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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原.研究表明,IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用,可显著增强疫苗的免疫保护效力.本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗,目的是验证猪源WN-γ(PoIFN-γ)、IL-2 (PoIL-2)和GM-CSF(PoGM-CSF)这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力. 研究表明，用PoIFN-与PCV2-Cap蛋白混合免疫时，PoIFN-能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力，但以Cap-PoIFN-γ融合蛋白免疫时，PoIFN-对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用PoIL-2或PoGM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-PoGM-CSF融合蛋白免疫时，PoIL-2和PoGM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用，但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变，从而增强疫苗的免疫保护效力，然而以Cap-PoIL-2融合蛋白免疫时，PoIL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：对猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2最早提供完全攻毒保护时间的研究

腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2最早提供完全攻...

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：袁晋孙元王春花秦华洋丛鑫李素罗玉子刘磊仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度传染性、致死性猪传染病,对养猪业危害极大.目前,疫苗接种仍然是防控该病的重要措施.猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)在猪瘟防控中发挥了重要作用,但由于其缺乏鉴别疫苗接种和野毒感染的特性,不利于猪瘟的... 详细信息

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度传染性、致死性猪传染病,对养猪业危害极大.目前,疫苗接种仍然是防控该病的重要措施.猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)在猪瘟防控中发挥了重要作用,但由于其缺乏鉴别疫苗接种和野毒感染的特性,不利于猪瘟的根除和净化,因此研制具有标记特性的新型猪瘟疫苗具有重要意义.此前,本实验室构建了一种腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,该疫苗不但具有标记特性,而且免疫效力与C株疫苗相当,且在多方面弥补了C株的不足.本研究拟进一步评价该嵌合载体猪瘟疫苗最早提供完全攻毒保护的时间.将rAdV-SFV-E2免疫猪瘟抗原和抗体均为阴性的健康仔猪(n=5),免疫一次后于不同时间点用CSFV强毒石门株进行攻击,并检测其抗体应答、临床症状、病毒血症和病理变化等.结果显示,rAdV-SFV-E2免疫后1周和2周,分别能对致死性CSFV强毒的攻击提供部分保护(3/5存活)和不完全保护(全部存活,但出现了短暂的发热和低水平的病毒血症);免疫后3周和4周,能够完全抵抗致死性CSFV强毒的攻击,表现为无病毒血症,无临床症状,无剖检变化和组织病理学变化.此研究进一步证实了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2作为种新型猪瘟标记疫苗的可能性,在猪瘟的紧急防控中也能够起到一定的作用.

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗最早保护时间腺病毒甲病毒复制子嵌合载体

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禽和猪戊型肝炎病毒共有抗原表位的精确定位

禽和猪戊型肝炎病毒共有抗原表位的精确定位

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王鑫杰赵钦孙亚妮赵冀楠刘宝元周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站陕西杨凌712100

通过杂交瘤细胞技术制备了6株抗禽HEVORF2蛋白的单克隆抗体，然后western blot和间接ELISA检测发现，两株单抗3E8和1B5可以与人、猪HEV的ORF2蛋白发生交叉反应，提示两株单抗识别的抗原表位可能是禽、人和猪HEV共有的抗原表位。随后本... 详细信息

通过杂交瘤细胞技术制备了6株抗禽HEVORF2蛋白的单克隆抗体，然后western blot和间接ELISA检测发现，两株单抗3E8和1B5可以与人、猪HEV的ORF2蛋白发生交叉反应，提示两株单抗识别的抗原表位可能是禽、人和猪HEV共有的抗原表位。随后本研究通过噬菌体展示技术对两株单抗识别的抗原表位进行了鉴定，经三轮生物淘选及对淘选产物测序，获得了两株单抗3E8和1B5识别的两个线性多肚的氨基酸序列为IPHD和VKLYMS。通过序列比对分析，发现单抗3E8筛淘的序列IPHD与人、猪HEV ORF2蛋白442IPHD445完全一致，同时与禽HEV ORF2蛋白372VPHD375高度同源;而单抗1B5筛淘序列VKLYMS与禽HEV ORF2蛋白354~360氨基酸区域和人、猪HEV ORF2蛋白424~430氨基酸区域完全一致，因此IPHD和VKLYMS是禽、人和猪HEV两个共有的抗原表位。为进一步鉴定具体氨基酸对抗原表位的影响，通过合成不同的多肽以及原核表达截短和突变的重组蛋白为抗原，同样通过间接ELISA和westernblot方法分析替换或缺失氨基酸对抗原表位特异性的影响。结果发现单抗3E8识别的抗原表位中P,H为决定性氨基酸，I,D为辅助性氨基酸，而单抗1B5识别的抗原表位中每个氨基酸均起关键性作用，突变任何一个氨基酸，该多肽均不与单抗发生反应。最后利用两个共有抗原表位的模拟肽为包被抗原，间接ELISA检测禽、人和猪HEV阳性血清，结果发现均发生有效的阳性反应。

关键词：兽医学戊型肝炎病毒共有抗原表位定位

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副猪嗜血杆菌分泌组中主要保护性抗原的筛选与鉴定

副猪嗜血杆菌分泌组中主要保护性抗原的筛选与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘娇李建军崔宁张艳禾谢芳李刚周泷倪洪波王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163000

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是革拉瑟氏病(Glasser's disease)的病原体,该病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征,对养猪业危害严重并造成巨大的经济损失.HPS的主要毒力因子以及保护性抗原目前还不是很清楚... 详细信息

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是革拉瑟氏病(Glasser's disease)的病原体,该病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征,对养猪业危害严重并造成巨大的经济损失.HPS的主要毒力因子以及保护性抗原目前还不是很清楚,这大大妨碍了高效疫苗的研制和该病的免疫防制.一般来说,病原细菌的主要毒力因子和保护性抗原往往是其分泌到菌细胞外的毒素和一些酶类,以及位于细菌表面的外膜蛋白等.本研究利用免疫蛋白质组学(Immune proteomics)技术对HPS分泌组中的保护性抗原进行了筛选和鉴定.一共鉴定到了6种具有良好反应活性的蛋白，分别是亚铁血红素结合蛋白HbpA、过氧化氢酶Catalase、寡肽透酶OppA、寡肽胞周结合蛋白OppA2、外膜蛋白P2以及参与Fe3+和ATP结合转运的AfuA蛋白。以上6种蛋白经原核表达载体pET-28a(+)克隆后都得到了良好表达，纯化的6种重组蛋白经western blot及ELISA检测验证，均具有良好的反应活性;6种重组蛋白免疫小鼠后可以刺激机体产生较高滴度的抗体，对HPS血清5型强毒株Nagasaki 5倍LDP剂量菌的攻击能够提供良好的保护力，保护率均介于50~80％之间。结果表明，本研究筛选和鉴定到的这6种蛋白可以作为亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：副猪嗜血杆菌保护性抗原蛋白筛选反应活性鉴定

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传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％.为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,两个病毒株基因组... 详细信息

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％.为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,两个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp.病毒演化分析结果显示两个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96.8％～98.1％和96.9％～98.4％,处在IBDV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89.7％～90.4％和90.0％～90.7％,位于弱毒株分支上.IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ-11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段777-782位核苷酸序列为GGTGCC,没有KpnⅠ酶切位点,具有弱毒株的序列特点.以上分析结果表明,QL和ZZ-11为IBDV自然重配株,A节段源于超强毒株,而B节段源于弱毒株.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSV... 详细信息

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG混合物共转染293FT细胞,获得含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-m iR-21的细胞株DF-miR-21,用qRT-PCR检测gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高了60％.将IBDV接种到DF-miR-21细胞,在96 h后,病毒滴度为10475 TCID50/0.1 mL,而正常DF-1细胞的病毒滴度为108.75 TCID50/0.1mL.用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组B片段上具有gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染的DF-miR-21细胞,用western-blot分析,VP1蛋白的表达量较正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上(VP1蛋白的合成)而不是在转录水平上(VP1mRNA的转录)实现的.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒小分子核糖核酸表达系统病毒复制

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猪繁殖与呼吸综合症病毒Nsp9单域抗体库的构建

猪繁殖与呼吸综合症病毒Nsp9单域抗体库的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘红亮王妍肖书奇徐乐周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站陕西杨凌712100

为了制备特异性针对PRRSV Nap9的并且可以抑制病毒感染的纳米抗体，构建了针对Nsp9的双峰驼重链抗体可变区抗体文库。首先利用pET28a载体构建了Nsp9全长的原核表达载体，并将其导入BL21表达菌中。表达并纯化Nsp9重组蛋白，利用His... 详细信息

为了制备特异性针对PRRSV Nap9的并且可以抑制病毒感染的纳米抗体，构建了针对Nsp9的双峰驼重链抗体可变区抗体文库。首先利用pET28a载体构建了Nsp9全长的原核表达载体，并将其导入BL21表达菌中。表达并纯化Nsp9重组蛋白，利用His单抗和PRRSV阳性猪血清鉴定重组蛋白免疫反应性。将重组蛋白与弗氏佐剂充分混匀免疫4岁健康雄性阿拉善双峰驼，经过5轮免疫后采集实验动物血液，分离外周血淋巴细胞，提取总RNA并反转录cDNA，根据骆驼重链抗体可变区上下游保守序列设计引物，利用PCR扩增VHH基因，将其连入pCANTAB SE噬菌体载体，转化TG1感受态细胞制备双峰驼重链抗体可变区抗体文库。表达并纯化了具有较强免疫反应性的可溶性Nsp9重组蛋白，ELISA结果显示猪体在攻毒后14d左右可以检测到Nsp9的抗体，抗体滴度在功毒后28 d可以达到较高的水平。双峰驼经过5轮免疫后抗体效价达到1:50 000，采集血液后，从350 mL全血中分离得到3×108个外周血淋巴细胞。提取RNA并反转录后，利用PCR扩增得到400 by左右的VHH条带，将其连入pCANTAB 5E噬菌体展示载体中，电转化TGI感受态细胞，得到了库容量为2×108的双峰驼重链抗体文库。猪体感染PRRSV后可产生针对Nsp9的抗体。可溶性Nsp9重组蛋白有望用于针对PRRS的血清学检测。本文构建的抗体库库容大且丰度较高，可用于Nsp9纳米抗体的筛选。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒单域抗体库非结构蛋白血清学检测

来源：评论

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三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性研究

三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：梁恩涛陈杰黄小波曹三杰文心田张丹张小会朱书权四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川雅安625014 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川雅安625014 四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心四川成都611130

为了探完减毒沙门氏菌均递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同大小S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估.用RT-PCR方法扩增了S499-650(长456 bp,编码S蛋白N末端499～650位氨基酸)、S499-78... 详细信息

为了探完减毒沙门氏菌均递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同大小S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估.用RT-PCR方法扩增了S499-650(长456 bp,编码S蛋白N末端499～650位氨基酸)、S499-789基因(长873 bp,编码S蛋白N末端499～789位氨基酸),插入真核载体pVAX1中构建了表达质粒pVAX-S499-650、pVAX-S499-789,再电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中构建了口服菌株SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207 (pVAX-S499-789).进行了重组菌株SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207(pVAX-S499-789)和前期构建的SL7207(pVAXD-S 1-789)(长2367 bp,编码S蛋白N末端1～789位氨基酸)菌株的生物学特性研究,包括生长曲线测定、携带质粒的体内/外稳定性、回肠组织内的转录、在小鼠体内动态增殖规律、口服小鼠的安全性等.结果表明:SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207(pVAX-S499-789)、SL7207(pVAXD-S1-789)3种口服菌株均具有较高的稳定性;携带的目的基因可在肠道组织内转录;菌株在小鼠肝、脾中增殖约5周后逐渐被机体清除;口服小鼠具有良好的安全性.本研究结果表明减毒鼠伤寒沙门茵SL7207可递呈不同长度的S基因抗原片段,为后续开展3种菌株的实际口服免疫效果比较研究奠定了基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒疫苗制备 S基因减毒鼠伤寒沙门菌生物学特性

来源：评论

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减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫原性

减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫原性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张鑫淼曹三杰黄小波文心田汪洋阳张丹张小会四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川雅安625014 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川雅安625014 四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心四川成都611130

以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律.将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(pVAXD)以1×109 cfu/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定免疫小鼠的外周血及脾脏淋巴细胞增殖水平、干扰素(IFN-γ)和细胞因子IL-4水平.结果表明,SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫可诱导小鼠分别产生特异性的抗TGEV S、N两种蛋白的血清IgG及肠道黏膜IgA.在整个免疫过程中,SL7207(pVAXD-N-Sa)产生的抗体水平(包括血清IgG及肠道黏膜IgA)与SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)无显著差异,均在免疫后第6周诱导产生的抗体滴度达到最高峰.免疫后第6周,SL7207(pVAXD-N-Sa)刺激脾淋巴细胞的增殖作用优于SL7207(pVAX-S)、SL7207 (pVAX-N).在免疫后第6周,SL7207(pVAXD-N-Sa)刺激产生的IFN-γ水平高于SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N),但无显著差异(p＞0.05).在整个免疫过程中,诱导产生的IL-4水平不明显,免疫组与对照组无显著差异(p＞0.05).研究结果显示SL7207(pVAXD-N-Sa)具有良好的口服免疫原性,并同时具有S和N双基因的免疫功能,本研究为进一步开展猪体的免疫评价奠定了基础.

关键词：猪传染性胃肠炎减毒沙门氏菌双启动子基因疫苗口服免疫原性

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金黄色葡萄球菌TraP、FnBPA和α-溶血素融合蛋白免疫保护研究

金黄色葡萄球菌TraP、FnBPA和α-溶血素融合蛋白免疫保护研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘道龙孙虎男于永忠崔玉东陈亮王歆桐代建杨轩魏玉华王健楠于立权吴志军黑龙江八一农垦大学生命科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学生命科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患菌,也是奶牛乳房炎主要致病因之一.以往研究证明,金葡菌FnBPA和Trap蛋白作为免疫原在小鼠的攻毒试验中具有免疫保护性作用.α-溶血素(α-h1a)作为金葡菌在侵染过程中一种外分泌蛋白,其免疫优势片段也具有... 详细信息

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患菌,也是奶牛乳房炎主要致病因之一.以往研究证明,金葡菌FnBPA和Trap蛋白作为免疫原在小鼠的攻毒试验中具有免疫保护性作用.α-溶血素(α-h1a)作为金葡菌在侵染过程中一种外分泌蛋白,其免疫优势片段也具有良好的免疫保护性作用;本研究拟对上述三种蛋白进行融合表达,研发一种新型亚单位嵌合疫苗,为金葡菌感染的协同防控奠定基础. 本研究采用Trap全蛋白、FnBPA的免疫优势片段FL和α-溶血素免疫优势片段hlaD，通过人工构建肽段Linker用overlap-PCR方法将三个目的片段串联，之后连入pET32a表达载体进行表达，获得的融合蛋白命名为TAF(Trap-hIaD-FL)。实验结果表明，TAF重组蛋白在小鼠模型中具有很好的免疫保护性作用，明显优于其他各对照实验组，在肺部攻毒试验中对*** Newman株和HLJ123-1株的保护率分别达到100％和90％;在腹腔攻毒试验中对*** Nemnan株和HLJ23-1株的保护率分别达到90％和80％;而各免疫组中的混合蛋白组，攻毒后免疫保护率不到50％。TAF实验组中检测的干扰素-γ，白介素-2，白介素-4，白介素-17高于其他各实验组。以上研究结果表明，TAF融合蛋白具有很好的免疫原性，能有效的抑制金葡菌感染，为今后研究多结构域的亚单位嵌合疫苗提供一定参考。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌亚单位嵌合疫苗蛋白融合表达

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