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会议通知(二)

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猪业观察 2008年第12期 1-1页

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会将于2008年9月25日至29日在江苏省扬州市举行。大会由禽病学分会主办,扬州大学举办。现将有关事项通知如下:

关键词：禽病学分会中国畜牧兽医学会防制

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小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰

小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：张静安晓荣李晴崔秀宏刘琳裴业春陈永福侯健中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京 100094

与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以昆明白... 详细信息

与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以昆明白小鼠为研究对象，对IVM-IVF胚胎的DNA甲基化和组蛋白修饰进行了研究。初步结果如下：实验1：比较了三种不同来源胚胎的发育能力，即：体内受精胚胎、体内成热-体外受精胚胎、体外成熟-体外受精胚胎。结果表明，体外成熟卵母细胞的受精率(58.6％)明显低于体内成熟卵母细胞(73.8％)(P＜0.05)，同时体外成熟-体外受精胚胎的囊胚率(33.7％)也明显低于体内成熟-体外受精胚胎(64.3％)和体内受精胚胎(87.1％)(P＜0.05)。这一结果说明体外成熟来源的卵母细胞发育能力减弱。实验2：用免疫荧光染色法时三种不同来源受精卵的DNA甲基化、H3K9乙酰化、H3K9甲基化模式进行了检测。主要观察了原核期受精卵中雌雄原核的表观遗传修饰状态。结果表明，三种不同来源的原核期受精卵在DNA甲基化和H3K9修饰上没有明显差别。实验3：利用反转录PCR(RT-PCR)比较了三种卵母细胞中相关表观遗传修饰酶的mRNA含量。三种卵母细胞为：未成熟卵(GV期)、体外成熟的MⅡ期卵母细胞和体内成熟的MⅡ期卵母细胞。相关表现遗传修饰酶包括：DNA甲基化酶(Dnmt1，Dnmt3a，Dnmt 3b)，组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白甲基化酶(Suv39h1，G9a)。结果显示：Dnmt1，Dnmt 3a，HAT的mRNA在三种卵母细胞中均含量很高，而G9a mRNA在三种卵母细胞中都没有检测到;Dnmt 3b和Suv39h1在体内成熟的MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到，但在GV期卵和体外成熟MⅡ卵中可以检测到。结论：体外成熟的卵母细胞与体内成熟的卵母细胞在表观遗传修饰酶mRNA含量上(Dnmt 3b和Suv39h1)有一定差异，但在原核期受精卵的表观遗传特征上没有差别，因此推断：体外成熟一体外受精胚胎发育能力减弱可能不是由DNA甲基化或H3K9修饰的异常重编程造成的。但是，原核期以后的发育时期是否存在表观遗传修饰异常需要进一步研究确证。

关键词： DNA甲基化组蛋白修饰体外成熟体外受精卵母细胞动物繁殖小白鼠

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出壳肉鸡弱雏病原菌的分析

出壳肉鸡弱雏病原菌的分析

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：杨子龙刘洁玉张欣李博宋阔阔李慧芳姬晶晶刘彦威刘利强河北工程大学生命科学与食品工程学院河北省禽病工程研究中心

刚出壳雏鸡的发病和死亡,不仅直接影响孵化场和肉鸡养殖场的经济效益,同时这些病或死的雏鸡还可能传染健康雏鸡,给商品鸡场造成污染。随着养鸡规模的扩大,垂直传播病原菌数量的增加,病原菌成为刚出壳雏鸡发病的主要原因之一,因此,探究... 详细信息

刚出壳雏鸡的发病和死亡,不仅直接影响孵化场和肉鸡养殖场的经济效益,同时这些病或死的雏鸡还可能传染健康雏鸡,给商品鸡场造成污染。随着养鸡规模的扩大,垂直传播病原菌数量的增加,病原菌成为刚出壳雏鸡发病的主要原因之一,因此,探究出壳肉鸡弱雏的病原菌感染情况,对有效防治该病的发生具有重要意义。本试验通过对10只出壳肉鸡弱雏进行解剖,从肝脏,心脏以及脾脏分离菌株,培养、纯化,革兰氏染色观察菌落形态,使用鉴别培养基(HE培养基、叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基、营养琼脂培养基和麦康凯培养基四种培养基)初步判断菌种;又通过DNA提取进行16S r RNA PCR扩增,扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测;测序结果在Gen Bank数据库中进行Blast分析比对,用DNAStar软件对相近序列进行同源性分析,确定菌种。10只雏鸡共有6只分离出病原菌,占60%。分离出21株病原菌,经形态学观察、鉴别培养基培养、鉴定检测、Blast分析比对,结果如下:大肠杆菌11株,占52.4%,肠球菌6株,占28.6%,奇异变形杆菌4株,占19.0%。导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌是大肠杆菌、肠球菌和奇异变形杆菌。据了解,现在这三种细菌作为主要致病菌已经严重危害了养殖业的健康发展,所以研究以上细菌的快速检测方法对于防治由这三种细菌引起的疾病具有很重要意义。我们的调查结果,对导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌有了新的发现,有利于出壳雏鸡成活率的提高。但是,试验所采集的弱雏较少,所分析的结果只具有一定的参考意义,为下一步的实验打下一个良好的基础,应通过更多的弱雏病原菌分离鉴定来使实验数据更为准确,也为防治疾病提供更多的依据。

关键词：奇异变形杆菌肠球菌大肠杆菌病原菌

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马-牛异种核移植的初步研究

马-牛异种核移植的初步研究

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会

作者：沈彦军袁天杰庞云渭杜卫华朱化彬中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 100193 中国农业科学院草原研究所呼和浩特 010010

研究目的及意义：异种核移植在物种的改良、濒危动物的保护;研究核质关系、基因表达调控、细胞分化和物种进化以及胚胎干细胞等方面具有重要的研究意义。手工克隆(HandmadeCloning，HMC)省去了繁杂的显微操作过程，并降低了生产成本，... 详细信息

研究目的及意义：异种核移植在物种的改良、濒危动物的保护;研究核质关系、基因表达调控、细胞分化和物种进化以及胚胎干细胞等方面具有重要的研究意义。手工克隆(HandmadeCloning，HMC)省去了繁杂的显微操作过程，并降低了生产成本，而且具有较高的融合率和囊胚率，为体细胞克隆技术的应用研究开辟了一条捷径。本研究运用手工克隆技术利用马的体细胞和牛的卵母细胞构建重构胚胎，对马牛异种手工核移植进行了初步研究，为以后的研究打下基础。材料和方法：1.供体细胞培养剪取马耳缘1cm2左右的组织块，用DMEM全培养液，进行马成纤维细胞培养、传代。取5-10代的细胞作为供体细胞。2.重构胚的构建及体外培养将体外成熟培养18h左右的COCs去除颗粒细胞，挑选排出极体的去核，经去除透明带，作受体胞质。构建重构胚时，先将半卵在植物凝集素(PHA)中处理3-4s后，再粘附供体细胞。在交流电(AC)下，使体细胞-半卵复合体的排列方向与电极垂直，然后将另一半卵粘附其上，排列顺序为半卵-体细胞-半卵，并使其排列方向与电极垂直.最后给以50V/mm，9s，1个脉冲的直流电(DC)进行电融合。重构胚经激活后，移入mcR1aa液中，用微穴法(WOWs)体外培养。48h后换液并检查卵裂率，7d后检查重构胚发育情况。结果：马-牛重构胚经激活、体外培养后，融合率为93.9％(171/182)。培养48h后统计分裂率为91.2％(156/171)，其中2-4-细胞为33.9％(53/156)、4-细胞以上为66.1％(103/156)。培养7d后发现无囊胚出现，发育至16-细胞以上为19.8％(31/156)。利用马微卫星特异引物对分裂的各时期胚胎分别进行核遗传物质检测，发现其与供体马具有相同的基因型，证明所构建的重构胚具有供体马的遗传物质。讨论：重构的马牛异种核移植胚胎，体外培养得到较高的融合率和分裂率，表明牛的卵母细胞能够支持马体细胞的重编程和手工克隆技术具有简单、高效的优点。但是重构胚在16-细胞期出现发育停滞的现象，未能发育到囊胚.发生阻滞的时期正是新mRNA、rRNA和蛋白质合成启动的阶段。前几个分裂时期的合成代谢主要是由卵母细胞质中的原有mRNA、rRNA指导完成。随着胚胎的发育，供体细胞核基因组开始启动转录，重构胚的分裂逐步由受体胞质的mRNA、rRNA指导向供体细胞mRNA、rRNA指导转变，此时若某发育相关基因不能正确表达便会出现发育停滞现象。因此，在这一时期胚胎对培养条件特别敏感，稍有不适便会出现不可逆的发育停滞。在下一步的实验中计划通过改进培养条件和方法，促使重构胚发育必需基因表达，克服发育受阻现象.并对重构胚胎的线粒体命运和核基因组DNA甲基化进行检测，以研究异种核移植胚胎的核质互作和核重编程问题。

关键词：异种核移植手工克隆体细胞核核移植技术马体细胞牛卵母细胞重构胚胎 DNA甲基化

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Minor deletions in loops of the capsids on Porcine parvovirus VP2 for the assembly of virus-like particles

Minor deletions in loops of the capsids on Porcine parvoviru...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者： Qunxing Pan Kongwang He Yongshan Wang Xiaoli Wang Wei Ouyang Libing Wen Rongli Guo Institute of Veterinary Medicine Jiangsu Academy of Agricultural Sciences.Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and TechnologyMinistry of Agriculture.National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products

Virus-like particles(VLPs) constitute a new genetation of non-replicative vectors for delivery of heterologous epitopes and induction of immune *** is no previous information for deletions in different loops of PPV VP2 on correct assembly of *** this report,we have constructed deletion mutants in the surface of PPV capsids by adenoviruses expression *** of recombinant adenoviruses expressing PPV:AVP2(Loop2/4) were studied by IFA and Western blotting *** microscopy analysis confirmed the presence of abundant VLPs in loop2 deletion mutant, with the expected size and appropriate *** the other hand,loop4 deletions produced a lower number of particles and the morphology of the particles was not well *** study showed that rAd-△VP2(Loop2) could induce specific antibody response to PPV as strong as PPV inactivated vaccine,rAd-△VP2(Loop4) could induce specific antibody titers lower than rAd-△VP2(Loop2)(p<0.05).In conclusion,our study open the possibility of inserting simultaneously B and T cell epitopes in the loop 2 and the N terminus,*** combination of different types of epitopes(B,CD4+,and CD8+) in different positions of the PPV particles opens the way to the development of highly efficient vaccines,able to stimulate at the same time the different branches of the immune system.

关键词： virus-like particles loops deletion mutants PPV

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Aerobes and Estrode and Progesterone Levels in Cystic Endometrial Hyperplasia-pyometra Complex Bitches

Aerobes and Estrode and Progesterone Levels in Cystic Endome...

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中国畜牧兽医学会兽医影像技术学分会第七次全体会员代表大会暨第十四次学术研讨会

作者： Gao Xian Zhou Lixia Deng Ganzhen Liu Chang Li Chengye Qiu Changwei Veterinary Medical College Huazhong Agricultural University

The objective were to determine which aerobic bacteria produce marked effect on cystic endometrial hyperplasia-pyometra complex（CEH-P） and where they sourced from,and analyze the relations of progesterone and estrode concentration in bitch blood with ***-eight privately owned bitches were diagnosed as CEH-P including pyometra and endometritis by history,physical examination,ultrasonography,ovariohysterectomy and histopathological *** vagina and uteri samples were obtained with cotton pledget,and uteri cumulative fluids of CEH-P cyst were collected with syringe in vitro for aerobically bacterial isolation and identification;sera were brought back to laboratory to detect progesterone and estrode levels respectively with Iodine[I]Progesrerone Radioimmunoassay Kit and Iodine[I]Estradiol Radioimmunoassay *** of 99 isolates were identified,and the main aerobes in CEH-P were Escherichia coli（33/99）,and the next in order were Salmonella enterica（14/99）,Proteus mirabilis（13/99）,Pseudomonas aeruginosa（13/99）,Staphylococcus aureus（12/99,）,Streptococcus agalactiae（7/99）,Shigella（6/99） and Corynebacteria（1/99）.Thereinto,Escherichia coli,Salmonella enterica,Proteus mirabilis,Pseudomonas aeruginosa,Staphylococcus aureus and Shigella could be isolated from healthy *** levels of estrode in endometritis,pyometra and estrus bitches were higher than that of in diestrus bitches（p<0.01）.In addition,the level of estrode was higher in CEH-P bitches than in estrus bitches（p<0.05）.Estrode level in endometritis bitches was different from that of in estrus bitches（p<0.01）.No difference of estrodiol level was found between endometritis and pyometra bitches（p>0.05）.Progesterone levels were different among all four groups（p<0.01）,in the order from high to low were pyometra,endometritis,estrus and diestrus *** experiment validated that bacterial inoculation in uteri was failed without hormone stimulation *** suggests that,in addition to common

关键词： CEH-P Aerobes Progesterone and estrode levels Bitch

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猪圆环病毒2型与猪细小病毒共感染对仔猪的致病性

猪圆环病毒2型与猪细小病毒共感染对仔猪的致病性

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：杨芳陈立功宋勤叶李艳琴刘祥义张振红李楠河北农业大学河北省兽用生物制品研究中心

猪圆环病毒2型（porcine circovirus type2,PCV2）引起的猪圆环病毒相关疾病（PCV2-associateddiseases,PCVAD）是危害当今世界养猪生产的重要免疫抑制性传染病之一。而猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）是PCVAD发病的重要协同致病... 详细信息

猪圆环病毒2型（porcine circovirus type2,PCV2）引起的猪圆环病毒相关疾病（PCV2-associateddiseases,PCVAD）是危害当今世界养猪生产的重要免疫抑制性传染病之一。而猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）是PCVAD发病的重要协同致病因子。本研究通过分析PCV2与PPV共感染仔猪的临床症状、病理学变化、PCV2与PPV的组织分布以及外周血淋巴细胞亚群含量的变化,以期阐明PCV2与PPV共感染对仔猪的协同致病作用,为进一步揭示PCV2的致病机制奠定基础。将48头35 d健康仔猪随机分为PCV2感染组、PPV感染组、PCV2/PPV感染组和空白对照组,每组12头,分别经口鼻路径接种病毒。PCV2感染组接种PCV2 SD/2008株细胞毒(10TCID/0.1mL),3 mL/头;PPV感染组接种PPV7909株细胞毒(10TCID/0.1mL),3 mL/头;PCV2/PPV感染组接种3 mL,PCV2 SD/2008株和3 mL PPV7909株的混合液;对照组经相同途径接种3 mL细胞维持液。感染后第4-5周PCV2感染组和PCV2/PPV感染组仔猪的周平均增重显著低于PPV感染组与空白对照组（P<0.05）,PCV2/PPV感染组的周增重低于PCV2感染组。PCV2感染猪和PCV2/PPV共感染猪均出现由单核/巨噬细胞、多核巨细胞和嗜酸性粒细胞浸润引起的间质性肺炎、肝炎、肾炎和淋巴结炎症,以及淋巴组织内淋巴细胞缺失等PCV2引起的典型病理变化。与PCV2感染猪相比,共感染猪的肉眼病变和显微病变均较严重,而且病变出现比率较高。上述结果表明PPV感染对PCV2的致病作用具有协同作用。感染后3、7、14、35 d（dpi）,应用免疫组化技术检测组织中PCV2和PPV抗原的分布。结果表明,PCV2/PPV感染组猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结、小肠等多种组织中的PCV2、PPV抗原信号数量与强度均高于PCV2或PPV单独感染猪,而且PCV2/PPV感染组淋巴结内的PCV2阳性信号的检出时间较早。此结果提示,PPV与PCV2共感染对其在部分组织中的增殖具有相互促进作用。感染14 d后,PCV2/PPV共感染猪血清中的PCV2或PPV特异性抗体分别比PCV2或PPV单独感染猪的相应抗体水平高,表明PCV2/PPV共感染可导致机体血清特异性IgG水平升高。3、7、14和35 dpi,应用流式细胞术测定各组仔猪外周血淋巴细胞中CD21MHC-I、CD21MHC-Ⅱ、CD3CD4CD8-、CD3CD4CD8、CD3CD4CD8、CD3CD4CD25、CD4CD8CD45RA、CD3CD4-CD8和NK等细胞亚群的动态变化,分析PCV2/PPV共感染对外周血免疫细胞含量的影响。结果显示,PCV2/PPV共感染可以引起CD21MHC-Ⅰ和CD21MHC-Ⅱ成熟B细胞含量初期升高,后期下降,造成CD3CD4CD25调节性T细胞含量升高;导致CD4CD8CD45RA效应性T细胞持续下降,以及CD3CD4CD8杀伤性T细胞、CD3CD4CD8、CD3CD4CD8双阴性T细胞和CD3CD4CD8NK细胞含量不同程度的降低。提示PPV/PCV2共感染可能上调了机体的免疫抑制性调节功能,使体液免疫功能相对增强,而特异性和非特性细胞免疫功能则下降,最终导致机体免疫功能抑制、体液一细胞免疫应答之间失衡。综上所述,本研究结果表明PPV通过促进PCV2在组织中的增殖、加剧机体免疫功能抑制和紊乱,发挥其对PCV2的协同致病作用。

关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒共感染协同致病仔猪

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鸡传染性法氏囊病病毒广西流行代表毒株免疫原性的研究

鸡传染性法氏囊病病毒广西流行代表毒株免疫原性的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：韦平黄志永吴俊姬阳秀英腾丽琼尤岩岩陆有飞钟雅婷李葆泓广西大学养禽与禽病研究所

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的主要危害幼龄鸡的一种急性、高度接触性的传染病,除引起发病、死亡等直接的损失外,还可导致感染鸡产生免疫抑制,致... 详细信息

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的主要危害幼龄鸡的一种急性、高度接触性的传染病,除引起发病、死亡等直接的损失外,还可导致感染鸡产生免疫抑制,致使机体免疫应答降低和对其它疾病的易感性增高,造成更大的损失。基因突变所引起的IBDV超强毒株(vvIBDV)和不同血清亚型的出现,是造成目前现有商品疫苗免疫效力不高或免疫失败的主要原因之一。因此,及时分离并筛选具有代表性的地方流行毒株作为研制疫苗的候选毒株,并对其免疫原性和交叉免疫保护性进行试验就成为一项十分有意义而且非常必需的工作。在之前的研究中,我们在对2000～2006年间分别来自广西、江苏、浙江、安徽、海南5个省的23个IBDV分离毒株的主要保护性抗原蛋白VP2基因的高变区序列进行比较分析后发现,分离株可明显分为2群:第1群为属于cIBDV的10个弱毒株及2个中等偏强毒力的分离株,第2群为属于vvIBDV的11个分离株。本课题选取分离自广西的属第2群的vvIBDV毒株BH11、TSC-2(9)和属第1群的中等偏强毒力株040124、YL052作为代表,与目前在生产上使用最广泛的商品疫苗株B87(in)和FW2512一起,进行了毒株血清亚型和致病力鉴定、毒株间交叉免疫保护等研究,目的是筛选出致病性强、免疫原性和免疫交叉保护性好的病毒作为研制疫苗的毒株。首先,通过应用免疫兔子制备的抗IBDV单因子血清,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对四个流行代表株040124、BH11、TSC-2(9)、YL052和2个疫苗株B87(in)、FW2512进行交叉中和试验。结果根据各毒株的中和效价,6个毒株可分成2个不同的血清亚型:BH11为一个亚型,YL052、TSC-2(9)、040124与疫苗株B87(in)和FW2512为另一个亚型;通过聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系,结果显示目前在广西流行的IBDV野毒株之间以及其与疫苗株间的抗原性存在一定的差异。第二,用四个流行代表毒株分别人工感染4周龄的IBD非免疫鸡,以比较和确定它们的致病性。实验从致死率、免疫器官指数及法氏囊显微病理损伤评分分别进行评价。结果显示四个毒株对实验鸡的发病率均为100%;在各实验组与对照组的免疫器官指数比较中差异均显著(p<0.05),表明它们均具有一定程度的致病性,但各毒株间的毒力差异较大,040124毒株的致死率(40%)和法氏囊显微病理损伤评分(5分)均为最高。第三,通过制备四个分离株的灭活油乳剂疫苗,进行了商品疫苗毒株B87(in)、FW2512对4个分离株的免疫保护试验和各分离株间的免疫交叉保护试验。试验分别从攻毒后各毒株疫苗免疫组鸡的免疫保护指数(immune protection index,IPI)、免疫器官指数(immune organs index,IOI)进行评价。结果显示,B87(in)和FW2512疫苗免疫组对四个分离株YL052、040124、BH11、TSC-2(9)、的IPl分别为80%、60%、70%、70%和70%、60%、70%、80%,表明现有常用的商品疫苗B87(in)和FW2512不能对流行毒株提供完全的保护,这与生产中使用这些疫苗免疫后仍发病的结果相吻合;四个流行代表毒株制备的灭活油乳剂疫苗对同源毒株均可产生100%保护,毒株040124的疫苗对BH11、TSC-2(9)、YL052的IPI分别为80%、80%、90%,交叉免疫保护性最好,其它三个毒株间的IPI则差异较大(40%～80%之间);在毒株免疫组与未免疫组的IOI比较观察中发现,分离株TSC-2(9)和YL052免疫组与未免疫组的差异显著(p<0.05),而分离株040124和BH11免疫组与未免疫组的101差异则不显著(p>0.05)。综合两项指标的结果,证明毒株040124株的免疫原性最好。本课题研究的结果表明,广西存在不同的IB- DV血清亚型的流行,商品疫苗B87(in)和FW2512已不能对流行毒株提供完全的保护,流行代表毒株040124的免疫原性和交叉免疫保护性最好,可作为研制适合本地使用的疫苗的候选毒株。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒血清亚型抗原变异致病性免疫原性交叉免疫保护疫苗候选毒株

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