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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：史建民李红玲刘国世薛振华田秀芝王粱史文清张洪海张忠诚中国农业大学动物科技学院北京 100193 中国农业大学动物科技学院北京 100193 农业生物技术国家重点实验室北京 100193 北京市畜牧兽医总站北京 100107 曲阜师范大学生物系曲阜 273165

[目的]研究外源褪黑激素(Melatonin MT)对昆明白小鼠生长和繁殖性能的影响，为外源MT在畜牧生产上的应用提供依据。[方法]将40只昆明白小鼠(公母各半)随机分成4组，用皮下埋植的方法埋植不同剂量(0.1.4、8mg)的外源MT，每3天称量一次小... 详细信息

[目的]研究外源褪黑激素(Melatonin MT)对昆明白小鼠生长和繁殖性能的影响，为外源MT在畜牧生产上的应用提供依据。[方法]将40只昆明白小鼠(公母各半)随机分成4组，用皮下埋植的方法埋植不同剂量(0.1.4、8mg)的外源MT，每3天称量一次小鼠的体重并记录;MT处理11周后，雄鼠与正常雌鼠交配，记录冲出的卵中受精卵的数量;雌鼠与正常雄鼠交配，记录冲出的卵的数量，14周后HE染色，制作睾丸和卵巢切片。[结果]在体重增长方面，外源MT对昆明白公鼠体重增长有促进作用，皮下埋植8mg组的促进作用显著(P＜0.05);对昆明白母鼠体重增长有抑制作用，皮下埋植8mg组的抑制作用显著(P＜0.05)。在繁殖性能方面，外源MT对昆明白鼠公鼠繁殖性能抑制作用显著，皮下埋植1mg和4mg组抑制作用显著(P＜0.05)，但皮下埋植外源MT 8mg组和对照组间无统计学差异(P＞0.05)，睾丸精细管组织观察也可以说明;对昆明白母鼠繁殖性能也有抑制的趋势，但无统计学差异(P＞0.05)，组织学上也无差异。[结论]外源MT对昆明白鼠生长和繁殖性能有影响，并存在性别和剂量的依赖性。

关键词：褪黑激素昆明白鼠繁殖性能生长发育

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实验用五指山猪近交系群体在14个微卫星位点的遗传学分析

实验用五指山猪近交系群体在14个微卫星位点的遗传学分析

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：李凯牟玉莲刘云海扬述林刘岚员新旭韩建林冯书堂北京农学院北京 102206 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100094 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100094 北京农学院北京 102206

[目的]目的在于探索五指山猪近交系的遗传学规律，为其表性学研究提供有力支持。 [方法]本实验以实验用五指山猪近交系为材料。利用荧光标记技术检测了实验用五指山猪近交系三个群体75头个体，14个微卫星位点上基因的纯合度以及随近... 详细信息

[目的]目的在于探索五指山猪近交系的遗传学规律，为其表性学研究提供有力支持。 [方法]本实验以实验用五指山猪近交系为材料。利用荧光标记技术检测了实验用五指山猪近交系三个群体75头个体，14个微卫星位点上基因的纯合度以及随近交代数的推进每个星座上等位基因的变化规律。 [结果]五指山猪近交系三个家系F13-F18群体的平均杂合度为0.42，平均多态信息含量为0.37，平均每个位点的等位基因数为2.7;F13-F18群体的平均杂合度分别为0.41、0.45、0.42，平均等位基因数为2.36、2.29、2.5;F13-F18三个家系每世代的群体的平均杂合度分别为0.31、0.41、0.36、0.41、0.37、0.2;研究发现SW2409、SW510、SW71在五指山猪近交系三个家系群体中已经达到完全纯合，而***205、SW936、SW0036在三家系、六世代中未能纯合。 [结论]从结果中可以看出，除几个基因座外，实验用五指山猪近交系呈纯化趋势，杂合度随世代增高而降低，揭示了近交系猪分子遗传学特征。并初步发现了可能维持五指山猪种质特异性的特有等位基因以及了解到近交猪在14个微卫星位点上的纯合度及每个星座上等位基因的变化规律。

关键词：五指山猪近交系群体微卫星位点遗传学分析种质特异性等位基因

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利用Red重组系统对牛酪蛋白基因间不同长度的间隔序列及αs1-酪蛋白基因CDS区的敲除

利用Red重组系统对牛酪蛋白基因间不同长度的间隔序列及αs1-酪蛋...

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：黄玮玮田允波李峰施振旦薛可陈学进仲恺农业工程学院生命科学学院广州 510225 华南农业大学动物科学学院广州 510642 上海交通大学附属新华医院发育生物学研究中心上海 200092 仲恺农业工程学院生命科学学院广州 510225 上海交通大学附属新华医院发育生物学研究中心上海 200092 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海 00031 华南农业大学动物科学学院广州 510642 上海交通大学附属新华医院发育生物学研究中心上海 200092 沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳 110161 上海交通大学附属新华医院发育生物学研究中心上海 200092

借助Red重组系统通过空隙修复(Gap-repair)方式顺利从BAC克隆RP42-254I13获得包括αs1-，β-酪蛋白基因以及两个基因之间的19.6 kb序列在内的82 kb的DNA序列(pBAcLinksp-AD，在其它实验中已经成功获得此重组质粒，见图1)，本试验主要是... 详细信息

借助Red重组系统通过空隙修复(Gap-repair)方式顺利从BAC克隆RP42-254I13获得包括αs1-，β-酪蛋白基因以及两个基因之间的19.6 kb序列在内的82 kb的DNA序列(pBAcLinksp-AD，在其它实验中已经成功获得此重组质粒，见图1)，本试验主要是以这个82 kb的重组质粒为基础，利用Red重组系统成功逐段敲除两个牛酪蛋白基因之间的不同长度(19 kb，14.5 kb，10 kb，5 kb)的间隔序列以及α s1-酪蛋白基因的CDS区。方法：设计引物，PCR扩增同源臂：酶切同源臂、PKS载体和Neo基因及连接;连接产物的鉴定;最后进行同源重组，通过抗性基因筛选阳性克隆。结果：获得了缺失不同大小片断的基因序列以及缺失CDS区的αs1-酪蛋白基因，为研究αs1-和β-酪蛋白基因3端侧翼序列(19.6 kb间隔序列)在牛酪蛋白基因座控制区的定位奠定坚实的技术基础，并为随后插入外源基因，研究其表达功能，进行乳腺生物反应器的研究提供了方法。

关键词： Red重组酪蛋白基因 DNA序列外源基因牛

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梅花鹿XY分离精液腹腔镜输精的初步观察

梅花鹿XY分离精液腹腔镜输精的初步观察

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：魏海军高庆华赵伟刚张宇赵蒙李生崔学哲薛海龙张云梅中国农业科学院特产研究所新疆塔里木大学动物科技学院 XY种畜有限公司

2006年9月下旬，应用电刺激采精技术，采集中国农业科学院特产研究所茸鹿实验基地成年梅花鹿种公鹿精液，1：1稀释后，在5小时内送到流式细胞仪实验室。经过荧光素Hochest33342前处理后，使梅花鹿精子通过流式细胞计数器，根据精子荧光... 详细信息

2006年9月下旬，应用电刺激采精技术，采集中国农业科学院特产研究所茸鹿实验基地成年梅花鹿种公鹿精液，1：1稀释后，在5小时内送到流式细胞仪实验室。经过荧光素Hochest33342前处理后，使梅花鹿精子通过流式细胞计数器，根据精子荧光强度的不同实现梅花鹿X精子和Y精子的区分和分离，结果分别获得94％Y精子和91％X精子纯度的梅花鹿XY分离精液。将分离精液平衡，稀释后装入0.25ml细管中，每管含性控精子量为220-230万个。按常规冷冻方法冷冻细管精液并贮存在-196度的液氮中。2006年9月11日选择36只经产2-3胎的健康雌性梅花鹿进行阴道内放置孕酮阴道拴(CIDR)，9月23日晚取出CIDR，并肌肉注射330IU孕马血清促性腺激素。取出CIDR后第58-60小时，采用腹腔镜技术观察同期发情处理的梅花鹿卵巢卵泡发育情况，对卵巢上有大卵泡的一测子宫角进行X精子或Y精子冷冻精液输精，同时肌肉注射15ug促黄体素释放激素D-色氨酸类似物(LRH-A3)。解冻后精子活率为0.45。其中有6只母鹿输Y精子精液，7只母鹿输X精子精液。结果总产胎率为84.61％(11/13).其中输Y精子精液的母鹿产公仔率为100％(5/5);输x精子精液的母鹿产母仔率为83.33％(5/6)。

关键词：梅花鹿电刺激采精精液分离性腺激素冷冻精液腹腔镜输精

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两株不同时期IBV地方分离株核衣壳蛋白基因的遗传变异性分析

两株不同时期IBV地方分离株核衣壳蛋白基因的遗传变异性分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：磨美兰李孟陈秋英范文胜王秀英韦平廖晓红赵夏宇广西大学动物科学技术学院

鸡传染性支气管炎(Infectious bron- chitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性高度接触传染性的呼吸道疾病,严重危害整个世界养禽业。IBV的主要结构蛋白为纤突(S)蛋白、膜(M)蛋白、核衣壳... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Infectious bron- chitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性高度接触传染性的呼吸道疾病,严重危害整个世界养禽业。IBV的主要结构蛋白为纤突(S)蛋白、膜(M)蛋白、核衣壳(N)蛋白和E蛋白。以前认为IBV S1基因是最容易发生变异的,而N基因则相对保守,但最近的研究表明IBV N基因在不同毒株间存在变异,并且这些差异存在于推测的抗原表位和功能相关区域。为了探讨IBV遗传变异的机理,本研究对两株不同时期IBV广西分离株的核衣壳基因进行遗传变异性分析,旨在为我国IBV的分子流行病学研究奠定基础,为IBV的防控提供参考。本研究利用反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对1988年和2005年从免疫过的发病鸡群中分离到的2株IBV毒株GX-XD和GX-YL3的N基因进行扩增克隆并测定其核苷酸序列,并应用DNAstar软件将测定的广西分离株的核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank发表的其它13个IBV参考株进行进化关系分析。结果表明2株IBV的N基因均含有一个长1230bp的ORF,编码由409个氨基酸组成的N蛋白。2株不同时期广西IBV分离株之间的N基因核苷酸序列同源性为86.5%,推导的氨基酸序列同源性为91.7%,低于以前报道的94%以上的同源性。1988年的分离株GX-XD与常用疫苗株H120、H52、M41的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别介于87.8%-89.0%和92.0%- 93.2%之间,与其它IBV参考株核苷酸序列及推导出的氨基酸序列同源性分别介于86.5%-89.1%和91.2%-93.7%之间。2005年分离的GX-YL3毒株除与国内报道的嗜肾IBV-X株同源性较高(核苷酸序列为96.9%,氨基酸序列为97.3%)外,与其它IBV参考株核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性较低,分别介于86.0%-87.6%和90.5%-92.2%之间,其中与常用疫苗株H120、H52、M41的核苷酸序列及推导出的氨基酸序列同源性分别介于和86.0%-87.4%和90.0%-91.2%。2株广西分离毒株与参考株相比较,除了极少数连续3个核苷酸突变外,整个N基因核苷酸序列共发生100多处点突变,N基因的突变特点为散在的点突变,无缺失和插入现象,这些呈散在分布的点突变涉及整个ORF,与国内其他学者的报道一致。本研究结果表明了IBV的N基因并不是严格保守的,N基因点突变普遍存在,这些单碱基突变对病毒的生物学特性有何影响,还有待进一步研究;2005年分离株GX-YL3的N蛋白的变异程度比1988年分离株GX-XD大,但N蛋白的变异程度是否呈越来越大的趋势,N基因分子遗传变异是否存在一定的规律性及其生物学特性上发生的变化有待进一步深入研究。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核衣壳基因序列测定遗传变异

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稳定表达鸡CD4、CD8α细胞系的建立与鉴定

稳定表达鸡CD4、CD8α细胞系的建立与鉴定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：袁舟潘志明孟松树季琰胡青海焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室

鸡CD4和CD8分子是T细胞表面Ⅰ型跨膜糖蛋白,作为TCR的辅受体参与对MHC分子递呈抗原的识别。除了作为细胞黏附分子发挥作用外,它们还是传递信号的分子。因此,深入研究ChCD4和ChCD8将有利于我们了解这些辅受体在家禽免疫防御中的作用,从... 详细信息

鸡CD4和CD8分子是T细胞表面Ⅰ型跨膜糖蛋白,作为TCR的辅受体参与对MHC分子递呈抗原的识别。除了作为细胞黏附分子发挥作用外,它们还是传递信号的分子。因此,深入研究ChCD4和ChCD8将有利于我们了解这些辅受体在家禽免疫防御中的作用,从而为阐明疾病的免疫机理奠定基础。本研究利用Flp/FRT重组系统,将Flp重组酶表达载体pOG44与带有白莱航鸡CD4或CD8α基因序列的真核表达载体pcDNA5/FRT共转染Flp-In-293细胞,在Flp重组酶介导下使Flp- In-293细胞中的FRT位点与真核表达载体pcD- NA5/FRT中的FRT位点发生特异性重组,经Hy- gromycin B抗性压力筛选获得了表达ChCD4、ChCD4-FLAG、ChCD8α或ChCD8αc-FLAG的稳定细胞系,这为研制针对ChCD4、ChCD8α的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。分别用BamHⅠ、ApaⅠ和Bam HⅠ、XhoⅠ从pcDNA3.1-CD4和pcDNA3.1-CD8中切出白莱航鸡CD4和CD8α基因,并插入pcDNA5/FRT载体中,构建出真核表达质粒pcDNA5/FRT-CD4和pcDNA5/FRT-CD8α。用PCR方法扩增去除C端终止子的ChCD4和ChCD8α基因片段,经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后插入pcDNA3.1-FLAG载体,使其C端带有FLAG标签;然后用KpnⅠ和ApaⅠ将目的片段ChCD4-FLAG和ChCD8α-FLAG切下插入pcDNA5/FRT载体,最后构建出真核表达质粒pcD- NA5/FRT-CD4-FLAG和pcDNA5/FRT-CD8α- FLAG。分别将ChCD4、ChCD8α及C端带有FLAG标签的四种真核表达质粒瞬时转染Flp-In-293细胞,孵育48h后,FACS检测结果表明,四种真核表达质粒pcDNA5/FRT-CD4、pcDNA5/FRT-CD8α、pcDNA5/FRT-CD4-FLAG、pcDNA5/FRT-CD8α- FLAG构建正确且都能在Flp-In-293细胞膜上表达,且C端带有FLAG标签不影响目的蛋白的表达。采用脂质体转染法,将重组酶表达载体pOG44与四种pcDNA5/FRT真核表达质粒分别共转染Flp-In-293细胞,孵育48h后,用含120μg/ml Hygro- mycin B的完全培养基1:10稀释进行抗性筛选,3-4周后挑取克隆扩大培养并作FACS鉴定,获得表达ChCD4的细胞克隆,分别命名为C1、C2、C7;表达ChCD4-FLAG的细胞克隆,分别命名为D1、D6、D8;表达ChCD8α的细胞克隆,命名为E1;表达ChCD8α-FLAG的细胞克隆,分别命名为F1、F2、F3、F4。FACS、直接免疫荧光、间接免疫荧光分析表明,ChCD4和ChCD8α均在Flp-In-293细胞膜上表达,C端FLAG标签也得到了表达;β-半乳糖苷酶活性及Zeocin抗性分析表明,lacZ-Zeo融合蛋白在筛选过程中依然部分存在;选取C1、D1和E1、F1在抗性压力下长期培养后,FACS检测表明,目的蛋白能稳定表达;正常条件培养及饥饿20h培养F1、F2、F3、F4后裂解细胞进行SDS-PAGE电泳,转印后以FLAG单抗为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG抗体为二抗进行Western blotting,ECL显色,四个克隆均在35kDa处有目的条带,阴性对照E1及未转染细胞均无任何条带。饥饿培养与正常条件培养的细胞条带差异不大,说明有无血清刺激均不影响细胞表达ChCD4或ChCD8α分子。以鼠抗鸡CD8α纯化抗体为一抗进行Western blotting,F1、F2、F3、F4均在预期的35kDa处有目的条带。

关键词：鸡 CD4 CD8α 稳定表达细胞系建立

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通过嵌合体途径提高体细胞再克隆牛效率的研究

通过嵌合体途径提高体细胞再克隆牛效率的研究

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：陈秀萍李荣丁方荣李松戴蕴平李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

尽管许多哺乳动物都已被成功克隆，但克隆效率非常低，仅有低于5％的重组胚胎可以发育成个体，再克隆的效率则更低。体细胞克隆效率低主要体现在克隆胚胎质量差(与正常胚胎相比细胞数少、凋亡细胞数多)，克隆胎儿妊娠率低，流产率高、... 详细信息

尽管许多哺乳动物都已被成功克隆，但克隆效率非常低，仅有低于5％的重组胚胎可以发育成个体，再克隆的效率则更低。体细胞克隆效率低主要体现在克隆胚胎质量差(与正常胚胎相比细胞数少、凋亡细胞数多)，克隆胎儿妊娠率低，流产率高、出生后健康状况不艮。据统计，80％以上的克隆胎儿面临流产，出生的50％以上的克隆动物因器官发育不全出现早期夭折，存活的克隆后代往往存在各种生理异常，因而提高大型家畜动物的克隆效率成为克隆技术应用于生产的瓶颈问题。通过嵌合体途径，利用IVF来源胚胎的卵裂球改善体细胞重编程状况、补偿克隆胚胎发育过程中的缺陷(如滋养层细胞数少导致的胎盘异常，器官异常发育等)，将有助于提高再克隆胚胎的体内、外发育能力，不仅可以提高再克隆的效率，加快克隆技术应用到生产的进程，而且如果乳腺中含有大部分转基因目的成分，将提高转基因大家畜n乳腺生物反应器”的制作效率，必将加快转基因牛核心群扩繁的进程，并可推广到转基因山羊、绵羊、猪和兔的基础群的生产和扩繁。此外，如果得到的后代为生殖嵌合，可以将其遗传物质遗传给后代，将为良种家畜品质资源的保护提供一条新途径。本研究以本实验室已经建立的转hLF基因克隆牛的耳成纤维细胞系为核供体细胞，得到再克隆胚胎，然后通过显微注射将一个8-细胞期IVF胚胎的卵裂球注射到同一发育时期的8-细胞再克隆胚胎中，制作嵌合体胚胎。从亚细胞水平比较再克隆胚胎和嵌合体胚胎两者的体外发育能力，主要包括囊胚发育率，ICM、TE细胞数、总细胞数、ICM：CM比值。并通过胚胎移植比较两者体内发育能力，主要包括受体牛妊娠率、妊娠35天的胎牛数、出生牛教以及断奶数，以期通过此方法提高转基因克隆牛的再克隆胚胎的体内外发育能力。结果显示：(1)两者囊胚发育率相当，但嵌合体胚胎组的ICM、TE细胞数、总细胞数.ICM：CM比值均高于再克隆组;(2)嵌合体胚胎组的受体牛妊娠率、分娩率、犊牛出生率和存活率均高于对照组;(3)嵌合体组流产牛的各组织器官经PCR鉴定，均含GFP和hLF转基因;(4)经检测存活的4头再克隆嵌合体牛的血液，耳朵和尾巴样本中有2头为转基因阳性。

关键词：牛繁殖技术体细胞核克隆胚胎胚胎发育嵌合体

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小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰

小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：张静安晓荣李晴崔秀宏刘琳裴业春陈永福侯健中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京 100094

与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以昆明白... 详细信息

与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以昆明白小鼠为研究对象，对IVM-IVF胚胎的DNA甲基化和组蛋白修饰进行了研究。初步结果如下：实验1：比较了三种不同来源胚胎的发育能力，即：体内受精胚胎、体内成热-体外受精胚胎、体外成熟-体外受精胚胎。结果表明，体外成熟卵母细胞的受精率(58.6％)明显低于体内成熟卵母细胞(73.8％)(P＜0.05)，同时体外成熟-体外受精胚胎的囊胚率(33.7％)也明显低于体内成熟-体外受精胚胎(64.3％)和体内受精胚胎(87.1％)(P＜0.05)。这一结果说明体外成熟来源的卵母细胞发育能力减弱。实验2：用免疫荧光染色法时三种不同来源受精卵的DNA甲基化、H3K9乙酰化、H3K9甲基化模式进行了检测。主要观察了原核期受精卵中雌雄原核的表观遗传修饰状态。结果表明，三种不同来源的原核期受精卵在DNA甲基化和H3K9修饰上没有明显差别。实验3：利用反转录PCR(RT-PCR)比较了三种卵母细胞中相关表观遗传修饰酶的mRNA含量。三种卵母细胞为：未成熟卵(GV期)、体外成熟的MⅡ期卵母细胞和体内成熟的MⅡ期卵母细胞。相关表现遗传修饰酶包括：DNA甲基化酶(Dnmt1，Dnmt3a，Dnmt 3b)，组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白甲基化酶(Suv39h1，G9a)。结果显示：Dnmt1，Dnmt 3a，HAT的mRNA在三种卵母细胞中均含量很高，而G9a mRNA在三种卵母细胞中都没有检测到;Dnmt 3b和Suv39h1在体内成熟的MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到，但在GV期卵和体外成熟MⅡ卵中可以检测到。结论：体外成熟的卵母细胞与体内成熟的卵母细胞在表观遗传修饰酶mRNA含量上(Dnmt 3b和Suv39h1)有一定差异，但在原核期受精卵的表观遗传特征上没有差别，因此推断：体外成熟一体外受精胚胎发育能力减弱可能不是由DNA甲基化或H3K9修饰的异常重编程造成的。但是，原核期以后的发育时期是否存在表观遗传修饰异常需要进一步研究确证。

关键词： DNA甲基化组蛋白修饰体外成熟体外受精卵母细胞动物繁殖小白鼠

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鸡传染性法氏囊病病毒广西流行代表毒株免疫原性的研究

鸡传染性法氏囊病病毒广西流行代表毒株免疫原性的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：韦平黄志永吴俊姬阳秀英腾丽琼尤岩岩陆有飞钟雅婷李葆泓广西大学养禽与禽病研究所

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的主要危害幼龄鸡的一种急性、高度接触性的传染病,除引起发病、死亡等直接的损失外,还可导致感染鸡产生免疫抑制,致... 详细信息

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的主要危害幼龄鸡的一种急性、高度接触性的传染病,除引起发病、死亡等直接的损失外,还可导致感染鸡产生免疫抑制,致使机体免疫应答降低和对其它疾病的易感性增高,造成更大的损失。基因突变所引起的IBDV超强毒株(vvIBDV)和不同血清亚型的出现,是造成目前现有商品疫苗免疫效力不高或免疫失败的主要原因之一。因此,及时分离并筛选具有代表性的地方流行毒株作为研制疫苗的候选毒株,并对其免疫原性和交叉免疫保护性进行试验就成为一项十分有意义而且非常必需的工作。在之前的研究中,我们在对2000～2006年间分别来自广西、江苏、浙江、安徽、海南5个省的23个IBDV分离毒株的主要保护性抗原蛋白VP2基因的高变区序列进行比较分析后发现,分离株可明显分为2群:第1群为属于cIBDV的10个弱毒株及2个中等偏强毒力的分离株,第2群为属于vvIBDV的11个分离株。本课题选取分离自广西的属第2群的vvIBDV毒株BH11、TSC-2(9)和属第1群的中等偏强毒力株040124、YL052作为代表,与目前在生产上使用最广泛的商品疫苗株B87(in)和FW2512一起,进行了毒株血清亚型和致病力鉴定、毒株间交叉免疫保护等研究,目的是筛选出致病性强、免疫原性和免疫交叉保护性好的病毒作为研制疫苗的毒株。首先,通过应用免疫兔子制备的抗IBDV单因子血清,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对四个流行代表株040124、BH11、TSC-2(9)、YL052和2个疫苗株B87(in)、FW2512进行交叉中和试验。结果根据各毒株的中和效价,6个毒株可分成2个不同的血清亚型:BH11为一个亚型,YL052、TSC-2(9)、040124与疫苗株B87(in)和FW2512为另一个亚型;通过聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系,结果显示目前在广西流行的IBDV野毒株之间以及其与疫苗株间的抗原性存在一定的差异。第二,用四个流行代表毒株分别人工感染4周龄的IBD非免疫鸡,以比较和确定它们的致病性。实验从致死率、免疫器官指数及法氏囊显微病理损伤评分分别进行评价。结果显示四个毒株对实验鸡的发病率均为100%;在各实验组与对照组的免疫器官指数比较中差异均显著(p<0.05),表明它们均具有一定程度的致病性,但各毒株间的毒力差异较大,040124毒株的致死率(40%)和法氏囊显微病理损伤评分(5分)均为最高。第三,通过制备四个分离株的灭活油乳剂疫苗,进行了商品疫苗毒株B87(in)、FW2512对4个分离株的免疫保护试验和各分离株间的免疫交叉保护试验。试验分别从攻毒后各毒株疫苗免疫组鸡的免疫保护指数(immune protection index,IPI)、免疫器官指数(immune organs index,IOI)进行评价。结果显示,B87(in)和FW2512疫苗免疫组对四个分离株YL052、040124、BH11、TSC-2(9)、的IPl分别为80%、60%、70%、70%和70%、60%、70%、80%,表明现有常用的商品疫苗B87(in)和FW2512不能对流行毒株提供完全的保护,这与生产中使用这些疫苗免疫后仍发病的结果相吻合;四个流行代表毒株制备的灭活油乳剂疫苗对同源毒株均可产生100%保护,毒株040124的疫苗对BH11、TSC-2(9)、YL052的IPI分别为80%、80%、90%,交叉免疫保护性最好,其它三个毒株间的IPI则差异较大(40%～80%之间);在毒株免疫组与未免疫组的IOI比较观察中发现,分离株TSC-2(9)和YL052免疫组与未免疫组的差异显著(p<0.05),而分离株040124和BH11免疫组与未免疫组的101差异则不显著(p>0.05)。综合两项指标的结果,证明毒株040124株的免疫原性最好。本课题研究的结果表明,广西存在不同的IB- DV血清亚型的流行,商品疫苗B87(in)和FW2512已不能对流行毒株提供完全的保护,流行代表毒株040124的免疫原性和交叉免疫保护性最好,可作为研制适合本地使用的疫苗的候选毒株。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒血清亚型抗原变异致病性免疫原性交叉免疫保护疫苗候选毒株

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会议通知(二)

引用

猪业观察 2008年第12期 1-1页

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会将于2008年9月25日至29日在江苏省扬州市举行。大会由禽病学分会主办,扬州大学举办。现将有关事项通知如下:

关键词：禽病学分会中国畜牧兽医学会防制

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