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鸡包涵体性肝炎肿瘤坏死因子α基因mRNA表达的研究

鸡包涵体性肝炎肿瘤坏死因子α基因mRNA表达的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：王凤龙葛金英内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院

应用分子克隆获得的鸡肿瘤坏死因子α基因片段,通过地高辛标记制备 DNA核酸探针,核酸原位杂交检测鸡包涵体肝炎病毒Hb株在感染鸡组织细胞的肿瘤坏死因子α mRNA的表达水平,结果表明,Hb株感染雏鸡后,在肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊和盲肠扁... 详细信息

应用分子克隆获得的鸡肿瘤坏死因子α基因片段,通过地高辛标记制备 DNA核酸探针,核酸原位杂交检测鸡包涵体肝炎病毒Hb株在感染鸡组织细胞的肿瘤坏死因子α mRNA的表达水平,结果表明,Hb株感染雏鸡后,在肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊和盲肠扁桃体中能检测到一定数量肿瘤坏死因子α mRNA信号,其中在5-7天和36-56天时阳性细胞数量较多,其它感染时间阳性细胞少,阳性信号弱,甚至检测不到阳性信号。与感染鸡外周血和脾脏肿瘤坏死因子α活性的动态变化基本一致, 表明鸡包涵体肝炎病毒感染,能诱生和促进机体表达和分泌肿瘤坏死因子α,TNF α的产生与FAV-Hb感染有相关性,TNF α在鸡包涵体性肝炎的发病机理中具有重要作用。

关键词：鸡肿瘤坏死因子α 包涵体肝炎核酸探针原位杂交

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鸡传染性支气管炎病毒地方分离株mRNA5及mRNA6遗传变异特征

鸡传染性支气管炎病毒地方分离株mRNA5及mRNA6遗传变异特征

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：马德星李广兴东北农业大学动物医学学院东北农业大学动物医学学院

从我国四川省一疑似鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis virus, IB)的雏鸡病料中成功分离并鉴定了一株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV),暂命名为SC。自接毒鸡胚尿囊液中提取单股RNA后应用RT-PCR技术... 详细信息

从我国四川省一疑似鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis virus, IB)的雏鸡病料中成功分离并鉴定了一株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV),暂命名为SC。自接毒鸡胚尿囊液中提取单股RNA后应用RT-PCR技术扩增得到了包括IBV SC株mRNA 5 cDNA基因(可编码重叠的5a、5b蛋白)及mRNA 6 cDNA基因(可编码N蛋白)共约1600bp片段。应用DNAstar v5．06分析软件将克隆测序的5a、5b蛋白基因及N蛋白基因分别与GeneBank中11株国内外参考毒株基因序列进行比较与分析,发现 IBV SC株变异独特,明显不同于国内外参考毒株。

关键词：传染性支气管炎病毒 mRNA5及mRNA6 cDNA 遗传变异

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禽源大肠杆菌的生物表型特性

禽源大肠杆菌的生物表型特性

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：陈祥赵李祥高崧王晓泉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室

禽病原性大肠杆菌(Avian Patho- genic Escherichia coli,APEC)主要通过呼吸道的侵入而引起机体的全身性感染和败血症,给养禽业带来了重大的经济损失,致病性和非致病性禽源大肠杆菌分离株在生化特性和药物敏感性方面相似,除了引起鸡胚... 详细信息

禽病原性大肠杆菌(Avian Patho- genic Escherichia coli,APEC)主要通过呼吸道的侵入而引起机体的全身性感染和败血症,给养禽业带来了重大的经济损失,致病性和非致病性禽源大肠杆菌分离株在生化特性和药物敏感性方面相似,除了引起鸡胚或鸡的死亡外,还未鉴定出某一单独的毒力因子可区分所有的致病菌株与非致病菌株。本试验以我国分离的APEC E037株(078)、E058株(02)获得的SSH差异片段和SCOTS体内转录序列为研究基础,选取Ⅰ型菌毛、P菌毛、温度敏感性血凝素和血清耐受等为研究对象,对其相关表型进行检测,阐述其与致病性的关系,为深入研究该病的致病机理和特异防制措施奠定基础。选取243株禽源大肠杆菌分离株,其中O78血清型分离株有124株,O2血清型分离株有51株,其它血清型分离株有68株,包括15株O18、13株O1、9株O11、7株O26、6株O88、4株O131、2株O127、2株O148和O3、O4、O12、O17、O48、O70、O81、O87、O100、O125血清型分离株各1株,合计20个血清型。对同时对这243株禽源大肠杆菌分离株进行血清耐受试验、菌毛化大肠杆菌血凝试验和温度敏感性血凝素试验。在这些分离株中,高度血清耐受、中等血清耐受、轻度血清耐受和血清敏感菌株分别占受试菌株的57.2%(139/243)、28.8%(70/ 243)、10.3%(25/243)和3.7%(9/243)。在37℃细菌培养物与鸡红细胞凝集试验中,甘露糖敏感血凝(manose sensitive hemagglutination,MSHA)和甘露糖耐受血凝(manose resistant hemag- glutination,MRHA)菌株分别占受试菌株的64.6% (157/243)和5.8%(14/243);与豚鼠红细胞凝集试验中,MSHA和MRHA菌株分别占受试菌株的74.9%(182/243)和2.9%(7/243),其中与鸡红细胞凝集试验MSHA菌株中,MSHA阳性菌株占高致病株的69.5%(132/190),MRHA阳性菌株占低致病株的22.2%(2/9),两者差异极显著(p<0.01)。在温度敏感性血凝素试验中,MRHA菌株为112株,占分离株的46.1%,其中O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的83%-100%,而其它血清型的高致病株仅占57%左右,差异显著(p<0.05)。结果显示禽源大肠杆菌的致病性与其血清耐受能力、鸡红细胞MSHA菌毛的表达和温度敏感性血凝素的表达呈一定的相关关系。

关键词：禽病原性大肠杆菌致病性血凝试验血清耐受温度敏感性血凝素

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志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析

志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：喻华英王景林高丰康琳吴东林赵金红新疆塔里木农垦大学动科院军事医学科学院微生物流行病研究所长春解放军军需大学军事医学科学院微生物流行病研究所长春解放军军需大学长春解放军第208医院

用Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切pGEM-TB3克隆质粒,得到为大小约为225bp的ShT-B基因片段,分别将其插入到经双酶切的pQE40和pQE30表达载体中,构建了两个ShT-B的重组表达质粒pQE40-B3和pQE30-B2,分别转化到*** M15,经IPTG诱导后,重组质粒目的蛋白... 详细信息

用Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切pGEM-TB3克隆质粒,得到为大小约为225bp的ShT-B基因片段,分别将其插入到经双酶切的pQE40和pQE30表达载体中,构建了两个ShT-B的重组表达质粒pQE40-B3和pQE30-B2,分别转化到*** M15,经IPTG诱导后,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中,pQE40-B3表达蛋白约占菌体总蛋白的37％,主要为包涵体形式。 pQE30-B2表达蛋白约占菌体总蛋白的16％,主要为可溶性形式,约9．2％。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。

关键词：志贺毒素B亚单位表达载体表达分析

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实验用五指山猪近交系群体在14个微卫星位点的遗传学分析

实验用五指山猪近交系群体在14个微卫星位点的遗传学分析

引用

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：李凯牟玉莲刘云海扬述林刘岚员新旭韩建林冯书堂北京农学院北京 102206 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100094 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100094 北京农学院北京 102206

[目的]目的在于探索五指山猪近交系的遗传学规律，为其表性学研究提供有力支持。 [方法]本实验以实验用五指山猪近交系为材料。利用荧光标记技术检测了实验用五指山猪近交系三个群体75头个体，14个微卫星位点上基因的纯合度以及随近... 详细信息

[目的]目的在于探索五指山猪近交系的遗传学规律，为其表性学研究提供有力支持。 [方法]本实验以实验用五指山猪近交系为材料。利用荧光标记技术检测了实验用五指山猪近交系三个群体75头个体，14个微卫星位点上基因的纯合度以及随近交代数的推进每个星座上等位基因的变化规律。 [结果]五指山猪近交系三个家系F13-F18群体的平均杂合度为0.42，平均多态信息含量为0.37，平均每个位点的等位基因数为2.7;F13-F18群体的平均杂合度分别为0.41、0.45、0.42，平均等位基因数为2.36、2.29、2.5;F13-F18三个家系每世代的群体的平均杂合度分别为0.31、0.41、0.36、0.41、0.37、0.2;研究发现SW2409、SW510、SW71在五指山猪近交系三个家系群体中已经达到完全纯合，而***205、SW936、SW0036在三家系、六世代中未能纯合。 [结论]从结果中可以看出，除几个基因座外，实验用五指山猪近交系呈纯化趋势，杂合度随世代增高而降低，揭示了近交系猪分子遗传学特征。并初步发现了可能维持五指山猪种质特异性的特有等位基因以及了解到近交猪在14个微卫星位点上的纯合度及每个星座上等位基因的变化规律。

关键词：五指山猪近交系群体微卫星位点遗传学分析种质特异性等位基因

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玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞受精的影响

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞受精的影响

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会

作者：张秋婷梁洋王春生安铁洙东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院东北林业大学生命科学学院

随着胚胎玻璃化冷冻技术的不断完善,已在畜牧业领域广泛应用。用含40％Ethylene glycol 的FS(含30％Ficoll-70和0．5MSucrose的PB1液)液的为冷冻保护液(EFS法),冷冻保存小鼠2- 细胞期胚获得很高体外发育率。但是,当该方法在冷冻保存成... 详细信息

随着胚胎玻璃化冷冻技术的不断完善,已在畜牧业领域广泛应用。用含40％Ethylene glycol 的FS(含30％Ficoll-70和0．5MSucrose的PB1液)液的为冷冻保护液(EFS法),冷冻保存小鼠2- 细胞期胚获得很高体外发育率。但是,当该方法在冷冻保存成熟卵母细胞时,其冷冻效果不稳定, 难以获得理想的效果。为了探明EFS法冷冻保存对小鼠成熟卵母细胞及其受精过科中的影响,本研究对性成熟的昆明鼠用PMSG和hCG超数排卵后,进行下列处理:(1)在注射hCG后第14～16h 采集卵丘卵子复合体,用含0．5％透明质酸酶的PB1去掉卵子透明带外周的颗粒细胞,然后人工切开透明带并用改良M16液进行体外受精,或者无颗粒细胞卵经冷冻-解冻-透明带切开后进行体外受精,观察发育至2-细胞期胚、4-细胞期胚和桑椹胚的能力;(2)自然交配,在注射hCG后的第26h 和42h分别采集1-细胞期胚和2-细胞期胚,直接进行体外培养,或者用EFS法经冷冻-解冻后进行体外培养,观察其发育至4-细胞期和桑椹胚的能力。结果显示,(1)新鲜去颗粒细胞卵的体外受精率为71．43％,而去颗粒细胞卵经冷冻-解冻后所进行体外受精中未能获得受精卵,两者差异极显著 (P<0．01);(2)自然交配,在注射hCG后的第26h采集1-细胞期胚,直接培养或经冷冻-解冻后培养, 发育至2-细胞期胚、4-细胞期胚和桑椹胚比率分别为94．1％、94．1％、47．1％和85．7％、42．9％、22．9％, 不同处理组间差异极显著(P<0．01)。与其相比,在注射hCG后的第26h采集2-细胞期胚,直接培养或经冷冻-解冻后培养后,发育至4-细胞期胚和桑椹胚比率分别为92．5％、92．5和84．6％,不同处理组间未出现差异。上述结果表明,成熟卵母细胞及其在受精过程中,极易受到冷冻-解冻损害, 这种损害极有可能发生在细胞核,导致卵母细胞不能正常受精分裂。对小鼠成熟卵及其受精阶段卵细胞器在冷冻-解冻过程中损伤变化有待于进一步探讨。

关键词：小鼠卵母细胞玻璃化冷冻

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绵羊巴氏杆菌间接ELISA检测试剂盒的研制

绵羊巴氏杆菌间接ELISA检测试剂盒的研制

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：陈士恩马忠仁冯玉萍毛东风罗晓琴西北民族大学生命科学与工程学院西北民族大学生命科学与工程学院西北民族大学生命科学与工程学院西北民族大学生命科学与工程学院西北民族大学生命科学与工程学院

成功研制了检测绵羊巴氏杆菌抗体的间接ELISA试剂盒。以提取的巴氏杆菌外膜蛋白和脂多糖为该试剂盒的包被抗原,其最佳工作浓度为稀释200倍,包被浓度为5 μg／ml。所检血清最佳稀释度为1:100。辣根过氧化物酶标兔抗羊IgG最佳工作浓度为1:... 详细信息

成功研制了检测绵羊巴氏杆菌抗体的间接ELISA试剂盒。以提取的巴氏杆菌外膜蛋白和脂多糖为该试剂盒的包被抗原,其最佳工作浓度为稀释200倍,包被浓度为5 μg／ml。所检血清最佳稀释度为1:100。辣根过氧化物酶标兔抗羊IgG最佳工作浓度为1:800。在甘肃省某羊场绵羊巴氏杆菌病爆发期间,利用该间接ELISA方法检测1800份绵羊血清,其中 56份呈阳性,并从15例死羊分离出同型溶血性巴氏杆菌毒株。

关键词：绵羊巴氏杆菌间接ELISA 试剂盒

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乌鲁木齐地区规模化奶牛场O型口蹄疫免疫效果的监测及评价

乌鲁木齐地区规模化奶牛场O型口蹄疫免疫效果的监测及评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：徐敏简子健符子华易忠胡建军新疆农业大学动物医学学院新疆农业大学动物医学学院新疆畜牧科学院兽医研究所新疆畜牧科学院兽医研究所新疆农业大学动物医学学院

本试验用O型口蹄疫抗体检测液相阻断ELISA诊断试剂盒对乌鲁木齐地区15 个免疫牛场的726份口蹄疫感染抗体阴性血清样品进行检测,在免疫接种疫苗105天左右(最低95天,最高128天)后,70％以上的牛场(11／15)的牛群获得了100％免疫保护率(≥1:... 详细信息

本试验用O型口蹄疫抗体检测液相阻断ELISA诊断试剂盒对乌鲁木齐地区15 个免疫牛场的726份口蹄疫感染抗体阴性血清样品进行检测,在免疫接种疫苗105天左右(最低95天,最高128天)后,70％以上的牛场(11／15)的牛群获得了100％免疫保护率(≥1:128), 群体免疫水平整齐。检测结果显示,乌鲁木齐地区规模化奶牛场的O型口蹄疫的免疫效果较好,总体水平达到86．9％(631／726),说明目前采用的每4个月1次的免疫程序是可行的。同一厂家同一批次疫苗的免疫效果的差异、不同生产厂家的疫苗、浓缩苗与普通苗的免疫效果以及成年牛与青年牛免疫效果的差异,虽然没有做免疫前抗体水平检测,但可推测免疫效果与基础免疫水平高低有一定关系。

关键词：牛口蹄疫 FMD-0-LB-ELISA 免疫抗体检测免疫效果评价

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粪肠球菌SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立与应用

粪肠球菌SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立与应用

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：李博张欣刘娜刘彦威刘利强刘建钗河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸 056021 河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸 056021 河北省禽病研究技术工程中心河北邯郸 056021

粪肠球菌是人和动物胃肠道内广泛存在的一种重要的机会致病菌，通常不引起动物发病.但近年来滥用抗生素现象在养禽业十分严重，使得禽类感染粪肠球菌的病例逐年增多，且不同成长阶段的禽类均会感染.为了建立一种快速、特异、敏感的检测...

粪肠球菌是人和动物胃肠道内广泛存在的一种重要的机会致病菌，通常不引起动物发病.但近年来滥用抗生素现象在养禽业十分严重，使得禽类感染粪肠球菌的病例逐年增多，且不同成长阶段的禽类均会感染.为了建立一种快速、特异、敏感的检测、诊断鸡粪肠球菌的方法，以对粪肠球菌感染的防治提供便捷的方法，本研究参照Gen Bank 中已发表的鸡粪肠球菌全基因组，采用Primer Express5.0 软件设计了一对特异引物，先通过常规的普通PCR 检测引物的特异性，然后进行敏感性、特异性、重复性试验成功建立了检测鸡粪肠球菌的SYBR Green I LC-PCR 检测方法，并通过临床组织样品检测评价其临床实用性.

关键词：

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血管内皮生长因子在牛流行性白血病肿瘤组织的表达及其意义

血管内皮生长因子在牛流行性白血病肿瘤组织的表达及其意义

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：龙塔潘耀谦佘锐萍董发明王天奇杨玉荣刘志军河南科技大学河南科技大学中国农业大学河南科技大学河南科技大学中国农业大学河南科技大学

本研究采用免疫组化ABC方法首次对14例EBL病牛的肿瘤组织中VEGF的表达、分布变化进行了研究。结果表明:EBL病牛淋巴结、心脏肿瘤组织中VEGF阳性细胞表达率分别为78．6％和90％,并见到肿瘤组织中绝大多数肿瘤细胞过量表达VEGF,均明显高... 详细信息

本研究采用免疫组化ABC方法首次对14例EBL病牛的肿瘤组织中VEGF的表达、分布变化进行了研究。结果表明:EBL病牛淋巴结、心脏肿瘤组织中VEGF阳性细胞表达率分别为78．6％和90％,并见到肿瘤组织中绝大多数肿瘤细胞过量表达VEGF,均明显高于相应瘤旁组织,差异极显著(P<0．01)。还观察到血管内皮细胞和血管内肿瘤细胞分泌VEGF 现象。因此,我们认为VEGF在EBL病牛肿瘤细胞中的高表达现象,证明VEGF在EBL 肿瘤形成、浸润和全身多脏器转移的过程中起重要作用。

关键词：牛白血病肿瘤细胞血管内皮生长因子免疫组化

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