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61 篇 华中农业大学
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43 篇 广西大学
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36 篇 中国农业科学院哈...
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33 篇 广东省农业科学院...
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作者

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37 篇 林映才
35 篇 刘秀梵
34 篇 金宁一
31 篇 程安春
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22 篇 单安山
22 篇 童光志
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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及原核表达

隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及原核表达

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：于慧珠陈兆国岳城米荣升夏延富中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心新疆农业大学动物医学学院湖南农业大学动物医学学院

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T载体并进行序列测定,以GenBank登录的微小隐孢子虫CP41基因序列为参照,... 详细信息

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T载体并进行序列测定,以GenBank登录的微小隐孢子虫CP41基因序列为参照,进行同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆到pGEX-5x-3原核表达载体,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)诱导表达并复性纯化包涵体蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白,Western blot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列比较,同源性为90.50%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46 ku,Western blot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型(Cryptosporidium rabbit genotype)感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫SPF兔后,血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。

关键词：隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白 CP41 克隆原核表达

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日本血吸虫蛋白酶体α2亚基基因的克隆、表达及功能分析

日本血吸虫蛋白酶体α2亚基基因的克隆、表达及功能分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：洪炀韩宏晓彭金彪王欣之石耀军傅志强刘金明林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室南京农业大学动物医学院

目的克隆和表达日本血吸虫蛋白酶体α2亚基(SjPSMA2)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在BALB/c小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。方法从本实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,获得一个... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫蛋白酶体α2亚基(SjPSMA2)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在BALB/c小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。方法从本实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,获得一个EST序列,经生物信息学分析命名为SjPSMA2,以日本血吸虫42天童虫cDNA为模板,获得其全长cDNA。实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫中的表达情况,以pET28a(+)为载体成功构建了该基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌系统中进行表达,对重组蛋白进行纯化后,Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组抗原免疫BALB/c小鼠评估其免疫保护效果。结果成功获得了SjPSMA2编码基因的全长cDNA,开放阅读框为708bp,编码235个氨基酸,理论分子量25.84kD。实时定量PCR分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d和42d虫体中都有表达,13d和42d表达量高于其它时期。获得了纯化的SjPSMA2重组蛋白,以包涵体形式存在,具有良好的抗原性和免疫原性。在小鼠免疫保护试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠产生了较高的特异性抗体水平,获得了12.1%的减虫率和35.24%的肝脏减卵率。结论获得了SjPSMA2基因的全长cDNA,成功构建了pET28a(+)-SjPSMA2重组质粒,该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

关键词：免疫保护效果编码基因免疫原性抗原性重组抗原日本血吸虫功能分析

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弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫猪T细胞亚群的影响

弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫猪T细胞亚群的影响

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：蔡志杰王艳华付宝权李文卉芦赟曹丽艳张燕丽张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃业大学动物医学院

为了研究弓形虫代谢分泌抗原疫苗对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后2周、免疫后4周、感染后1周及... 详细信息

为了研究弓形虫代谢分泌抗原疫苗对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后2周、免疫后4周、感染后1周及感染后2周采取仔猪外周血,用流式细胞仪对各试验组外周血中CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行检测,用IHA对抗弓形虫抗体水平做检测。结果表明,弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫仔猪后,免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞水平与特异性抗体效价与对照组相比均有大幅度升高;感染后1周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值较感染前不同程度降低,感染后2周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值上升至免疫后水平,CD8+水平下降,感染后特异性抗体效价进一步升高。因此,弓形虫代谢分泌抗原疫苗能够提高仔猪外周血CD3+、CD4+及CD8+T淋巴细胞的百分数和特异性抗体滴度。

关键词：弓形虫代谢分泌抗原 T细胞亚群抗体水平

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青海血蜱“隐藏”抗原肌球蛋白碱性轻链分子的克隆与分析

青海血蜱“隐藏”抗原肌球蛋白碱性轻链分子的克隆与分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：高金亮罗建勋樊瑞泉关贵全任巧云马米玲殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

蜱叮咬动物和利用蜱研磨物免疫动物所产生的抗体之间有很大的差异。利用青海血蜱唾液腺蛋白免疫绵羊产生的抗体能与该蜱唾液腺蛋白中分子量为22kDa(P22)和37kDa(P37)的两个天然蛋白发生免疫反应,而蜱自然吸血刺激绵羊产生的抗体却不能... 详细信息

蜱叮咬动物和利用蜱研磨物免疫动物所产生的抗体之间有很大的差异。利用青海血蜱唾液腺蛋白免疫绵羊产生的抗体能与该蜱唾液腺蛋白中分子量为22kDa(P22)和37kDa(P37)的两个天然蛋白发生免疫反应,而蜱自然吸血刺激绵羊产生的抗体却不能与这两个蛋白发生反应。利用这两个天然蛋白免疫家兔产生的抗血清对青海血蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选获得了一个长度为1085bp的cDNA阳性克隆(Hq02)。Hq02含有483bp的开放阅读框,编码一个分子量约为18kDa的蛋白。RT-PCR分析表明此基因在青海血蜱的唾液腺、中肠、一些其它器官和该蜱的不同发育阶段表达。所预测的Hq02基因的氨基酸序列与一些已知的肌球蛋白碱性轻链蛋白有很高的同源性。该蛋白在大肠杆菌中与,17基因10蛋白得到了融合表达。Western blot分析表明此重组蛋白只能与利用P22和P37免疫家兔产生的阳性血清反应,而不能与蜱叮咬家兔产生的阳性血清发生反应,说明此阳性克隆所编码的蛋白是青海血蜱的"隐藏"抗原。利用该重组蛋白免疫绵羊产生的抗体能使青海血蜱雌蜱的饱血体重下降21.8%。这是关于蜱的肌球蛋白碱性轻链蛋白的首次报道。

关键词：青海血蜱 Hq02基因肌球蛋白碱性轻链 "隐藏"抗原

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Prevalence and identification of human Cryptosporidium *** China:unique *** population and first report of C. felis

Prevalence and identification of human Cryptosporidium *** C...

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者： Rongjun Wang~a,Huili Zhu~a,Longxian Zhang~(a,*),Yaoyu Feng~b,Fuchun Jian~a,Chengshen Ning~a,Meng Qi~a,Yang Zhou~a,Kanda Fu~c,Yaqiang Wang~c,Yanru Sun~a,Qiang Wang~a,Jiacheng Li~a, Hailiang Dang~a,Lihua Xiao~d (aThe College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China bSchool of Resource and Environmental Engineering,East China University of Science and Technology,Shanghai 200237,China cInspection division of Henan university Huaihe hospital,Kaifeng 475000,China dDivision of Parasitic Diseases,National Center for Zoonotic,Vector-Borne and Enteric Diseases,Centers for Disease Control and Prevention,Atlanta,GA 30341)

A total of 9033 stool specimens from three representative areas were examined between June 2007 and December 2008 to assess the prevalence of human cryptosporidiosis in Henan Province in *** were concentrated by forma... 详细信息

关键词： Prevalence and identification of human Cryptosporidium spp.in China:unique C.hominis population and first report of C felis

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巨型艾美球虫gam56基因的分段原核表达及其产物的免疫保护效果

巨型艾美球虫gam56基因的分段原核表达及其产物的免疫保护效果

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：许金俊姜慧婕陶建平彭昊张艳孙文瑶扬州大学兽医学院

已报道的7种鸡球虫中,巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)具有较强的致病性和免疫原性,对其他种类球虫也能产生交叉保护力。配子体是鸡球虫体内生活史中的一个重要发育阶段,利用三种从配子体提取纯化的56、82和250 ku抗原组成的亚单位苗Cox... 详细信息

已报道的7种鸡球虫中,巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)具有较强的致病性和免疫原性,对其他种类球虫也能产生交叉保护力。配子体是鸡球虫体内生活史中的一个重要发育阶段,利用三种从配子体提取纯化的56、82和250 ku抗原组成的亚单位苗CoxAbic现已商品,临床应用效果良好。本研究以*** NT株纯化的配子体提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出gam56基因全编码区cDNA片段,并克隆到pGEM-Teasy载体和测序。根据测序结果设计引物,扩增gam56基因两段含丰富抗原表位的编码区片段,克隆到原核表达质粒pGEx-6P-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-gam56-1和pGEX-6P-1-gam56-2。经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳鉴定证实,gam56基因的2个片段在大肠杆菌中得到了融合表达,融合蛋白分子量分别约为44 Ku和38 Ku。以可溶性的GST-gam56-2融合蛋白为免疫原,设立高、中、低(1.0、0.5、0.25 mg)3个剂量,单独或使用弗氏完全佐剂,于5日龄、12日龄和19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,在26日龄时用5×10～4个***孢子化卵囊进行攻毒,8 d后扑杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。结果显示:就相对增重率而言各免疫组较未免疫攻毒组的要高27.6%以上,各免疫组之间稍有差异但不显著(P>0.05);就卵囊减少率指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度减少,但是均小于75%。GST-gam56-2融合蛋白对于***感染具有一定的免疫保护效力,可用于亚单位疫苗的研制。

关键词：巨型艾美球虫 gam56基因重组蛋白保护效果

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吉林株犬新孢子虫SAG1基因的克隆与原核表达

吉林株犬新孢子虫SAG1基因的克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：栾杨贾立军李月梅薛书江张守发延边大学农学院动物医学系

根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计并合成了一对含有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物。提取吉林株犬新孢子虫基因组DNA,采用PCR方法,扩增吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到... 详细信息

根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计并合成了一对含有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物。提取吉林株犬新孢子虫基因组DNA,采用PCR方法,扩增吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切测序正确的重组克隆质粒pMD18-T-SAG1,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粞性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的原核表达载体pGEX-4T-1中,获得原核重组表达质粒pGEX-SAG1,经PCR鉴定、酶切鉴定和重组质粒的序列分析。证实成功构建了原核表达载体pGEX-SAG1。将构建成功的原核表达载体,在1mmol/L的IPTG诱导下进行大量表达,应用SDS-PAGE与Western-bloaing对重组原核表达质粒pGEX-SAG1进行鉴定。并采用超声波裂解法破碎经IPTG诱导的大肠杆菌BL21,鉴定蛋白质存在形式。结果表明,克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,大小为27ku,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列的同源性为99%,氨基酸序列同源性为98.8%。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达并且具有良好的抗原性。SDS-PAGE与Western-blotring证实,表达的重组融合蛋白在8h时表达量最大,大小为53ku,且具有良好的反应原性与。而且通过超声波裂解法鉴定,重组融合蛋白以包涵体的形式存在。

关键词：犬新孢子虫 SAG1基因克隆原核表达

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不同激活方法对猪卯胞质内单精子注射(ICSI)效果的影响

不同激活方法对猪卯胞质内单精子注射(ICSI)效果的影响

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会

作者：肖雄李跃民西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆400715

本试验以三种不同注射方式即精子注射、假性注射和不注射结合三种不同人工激活方法即注射CaCl2溶液(1.8p1，30mM)、离子霉素(15μmol/L，40min)和电脉冲(场强0.4KV/cm、脉冲时程90μs、一次脉冲)处理猪卵母细胞，以至少形成一个原核或... 详细信息

本试验以三种不同注射方式即精子注射、假性注射和不注射结合三种不同人工激活方法即注射CaCl2溶液(1.8p1，30mM)、离子霉素(15μmol/L，40min)和电脉冲(场强0.4KV/cm、脉冲时程90μs、一次脉冲)处理猪卵母细胞，以至少形成一个原核或发生卵裂计为激活，形成雌雄原核计为受精，在无精子注射的情况下至少形成两个原核或发生卵裂计为孤雌发育，统计分析不同激活方法对ICSI效果的影响。(1)机械刺激：研究发现假性注射+未激活处理组卵母细胞的激活率虽然高丁无机械刺激+无激活处理对照组((12.8％～13.3％)vs(8.3％～8.9％))，但明显低于假性注射+人工激活处理组((12.8％～13.3％)vs(18.3％～64.3％))，结果表明，单纯注射性机械刺激对猪卵母细胞的激活效果较差，为提高卵母细胞激活率，有必要进行人工激活;(2)人工激活：精子注射卵母细胞经CaCl2、离子霉素和电脉冲激活处理后，其激活率无显著性差异(69.4％vs 67.3％vs 70.4％)，CaCl2处理组的受精率显著高于离子霉素处理组(46.4％vs 31.2％)(P<0.05)，并与电激活处理组无显著性差异(46.4％ vs 38.8％)(P>0.05)。但是，在假性注射组(5.9％ vs 45.3％，51.6％)和对照组(4.5％　vs 38.8％，46.5％)中，CaCl2处理组的孤雌发育率极显著地低于离子霉素和电激活处理组(P<0.01);(3)CaCl2处理斤ICSI卵母细胞发育情况：CaCl2处理组的卵裂率(48.1％　vs 17.0％)(P<0.01)囊胚总细胞数(30.2vs 26.3)(P<0.05)显著高于未经CaCl2活化的对照组。结果表明ICSI卵母细胞经CaCl2溶液激活处理后，能够取得较好的ICSI效果，而不显著增加其孤雌发育率。

关键词：猪卵母细胞精子注射人工激活

来源：评论

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猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：张少华骆学农贾万忠郭爱疆景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾蚴间接ELISA检测方法... 详细信息

囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾蚴间接ELISA检测方法。方法通过RT-PCR从猪带绦虫囊尾蚴mRNA中扩增出TS-CC18ORF,将TS-CC18 ORF亚克隆到表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株,采用Ni-FF亲和层析柱提纯表达蛋白。Tricine-SDS—PAGE及Western blotting分析抗原特性。以TS-CC18作为包被抗原,优化各种ELISA反应条件,并与全囊虫层析抗原ELISA进行诊断效果比较。结果测序确证TS-CC18ORF大小约为261bp,与GenBank上发表的AF356330核苷酸相似性为85.1%,氨基酸相似性为73.6%。Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.4 mmol/L IPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性TS-CC18重组蛋白,其相对分子质量约16 kD。Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,与细颈囊尾蚴、旋毛虫、弓形虫病猪血清无交叉反应。确定的TS-CC18抗原最佳包被量为10μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:50,兔抗猪IgG-HRP的工作浓度为1:6000,作用时间为60 min。结果判定以P/N≥12.0为阳性,P/N<2.0为阴性。以全囊虫层析抗原ELISA检测结果为参照标准,该方法的相对敏感性达88%,相对特异性为100%,总符合率为97.4%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃至少可放置6个月。结论成功建立了猪囊尾蚴TS-CC18间接ELISA抗体检测方法,其特异性、敏感性及稳定性良好,对于快速诊断猪囊尾蚴病及血清流行病学调查具有应用价值。

关键词：猪囊尾蚴 TS-CC18抗原原核表达间接ELISA

来源：评论

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Effect of Duration on Maturation in vitro of Domestic Cat Oocytes

Effect of Duration on Maturation in vitro of Domestic Cat Oo...

引用

中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会

作者： WU Jing~(1,2),GUO Yong~1,WANG Xin-zhuang~(3,2),LIU Yun-hai~1,LI Kai~1,BAO Wen-yu~1,XU Yang~1,NI He-min~(1*) (1.Department of Animal Science and Technology,Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China 2.College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,China 3.Henan University of Agriculture,Zhengzhou 450002,China)

The aim of this study is to investigate the effect of durations on nuclear maturation in vitro of feline oocytes. Following the in vitro maturation(IVM) in Medium 199 added with FSH and *** oocytes were treated for 28h.32h and 36h *** vitro maturated oocytes were subjected to artifical activation in 10%*** activated oocytes were cultured 6 *** rate of activated oocytes was evaluated on Day *** were stained with Hoechest 33342 on Day 6 to observe the potential of activated *** the same time,the matured oocytes were fixed in 3.7% paraformaldehyde,stained in FITC-LCA and *** observed the distribution of cortical granules(CGs) to evaluate the cytoplasmic *** cleave rate of activated oocytes in the 32h group was significantly higher than the 28h group (60.42%vs 43.16%.0.01

关键词： domestic cat oocyte duration of lVM parthenogenetic activation cortical granules

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