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- 6 篇 教育学
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19 篇 新城疫
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14 篇 鸡新城疫

机构

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48 篇 河南农业大学
41 篇 华南农业大学
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37 篇 山东农业大学
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30 篇 广西大学
27 篇 四川农业大学
26 篇 内蒙古农业大学
24 篇 中国农业科学院哈...
20 篇 安徽农业大学
20 篇 北京农学院
18 篇 河南科技大学
18 篇 石河子大学
16 篇 北京市农林科学院...
15 篇 西北农林科技大学
15 篇 吉林农业大学

作者

26 篇 彭克美
26 篇 王川庆
22 篇 陈陆
21 篇 丁壮
20 篇 杨霞
18 篇 赵德明
18 篇 李升和
18 篇 刘红英
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16 篇 唐丽
16 篇 杜安娜
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15 篇 位兰
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13 篇 毕英佐
13 篇 董雅娟

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FSH对腔前卵泡生长发育的影响

FSH对腔前卵泡生长发育的影响

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：梁洋孙兴参刘娣安铁洙东北林业大学东北农业大学东北农业大学东北林业大学

随着小鼠腔前卵泡体外培养影响因子的深入研究,已探明促性腺激素(FSH)在卵泡的生长和发育过程中发挥重要作用。为了探讨FSH对不同发育期小鼠腔前卵泡的作用,本实验采用机械法分离并选择120～140μm小鼠腔前卵泡。以添加10％血清和1％IT... 详细信息

随着小鼠腔前卵泡体外培养影响因子的深入研究,已探明促性腺激素(FSH)在卵泡的生长和发育过程中发挥重要作用。为了探讨FSH对不同发育期小鼠腔前卵泡的作用,本实验采用机械法分离并选择120～140μm小鼠腔前卵泡。以添加10％血清和1％ITS的α-MEM为基础培养, 分为添加FSH和不添加FSH组,以及在培养的0d、2d、4d、6d、8d添加FSH(100mIU／ml)组, 对所获得的腔前卵泡进行体外培养,观察卵泡的直径、出腔率、卵母细胞GVBD率及体外受精后的受精率。与此同时,在培养后的2d、4d、6d和8d依次测量培养液中的雌二醇含量。结果表明: (1)正常添加组其卵泡的存活率、出腔率、GVBD率和2-cell胚胎率(78．7％、55．0％、35．0％和 7．5％)显著高于培养液中未添加FSH的结果(分别为13．7％、8．8％、6．3％和0)(p<0．05),说明 FSH的存在对于腔前卵泡的生长发育具有促进作用;(2)6d之前添加FSH的培养组腔前卵泡能够正常生长和发育(卵泡直径299．2±11．2;卵母细胞直径69．4±1．9);2d-4d添加FSH更利于卵母细胞的成熟(2-cell胚胎率分别为7．9％和9．2％),由于FSH对腔形成的促进作用并不是从最初的培养开始,所以适时(本实验认为2-4天)添加FSH可能更利于腔前卵泡的生长发育;(3)仅在6d 前添加FSH的培养组E2才能被检测出,而第6d以后添加激素组虽然有部分卵泡能正常生长,但 E2分泌量却几乎检测不到,这进一步说明腔前卵泡的生长和发育依赖于FSH的存在,6d前添加 FSH雌二醇的分泌量能够逐渐恢复。

关键词：小鼠腔前卵泡 FSH

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冷藏绵羊皮肤的成纤维细胞继代培养及冷冻保存

冷藏绵羊皮肤的成纤维细胞继代培养及冷冻保存

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：刘欣张丽新梁洋安铁洙东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院

随着体细胞克隆技术的完善,皮肤成纤维细胞必将作为核供体被广泛应用。为了探讨哺乳动物,特别是珍稀动物死亡一定时间后其皮肤成纤维细胞利用的可能性,从幼龄绵羊耳廓采集皮肤,在4℃条件下用mPBS液分别保存0 h(对照组)、24h、48h和72h后... 详细信息

随着体细胞克隆技术的完善,皮肤成纤维细胞必将作为核供体被广泛应用。为了探讨哺乳动物,特别是珍稀动物死亡一定时间后其皮肤成纤维细胞利用的可能性,从幼龄绵羊耳廓采集皮肤,在4℃条件下用mPBS液分别保存0 h(对照组)、24h、48h和72h后,用含有谷氨酰胺和胎牛血清的DMEM培养液进行原代和继代培养。此外,当各处理组在经原代培养达到100％汇合时, 以DMSO为冷动保护剂,采用常规方法进行冷冻-解冻后进行传代培养。其结果:(1)在4℃条件下保存0 h、24h、48h和72h的皮肤成纤维细胞原代培养后到达100％汇合时间分别为8d、9d、14d 和15d;(2)与对照组第1-4代培养时的100％汇合时间(均为4d)相比,虽然其它保存组的第1- 3代培养后达到100％汇合的时间滞后(为5-8d),但是,经4代培养后,100％的回合时间(4d) 与对照组无差异;(3)对于冷冻-解冻的原代细胞进行传代培养时,虽然在第1代各组间100％汇合时间不同步(11-13d),但是经第2代培养4d后均达到100％回合。上述结果表明,当绵羊死亡后立即采取其耳廓皮肤并用mPBS液在4℃条件下保存24-72h,经原代-传代培养(4代)或经原代- -冷冻-复苏培养-传代培养后,其成纤维细胞可恢复至具有新鲜耳廓成纤维细胞的传代能力。

关键词：绵羊皮肤成纤维细胞传代培养冷冻保存

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雏鸵鸟脾脏的显微与超微结构及脾内5-HT的分布定位

雏鸵鸟脾脏的显微与超微结构及脾内5-HT的分布定位

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：宋卉彭克美李升和王岩位兰唐丽杜安娜靳二辉王家乡华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院

采用光镜和电镜制片及染色技术,观察雏鸵鸟脾脏的解剖学、显微和超微结构特点,并结合免疫组化SABC法对5-HT在脾脏内的表达进行定位,以探明5-HT免疫反应阳性细胞在脾内的分布规律。结果显示, 雏鸵鸟脾脏被膜较薄,小梁不发达;白髓内动脉... 详细信息

采用光镜和电镜制片及染色技术,观察雏鸵鸟脾脏的解剖学、显微和超微结构特点,并结合免疫组化SABC法对5-HT在脾脏内的表达进行定位,以探明5-HT免疫反应阳性细胞在脾内的分布规律。结果显示, 雏鸵鸟脾脏被膜较薄,小梁不发达;白髓内动脉周围淋巴鞘薄,偶见脾小结,但无生发中心;淋巴细胞内含较多的线粒体、游离核糖体及少量RER,核膜双层,有明显的核膜孔;椭球体积小,其周围淋巴鞘较厚,且数量多,椭球与周围淋巴组织之间有强嗜酸性均质物形成的明显界限,鞘毛细血竹外细胞胞质内富含粗面内质网、线粒体和游离核糖体。5-HT免疫阳性细胞网形或卵圆形,胞体较大,胞质较多,核多位于细胞一侧, 阳性产物位于胞质内;红髓内阳性细胞数量最多,阳性产物表达最强;动脉周围淋巴鞘内阳性细胞数量较少, 但阳性产物表达较强;而椭球内有弱阳性产物表达。研究表明,雏鸵鸟椭球周围淋巴鞘数量远比动脉周围淋巴鞘的多;椭球与周围淋巴组织之间界限明显,其间的强嗜酸性物质主要由纤维构成;5-HT免疫阳性细胞数量较多,主要位于红髓、动脉周围淋巴鞘和椭球,阳性产物表达强;脾脏是合成外周5-HT的重要场所,可能主要出浆细胞和原浆细胞合成分泌;外周5-HT可能参与机体的体液免疫应答反应。

关键词：雏鸵鸟脾脏显微结构超微结构 5-HT分布

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羔羊期和性成熟期奶山羊下丘脑中催产素的表达

羔羊期和性成熟期奶山羊下丘脑中催产素的表达

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：陈树林蒲强红张艳毛海鹏周建平李耀辉赵慧英卿素珠范光丽西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院

本试验采用免疫组化链霉索抗生物蛋白-过氧化物酶法(SP法)来检测羔羊期和性成熟期雌性奶山羊下丘脑中催产素表达的变化规律。结果显示:催产素免疫阳性神经元羔羊期和性成熟期共同分布于视上核、室旁核、乳头体内侧核等核团,羔羊期催产... 详细信息

本试验采用免疫组化链霉索抗生物蛋白-过氧化物酶法(SP法)来检测羔羊期和性成熟期雌性奶山羊下丘脑中催产素表达的变化规律。结果显示:催产素免疫阳性神经元羔羊期和性成熟期共同分布于视上核、室旁核、乳头体内侧核等核团,羔羊期催产素免疫阳性神经元还广泛分布于室周核、视前内侧核等核团,但性成熟期未见分布;在视上核、室旁核、乳头体内侧核等核团性成熟期催产素免疫阳性神经元数日都显著高于羔羊期(P<0．01);羔羊期催产素免疫阳性产物的平均灰度值则在室旁核、视上核、乳头体内侧核等核团显著低于性成熟期(P<0.01),在其他核团则高于性成熟期,且大部分差异明显(P<0.01)。结果提示性成熟期催产素的表达比羔羊期高,催产素与生殖系统的发育成熟有密切关系,室旁核、视上核、乳头体内侧核、乳头体后核等少数核团对生殖系统的发育成熟可能有重要作用。

关键词：羔羊期性成熟期下丘脑催产素奶山羊

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Chemical composition and microstructure of uroliths and urinary sediment crystals associated with the feeding of high-level cottonseed meal diet to water buffalo calves

Chemical composition and microstructure of uroliths and urin...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者： Xiaolong Wang, Kehe Huang, Jingbao Gao, Xiangzhen Shen, Chengyi Lin and Gengdi Zhang (College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, PR China Center for Materials Analysis of Nanjing University, Nanjing 210008, PR China Department of Earth Science, Nanjing University, Nanjing 210008, PR China )

The chemical composition and microstructure of seven uroliths and four urinary sediment samples associated with the feeding of high-level cottonseed meal diet to buffalo calves were examined by chemical qualitative analyses, scanning electron microscopy ( ), X-ray diffraction, and X-ray energy dispersive spectrometry ( ). Struvite was a major component of kidney stones and of some bladder stones. The kidney stone sample appeared cracked under low power under, aggregated into tiny balls under high power, and as a bladelike structure under even higher power. The bladder stone samples appeared finely granular or granular with various forms of prismatic crystals. The urinary sediments were prismatic crystals, with granules. The newly found prismatic crystals, which were rich in potassium and similar to struvite in crystal structure, were identified as potassium magnesium phosphate (KMgP04·6H2O) in some bladder stones and urinary sediments. However, crystals which contained Mg and P only, which had been used for struvite identification, were not found by examination in urinary sediments from fresh urine samples of buffalo calves fed the high-level cottonseed meal diet.

关键词： Chemical composition and microstructure of uroliths and urinary sediment crystals associated with the feeding of high-level cottonseed meal diet to water buffalo calves

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大鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中Ran的定位及其作用

大鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中Ran的定位及其作用

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：曹允考罗继龙梁建广东北农业大学解剖教研室东北农业大学解剖教研室东北农业大学解剖教研室

Ran在许多有机体的整个细胞周期中控制多种细胞过程,象核质间物质转运,DNA复制, RNA转录、加工或剪接,细胞有丝分裂或减数分裂的开始和结束,微管产生和纺锤体组装,染色体的正确分配,核膜破裂和重组等。实验采用激光共聚焦显微技术对大... 详细信息

Ran在许多有机体的整个细胞周期中控制多种细胞过程,象核质间物质转运,DNA复制, RNA转录、加工或剪接,细胞有丝分裂或减数分裂的开始和结束,微管产生和纺锤体组装,染色体的正确分配,核膜破裂和重组等。实验采用激光共聚焦显微技术对大鼠卵母细胞在减数分裂成熟、受精和早期胚胎有丝分裂过程中Ran的定位变化进行研究,并在Ran抗体注射后对微管组装的影响和药物处理破坏微管组装过程后Ran的定位及作用进行探讨。研究表明:在大鼠GV期卵母细胞、早期胚胎的间期细胞中,Ran主要分布于细胞核内,核仁内没有Ran分布,细胞质中 Ran浓度极低。核膜破裂,细胞进入减数分裂或有丝分裂,Ran扩散分布到整个细胞,但在染色体周围浓集,浓集区形态和纺锤体微管排列的形态一致;在分裂后期和末期浓集区域随纺锤体的拉长、反转而分布于被分开的两组染色体和分裂板之间,呈两条亮带。胞质中其它部分,有絮状的团块聚集。受精卵原核形成,早期胚胎细胞有丝分裂结束后细胞核重新形成过程中,Ran首先在染色体周围聚集,核膜形成后继续向核内浓集,随着核的增大,Ran几乎都进入细胞核,细胞质内几乎看不到Ran存在。GV期卵母细胞Ran抗体显微注射后,对第一极体的排放影响不明显, 严重破坏第一、第二次减数分裂纺锤体组装。MⅡ期卵母细胞抗体注射后破坏MⅡ期纺锤体的正常结构。MⅡ期卵母细胞用秋水仙素处理,破坏纺锤体微管后,Ran聚集形成的纺锤体样结构消失, 除在染色体存在部位的卵质膜下有聚集区外,在细胞质中均匀分布。用紫杉醇处理,促进微管聚合,纺锤体微管膨大,细胞质中出现许多小的星体样结构,Ran在纺锤体上的聚集区和膨大的纺锤体微管变化一样,但没显示出细胞质内的小星体结构。由此可见Ran在纺锤体组装中起着重要作用。

关键词：大鼠Ran 卵定位

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绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆及其在成纤维细胞中的活性分析

绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆及其在成纤维细胞中的活性分...

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：王春生余刚张立新安铁洙东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院

启动子是一段供RNA聚合酶定位用的,位于基因转录起始点上游并对基因转录起调控作用的DNA序列,也是基因表达调控的重要顺式元件之一。角蛋白结合蛋白(keratin associated protein,KAP)是羊毛主要结构蛋白,其功能是使中间纤维交联成束、成... 详细信息

启动子是一段供RNA聚合酶定位用的,位于基因转录起始点上游并对基因转录起调控作用的DNA序列,也是基因表达调控的重要顺式元件之一。角蛋白结合蛋白(keratin associated protein,KAP)是羊毛主要结构蛋白,其功能是使中间纤维交联成束、成网,并把中间纤维交联到质膜或其它骨架成分上,其表达具有毛囊组织特异性。为了构建毛发特异表达载体,需要克隆具有毛发组织表达特异性的启动子,并检验其在细胞中的表达活性,本实验以绵羊基因组DNA为模板,通过分子克隆得到KAP6．1启动子,序列分析结果表明:KAP6．1启动子序列大小为830bp, 与GenBank上M95719有99．64％的同源性,与M95719相比,KAP6．1有3个碱基差异:在349 位点有一个C缺失;在438位点有一转换(G代替A);在726位点,有一颠换(A代替T), 在246位点有一依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box,但没有发现依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box。把KAP6．1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中, 构建重组真核表达载体,采用质脂体法转染化代培养的绵羊成纤维细胞,转染24小时后蓝光激发条件下可以检测到用细胞核内及附近有绿色荧光蛋白的高表达,48小时后逐渐减弱,但细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加。以上结果表明:(1)KAP6．1启动子在成纤维细胞中具有表达活性;(2)CAAT box可能不是KAP6．1启动子表达活性的必须调控元件。

关键词：角蛋白结合蛋白肩动子分子克隆活性分析

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传染性支气管炎弱毒苗黏膜免疫途径对雏鸡上呼吸道及哈德氏腺SIgA细胞分布的影响

传染性支气管炎弱毒苗黏膜免疫途径对雏鸡上呼吸道及哈德氏腺SIgA...

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：周华波房慧伶贾永起王晓丽吴欣欣李红蕾广西大学动物科技学院广西大学动物科技学院广西大学动物科技学院广西大学动物科技学院广西大学动物科技学院广西大学动物科技学院

本研究采用改良硫酸铵盐析法、Macro-prep High Q阴离子交换柱层析纯化得到鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA),并用于免疫家兔制备兔抗鸡SIgA多克隆抗体。将传染性支气管炎弱毒苗对 1日龄雏鸡分别进行点眼免疫A和C组,滴鼻免疫B和D组,并且在11... 详细信息

本研究采用改良硫酸铵盐析法、Macro-prep High Q阴离子交换柱层析纯化得到鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA),并用于免疫家兔制备兔抗鸡SIgA多克隆抗体。将传染性支气管炎弱毒苗对 1日龄雏鸡分别进行点眼免疫A和C组,滴鼻免疫B和D组,并且在11日龄时加强免疫C、D 组,以葡萄球菌A蛋白-辣根过氧化酶(SPA-HRP)免疫组化染色,对哈德氏腺和呼吸道相关淋巴组织(BALT)中SIgA细胞的分布、数量变化及消长规律进行研究,以期了解黏膜免疫应答的机理,为禽病的防控提供理论依据。结果表明:分离纯化得到的鸡SIgA浓度达22mg/ml;经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可知,鸡SIgA重链分子量为64-65ku,轻链为26-28ku,J 链约16ku:用纯化的鸡SIgA免疫兔制备得到1:128兔抗鸡SIgA抗血清。免疫组化染色结果显示:SIgA阳性细胞呈圆形或卵圆形,也有梭形、柱状或不规则形状。SIgA细胞分布于哈氏腺的间质中,且主要分布在各级管腔上皮及腺上皮周围,其中成熟的浆细胞紧贴腺上皮及管腔上皮分布。气管中SIgA细胞主要分布在气管黏膜上皮之间和固有膜处,局部黏膜形成小隐窝,隐窝内分布有 SIgA细胞,隐窝下的固有膜中也有较多的SIgA型浆细胞。统计分析表明:各免疫组哈德氏腺和气管中SIgA细胞数在相同日龄下都显著高于对照组(p<0．01),点眼免疫的A、C组显著高于滴鼻免疫的B、D组(P<0．01), C、D组SIgA阳性细胞增加的数量要高于A、B组,C、D组雏鸡 25日龄时SIgA细胞达峰值,而A、B组在35日龄才达峰值。说明用点眼和滴鼻途径免疫雏鸡可以有效地诱导哈德氏腺和气管产生较多SIgA细胞,而加强免疫则使SIgA细胞数量更进一步增多。

关键词：黏膜免疫分泌型免疫球蛋白A 传染性支气管炎哈德氏腺气管

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冬眠鳖附睾中生精细胞的异质性

冬眠鳖附睾中生精细胞的异质性

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：韩向琨张莉陈秋生南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院

脊椎动物精子的发生和变态是在睾丸的曲细精管上进行的,附睾是精子储存和成熟的主要部位,附睾中都是具有鞭毛的成形的精子。关于精子在附睾中分化变态的研究未见资料报道。我们在观察中华鳖成熟精子超微结构的基础上,应用透射电镜和扫... 详细信息

脊椎动物精子的发生和变态是在睾丸的曲细精管上进行的,附睾是精子储存和成熟的主要部位,附睾中都是具有鞭毛的成形的精子。关于精子在附睾中分化变态的研究未见资料报道。我们在观察中华鳖成熟精子超微结构的基础上,应用透射电镜和扫描电镜技术,对冬眠鳖精子在附睾内的形态发生和变态过程进行了详细研究。结果表明,附睾头、体、尾各个部位除了贮存成形的精子外,还有大量尚未发育成熟的精子,其形态表明出明显的异质性:1)圆形的精子细胞。此时细胞刚处于变态阶段,细胞核网球形,染色质呈细小的颗粒状,细胞内见有发达的高尔基复合体,线粒体稀少,多为圆形,线粒体外膜通透性增高,部分膜结构不清楚,电子密度低。扫描电镜下精子细胞呈椭网形,表面不平整,可见一些凹陷。2)变态中的精子细胞。细胞核移向一端, 染色质颗粒逐渐浓缩成均质状,精子顶体复合体开始形成。线粒体增多,并变化为多种形状。在哑铃形线粒体中,线粒体嵴少,电子密度低。有的线粒体呈大的不规则的圆形,仅见一到两层同心圆结构,中间基质分散,有的呈板嵴状排列,基质清亮。胞质中含有大量的脂滴并随其他胞器开始后移。3)细胞核染色质进一步浓缩为均质状,核开始拉长,大部分胞质游离于头部末端和中段之间,大量的线粒体演变为同心圆的结构,中间基质致密呈高电子密度状态,此时远端中心粒逐渐伸长,同心圆状线粒体环形排列在中段,形成后期的线粒体鞘。胞质周围有大量环绕的微管并组装成鞭毛的轴丝,将来发育为精子尾部,扫描电镜下胞质周围的轴丝形似笼状,环绕在精子头部。由于胞质部分还没有排出,扫描电镜下看不到中段结构。4)精子完整结构基本形成,但在头部末端和中段尚有部分胞质,形成胞质小叶。成熟精子呈细长的蚯蚓状,结构完整,由头部、连接段、中段、主段和末段组成。上述结果有两种可能:中华鳖附睾不仅是精子贮存和成熟的部位,也可能是进行精子变态和发生的另一个场所;或者,冬眠期中华鳖曲细精管的生精上皮脱落后,通过输出小管排入到附睾中,在此发生凋亡或退行性变化。

关键词：中华鳖附睾精子细胞异质性

来源：评论

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玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞受精的影响

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞受精的影响

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：张秋婷梁洋王春生安铁洙东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院

随着胚胎玻璃化冷冻技术的不断完善,已在畜牧业领域广泛应用。用含40％Ethylene glycol 的FS(含30％Ficoll-70和0．5MSucrose的PB1液)液的为冷冻保护液(EFS法),冷冻保存小鼠2- 细胞期胚获得很高体外发育率。但是,当该方法在冷冻保存成... 详细信息

随着胚胎玻璃化冷冻技术的不断完善,已在畜牧业领域广泛应用。用含40％Ethylene glycol 的FS(含30％Ficoll-70和0．5MSucrose的PB1液)液的为冷冻保护液(EFS法),冷冻保存小鼠2- 细胞期胚获得很高体外发育率。但是,当该方法在冷冻保存成熟卵母细胞时,其冷冻效果不稳定, 难以获得理想的效果。为了探明EFS法冷冻保存对小鼠成熟卵母细胞及其受精过科中的影响,本研究对性成熟的昆明鼠用PMSG和hCG超数排卵后,进行下列处理:(1)在注射hCG后第14～16h 采集卵丘卵子复合体,用含0．5％透明质酸酶的PB1去掉卵子透明带外周的颗粒细胞,然后人工切开透明带并用改良M16液进行体外受精,或者无颗粒细胞卵经冷冻-解冻-透明带切开后进行体外受精,观察发育至2-细胞期胚、4-细胞期胚和桑椹胚的能力;(2)自然交配,在注射hCG后的第26h 和42h分别采集1-细胞期胚和2-细胞期胚,直接进行体外培养,或者用EFS法经冷冻-解冻后进行体外培养,观察其发育至4-细胞期和桑椹胚的能力。结果显示,(1)新鲜去颗粒细胞卵的体外受精率为71．43％,而去颗粒细胞卵经冷冻-解冻后所进行体外受精中未能获得受精卵,两者差异极显著 (P<0．01);(2)自然交配,在注射hCG后的第26h采集1-细胞期胚,直接培养或经冷冻-解冻后培养, 发育至2-细胞期胚、4-细胞期胚和桑椹胚比率分别为94．1％、94．1％、47．1％和85．7％、42．9％、22．9％, 不同处理组间差异极显著(P<0．01)。与其相比,在注射hCG后的第26h采集2-细胞期胚,直接培养或经冷冻-解冻后培养后,发育至4-细胞期胚和桑椹胚比率分别为92．5％、92．5和84．6％,不同处理组间未出现差异。上述结果表明,成熟卵母细胞及其在受精过程中,极易受到冷冻-解冻损害, 这种损害极有可能发生在细胞核,导致卵母细胞不能正常受精分裂。对小鼠成熟卵及其受精阶段卵细胞器在冷冻-解冻过程中损伤变化有待于进一步探讨。

关键词：小鼠卵母细胞玻璃化冷冻

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