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Characterization of Tissue Expression and Cloning of POU2F3 Gene in Chinese Merino(Xinjiang Junken Type)

Characterization of Tissue Expression and Cloning of POU2F3 ...

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会

作者： RONG En-guang YU Lei QIAO Shu-pei YANG Hua LI Hui WANG Ning College of Animal Science and Technology Northeast Agricultural University Institute of Animal Husbandry and Veterinary Xinjiang Academy of Agriculture and Reclamation Science

Introduction POU2f3(POU domain,class 2,transcription factor 3) is a member of the POU-domain family of protein,some members of which are known to be transcription factors with roles in regulating housekeeping or tissue-specific gene expression in the adult *** study was to explore the expression level of POU2F3 gene in various sheep tissues,and clone the full-length coding sequence(CDS) of sheep POU2F3 gene in Chinese Merino(Xinjiang Junken Type).

关键词： POU domain Xinjiang Junken Type Characterization of Tissue Expression and Cloning of POU2F3 Gene in Chinese Merino

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吉林省某猪场爆发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎

吉林省某猪场爆发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王明月郭昌明鲁海冰邢泽黎朱利塞盖小春王芳王新平吉林大学动物医学学院

前言猪葡萄球菌(***)与金黄色葡萄球菌(***)同属葡萄球菌科葡萄球菌属中的成员。它们是一类最为常见和重要的条件性致病微生物,也是引起人类和动物共患传染病的病原体。据报道,猪葡萄球菌可以引起猪渗出性皮炎,马与鸡关节炎、牛乳腺炎... 详细信息

前言猪葡萄球菌(***)与金黄色葡萄球菌(***)同属葡萄球菌科葡萄球菌属中的成员。它们是一类最为常见和重要的条件性致病微生物,也是引起人类和动物共患传染病的病原体。据报道,猪葡萄球菌可以引起猪渗出性皮炎,马与鸡关节炎、牛乳腺炎。此外与猪群接触的人类可以出现菌血症、败血症和多器官功能衰竭。2015年3月份,吉林省某猪场爆发了一种临床上以呼吸困难、发绀、腹泻为主要特征的疫病,剖检病理变化主要表现化脓性肺炎和纤维素性胸膜肺炎和腹膜炎,发病猪一般10-15天死亡。我们从送检病猪体内的实质器官和血液中分离出一种革兰氏阳性葡萄球菌,经过培养及生化实验等初步鉴定后,进行16SrRNA和L36基因片段的扩增和测序。测序结果发现,扩增出的基因片段的序列与猪葡萄球菌核苷酸序列的同源性达96%-100%,表明所分离的菌株为猪葡萄球菌,并将其命名为JLHN15。材料和方法无菌采取病猪的心包积液、血液、肝脏、脾脏和肺脏,接种含有5%血清和5%血液的琼脂平板,进行分离培养。然后对分离培养出的细菌进行革兰氏染色镜检和生化特性、药敏试验、凝固酶试验和动物接种试验,确定细菌的生化特性和致病性。同时应用PCR扩增细菌基因组序列,测定和分析确定细菌的种类。结果与讨论病料直接涂片及染色,镜下可见菌体呈蓝紫色,大小均匀,不规则排列呈葡萄串样或成双排列;无菌采取病料接种固体培养基出现圆形、不透明、湿润、表面光滑、边缘整齐的菌落。血液琼脂平板培养无溶血现象;凝固酶试验发现试管内容物完全凝固,试管倒置或倾斜时不流动,结果为阳性。生化特性鉴定发现,分离菌株对还原硝酸盐、精氨酸、麦芽糖、蔗糖为阳性;对鸟氨酸、葡萄糖、尿素、ONPG、木糖、赖氨酸、硫化氢为阴性。药敏实验发现,JLHN15对先锋霉素、氟哌酸、美福仙、头孢肤肟、复方新诺明为高度敏感;罗红霉素、苯唑青霉素、新霉素、万古霉素等中度敏感;卡那霉素、多粘霉素B等不敏感。小鼠接种试验发现JLHN15对小鼠具有明显的致病性,接种小鼠于48小时内均发生死亡。剖检可见肺脏有充血水肿,心包积液。肝脏和脾脏有出血点和大量纤维素沉着。PCR扩增、序列测定和分析发现扩增片段核苷酸序列与猪葡萄球菌的同源性最高,可达96%-100%,表明分离的细菌菌株为猪葡萄球菌。金黄色葡萄球菌引起动物的化脓性肺炎和败血症的报道非常多见,而由猪葡萄球菌引起化脓性肺炎和败血症的报道非常罕见,本研究为首次报道。结论病料涂片、镜检,分离培养,生化鉴定、PCR等结果表明引起爆发化脓性肺炎和败血症的病原体为猪葡萄球菌;JLHN15对先锋霉素、丙氟哌酸、氟哌酸、头孢肤肟等非常敏感;对青霉素、罗红霉素、四环素、氯霉素等中度敏感;而对多粘霉素B及卡那霉素具有耐药;小鼠感染实验和凝固酶试验结果表明JLHN15为病原性猪葡萄球菌,临床上应与金黄色葡萄球菌引起的类似疾病进行鉴别诊断。

关键词：猪葡萄球菌核苷酸序列同源性化脓性肺炎吉林省

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牛副流感病毒3型P蛋白磷酸化位点与功能性结构域预测分析

牛副流感病毒3型P蛋白磷酸化位点与功能性结构域预测分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：赵贵民王洪梅何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心

引言牛副流感病毒3型(BPIV3)是引起牛等多种动物急性呼吸道疾病的主要病原。感染BPIV3后可导致机体免疫机能和巨噬细胞功能低下,进而继发细菌或支原体感染,引起严重的肺炎,导致牛呼吸道疾病综合征(BRDC),使死亡率大大增加,严重制约我国... 详细信息

引言牛副流感病毒3型(BPIV3)是引起牛等多种动物急性呼吸道疾病的主要病原。感染BPIV3后可导致机体免疫机能和巨噬细胞功能低下,进而继发细菌或支原体感染,引起严重的肺炎,导致牛呼吸道疾病综合征(BRDC),使死亡率大大增加,严重制约我国乃至世界养牛业的健康发展。副黏病毒P蛋白中因丝氨酸和苏氯酸含量较高,常作为磷酸化位点被病毒感染的宿主细胞内蛋白激酶激活而发生磷酸化,其磷酸化对病毒转录与复制的调控作用是目前研究的热点。解析BPIV3 P蛋白磷酸化作用,可以更好地为抗病毒药物的研制提供策略。材料与方法 BPIV3分离株SD2014为本单位疾病研究室分离保存。利用生物信息学的方法首先比较了副黏病毒不同种属病毒P蛋白氨基酸序列的同源性,然后比对了23株副流感病毒3型的P蛋白序列,预测分析了BPIV3 SD2014毒株保守的磷酸化位点与功能性结构域的对应关系。结果与讨论对副黏病毒P蛋白序列进行同源性比对,发现P蛋白氨基酸从241-709不等,同一属的不同病毒氨基酸数目基本相同,但是呼吸道病毒属的副流感病毒1型P蛋白编码385aa,而3型则编码600aa,相差较大。通过分析发现BPIV3 SD2014毒株P蛋白中可能存在22个潜在的磷酸化位点,按不同蛋白激酶作用类型,将这些磷酸化位点分为PKA、PKB、PKC、cdc2、CKⅠ/CKⅡ、p38MDBK和其他蛋白激酶7个组。将SD2014 BPIV3毒株P蛋白功能结构域进行了预测,4个主要功能结构域PNT、PMD、PCT和PX分别位于1-50 aa、50-271 aa、398-479aa和551-600aa,发现PKC激酶的作用位点贯穿了全部4个功能结构域。本研究发现的磷酸化位点的具体功能还需进一步通过试验验证。副流感病毒的P蛋白对病毒RNA合成是必需的,P蛋白在病毒生长周期内与多种蛋白相互作用。宿主细胞内蛋白激酶对P蛋白的磷酸化作用是P蛋白实现其功能的前提条件,阐明作用于BPIV3 P蛋白的磷酸激酶和其发挥作用的主要磷酸化位点意义重大。结论 PKC激酶的作用位点贯穿于BPIV3 P蛋白的4个功能结构域,特别是在参与P蛋白自身四聚体形成和与L蛋白互作的区域。

关键词：磷酸化位点功能性结构域副黏病毒副流感病毒预测分析

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王东方闫若潜吴志明刘梅芬赵雪丽谢彩华王淑娟马震原李勤楠河南省动物疫病预防与控制中心河南科技大学动物科技学院

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将I... 详细信息

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将IFN-β和IL-2联合应用可发挥协同抗病毒和免疫增强作用。课题前期研究证明表达成功的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2重组融合蛋白（rChIFN-a-Linker-ChIL-2）在体外具有显著的协同生物学活性。本研究在前期研究的基础上开展重组融合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病毒（IBDV）的最佳使用剂量研究。通过检测攻毒前后外周血带毒时间、外周血中细胞因子的表达水平及外周血中淋巴细胞亚群等指标的差异以揭示重组融合蛋白在鸡体内抗病毒和免疫增强作用的机理,并筛选重组融合蛋白在鸡体内发挥最佳抗病毒活性的最适剂量。材料与方法重组融合蛋白、重组鸡α干扰素蛋白（rChIFN-α）、IBDV由河南省动物疫病预防控制中心研究和保存;30日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪（FACS CaIibur）为美国BD公司产品。将IBDV LX强毒株人工感染37日龄SPF鸡,同时分别选取在CEF细胞上抗VSV活性单位为200IU、1000IU、3000IU、5000IU的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白采用注射方式进行鸡体内活性比较实验;并观察试验鸡临床症状,检测攻毒前、后（dpc）不同时间鸡体的排毒率、IBDV在不同组织器官的动态分布、外周血带毒时间、外周血中ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α、ChIFN-γ细胞因子的表达水平,鸡PBLC和脾脏淋巴细胞的增殖活性及外周血中淋巴细胞亚群等指标。结果与讨论结果表明,不同剂量的重组融合蛋白在鸡体的抗病毒活性存在差异。注射后不同时间,3000IU重组融合蛋白试验组IBD典型症状持续时间、病死率、排毒率、各组织器官带毒率、外周血持续带毒率（28h、20%、22.2%、16.7%、23.5%）等指标均显著低于其他剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组;ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChiFN-α、ChIFN-γ五种细胞因子的表达水平均显著高于其他组;12 dpc时,不同实验组鸡的外周血T淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖活性达到峰值,且3000IU重组融合蛋白实验组鸡的OD490值（0.2654、0.3406）均显著高于其他实验组鸡（p<0.05）;12 dpc5 dpc期间,不同剂量的攻毒实验组鸡的CD4+/CD8+比值均显著低于相同剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组,其中3000IU的重组融合蛋白攻毒组鸡的CD4+/CD8+比值显著高于其他剂量的攻毒实验组鸡和所有rChIFN-β蛋白对照攻毒实验组。以上各项检测指标表明,重组融合蛋白体内、外抗病毒和免疫增强活性均高于rChIFN-α蛋白对照,且3000IU的重组融合蛋白在鸡体内具有最佳的抗病毒和免疫增强活性。重组融合蛋白在鸡体内以提高外周血中CD3+CD4+细胞的含量,降低CD3+CD8+细胞的含量,使CD4+/CD8+比值大幅升高来增强机体细胞免疫能力。

关键词：鸡α干扰素 IFN 不同剂量重组融合蛋白使用剂量白细胞介素

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重组鸡白细胞介素-6/2复合蛋白对鸡T、B淋巴细胞增值活性和T淋巴细胞亚群的影响研究

重组鸡白细胞介素-6/2复合蛋白对鸡T、B淋巴细胞增值活性和T淋巴...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李勤楠闫若潜吴志明谢彩华赵雪丽李宁李方方河南科技大学动物科技学院河南省动物疫病预防与控制中心

引言白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）具有促进Th2型细胞分化,刺激T、B淋巴细胞增殖与分化,可作为疫苗佐剂发挥其免疫增强作用;白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可促进T细胞生长与分化,诱导CTL、NK细胞细胞分泌Th1型细胞因子,从... 详细信息

引言白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）具有促进Th2型细胞分化,刺激T、B淋巴细胞增殖与分化,可作为疫苗佐剂发挥其免疫增强作用;白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可促进T细胞生长与分化,诱导CTL、NK细胞细胞分泌Th1型细胞因子,从而提高机体的细胞免疫能力;将IL-2与IL-6联合应用可发挥更强的协同免疫增强作用。本研究前期的研究结果已证明表达纯化的重组鸡白细胞介素-6/白细胞介素-2（重组复合蛋白,rChIL-6-Linker-ChIL-2）在体内外均具有与抗ChIL-6单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性反应的免疫原性,且均具有促鸡外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖活性。本研究在此基础上进一步研究重组复合蛋白应用鸡体后对鸡淋巴细胞亚群的影响,并与重组鸡ChIL-6（rChIL-6）和ChIL-2蛋白（rChIL-2）进行比较,以揭示重组融合蛋白在鸡体内增强细胞免疫和体液免疫功能的作用机理。材料与方法重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2均由河南省动物疫病预防控制中心保存;28日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪（FACS Calibur）为美国BD公司产品;将实验动物分为PBS组、重组复合蛋白组、单一rChIL-6组、单一rChIL-2组、rChIL-6+rChIL-2混合组,于28日龄进行蛋白注射,于接种前（0 dpi）以及接种后的不同时间（dpi）采集一次抗凝血和脾脏。采用MTS法分别测定不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）和脾脏B淋巴细胞的增殖活性;采用流式细胞术对不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞中CD3CD4、CD3CD8百分含量以及CD4/CD8比值进行检测。结果与讨论结果表明:7 dpi5 dpi,重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2、rCHIL-6+rChIL-2混合蛋白均具有良好的促T、B淋巴细胞增殖活性,重组复合蛋白组和rChIL-6+rChIL-2混合蛋白组促鸡T、B淋巴细胞增殖活性显著优于单一蛋白使用组（P<0.05）,各蛋白接种组在14 dpi1 dpi期间,鸡T、B淋巴细胞的增殖活性曲线达到峰值;重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2和rChIL-6+RChIL-2混合蛋白在7 dpi1 dpi期间均可显著提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3CD4细胞百分含量、降低CD3CD8细胞的百分含量、提高CD4/CD8比值;7 dpi1 dpi期间,重组复合蛋白组鸡的CD3CD4、CD3CD8细胞含量及CD4/CD8比值与单一蛋白对照组相比差异均显著（P<0.05）;由此可见,重组融合蛋白具有良好的促进T、B淋巴细胞增殖的活性,提高外周血中CD4/CD8比值,增强机体的体液免疫和细胞免疫;重组复合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4/CD8比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于单一rChIL-6蛋白或rChIL-2蛋白;重组复合蛋白在体内发挥了ChIL-6、ChIL-2对细胞免疫和体液免疫功能的协同增强作用。

关键词：复合蛋白白细胞介素重组融合蛋白淋巴细胞亚群

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提高奶牛繁殖性能的免疫抑制素技术研究初报

提高奶牛繁殖性能的免疫抑制素技术研究初报

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十六次学术研讨会

作者：陈芳侯钇安郭日红施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所

引言高产奶牛的繁殖障碍成为制约奶牛养殖经济效益的瓶颈。常规的调控技术以调整奶牛发情配种的时间为主,无法从根本上提高卵巢机能,对配种受胎率的影响仍然有限。我们的前期研究发现,免疫抑制素可以缓解热应激对卵泡发育的不良影响,促...

引言高产奶牛的繁殖障碍成为制约奶牛养殖经济效益的瓶颈。常规的调控技术以调整奶牛发情配种的时间为主,无法从根本上提高卵巢机能,对配种受胎率的影响仍然有限。我们的前期研究发现,免疫抑制素可以缓解热应激对卵泡发育的不良影响,促进卵泡发育、提高雌激素分泌水平,并且促进卵母细胞体外成熟和提高超排后的胚胎产量和质量。将免疫抑制素与同期发情-定时输精技术（Ovsynch-TAI）相结合,能够显著改善夏季奶牛的激素分泌,并以剂量效应提高定时输精奶牛的配种受胎率。

关键词：

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β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄文科陈春丽韩静芳梁桂益林绮萍严洁珍陈瑞爱广东大华农动物保健品股份有限公司

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗... 详细信息

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗安全性和疫苗免疫效力等多个方面进行了研究,为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供参考依据。材料与方法(1)灭活条件的优化:β-丙内酯以不同浓度、不同灭活时间、不同pH值条件下对H9N2鸡胚毒进行4℃灭活,然后37℃水解2h,最后检测灭活效果及灭活前后胚液HA效价。(2)β-丙内酯残留量检测:对灭活后鸡胚液和免疫疫苗后肌肉进行残留量检测。(2)动物免疫试验:按照优化后的灭活条件灭活H9N2的SPF鸡胚毒液和海兰鸡鸡胚毒液,用常规浓度为0.1%甲醛量灭活作对照,然后分别制备成油乳剂灭活苗免疫SPF鸡和广西土鸡,另设生理盐水、大华农商品苗免疫组作对照组,定期检测免疫鸡血清AIV-H9 HI抗体变化情况。结果与分析(1)β-丙内酯灭活条件的优化:试验结果显示β-丙内酯对禽流感H9N2病毒胚液最佳的灭活条件为β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000灭活24h或β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000灭活18h;本实验设定的三个pH值(6.5、7.0、7.5)对病毒灭活效果的影响不明显;β-丙内酯灭活后的胚液HA效价下降在1个滴度以内,甲醛对照组灭活后的胚液HA效价下降为1～2个滴度。(2)残留量检测结果:H9N2鸡胚毒液经β-丙内酯灭活和水解后,鸡胚液和SPF鸡、广西土鸡免疫疫苗肌肉中未检测到β-丙内酯残留,且免疫鸡无异常发生,说明β-丙内酯在灭活后的37℃水浴中完全水解,在疫苗中无残留,对动物机体安全性高。(3)动物免疫试验结果:SPF鸡胚毒液制备的油苗和大华农油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为8log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0～1.5log2之间,优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组。海兰胚毒液制备的油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高的HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为7log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0～2 log2之间,略优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组。结论本研究结果显示β-丙内酯具有对H9N2灭活能力强HA效价影响小、极易水解成对机体无害产物而无残留等优点,以β-丙内酯作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗与甲醛作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗免疫SPF鸡和广西土鸡免疫效果相当,这一结果为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供了参考依据。

关键词： β-丙内酯禽流感灭活疫苗灭活剂

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1日龄SPF鸡免疫IBD高效灭活疫苗与囊胚宝效果的比较

1日龄SPF鸡免疫IBD高效灭活疫苗与囊胚宝效果的比较

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张秀文李阳王泽霖王永生浙江美保龙生物技术有限公司河南农业大学禽病研究所

引言因雏鸡免疫IBD活苗常受母源抗体干扰导致免疫失败,或因毒力过强造成免疫抑制,故近年来专用于1日龄雏鸡免疫的进口囊胚宝(2512株抗原抗体复合物苗)在国内很多养鸡场使用。以往的研究已证实囊胚宝的使用可减少显性IBD的发生,但其本质... 详细信息

引言因雏鸡免疫IBD活苗常受母源抗体干扰导致免疫失败,或因毒力过强造成免疫抑制,故近年来专用于1日龄雏鸡免疫的进口囊胚宝(2512株抗原抗体复合物苗)在国内很多养鸡场使用。以往的研究已证实囊胚宝的使用可减少显性IBD的发生,但其本质是2512毒株,仍有很强的毒性,可造成法氏囊高度萎缩,且有很强排毒能力,污染环境。本研究比较1日龄SPF鸡免疫高效IBD灭活联苗和囊胚宝后的实际效果,旨在为生产上正确选择疫苗、更有效地控制和消灭IBD提供科学依据。材料与方法试验用疫苗:高效IBD灭活苗2014001批由河南农业大学禽病所提供,有效期至2015年2月。囊胚宝(2512株抗原抗体复合物苗)购自匈牙利诗华-费拉西亚兽医生物制品有限公司,批号5811A4D1A,有效期至20141127。ND灭活苗2014001批由益康生物药厂提供。免疫时均按说明书使用。试验用鸡:1日龄SPF鸡75只,分为A、B、C3个大组,每个大组在同一隔离器中喂养(免囊胚宝的隔离器移至50米外它处)。每组25只再分成2小组;A1、B1、C1各15只,分别IBD灭活苗+ND单苗、囊胚宝+ND单苗、ND单苗;A2、B2、各10只,同居,仅免ND单苗,C2为空白对照。抗体检测:1、15、30、45日龄采血,按常规方法测定ND-HI抗体和IBD中和抗体(SOP)。囊/体比测定:免疫后30天、45天从各免疫组和同居组中取出5只,扑杀、剖解,观察法氏囊病理变化,并照相、称重,计算各免疫组、同居组、空白组的囊/体(g/kg)比值。结果与讨论免疫后30天、45天检查法氏囊显示免囊胚宝的B1组和同居B2组均出现法氏囊高度萎缩,30日龄B1、B2组囊/体比为0.16、0.19,45日龄为0.10、0.21,免疫组B1和同居组B2分别为对照组的1/3～1/4、1/2～1/3;免IBD灭活苗的A1和同居A2组、只免ND苗的C1和空白C2组法氏囊均无明显变化,30日龄A1、A2、C1、C2组囊/体比依次为0.45、0.41、0.50、0.42;45日龄依次0.62、0.49、0.50、0.47,再次证实囊胚宝有一定的毒性,可引起SPF鸡法氏囊迅速萎缩,且有很强排毒能力,污染环境,导致未免疫鸡的感染。IBD抗体测定的结果显示,仅免ND单苗C1组和空白C2组无抗体,免IBD灭活苗的A1组IBD抗体持续上升,15、30、45日龄抗体依次为10.6、14.8、14.9(1og2),而同居组无抗体;免囊胚宝+ND的B1组抗体上升缓慢、低下,15、30、45日龄抗体依次为6.6、11.4、11.0(1og2),且同居组B2拌随水平传播、法氏囊萎缩,逐步出现阳性抗体,依次为5.3、11.0、11.7(1og2)。ND抗体测定结果显示仅免ND单苗的C1组迅速上升,15、30、45日龄抗体依次为7.5、7.9、6.7(1og2),空白组C2无ND抗体;免疫IBD灭活苗+ND的A1组15、30、45日龄抗体依次为6.9、7.2、6.2(1og2),同居仅免ND单苗的A2组依次为7.3、7.9、7.4(1og2);而免囊胚宝+ND的B1组ND抗体依次为5.1、5.9、5.3,明显地低于C1、A1、A2组至少1～2个滴度,同居仅免ND单苗的B2组抗体依次为5.9、7.4、6.6(1og2),也低于C1、A1、A2组约0.5～1个滴度。结论囊胚宝本质上是2512强毒株,有很强的毒性,可引起SPF鸡法氏囊的高度萎缩;囊胚宝有很强排毒能力,能污染环境,引起同居鸡法氏囊的高度萎缩、阳性抗体的出现。高效IBD灭活苗免疫组抗体水平高,且持续上升;而囊胚宝免疫组IBD抗体低下。囊胚宝在造成法氏囊损伤的同时会导致对新城疫苗的免疫抑制,较对照组低1～2个滴度。

关键词：法氏囊灭活苗 IBD SPF

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母源抗体对H9灭活疫苗免疫的干扰

母源抗体对H9灭活疫苗免疫的干扰

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王泽霖李永涛万博丁向东岳建新张秀美李浩鹏河南农业大学禽病研究所乾元浩生物股份有限公司郑州厂

引言自1998年H9亚型禽流感在中国大地暴发以来,因疫苗的使用流行得到了有效控制,但免疫失败现象屡见不鲜,尤其在商品肉鸡生产中,常呈潜伏感染,每到秋末、冬春,在不良环境的应激下暴发流行,给养鸡业带来巨大经济损失。本实验比较1日龄SP... 详细信息

引言自1998年H9亚型禽流感在中国大地暴发以来,因疫苗的使用流行得到了有效控制,但免疫失败现象屡见不鲜,尤其在商品肉鸡生产中,常呈潜伏感染,每到秋末、冬春,在不良环境的应激下暴发流行,给养鸡业带来巨大经济损失。本实验比较1日龄SPF鸡和1、5、10日龄商品肉鸡免疫不同剂量H9灭活疫苗后的抗体规律,以探讨母源抗体对H9灭活苗免疫的干扰、免疫失败的机理,旨在为H9亚型禽流感的免疫和防控提供参考依据。材料与方法试验用疫苗:H9禽流感灭活苗2014001批由河南农业大学禽病研究所实验室试制,分为不浓缩苗、5倍浓缩苗、10倍浓缩苗3种,有效期至20150304。试验用鸡:1日龄SPF鸡20只,由乾元浩郑州生物药厂提供,于1日龄免疫不浓缩的H9疫苗。1日龄AA商品肉鸡200只,购自河南大用实业有限公司(带有高母源抗体),除20只不免疫做对照外,其余鸡分成3大组,每大组60只鸡再分成3小组,分别在1、5、10日龄免疫3种不同剂量H9禽流感灭活苗,第1小组免不浓缩苗,第2小组免5倍浓缩苗,第3小组免10倍浓缩苗,均每只注射0.2ml。抗体测定:免疫后20天、25天、42天定期采血,按常规方法测定各组的HI抗体。结果与讨论1日龄SPF鸡免疫H9苗后1、20、25、42日龄HI抗体分别为1、7.5、8.8、9.0(log2),抗体持续上升。1日龄商品肉鸡母源抗体10.3(log2),免疫不浓缩苗后20、25、42日龄的H9抗体分别为5、4.1、2.8;免疫5倍浓缩苗后的抗体依次为6、4.3、3.4;免疫10倍浓缩苗后抗体依次为6、4.、5.5(log2)。虽与对照组同期5.9、4.7、1.4(log2)的抗体一样,持续下降,但随免疫剂量的增大,下降速度趋缓。5日龄商品肉鸡母源抗体9(log2),免疫不浓缩苗后30、35、42日龄抗体分别为5.3、5.0、3.0;免疫5倍浓缩苗后抗体依次为6.0、5.8、5;免疫10倍浓缩苗后抗体依次为6.8、6.7、6.0(log2)。与对照组同期5.9、4.0、1.4(log2)抗体一样,持续下降,但免疫组下降缓慢,尤其是30日龄后对照组急剧下降至1.4(1og2),而免疫组除不浓缩苗为3(log2)外,均保持在5～6(lo2)。10日龄商品肉鸡母源抗体7(log2),免疫不浓缩苗后30、35、42日龄抗体分别为5.2、5.8、4.0;免疫5倍浓缩苗后抗体依次为6.3、6.7、6.0;免疫10倍浓缩苗后抗体依次为6.8、7.0、6.5(log2)。与对照组同期抗体持续下降至1.4(lo2)不同,免疫组在35天后略有还升,除不浓缩苗外均保持在6～7(log2)。结论 SPF鸡免后H9苗后抗体持续上升,而有母抗的商品肉鸡免疫后抗体先下降而后略有上升或不上升,证实母源抗体会干扰H9灭活苗免疫效果。试验证实母源抗体的干扰随着免疫日龄推迟、抗原剂量增加,相应减弱。从抗体水平来看,10倍浓缩苗抗体优于5倍浓缩和不浓缩苗,10日龄免疫抗体优于5日龄和1日龄免疫同期抗体,其机理尚待探讨。母源抗体干扰、免疫空白期的存在是导致当前H9免疫失败的重要原因之一。在当前环境污染严重,种鸡频繁免疫的背境下,制定合理免疫程序、进一步加大H9灭活疫苗的抗原量,以突破母源抗体干扰,尽快建立有效的主动免疫是控制IBD和其它疫病流行的重要措施。

关键词：母源抗体商品肉鸡

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猪戊型肝炎病毒抗体检测阻断ELISA方法的建立

猪戊型肝炎病毒抗体检测阻断ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：陈宜阳赵钦刘宝元孙亚妮李慧霞王鑫杰周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是一种由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的人急性病毒性肝炎。近年来,该病已成为许多发展中国家严重的公共健康问题,而我国是HEV感染的主要流行区之一。HEV感染大多数以自限性和低致死率为特点,但已... 详细信息

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是一种由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的人急性病毒性肝炎。近年来,该病已成为许多发展中国家严重的公共健康问题,而我国是HEV感染的主要流行区之一。HEV感染大多数以自限性和低致死率为特点,但已有研究发现包括孕妇在内以及一些具有免疫损伤的患者(HIV和器官移植者等)都存在HEV感染高致死性或转为慢性肝炎的风险。猪HEV是第一个动物HEV分离株,虽然其感染仅引起猪的亚临床感染,但是由于其人畜共感染性,正在被引起越来越多的重视。目前普遍认为,猪是HEV主要的自然储存宿主。因此,时刻监测猪HEV在猪群中的感染情况,为防控人HEV的感染具有重要的意义。然而,目前对猪群中猪HEV抗体的检测主要是利用商品化人HEV抗体检测ELISA试剂盒,并没有针对特异性猪HEV抗体检测试剂盒。此外,比较不同的商品化人HEV抗体ELISA试剂盒检测猪血清发现,其相互之间重合率低,特异性较差,往往造成许多假阳性和假阴性的结果。因此,为了能够准确、快速了解猪HEV在猪群中的感染情况,本实验建立了一种猪血清中猪HEV抗体检测的阻断ELISA方法,从而为猪HEV跨种系感染的防控提供方法支撑。本实验以原核表达制备的基因Ⅳ型猪HEV(CHN-SD-sHEV)的ORF2蛋白C端268个氨基酸(sORF2-C)为包被抗原,以HRP标记的针对上述蛋白的单克隆抗体1E4为阻断抗体,通过优化抗原和单抗浓度、血清最佳稀释比例等条件,确定了阻断ELISA的操作程序;同时利用已知的230份猪HEV阴性血清,确定了该方法的Cut-off值(Cut-off值=230份样品PI的平均值+2或3倍的标准差);最后,对建立的阻断ELISA方法进行了敏感性,特异性和重复性的评价,同时将该方法与Western blot和商品化人HEV抗体ELISA试剂盒的检测一致性进行了分析。结果发现,当抗原浓度为8μg/mL(100μL/孔)、HRP-1E4稀释比例为1:1000(6μg/孔),血清稀释度为1:20时为阻断ELISA方法的最佳反应条件;阴性血清检测确定的Cut-off值为16.9%;利用建立的方法对6份阳性血清进行板内及板间重复性试验,其变异系数分别为4.3%和7.9%,表明该方法具有良好的重复性;应用该方法对50份阳性血清进行敏感性试验,其敏感性为96%,对50份阴性血清进行特异性试验,其特异性为100%,表明该方法具有。较高的敏感性和特异性;通过交叉反应试验揭示,本方法不与PCV,PPV和PRRSV的阳性血清发生交叉反应;同时通过对150份临床猪血清用Western blot和商品化ELISA试剂盒检测发现,该方法与二者的一致性分别为92%和95%,33份bEIISA检测为阳性的血清中,Western Blot与ELISA试剂盒检测为阳性的个数均为33份,117份bELISA检测为阴性的血清中,Western Blot与ELISA试剂盒检测同为阴性的个数分别为105和110份。综上所述,本实验建立了一种快速、准确的猪HEV抗体检测的阻断ELISA方法,该方法的建立为猪群中猪HEV感染的流行病学调查提供了一种方法支撑。

关键词： ELISA 抗体检测猪戊型肝炎病毒阳性血清 HEV

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