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PHBHHx膜性材料的表面改性及其与大鼠胚胎神经干细胞的组织相容性研究

PHBHHx膜性材料的表面改性及其与大鼠胚胎神经干细胞的组织相容性...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：吕海侠卢小云杨志倩李明川刘勇西安交通大学医学院神经生物学研究所西安交通大学生命学院

目的聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有良好生物相容性的可降解高分子材料,3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)是PHA家族中的一员,其性能优于PHA家族的其它材料。研究表明PHBHHx对体外贴壁生长的成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞等多种... 详细信息

目的聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有良好生物相容性的可降解高分子材料,3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)是PHA家族中的一员,其性能优于PHA家族的其它材料。研究表明PHBHHx对体外贴壁生长的成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞等多种细胞具有良好的生物相容性,但是对于和体外悬浮生长的神经干细胞(NSC)的相容性欠佳。本研究拟对PHBHHx膜进行表面改性,以增强与NSC的组织相容性,进而为以NSC为基础的脑组织工程应用奠定基础。方法通过溶剂挥发法制备PHBHHx的二维膜支架,扫描电镜观察其表面性状;分别通过脂肪酶处理,NaOH处理和等离子处理的方法对PHBHHx膜进行表面改性,测量接触角大小检测膜表面亲水性;分离孕14.5天大鼠胚胎大脑皮质NSC,培养于NSC完全培养基(培养基成分:无血清的DMEM/F12+N2+B27+EGF+bFGF);培养至第三代的NSC分别接种在未处理、脂肪酶处理、碱处理、等离子处理以及碱+脂肪酶处理的PHBHHx支架膜表面,免疫染色观察细胞的分布状态,CCK-8试剂盒检测细胞生长状态,免疫细胞荧光化学观察NSC分化情况。结果与未处理的PHBHHx膜相比,脂肪酶+NaOH联合处理、等离子处理后,接触角明显减小,提示上述处理可以增强PHBHHx膜表面的亲水性;NSC在接种于PHBHHx支架后,能够继续存活,细胞形态饱满、折光性强,与未做表面改性处理组相比,处理后随着膜亲水性的增强,表面贴附细胞数量增加,存活状态良好,而且能够发生自发分化,分化为神经元和胶质细胞;与PHBHHx支架的共培养促进了NSC的增殖。结论 PHBHHx材料表面亲水性增强可以提高与NSC的组织相容性;与PHHBx材料的共培养,不改变NSC原有的增殖和多向分化潜能。

关键词： PHBHHx 神经干细胞相容性

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受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

引用

中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：黄玉芳梁敏黄芳复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RE... 详细信息

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RESP18的生理功能,我们采用常规基因剔除的策略,分析表明该基因缺失后小鼠胚胎致死。研究中还发现RESP18及其一个新的剪接体RESP18-c(序列已登陆NCBI网站,编号:FJ621497.1)在黑质-纹状体内表达,我们推测RESP18与RESP18-c通过参与分泌途径和内质网应激(ERS)影响了中脑黑质多巴胺能神经元的突触传递与存活,从而对PD的发生与发展起一定的作用。小鼠多巴胺能细胞MN9D是体外PD研究中常用的细胞模型,MN9D细胞经6-OHDA和内质网应激诱导物衣霉素—mm处理后,内质网分子伴侣——受糖调节蛋白78(GRP78/Bip)和C/EBP家族成员-CHOP/GADD153表达均显著增高,而RESP18则呈现出不同的反应:150μM 6-OHDA处理MN9D细胞9小时,与对照组相比,检测发现RESP18在mRNA和蛋白水平上都有显著的增高,RESP18下游与细胞骨架相关的LIMK2分子的表达也明显上升;0.5μg/mLTm处理MN9D细胞8小时,整体的RESP18蛋白水平没有改变,而未修饰的RESP18蛋白下降了0.6倍。进一步,我们构建了过表达RESP18/RESP18-c和干扰RESP18/RESP18-c的质粒载体,与上海南方模式生物研究中心合作建立了RESP18条件剔除小鼠,RESP18的生物学功能及其在PD发病中的作用机制在深入研究之中。

关键词： RESP18 内质网应激 PD

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GSS通过提高抗氧化能力对脑缺血再灌注损伤起保护作用

GSS通过提高抗氧化能力对脑缺血再灌注损伤起保护作用

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：黄志华李良东黎晓曾雪亮曾靖赣南医学院生理学教研室赣南医学院第一附属医院赣南医学院药理学教研室

目的研究染料木素磺酸钠（genistein sulfonate sodium,GSS）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型进行实验研究。在缺血后10分钟,假手术组与模型组经舌下静脉注射生理盐水,治... 详细信息

目的研究染料木素磺酸钠（genistein sulfonate sodium,GSS）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型进行实验研究。在缺血后10分钟,假手术组与模型组经舌下静脉注射生理盐水,治疗组分别从舌下静脉注射等体积不同浓度的GSS（0.5 mg/kg,1 mg/kg或2 mg/kg）。缺血1h,再灌注24 h后,行神经功能评分,取大脑进行TTC染色,测定脑梗死体积;取血清,酶法测血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性;取脑组织,制成10%匀浆,测定缺血区脑组织LDH、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、谷胱苷肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量。结果（1）与模型组相比,各剂量组神经功能学评分降低,其中1 mg/kg GSS组差异有统计学意义,高剂量GSS治疗后大鼠脑梗死体积降低;（2）模型组大鼠血清LDH活性升高,组织LDH活性降低,与模型组相比,各剂量GSS治疗组大鼠血清LDH活性降低,组织LDH活性升高;（3）模型组大鼠组织T-AOC、GSH-Px、CAT、SOD活性降低,MDA含量升高,与模型组相比,各剂量GSS治疗组大鼠T-AOC、GSH-Px、CAT、SOD活性升高,MDA含量降低。结论（1）GSS可降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积及脑组织LDH的释放,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用;（2）GSS可升高大鼠抗氧化系统的活性,降低MDA的含量,提示GSS可能通过增强机体的抗氧化能力而对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

关键词：染料木素磺酸钠脑缺血再灌注损伤抗氧化作用

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过表达α-synuclein98诱导PC12细胞氧化应激及对鱼藤酮敏感性增强

过表达α-synuclein98诱导PC12细胞氧化应激及对鱼藤酮敏感性增强

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：宋连昆马开利苑玉和韩宁陈乃宏中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所

目的α-synuclein是帕金森病人路易小体的主要组成成分,并且在家族性帕金森病人中发现存在该蛋白的基因突变,说明α-synuclein与帕金森病密切相关。研究发现,路易小体中存在α-synuclein C端截短体,但其对细胞的作用机制尚不明确。杀虫... 详细信息

目的α-synuclein是帕金森病人路易小体的主要组成成分,并且在家族性帕金森病人中发现存在该蛋白的基因突变,说明α-synuclein与帕金森病密切相关。研究发现,路易小体中存在α-synuclein C端截短体,但其对细胞的作用机制尚不明确。杀虫剂鱼藤酮可能是诱发帕金森病的一种环境毒剂,它能导致线粒体功能障碍,增强细胞氧化应激,并且研究认为氧化应激也促进了帕金森病的发病。α-synuclein98是最近发现的一种C端截短体,本实验通过在PC12细胞中过表达α-synuclein98蛋白,研究该截短体对PC12细胞的毒性作用及过表达α-synuclein98蛋白的PC12细胞对鱼藤酮敏感性的变化。方法通过PCR方法获得α-synuclein全长和98的基因片段,克隆到DsRed-N1载体并转染PC12细胞,G418筛选稳定细胞株,RT-PCR与Western Blotting验证细胞稳定表达α-synuclein全长和198截短体;MTT法测定细胞活力;活性氧检测试剂盒和脂质氧化试剂盒测定胞内ROS和MDA水平。结果（1）获得稳定表达α-synuclein全长和98截短体的PC12细胞株。（2）MTT结果表明在没有鱼藤酮刺激的条件下,过表达α-synuclein98对pC12细胞活力没有明显抑制作用（对照组的95%）。（3）过表达α-synuclein98 PC12细胞内ROS与MDA水平相比对照组分别提高了26.5%和149.8%（P＜0.05）,而过表达全长α-synuclein的分别提高了5.6%与15.6%。（4）在0.5、1、2、5μM鱼藤酮刺激24 h后,过表达α-synuclein98的细胞活力明显降低（P＜0.05）,并呈浓度依赖性。结论过表达α-synuclein98能增加PC12细胞氧化应激水平,明显增强细胞对鱼藤酮的敏感性,导致细胞活力下降。

关键词： α-synuclein98 ROS MDA 氧化应激鱼藤酮细胞活力

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硒通过抑制炎症反应利于帕金森病的胚胎干细胞治疗

硒通过抑制炎症反应利于帕金森病的胚胎干细胞治疗

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：田立鹏徐亮丁健青陈生弟上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科上海交通大学医学院神经病学研究所

目的将胚胎干细胞定向诱导分化为多巴胺神经元,并作为供体细胞移植治疗帕金森病,寻求提高移植细胞存活率的方法。方法将小鼠胚胎干细胞通过无血清诱导体系进行神经分化,并在诱导因子SHH及FGF8的作用下产生多巴胺神经元;将诱导分化的多... 详细信息

目的将胚胎干细胞定向诱导分化为多巴胺神经元,并作为供体细胞移植治疗帕金森病,寻求提高移植细胞存活率的方法。方法将小鼠胚胎干细胞通过无血清诱导体系进行神经分化,并在诱导因子SHH及FGF8的作用下产生多巴胺神经元;将诱导分化的多巴胺能细胞定向移植6-OHDA单侧损毁帕金森病大鼠纹状体,评估移植2周、4周及8周后细胞存活率及PD大鼠行为学变化;分析纹状体细胞移植区域炎症因子的变化及其与细胞存活率的关系;研究营养元素硒在体外细胞实验中能否抑制LPS诱导的小胶质细胞激活;进一步研究硒能否抑制帕金森病大鼠细胞移植后的炎症反应,能否在PD大鼠模型中促进多巴胺神经元移植后的存活,能否利于细胞移植后PD大鼠行为学恢复。结果无血清的诱导分化方法能有效的提高ESC向NPC细胞的分化效率,并产生rosette样结构,约95%的细胞Nestin阳性,对NPC细胞经SHH及FGF8b诱导可以得到约占总细胞18%的DA神经元。ESC来源的DA能细胞移植6-OHDA大鼠PD模型2周后存活率仅20%,4周及8周后进一步下降。同时,在细胞移植区发现有大量的CD11b阳性小胶质细胞的聚集,并且iNOS及TNF-α等炎症因子表达量也有所上升。在BV2细胞中,硒能够浓度依赖性的抑制LPS诱导的iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、NO等致炎因子的产生,还可以有效抑制NF-κB信号转导通路的激活。在6-OHDA大鼠模型细胞移植实验中,硒也能够显著抑制移植区域小胶质细胞的激活及炎症因子的产生,增加DA神经细胞移植后的存活率。PD动物行为学分析表明,硒联合细胞移植治疗更能有效的促进6-OHDA大鼠旋转行为的改善。结论无血清神经诱导分化方法是安全有效的神经分化方法;硒可能通过抑制移植后炎症反应促进移植细胞的存活。

关键词：硒胚胎干细胞多巴胺神经元帕金森病神经分化炎症反应

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兴奋性毒性对神经元胞核内Munc-18蛋白表达分布的影响

兴奋性毒性对神经元胞核内Munc-18蛋白表达分布的影响

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：王丹丹张彦平许玉霞王洪权赵红赵晓燕朱粹青复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海医学院神经生物学系

目的突触囊泡释放中Munc-18蛋白发挥着重要的调节作用。Munc-18基因病理突变可导致癫痫的发生,近年有一篇文献报道在神经元胞核分布有Munc-18并可与DNA片段紧密结合,但是神经系统疾病与神经元胞核内Munc-18分布变化的关系尚不清楚。本... 详细信息

目的突触囊泡释放中Munc-18蛋白发挥着重要的调节作用。Munc-18基因病理突变可导致癫痫的发生,近年有一篇文献报道在神经元胞核分布有Munc-18并可与DNA片段紧密结合,但是神经系统疾病与神经元胞核内Munc-18分布变化的关系尚不清楚。本实验在明确Munc-18的神经元胞核分布的基础上,探讨了海人藻酸(KA)诱导癫痫动物模型和谷氨酸处理的原代神经元中Munc-18的分布。方法通过免疫电镜、免疫组化和Western Blot等方法观察Munc-18在神经元胞核内的分布,进一步分离神经元胞核并进行不同的处理,免疫荧光染色研究其具体分布状况。以KA诱导癫痫动物模型和经谷氨酸作用的原代培养大鼠神经元为观察对象,通过组织化学和Western Blot等方法研究Munc-18受兴奋性毒性影响后神经元胞核内表达分布的变化。结果 (1)组化方法检测结果显示,Munc-18在动物脑内皮层、海马和丘脑均有分布,尤以海马内分布最明显;(2)神经元胞核内存在较多Munc-18,其中有聚集,呈现出较明显的点状,对提取的神经元胞核进行Western Blot检测,进一步证明Munc-18的存在;另外,神经元胞核内也有p35分布并与Munc-18共存,但CDK5在核内分布不明显。胶质细胞的胞核内Munc-18分布极少或没有;(3)分离的神经元胞核经不同处理后进行荧光染色的结果提示,Munc-18可与DNA结合,部分与核基质结合,而与RNA结合不明显;(4)KA诱导动物癫痫发作可使海马的CA区和齿状回门区与颗粒细胞Munc-18在细胞核内分布显著减少,同时伴有SNAP-25表达量增加;(4)经谷氨酸作用的原代培养神经元胞核中Munc-18分布减少,在胞浆以及神经突起中分布增加,同时也有SNAP-25表达量增加。结论 Munc-18主要在神经元胞核内而非胶质细胞的胞核内分布,Munc-18可与DNA结合,推测其可能参与基因表达的调控;Munc-18的神经元胞核内分布受神经元的兴奋状态调节,经兴奋性毒性影响后Munc-18核内分布减少。

关键词： Munc-18蛋白核内分布兴奋性毒性

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帕金森病致病基因DJ-1相互作用蛋白蛋白质组学及线粒体功能调节研究

帕金森病致病基因DJ-1相互作用蛋白蛋白质组学及线粒体功能调节研...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：张煜王志全张施桂雅星盛呈雨曹立丁健青陈生弟上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所

目的帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病,其具体致病机制尚不明确。DJ-1是常染色体隐性遗传性PD PARK7型的致病基因,该基因突变导致的PD具有起病早和临床表现典型的特征。由于DJ-1具有抗氧化等多种功能,所以DJ-1在帕金森病中所发... 详细信息

目的帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病,其具体致病机制尚不明确。DJ-1是常染色体隐性遗传性PD PARK7型的致病基因,该基因突变导致的PD具有起病早和临床表现典型的特征。由于DJ-1具有抗氧化等多种功能,所以DJ-1在帕金森病中所发挥的重要作用受到人们越来越多的关注。我们应用蛋白质组学的方法通过寻找DJ-1相互作用蛋白来探讨其具体生理功能及致病机制。方法采用GST Pull down偶联质谱鉴定的方法 ,结合生物信息学分析以及体内外研究,寻找DJ-1的相互作用蛋白及其参与的生物学功能和通路。揭示DJ-1的生物调节功能及其所参与的帕金森病致病机制。结果利用原核表达以及免疫亲和吸附方法获得高浓度、高纯度的DJ-1蛋白。通过Pull down偶联质谱鉴定技术分离鉴定出441个DJ-1相互作用蛋白。应用生物信息学分析方法注释、分类DJ-1相互作用蛋白。结果表明DJ-1在体内与多个蛋白相互作用,这些相互作用蛋白分布于胞浆、细胞核以及各种细胞器;涉及氧化应激、能量代谢、生长增殖、免疫调控等多个生物过程,调节MAPK、mTOR、VEGF等多条信号通路;参与阿尔兹海默病、帕金森病、乳腺癌、黑色素细胞瘤等多种疾病;此外,体外细胞模型中我们发现DJ-1与DNM1L在细胞内存在良好的共定位,在功能上存在相互作用关系。DJ-1通过调节DNMlL的磷酸化修饰水平,发挥线粒体形态功能调节作用,导致帕金森病发病。结论 DJ-1参与多个生物调节过程以及致病机制。DJ-1通过与DNM1L的相互作用调节线粒体形态功能参与帕金森病发病。

关键词：帕金森病 DJ-1 蛋白质组学线粒体

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乳鼠直结肠扩张后在体骨髓干细胞自发分化表达神经细胞相关基因初探

乳鼠直结肠扩张后在体骨髓干细胞自发分化表达神经细胞相关基因初...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：陈婷杨蓓吴磊张大雷熊明娣邹惟莹邹挺高昕妍陈日新南昌大学医学院生理教研室中国中医科学院针灸研究所江西中医学院附属医院针康部

目的骨髓干细胞可以诱导分化成神经细胞,TRPV1是瞬时受体电位通道家族中最重要的成员之一,在胃肠病及与其相关的内脏高敏感中有重要的作用,新生动物进行直结肠扩张会引起内脏痛敏,本实验目的是探讨新生动物引起内脏痛敏过程中是否有骨... 详细信息

目的骨髓干细胞可以诱导分化成神经细胞,TRPV1是瞬时受体电位通道家族中最重要的成员之一,在胃肠病及与其相关的内脏高敏感中有重要的作用,新生动物进行直结肠扩张会引起内脏痛敏,本实验目的是探讨新生动物引起内脏痛敏过程中是否有骨髓干细胞自发分化为神经细胞和TRPV1阳性细胞参与。方法选用新生SD大鼠,随机分为实验组和对照组,在生后第8～14天实验组进行直结肠扩张,制作内脏痛敏模型,第15天实验组与对照组取全骨髓细胞作RT-PCR。按照RNA提取试剂盒说明书提取总RNA。以mRNA作为模板进行逆转录,PCR扩增。以GAPDH为内参照,检测TRPV1(PCR产物长度262 bp)、CD34(199 bp)、c-kit(327 bp)、nesting(38 1 bp)、β-tubulin(246 bp)、GFAP(437 bp)mRNA的表达。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后进行光密度扫描,将目的扩增条带的光密度值与GAPDH的光密度值之比作为衡量参数,分析各组mRNA的表达。结果验组神经干细胞或前体细胞标志物nesting、β-tubulin高表达,干细胞标志物CD34、c-kit没有表达,与内脏痛敏有关的TRPV1弱表达,对照组CD34、c-kit、nesting、β-tubulin均有表达,TRPV1几乎无表达,实验和对照组中均未见星型胶质细胞标志物(GFAP)蛋白的表达。结果提示部分CD34、c-kit阳性细胞在体内脏痛敏条件下可能自发分化为神经干细胞或前体细胞以及TRPV1阳性细胞。结论骨髓干细胞在新生大鼠体内经直结肠扩张后能自发分化为与内脏痛敏有关的神经细胞和TRPV1阳性细胞,骨髓干细胞可能参与内脏痛敏的发展进程。

关键词：骨髓干细胞神经细胞自发分化内脏痛 TRPV1

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正确处理《神经科学基础》教学中的四个关系

正确处理《神经科学基础》教学中的四个关系

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：李云庆李金莲董玉琳张富兴第四军医大学基础部人体解剖学教研室暨梁銶琚脑研究中心

目的《神经科学基础》或称《神经生物学》是一门在我国生命科学院校开设历史较短的课程,在教学过程中遇到了不少新问题,探讨并正确解决好这些问题,是落实教学内容、提高教学质量、达到教学要求的迫切要求。方法回顾、提炼与总结。结果... 详细信息

目的《神经科学基础》或称《神经生物学》是一门在我国生命科学院校开设历史较短的课程,在教学过程中遇到了不少新问题,探讨并正确解决好这些问题,是落实教学内容、提高教学质量、达到教学要求的迫切要求。方法回顾、提炼与总结。结果神经科学是当今生命科学领域的带头学科。面对神经科学迅猛发展的大好形势,开设神经科学基础课程就成了培养高级科学人才的高等院校应对挑战的一项重要战略措施,也是关系到教育质量和人才素质的大事。我们于1997年就开设了100学时的《神经科学基础》。其中,前一部分的60学时用于讲授神经系统的形态结构,剩下的40学时用讲座的形式介绍神经生理学、神经药理学、神经分子生物学、神经内分泌学等相关学科的内容,实现了多学科的相互协作与融合。在教学过程中,我们特别注重努力正确处理好以下几个关系:（1）学习基本理论、基本知识、基本操作和传授新、尖内容的关系:使学生不仅获得比较系统的学科基础知识,也能被引领进入当代神经科学研究的前沿;（2）构建学生新型知识结构的要求与保持学科系统性、完整性的关系:根据总体培养目标选择、优化教学内容,注意神经科学各分野之间的内在联系,努力做到"有所为和有所不为";（3）教师为主导、学生为主体的教与学关系:运用启发式课堂教学,启迪学生的思维,掌握分析问题和解决问题的方法 ,形成有利于培养学生自学能力和创新能力的氛围;（4）传授知识与培养能力的关系:①更新教材,使理论学习与实验教学相配套;②探讨多学科联合授课;③查阅神经科学的文献和资料,撰写综述或读书报告:综述或报告的评价意见作为本门课程考试成绩的一部分。结论神经科学既是生命科学专业的一门重要基础课,又是融多学科为一体,相互协作的一门能够使学生充分了解生命科学新知识、新技术和新方法的新兴学科,在生命科学的教学中占有重要地位。我们经过多年的教学改革与实践,将在教学中总结的经验呈现给大家。希望通过抛砖引玉,激发大家研讨在神经科学基础课程教学中存在的问题,为搞好这门课程的教学、培养适应21世纪需要的高素质人才服务。

关键词：神经科学基础理论教学教学改革

来源：评论

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ATP敏感性钾离子通道亚基Kir6.2在帕金森病发病机制中的作用及成为潜在治疗靶点的实验研究

ATP敏感性钾离子通道亚基Kir6.2在帕金森病发病机制中的作用及成...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：刘小坤王刚陈生弟上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科上海交通大学医学院神经病学研究所

目的探讨Kir6.2在帕金森病发病机制中的作用及成为潜在治疗靶点的初步研究。方法以PC12细胞为研究对象,第一步,将其分为三组,分别是正常组、转染Kir6.2质粒组和转染空载体组。首先在转染Kir6.2质粒48 h后,用细胞免疫荧光方法观察三组细... 详细信息

目的探讨Kir6.2在帕金森病发病机制中的作用及成为潜在治疗靶点的初步研究。方法以PC12细胞为研究对象,第一步,将其分为三组,分别是正常组、转染Kir6.2质粒组和转染空载体组。首先在转染Kir6.2质粒48 h后,用细胞免疫荧光方法观察三组细胞中Kir6.2的表达,然后用Western blot检测三组细胞中Kir6.2蛋白的表达情况,之后用WST-1检测三组细胞对不同浓度梯度下鱼藤酮处理24 h后的细胞活力,确定Kir6.2在细胞中的作用。第二步,设计siRNA对Kir6.2进行干扰,实验分正常组、干扰组和空转组,然后用上述细胞免疫荧光和Western blot方法检测Kir6.2在细胞中的表达,用WST-1检测Kir6.2被干扰后三组细胞在相同浓度梯度鱼藤酮处理24 h后的细胞活力,确定Kir6.2在细胞中的作用,进而确定Kir6.2在帕金森病发病机制中的作用。明确Kir6.2的作用后,用Western blot方法检测鱼藤酮处理前后细胞内PKC的变化,以及应用PKC激动剂和抑制剂后细胞活力的变化,以确定Kir6.2发挥作用的通路和作用的靶点。结果第一步中细胞免疫荧光结果和Western blot结果显示,转染组Kir6.2在细胞中表达较正常组和空转组明显增高,细胞活力检测发现Kir6.2组细胞活力较其他两组增高;第二步中Kir6.2干扰后,细胞免疫荧光和Western blot结果显示干扰组Kir6.2表达较正常组和空转组降低,细胞活力检测显示干扰组细胞活力较其他两组降低。结论 Kir6.2对鱼藤酮处理的PC12细胞具有保护作用,从而确定Kir6.2可能对帕金森病发病具有保护作用,其保护机制与PKC激活有关。

关键词：帕金森病钾通道鱼藤酮

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