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阿的平对微波损伤PC12分化细胞的保护作用

阿的平对微波损伤PC12分化细胞的保护作用

引用

中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：吴燕刘淑红王飞丁学峰赵永岐范明军事医学科学院基础医学研究所

目的探讨阿的平对微波损伤PC12分化细胞的保护作用。方法 PC12细胞经神经营养因子（NGF）诱导分化7～9天后,用免疫组化检测分化细胞百分比。将诱导分化后的细胞分为四组,正常组、辐射对照组、阿的平低剂量组和阿的平高剂量组。阿的平给... 详细信息

目的探讨阿的平对微波损伤PC12分化细胞的保护作用。方法 PC12细胞经神经营养因子（NGF）诱导分化7～9天后,用免疫组化检测分化细胞百分比。将诱导分化后的细胞分为四组,正常组、辐射对照组、阿的平低剂量组和阿的平高剂量组。阿的平给药组分别给予终浓度20μmol/L和40μmol/L阿的平溶液,1小时后与辐射对照组一起进行50 mW/cm、15分钟的微波辐射。分别与辐射后3小时和6小时消化细胞,PBS洗涤两次后,加入PE标记的Annexin-V和7-AAD,避光反应10～15分钟,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率、坏死率。结果 PC12细胞经NGF诱导分化后,胞体由不规则多角形的肿瘤细胞形态,逐渐变为椭圆形并伸出突起,分化后7至9天突起连接成网状。取分化7至9天PC12细胞,固定后神经元特异的烯醇化酶（NSE）和神经丝蛋白（NF）特异性抗体染色鉴定,结果显示NSE阳性细胞率超过90%,NF阳性细胞约为70%。辐射对照组在辐照后3 h测得细胞凋亡率为9.32%、坏死率为29.87%,6 h检测细胞凋亡率13.91%、坏死率可达44.45%。阿的平低剂量组照后3 h凋亡率为4.76%、坏死率为23.60%,6 h细胞凋亡率6.13%、坏死率32.52%。阿的平高剂量组照后3h凋亡率为4.21%、坏死率为7.92%,6 h细胞凋亡率5.29%、坏死率22.22%。结论阿的平可降低高功率微波辐射PC12分化细胞的凋亡率和坏死率,对微波辐射损伤的类神经元细胞有一定的保护作用。本实验为今后研究阿的平对微波的干预作用奠定了基础。

关键词：阿的平微波辐射 PC12细胞向神经分化保护作用

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内侧隔核神经元调控海马theta节律

内侧隔核神经元调控海马theta节律

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：马晓宇王静怡林龙年华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室

海马场电位的theta节律振荡(4-12 Hz)是啮齿类动物在注意、运动和快波睡眠等行为状态时出现的特征性脑电节律,与学习记忆等认知功能活动密切相关。已有研究表明,内侧隔核(Medial Septum)神经元在海马theta节律的形成中起着节律源的作用... 详细信息

海马场电位的theta节律振荡(4-12 Hz)是啮齿类动物在注意、运动和快波睡眠等行为状态时出现的特征性脑电节律,与学习记忆等认知功能活动密切相关。已有研究表明,内侧隔核(Medial Septum)神经元在海马theta节律的形成中起着节律源的作用。内侧隔核与海马间存在直接的神经联接,且内侧隔核神经元主要投射到海马的中间神经元。在清醒和麻醉动物上,也已观察到许多内侧隔核神经元具有theta节律的放电模式,与海马theta节律有不同的锁相关系。但目前仍不清楚内侧隔核神经元具体是如何参与海马theta节律调控的。运用多通道在体记录技术,我们在自由活动的小鼠脑内,同时记录内侧隔核神经元和海马CA1区神经元的放电活动,以及这两个脑区的局部场电位。并进一步运用格兰杰因果关系分析法,考察内侧隔核神经元的CA1区神经元的放电活动,以及这些神经元活动与CA1区theta节律之间的关系。我们在海马CA1区发现一类特殊的中间神经元,它们不仅与CA1区theta节律有高相关性和高放电锁相关系,而且还表现出对theta节律的强格兰杰因果关系影响。在内侧隔核,我们记录到四类与海马theta节律有高相关性的中间神经元,但其中只有一类表现出对海马theta节律的强格兰杰因果关系影响。进一步的分析显示,在考虑海马中间神经元活动的情况下,内侧隔核中间神经元对海马theta节律的强格兰杰因果关系影响明显降低至显著性水平以下,说明内侧隔核中间神经元可能通过对海马中间神经元的活动调节来参与调控海马的theta节律振荡。

关键词：内侧隔核海马 theta节律格兰杰因果关系分析

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成年大鼠脑缺血诱导新生神经元形成纹状体-黒质投射的研究

成年大鼠脑缺血诱导新生神经元形成纹状体-黒质投射的研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五届会员代表大会

作者：张秋婉孙笑徐明沈舒文郭建军孙凤艳复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海200032 复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海200032 复旦大学生物医学研究院干细胞研究所上海200032

为了研究在成年动物脑内缺血诱导的纹状体新生神经元是否能在结构上整合到现有的神经环路中，在动物缺血再灌注第1和11周将荧光金(一种逆向示踪剂)注射到黑质网状部，我们通过标记BrdU并结合免疫组化的方法标记新生神经元，同时应用激... 详细信息

为了研究在成年动物脑内缺血诱导的纹状体新生神经元是否能在结构上整合到现有的神经环路中，在动物缺血再灌注第1和11周将荧光金(一种逆向示踪剂)注射到黑质网状部，我们通过标记BrdU并结合免疫组化的方法标记新生神经元，同时应用激光共聚焦扫描的方法研究纹状体内新生神经元的投射情况。结果显示，正常或缺血再灌注的动物脑内均可在同侧检测到FG阳性信号。并且，在缺血再灌注第12周缺血侧纹状体的新生神经元上检测到FG的表达(BrdU+-FG+双标细胞)，而缺血再灌注2周却没有检测到双标细胞。这提示在成年动物脑缺血后纹状体新生神经元可以形成长投射到黒质网状部，也意味着了这些新生神经元具有逆向轴浆转运的功能。形态学的结果表明，纹状体作为一个非神经发生区，缺血后的新生神经元可以建立起从纹状体到黒质网状部的神经环路。这部分的结果对于研究缺血性脑中风后的神经功能恢复将具有十分重要的意义。

关键词：脑缺血纹状体黒质投射神经网络轴浆转运

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视神经假体刺入式电极刺激视神经的虚拟通道研究

视神经假体刺入式电极刺激视神经的虚拟通道研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：闫妍陆一樑李丽明柴新禹任秋实上海交通大学生物医学工程学院北京大学工学院生物医学工程系

目的视觉假体是以修复盲人部分功能视觉为目的的植入式微电子系统,根据其植入部位的不同,主要分为视网膜假体、视皮层假体和视神经假体,其中视网膜假体已经进入二期临床试验阶段。对于可植入的视觉假体来说,电极数量要受到制作工艺、电... 详细信息

目的视觉假体是以修复盲人部分功能视觉为目的的植入式微电子系统,根据其植入部位的不同,主要分为视网膜假体、视皮层假体和视神经假体,其中视网膜假体已经进入二期临床试验阶段。对于可植入的视觉假体来说,电极数量要受到制作工艺、电路结构、能量供给、散热以及神经组织生物相容性等因素的限制,目前视觉假体有限的植入电极数量成为制约其空间分辨率的瓶颈。在技术比较成熟的人工耳蜗,采取了一种通过利用两相邻电极电场在时间空间上的相互作用,产生额外的介于两电极单独刺激时产生的音调之间的可感知音调的技术,称为"虚拟通道"技术,该技术大大提高了人工耳蜗植入者的听觉质量。本研究拟在基于刺入式微电极刺激的视神经假体上探索虚拟通道技术的可行性和影响因素。方法成年猫麻醉后暴露视神经,植入尖端暴露长度为30至40μm的微丝电极阵列,电极对应的视野位置通过sparse-noise的方法获得,对电极阵列施加电流脉冲刺激视神经,在双侧初级视皮层放置5×6银球电极阵列对皮层诱发电位(EEPs)进行记录。通过改变两电极之间的刺激电荷分配比α,研究皮层响应空间位置的改变。结果用间隔约200μm的两个电极分别刺激视神经,可以在皮层诱发空间分布不同的EEPs响应,并且响应位置与电极所在的视野位置一致。当两个电极的刺激电荷分配比α从0～1以0.1步长依次递增时,在皮层可以诱发空间位置连续变化的EEPs响应,而且虚拟通道的空间分布与两个电极单独刺激时的阈值有关。结论用刺入式电极刺激视神经可以产生不同视野分布的虚拟通道响应,从而通过两个电极实现了多个虚拟位点的刺激,该刺激策略有望使电极数目有限的视觉假体产生更高的空间分辨率。

关键词：视觉假体视神经电刺激皮层诱发响应虚拟通道

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ERK通路通过调节DLP1参与α-突触核蛋白诱导的线粒体融合/分裂动力失衡

ERK通路通过调节DLP1参与α-突触核蛋白诱导的线粒体融合/分裂动...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：桂雅星王信义康文岩张英杰张煜刘军陈生弟上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科上海交通大学医学院神经病学研究所

目的越来越多的研究表明,α-突触核蛋白诱导的神经毒性在帕金森病的发病过程中起重要作用。近年来的研究表明,线粒体分裂/融合平衡异常与帕金森病发病机制密切相关。然而,α-突触核蛋白与线粒体分裂/融合动力学之间的基本关系尚未阐明... 详细信息

目的越来越多的研究表明,α-突触核蛋白诱导的神经毒性在帕金森病的发病过程中起重要作用。近年来的研究表明,线粒体分裂/融合平衡异常与帕金森病发病机制密切相关。然而,α-突触核蛋白与线粒体分裂/融合动力学之间的基本关系尚未阐明。本研究探讨线粒体分裂/融合平衡障碍在α-突触核蛋白引起的细胞损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法构建野生型和A53T突变型α-突触核蛋白质粒,并筛选α-突触核蛋白稳定表达的SH-SY5Y细胞株。采用免疫荧光、共聚焦显微镜、活细胞监测、电镜、亚细胞分离、免疫印迹法检测等技术,在过表达α-突触核蛋白的细胞模型和α-突触核蛋白转基因小鼠模型基础上,观察α-突触核蛋白对细胞线粒体形态和功能的影响;应用定量蛋白质组学、质谱分析结合生物信息数据库整合技术探讨α-突触核蛋白对线粒体动力影响的信号蛋白并在离体和在体水平进一步予以验证。结果野生型或A53T突变型α-突触核蛋白不仅诱导线粒体过度分裂,而且促使线粒体促分裂蛋白DLP1转位到线粒体,进而引起功能损伤。MAPK通路,特别是ERK信号通路,参与α-突触核蛋白诱导的线粒体分裂和DLP1转位过程。姜黄素能够通过抑制ERK过度激活,减少DLP1的线粒体积聚,挽救α-突触核蛋白诱导的线粒体动力失衡,并改善其造成的功能损伤。结论 ERK信号通路通过调节DLP1参与α-突触核蛋白诱导的线粒体融合/分裂动力失衡及相应的功能损伤,在帕金森的致病机制中发挥重要作用。姜黄素能够通过抑制ERK过度激活从而拮抗α-突触核蛋白诱导的线粒体动力失衡及相应的功能损伤,为帕金森病的预防和治疗提供了实验依据。

关键词： α-突触核蛋白帕金森病线粒体分裂姜黄素

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颈上神经节P2X7受体介导的心肌缺血引发交感兴奋反射的作用研究

颈上神经节P2X7受体介导的心肌缺血引发交感兴奋反射的作用研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：孔繁君刘俊刘双梅涂桂花彭海英梁尚栋南昌大学医学院生理学教研室

目的探讨大鼠颈上神经节(SCG)细胞P2X受体在心肌缺血引发交感兴奋反射中的作用。方法建立心肌缺血大鼠模型;实验共分为5组,即正常组,o-ATP对照组,假手术组,心肌缺血模型组,o-ATP治疗心肌缺血组。测定各组大鼠心电图、血压,心率和呼吸。... 详细信息

目的探讨大鼠颈上神经节(SCG)细胞P2X受体在心肌缺血引发交感兴奋反射中的作用。方法建立心肌缺血大鼠模型;实验共分为5组,即正常组,o-ATP对照组,假手术组,心肌缺血模型组,o-ATP治疗心肌缺血组。测定各组大鼠心电图、血压,心率和呼吸。免疫组化和蛋白印迹了解o-ATP对心肌缺血大鼠SCG细胞P2X受体蛋白表达的影响;原位杂交和PCR技术检测SCG细胞P2X受体mRNA表达的变化。结果心肌缺血模型组大鼠心电图出现明显的病理性Q波和ST段抬高,大鼠的血压升高,心率和呼吸加快,而应用o-ATP治疗心肌缺血组大鼠上述现象明显减轻(P<0.05);免疫组化和蛋白印迹结果显示心肌缺血组SCG细胞P2X受体阳性细胞灰度值较对照组增大(O<0.05),o-ATP治疗心肌缺血组P2X受体阳性细胞灰度值较心肌缺血组减小(P<0.05);原位杂交和PCR结果显示心肌缺血组SCG细胞P2X受体mRNA表达较对照组增大(P<0.05),o-ATP治疗心肌缺血组P2X受体mRNA表达较心肌缺血组减小(P<0.05)。结论 P2X受体拮抗剂o-ATP可以降低心肌缺血引发的血压、心率和呼吸的改变,并且可以降低心肌缺血大鼠SCG神经元P2X受体的表达。结果 (P<0.05)表明大鼠颈上神经节P2X受体参与心肌缺血引发的交感兴奋发射过程。

关键词：颈上神经节 P2X7受体 o-ATP

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NMDA受体NR2A亚单位内质网滞留机制

NMDA受体NR2A亚单位内质网滞留机制

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：张筱敏强文斌严循一徐飞罗建红浙江大学医学院神经生物学实验室

NMDA受体是中枢神经系统中一种非常重要的兴奋性神经受体,它在复杂的脑功能及神经退行性疾病等过程中发挥了重要的作用。NMDA受体为异四聚体,由多种不同的受体亚单位特异性组合而成。在异源系统单独表达NR1亚单位的剪切变体,以及NR2亚单... 详细信息

NMDA受体是中枢神经系统中一种非常重要的兴奋性神经受体,它在复杂的脑功能及神经退行性疾病等过程中发挥了重要的作用。NMDA受体为异四聚体,由多种不同的受体亚单位特异性组合而成。在异源系统单独表达NR1亚单位的剪切变体,以及NR2亚单位,会滞留在内质网,并且不能形成同源聚合体通道。我们的研究发现NR2A亚单位的ATD结构域带有一个内质网滞留信号,并且该滞留信号能够被NR1a亚单位的ATD结构域特异性掩盖,而在同源的NR2B亚单位的ATD,并没有发现这样的信号。进一步通过蛋白质组学的方法 ,我们鉴定出内质网蛋白Bip,可能参与了NR2A亚单位ATD结构域介导的内质网滞留。Bip为内质网分子伴侣蛋白,参与内质网质控,内质网相关蛋白降解等细胞内生理过程。我们研究发现在异源细胞中Bip能够特异性地结合NR2A的ATD,且在脑组织中Bip与NR2A亚单位的相互作用强于其与NR1或者NR2B亚单位的相互作用。此外,对培养海马神经元给予高钾刺激,可以提高NR2A亚单位的表面表达,而阻断蛋白质的内质网到高尔基运输则可以完全抑制高钾引起的NR2A亚单位表面表达的增加。以上结果提示,在内质网内存在NR2A的存储库,在特定外界刺激的条件下,内质网内的NR2A被释放,从而快速调节细胞膜表面含有NR2A和NR2B的受体的比例。这个过程可能是通过NR2A亚单位ATD结构域的滞留信号来进行控制,并且有多种内质网分子伴侣蛋白参与。

关键词： NMDA受体 Bip 内质网滞留信号 NR2A亚单位 ATD

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PHBHHx膜性材料的表面改性及其与大鼠胚胎神经干细胞的组织相容性研究

PHBHHx膜性材料的表面改性及其与大鼠胚胎神经干细胞的组织相容性...

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：吕海侠卢小云杨志倩李明川刘勇西安交通大学医学院神经生物学研究所西安交通大学生命学院

目的聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有良好生物相容性的可降解高分子材料,3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)是PHA家族中的一员,其性能优于PHA家族的其它材料。研究表明PHBHHx对体外贴壁生长的成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞等多种... 详细信息

目的聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有良好生物相容性的可降解高分子材料,3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)是PHA家族中的一员,其性能优于PHA家族的其它材料。研究表明PHBHHx对体外贴壁生长的成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞等多种细胞具有良好的生物相容性,但是对于和体外悬浮生长的神经干细胞(NSC)的相容性欠佳。本研究拟对PHBHHx膜进行表面改性,以增强与NSC的组织相容性,进而为以NSC为基础的脑组织工程应用奠定基础。方法通过溶剂挥发法制备PHBHHx的二维膜支架,扫描电镜观察其表面性状;分别通过脂肪酶处理,NaOH处理和等离子处理的方法对PHBHHx膜进行表面改性,测量接触角大小检测膜表面亲水性;分离孕14.5天大鼠胚胎大脑皮质NSC,培养于NSC完全培养基(培养基成分:无血清的DMEM/F12+N2+B27+EGF+bFGF);培养至第三代的NSC分别接种在未处理、脂肪酶处理、碱处理、等离子处理以及碱+脂肪酶处理的PHBHHx支架膜表面,免疫染色观察细胞的分布状态,CCK-8试剂盒检测细胞生长状态,免疫细胞荧光化学观察NSC分化情况。结果与未处理的PHBHHx膜相比,脂肪酶+NaOH联合处理、等离子处理后,接触角明显减小,提示上述处理可以增强PHBHHx膜表面的亲水性;NSC在接种于PHBHHx支架后,能够继续存活,细胞形态饱满、折光性强,与未做表面改性处理组相比,处理后随着膜亲水性的增强,表面贴附细胞数量增加,存活状态良好,而且能够发生自发分化,分化为神经元和胶质细胞;与PHBHHx支架的共培养促进了NSC的增殖。结论 PHBHHx材料表面亲水性增强可以提高与NSC的组织相容性;与PHHBx材料的共培养,不改变NSC原有的增殖和多向分化潜能。

关键词： PHBHHx 神经干细胞相容性

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GSS通过提高抗氧化能力对脑缺血再灌注损伤起保护作用

GSS通过提高抗氧化能力对脑缺血再灌注损伤起保护作用

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：黄志华李良东黎晓曾雪亮曾靖赣南医学院生理学教研室赣南医学院第一附属医院赣南医学院药理学教研室

目的研究染料木素磺酸钠（genistein sulfonate sodium,GSS）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型进行实验研究。在缺血后10分钟,假手术组与模型组经舌下静脉注射生理盐水,治... 详细信息

目的研究染料木素磺酸钠（genistein sulfonate sodium,GSS）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型进行实验研究。在缺血后10分钟,假手术组与模型组经舌下静脉注射生理盐水,治疗组分别从舌下静脉注射等体积不同浓度的GSS（0.5 mg/kg,1 mg/kg或2 mg/kg）。缺血1h,再灌注24 h后,行神经功能评分,取大脑进行TTC染色,测定脑梗死体积;取血清,酶法测血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性;取脑组织,制成10%匀浆,测定缺血区脑组织LDH、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、谷胱苷肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量。结果（1）与模型组相比,各剂量组神经功能学评分降低,其中1 mg/kg GSS组差异有统计学意义,高剂量GSS治疗后大鼠脑梗死体积降低;（2）模型组大鼠血清LDH活性升高,组织LDH活性降低,与模型组相比,各剂量GSS治疗组大鼠血清LDH活性降低,组织LDH活性升高;（3）模型组大鼠组织T-AOC、GSH-Px、CAT、SOD活性降低,MDA含量升高,与模型组相比,各剂量GSS治疗组大鼠T-AOC、GSH-Px、CAT、SOD活性升高,MDA含量降低。结论（1）GSS可降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积及脑组织LDH的释放,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用;（2）GSS可升高大鼠抗氧化系统的活性,降低MDA的含量,提示GSS可能通过增强机体的抗氧化能力而对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

关键词：染料木素磺酸钠脑缺血再灌注损伤抗氧化作用

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受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：黄玉芳梁敏黄芳复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RE... 详细信息

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RESP18的生理功能,我们采用常规基因剔除的策略,分析表明该基因缺失后小鼠胚胎致死。研究中还发现RESP18及其一个新的剪接体RESP18-c(序列已登陆NCBI网站,编号:FJ621497.1)在黑质-纹状体内表达,我们推测RESP18与RESP18-c通过参与分泌途径和内质网应激(ERS)影响了中脑黑质多巴胺能神经元的突触传递与存活,从而对PD的发生与发展起一定的作用。小鼠多巴胺能细胞MN9D是体外PD研究中常用的细胞模型,MN9D细胞经6-OHDA和内质网应激诱导物衣霉素—mm处理后,内质网分子伴侣——受糖调节蛋白78(GRP78/Bip)和C/EBP家族成员-CHOP/GADD153表达均显著增高,而RESP18则呈现出不同的反应:150μM 6-OHDA处理MN9D细胞9小时,与对照组相比,检测发现RESP18在mRNA和蛋白水平上都有显著的增高,RESP18下游与细胞骨架相关的LIMK2分子的表达也明显上升;0.5μg/mLTm处理MN9D细胞8小时,整体的RESP18蛋白水平没有改变,而未修饰的RESP18蛋白下降了0.6倍。进一步,我们构建了过表达RESP18/RESP18-c和干扰RESP18/RESP18-c的质粒载体,与上海南方模式生物研究中心合作建立了RESP18条件剔除小鼠,RESP18的生物学功能及其在PD发病中的作用机制在深入研究之中。

关键词： RESP18 内质网应激 PD

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