%。它与2.1亚型的同源性显著高于其他亚型,与2.1b的同源性高于2.1a和2.1c,然而,这类毒株自身的同源性更高。综合这些结果表明,2.1d亚亚群毒株的出现和流行可能是CSF大爆发的一个前兆,应该引起重点关注。

关键词：分离株猪瘟病毒分子流行病学

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