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2 篇 军事医学科学院放...
2 篇 军事医学科学院基...
2 篇 上海交通大学医学...
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内吗啡肽-2能神经细胞在大鼠回肠肌间神经丛的分布

内吗啡肽-2能神经细胞在大鼠回肠肌间神经丛的分布

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：李军平高昌俊吕伯昌张婷李云庆第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室梁球琚脑研究中心

目的内吗啡肽(endomorphines,EMs)是μ阿片受体(MOR)的选择性和高亲和性内源性配体,MOR在肠神经系统有广泛分布。离体小肠体外施加MOR激动剂可抑制其收缩运动及粘膜的分泌等;体内施加MOR拮抗剂纳洛酮可促进肠管运动、减缓便秘症状。说明... 详细信息

目的内吗啡肽(endomorphines,EMs)是μ阿片受体(MOR)的选择性和高亲和性内源性配体,MOR在肠神经系统有广泛分布。离体小肠体外施加MOR激动剂可抑制其收缩运动及粘膜的分泌等;体内施加MOR拮抗剂纳洛酮可促进肠管运动、减缓便秘症状。说明MOR及激动剂在小肠功能活动中具有很重要的作用。但是在肠神经系统内有无内吗啡肽能神经细胞的存在尚无确切形态学证据,本研究拟通过小肠全层铺片技术和免疫荧光方法探索内吗啡肽能神经元在肠肌神经丛内的分布及特点,为进一步探索小肠的活动机理提供形态学依据。方法正常SD大鼠颈椎脱臼后取出小肠,用含尼莫地平的Krebs液孵育后常规固定,体视显微镜下小肠全层铺片,暴露肠肌层神经丛,免疫荧光双标和三标染色,分五组:Ⅰ兔抗EM2(1:200)、小鼠抗烯醇化酶(NOS,1:200);Ⅱ兔抗EM2、山羊抗ChAT、小鼠抗肠血管活性肽(VIP,1:200);Ⅲ兔抗EM2、山羊抗ChAT、小鼠抗一氧化氮合酶(NOS,1:2000);Ⅳ兔抗EM2、豚鼠抗MOR(1:1000);Ⅴ兔抗EM2、山羊抗降钙素基因相关肽(CGRP,1:200),在肠神经系统,ChAT主要标记肠中间神经细胞和上行兴奋性神经细胞,VIP和NOS主要标记中间神经细胞和下行抑制性神经细胞。荧光显色后激光共聚焦显微镜观察。结果所有EM2阳性细胞同NSE完全共存,约占NSE阳性细胞的70%;EM2、ChAT和VIP三者共存占EM2阳性细胞的22%;EM2、ChAT和NOS三者共存占EM2阳性细胞的48%;MOR与EM2的共存占EM2阳性细胞的58%;EM2与CGRP未见共存。结论 (1)小肠肠肌丛有EM2能神经细胞存在;(2)EM2能神经细胞可能以中间神经细胞的角色作用于上行兴奋性神经细胞和下行抑制性神经细胞,从而调节回肠的蠕动。

关键词：内吗啡肽 μ阿片受体肠神经系统肠肌丛

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抗β淀粉样蛋白聚集化合物的体外筛选

抗β淀粉样蛋白聚集化合物的体外筛选

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：葛金芳乔金平甘昌胜潘见汪琛玮齐丛丛蔡莉周江宁中国科学技术大学生命科学学院神经退行性疾病实验室合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心

老年斑、神经元纤维缠结为阿尔茨海默病的两大重要病理特征,其生化基础均为β淀粉样蛋白(βamyloidprotein,Aβ)沉积,靶向于Aβ的治疗被认为是针对病因的治疗,而抗Aβ聚集化合物的设计与筛选则成为AD病因治疗的热点。本研究以刚果红(Con... 详细信息

老年斑、神经元纤维缠结为阿尔茨海默病的两大重要病理特征,其生化基础均为β淀粉样蛋白(βamyloidprotein,Aβ)沉积,靶向于Aβ的治疗被认为是针对病因的治疗,而抗Aβ聚集化合物的设计与筛选则成为AD病因治疗的热点。本研究以刚果红(Congo Red)和硫磺素T(thioflavin T,ThT)为阳性对照,通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)首先定性筛选出具有抗Aβ聚集潜能的化合物,再通过观察不同剂量化合物与的Aβ反应了解其动力学特征。结果表明,27种待测小分子化合物中有10种显示出与纤维状Aβ1-40或纤维状Aβ1-42的结合、解离特性,但与单体Aβ1-40或单体Aβ1-42则结合能力非常小。而且在(1.56-100μM)剂量范围内,大多呈现出与剂量有关的效应变化(结合单位随剂量增加而增加),其反应能力较阳性对照化合物弱,但反应性质相似。通过硫磺素T(thioflavinT,ThT)荧光强度的变化研究筛选出的化合物RES和G1101-2对Aβ1-40或Aβ1-42自我聚集过程的干扰,结果表明,RES(50μM)和G1101-2(50μM)能减弱ThT荧光强度。由于ThT结合的是纤维状Aβ1-40/1-42,提示G1101-2干扰Aβ1-40/1-42的聚集过程。进一步采用原子力显微镜(atomicforcemicroscopy,AFM)和核磁共振成像技术(1Hnuclearmagnetic resonance,1HNMR)也证实RES(50μM)和G1101-2(50μM)具有抗Aβ聚集能力。以上结果提示,SPR可作为筛选抗Aβ聚集潜能化合物的有效方法,经SPR筛选的化合物RES和G1101-2具有明显的抗Aβ聚集作用,而且这种作用可为AFM和1HNMR结果所证实。对上述小分子化合物进行的研究,可为抗β淀粉样蛋白聚集药物的研制、没计和验证提供了实验基础和理论依据。

关键词：阿尔茨海默病老年斑 Ab淀粉样蛋白

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旋转背景提高视觉认知任务加工速度:ERP研究

旋转背景提高视觉认知任务加工速度:ERP研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：王林杰魏金河曹毅赵琦陈文娟唐国华郭建平李大琛中国航天员科研训练中心重力生理学实验室

目的研究不同角速度匀速旋转刺激背景造成错觉条件下视觉认知任务的变化规律。方法 20名在校大学生志愿者,男女各半,年龄18-24岁,参加了本次试验。视觉认知任务的背景刺激为白色背景、红、绿、蓝三色光点（光点大小0.5°;0.5°... 详细信息

目的研究不同角速度匀速旋转刺激背景造成错觉条件下视觉认知任务的变化规律。方法 20名在校大学生志愿者,男女各半,年龄18-24岁,参加了本次试验。视觉认知任务的背景刺激为白色背景、红、绿、蓝三色光点（光点大小0.5°;0.5°）组成的30°/s、45°/s、60°/s的旋转背景下。视觉认知任务的产生于显示屏中央半径为5厘米的无光点区域（视角为11.5°;11.5°）,圆心为黄色光点,左右两侧据圆心5厘米处,为红绿闪烁光点,认知任务为（1）不反应任务:注视中央黄色光点,两侧光点闪烁,不做任何反应;（2）选择反应任务:注视中央黄色光点,监测两侧闪烁光点,根据红（绿）光点出现的视野,受试者进行左右按键反应;（3）选择心算任务:注视中央黄色光点,监测两侧闪烁光点,根据红（绿）光点出现的视野,左视野出现红（绿）光点闪烁+2,右视野出现红（绿）光点闪烁+3。分析完成相关任务过程中的脑事件相关电位。结果与白色背景下完成任务相比,旋转背景下进行不反应、选择反应以及选择心算任务,视觉认知的特异成分P100潜伏期显著缩短,同时可见随后成分潜伏期同样的缩短。在选择心算任务中,与白色背景下完成任务相比,可见P100峰值波幅在旋转背景下的明显升高。与45°/s旋转背景相比,在选择反应过程中非靶信号ERPs P3峰值幅度在30°/s旋转背景下降低。结论旋转背景加速视觉刺激感知、加工及判断;增强高负荷认知任务的空间选择注意程度;不同背景旋转速度导致非靶主动抑制加工发生变化。

关键词：旋转背景事件相关电位选择区分反应选择心算反应

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颅脑损伤与神经功能修复

颅脑损伤与神经功能修复

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：徐如祥姜晓丹戴宜武杨志军张洪钿北京军区总医院神经外科南方医科大学珠江医院广东神经外科研究所

脑损伤神经功能损害的治疗是神经外科领域的一大难题,创伤造成的脑损伤严重,神经功能损害发生率高。据世界卫生组织报道,全球每年约200万人死于各种伤害。在中国每年约20万人因各种伤害致死。以颅脑交通伤为例,全球每年因颅脑交通伤死亡... 详细信息

脑损伤神经功能损害的治疗是神经外科领域的一大难题,创伤造成的脑损伤严重,神经功能损害发生率高。据世界卫生组织报道,全球每年约200万人死于各种伤害。在中国每年约20万人因各种伤害致死。以颅脑交通伤为例,全球每年因颅脑交通伤死亡130万人,有2000-5000万人受伤,年经济损失全球300亿美元;在中国每年约9万人死亡,有100万人受伤,直接经济损失约30亿元人民币。在重型颅脑损伤患者中重残率为8%-12%,每年有8-12万人发生昏迷、偏瘫、失语等严重神经功能损害,现有的神经营养药物、理疗、针灸等治疗效果不佳,探寻新的有效治疗方法是神经医学科技工作者努力的方向。本课题组历经10余年的研究,已成功的将动物和人的成体骨髓基质细胞、脂肪细胞、脐带细胞等诱导分化为神经元样、神经胶质样细胞;并采用神经生化学、神经电生理学、免疫组织化学、电镜等方法进行鉴定,确定所诱导的神经元样细胞具有神经元的基本特性,并通过基因分析和裸鼠实验证实所获得的神经干细胞无明显致瘤性。应用大鼠、兔、猫、猴的自体骨髓源神经干细胞移植实验,纳米菲力磁铁微粒活细胞标记证实,神经干细胞可以在脑内存活及迁徙,神经功能损害有不同程度恢复,为临床应用奠定了基础。在实验研究的基础上,开展了100余例脑及脊髓损伤志愿者自体骨髓源神经干细胞移植治疗,初步结果显示部分患者神经功能损害有不同程度的改善。结果提示,自体神经干细胞移植对颅脑损伤神经功能损害有一定的改善作用,但是,自体神经干细胞移植治疗的安全性、有效性及治疗效果的评价指标尚有待深入研究。

关键词：颅脑损伤神经功能修复神经功能损害神经干细胞移植

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初级感觉神经元血管内皮生长因子及其受体在神经病理痛中的作用研究

初级感觉神经元血管内皮生长因子及其受体在神经病理痛中的作用研...

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：林加日徐昌水李桂林梁尚栋李欣刘晗南昌大学基础医学院生理学教研室

研究报道P2X和P2X受体涉及初级感觉神经介导的神经病理痛。血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowth Factor,VEGF)在神经病理痛病理变化过程中的作用尚不清楚。本研究目的是探讨VEGF及其受体(flk-1)在神经病理痛中的作用。建立大鼠...

研究报道P2X和P2X受体涉及初级感觉神经介导的神经病理痛。血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowth Factor,VEGF)在神经病理痛病理变化过程中的作用尚不清楚。本研究目的是探讨VEGF及其受体(flk-1)在神经病理痛中的作用。建立大鼠坐骨神经结扎损伤模型。实验大鼠随机分为三组:假手术组(Ⅰ),神经病理痛模型(Ⅱ)和抗VEGF抗体治疗神经病理痛模型组(Ⅲ)。Ⅰ和Ⅱ组大鼠鞘内注射注入PBS,Ⅲ组鞘内注射抗VEGF抗体。每隔两天测量机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)的变化,14天后取大鼠脊髓L4-6背根神经节,通过免疫组织化学、蛋白印迹分析、原位杂交和RT-PCR方法检测L4-6背根神经节(DRG)P2X、P2X、VEGF和flk-1的表达。结果表明Ⅱ组的MWT和TWL均明显低于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05);免疫组化显示Ⅱ组L4-6DRG的P2X、P2X、VEGF和flk-1的光密度值均高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.01);蛋白印迹分析表明L4-6 DRG的P2X、P2X、VEGF和flk-1的蛋白表达均明显高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.01);原位杂交检测显示Ⅱ组L4-6DRG的P2X、P2X、VEGF和flk-1的mRNA光密度值均高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.01);RT-PCR检测显示Ⅱ组L4-6 DRG的P2X、P2X、VEGF和flk-1的mRNA表达均高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.01)。而Ⅰ组和Ⅲ组的MWT、TWL及L4-6 DRG的P2X、P2X、VEGF和flk-1的mRNA和蛋白表达量均无显著差异性(P>0.05)。实验结果表明,VEGF可协同P2X和P2X受体参与神经病理痛的发病。

关键词：

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死亡受体5与神经细胞增殖

死亡受体5与神经细胞增殖

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：邓锦波牛艳丽范文娟刘彬河南大学神经生物学研究所

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）或Apo2配体（TRAIL/Apo2L）是肿瘤坏死因子（tumournecrosis factor,TNF）超家族成员之一。TRAIL/Apo2L可与其相关膜受体,DR4（Death Receptor4）和DR5（Death Receptor 5）结合诱导细胞凋亡。由于TRAIL可选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无明显杀伤作用,它的抗肿瘤特性引起科研工作者的广泛、密切关注。然而,我们在实验中发现DR4和DR5在神经前体细胞中呈强表达,新生神经元中呈弱表达,表明它们可能参与神经细胞增殖。为了进一步证实DR5参与神经细胞增殖,应用免疫细胞化学技术观察到DR5在脑内神经细胞增殖区,如齿状回颗粒细胞下层的神经元中呈强表达。在胚胎和新生鼠中,DR5阳性细胞密集分布于颗粒层,呈强表达。P7后,DR5阳性细胞减少,强表达的细胞密集地分布在海马齿状回的下颗粒层,其余的颗粒细胞呈弱表达。P30后,在海马齿状回的下颗粒层发现仅有少数DR5阳性细胞,其余颗粒细胞无表达。同时,在其它神经细胞增殖区,如E12（Embryonic day 12,E12）的神经管和P0小脑外颗粒区,在这些增殖区同样观察到DR5阳性细胞呈强表达。DR5阳性细胞的发育和分布规律表明DR5阳性细胞是增殖的神经细胞或有丝分裂后期的新生神经元。DR5/Brdu和DR5/doublecortin共表达进一步表明齿状回下颗粒层的DR5阳性细胞是增殖的神经细胞和新生神经元。总之:DR5阳性细胞是增殖的神经细胞和新生神经元,提示DR4和DR5参与神经细胞增殖、分化,其参与神经细胞增殖、分化的具体机制还有待进一步探讨。

关键词： DR5 齿状回神经细胞增殖发育 BrdU

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PPARγ激动剂比格列酮对TBI大鼠海马神经元及记忆认知功能的保护作用

PPARγ激动剂比格列酮对TBI大鼠海马神经元及记忆认知功能的保护...

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：王芬高建新乔保华刘克敬 Guo-Ying BING 山东大学医学院生理学研究所 Department of Neurobiology and anatomy University of Kentucky

目的过氧化物酶增殖因子活化受体γ（PPARγ）能够诱导抗氧化酶表达,去除分子氧和过氧化氢,提高组织的抗氧化能力。研究证实PPARγ激动剂在脑缺血和脊髓损伤等神经损伤的动物模型上具有神经保护作用,并用以治疗实验性自身免疫性脑脊髓... 详细信息

目的过氧化物酶增殖因子活化受体γ（PPARγ）能够诱导抗氧化酶表达,去除分子氧和过氧化氢,提高组织的抗氧化能力。研究证实PPARγ激动剂在脑缺血和脊髓损伤等神经损伤的动物模型上具有神经保护作用,并用以治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎、阿尔茨海默病和缺血性中风等神经疾病。本工作主要探讨了比格列酮对TBI大鼠海马神经细胞及其认知行为障碍的改善作用并初步分析了其病理机制。方法 SD实验大鼠30只,用自动控制脑损伤撞击设备制做大鼠左侧脑皮层损伤模型。实验分四组,即假手术组（sham group）、脑损伤溶剂治疗组（vehicle group）、脑损伤比格列酮治疗组（TBI+Pio）和脑损伤+比格列酮+PPARγ阻断剂（T0070907）组（TBI+Pio+Ant）。采用大鼠Morris水迷宫实验观察其行为学改变。大鼠脑损伤第15d时的脑冠状切片进OX-42、GFAP和NeuN免疫组化染色,分别计算海马CA1与CA3区小胶质细胞、星型胶质和神经细胞的数量。结果（1）Vehicle组大鼠比sham组大鼠的学习记忆能力显著减退,表现为潜伏期和游泳轨迹的延长、游泳速度减慢,两者具有显著性差异（P＜0.05）;TBI+Pio组与vehicle组和TBI+Pio+Ant组比较其潜伏期及游泳轨迹缩短、游泳速度加快,差异具有显著性（P＜0.05）。（2）Vehicle组比sham组海马CA1和CA3区神经元数量减少（P＜0.05）,小胶质细胞（P＜0.01）和星型胶质明显增多（P＜0.01）;TBI+Pio组比vehicle组的神经元数量多（P＜0.05）、小胶质细胞减少（P＜0.05）、星型胶质明显减少（P＜0.01）。结论比格列酮可以提高TBI大鼠的学习认知功能,减少胶质反应,从而发挥对海马神经元的保护作用。

关键词： PPARγ TBI Morris水迷宫胶质细胞神经元

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PPARγ激动剂吡格列酮对创伤性脑损伤大鼠皮层神经细胞的保护作用

PPARγ激动剂吡格列酮对创伤性脑损伤大鼠皮层神经细胞的保护作用

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：乔保华高建新王芬刘克敬 Guo-Ying BING 山东大学医学院生理学研究所 Department of Neurobiology and anatomy University of Kentucky

目的炎性反应是创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）神经细胞继发性死亡的重要机制之一,为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ激动剂吡格列酮（pioglitazone）对TBI大鼠皮层神经细胞的保护作用及抗炎机制,本工作研究了... 详细信息

目的炎性反应是创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）神经细胞继发性死亡的重要机制之一,为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ激动剂吡格列酮（pioglitazone）对TBI大鼠皮层神经细胞的保护作用及抗炎机制,本工作研究了吡格列酮对成年TBI大鼠皮层损伤（CCI模型）体积,星形胶质细胞增殖,小胶质细胞活化和神经元数目的作用。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、TBI+溶剂处理组（vehicle组）、TBI+pioglitazone治疗组（pio组）,TBI+pioglitazone+PPARγ拮抗剂（T0070907）组（pio+ant组）。大鼠脑冠状切片CresyViolet染色以确定损伤皮层的体积;ABC法免疫组化OX-42,GFAP和NeuN染色分别进行小胶质细胞、星形胶质和神经元计数。结果（1）pio组大鼠TBI皮层损伤体积（2.21±0.94）mm较vehicle组（5.51±2.11）mm和pio+ant组（4.54±1.72）mm显著减少（P<0.05）;pio+ant组皮层损伤体积与vehicle组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）Vehicle组大鼠皮层损伤区周围激活的小胶质细胞和反应性星形胶质细胞数量每个视野分别是（25.46±4.69）和（15.50±3.92）个,较sham组（5.51±1.42和2.93±1.23）和损伤对侧相应皮层明显增加（P<0.01）;而pio组大鼠皮层损伤区周围激活的小胶质细胞和反应性星形胶质细胞数量分别为（14.80±5.93）和（9.01±2.69）个,比vehicle组和pio+ant组显著减少（P<0.01）。（3）Vehicle组大鼠皮层损伤周围区神经元排列不整齐且稀疏,胞体缩小,染色较浅,部分突起断裂,每个视野神经元数量为92.33±12.14个,较sham组（146.50±18.42）和损伤对侧皮层相应部位明显减少（P<0.05）;而pio组大鼠皮层损伤区周围神经元排列较整齐,胞体呈圆形或椭圆形,染色加深,突起较长,神经元数量为122.16±14.35,较vehicle组和pio+ant组增多（P<0.05）。结论吡格列酮能够通过PPARγ减小TBI大鼠的皮层损伤体积,抑制星形胶质细胞增殖和小胶质细胞活化,减少神经元的损伤,从而发挥神经保护作用。

关键词： PPARγ 吡格列酮创伤性脑损伤胶质细胞神经元

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跨膜区段中内质网滞留/返留信号调控电压门控钠离子通道1.8在细胞膜上的表达

跨膜区段中内质网滞留/返留信号调控电压门控钠离子通道1.8在细胞...

引用

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：李乾苏园园王浩李磊王琼鲍岚中科院生化细胞所中科院分子细胞生物学重点实验室神经元蛋白运输研究组

目的电压门控钠离子通道在动作电位产生和传播中起了很重要的作用,其亚型1.8（Nav1.8）特异分布于外周神经系统,并对神经病理性痛和炎性痛有着很重要的贡献。我们以前的研究发现Nay1.8主要定位于背根神经节神经元的细胞内,在外源转染的... 详细信息

目的电压门控钠离子通道在动作电位产生和传播中起了很重要的作用,其亚型1.8（Nav1.8）特异分布于外周神经系统,并对神经病理性痛和炎性痛有着很重要的贡献。我们以前的研究发现Nay1.8主要定位于背根神经节神经元的细胞内,在外源转染的细胞中显示Nav1.8主要定位在内质网中,而Nav1.8第一个胞内段中的一个经典的内质网滞留/返留信号RRR对其滞留在内质网中有着很重要的贡献。但是即使将RRR信号突变后,通道在细胞膜上的表达水平仅仅增加了2倍左右,暗示了在通道其它区域仍存在内质网滞留/返留信号。Nav1.8由四个相似的结构域组成,每一个结构域含有六个跨膜区段。在这个研究中,我们建立了两套筛选系统来寻找Nav1.8中跨膜区段中潜在的内质网滞留/返留信号。方法我们利用人源的转铁蛋白Ⅰ型受体（TFR1,trans-ferrin receptor 1）作为模式分子来筛选奇数跨膜段中的信号,而利用大鼠源性的CD8α受体来筛选偶数跨膜段中的信号,进而把模式分子的跨膜区段分别用Nav1.8的相应跨膜区段取代。将这些杂合分子转染到COS7细胞中,利用活细胞染色以及生物素标记细胞膜表面蛋白技术鉴定蛋白在细胞膜上表达的差异。结果（1）Nav1.8每一个结构域中的第一个和第三个跨膜区段能引起复合分子滞留在内质网中,而第二个跨膜区段同样具有此效果;（2）第一个和第三个跨膜区段中的酸性氨基酸在内质网滞留效果中起着很重要的作用,第二个跨膜区段中的带电荷氨基酸同样也起着很重要的作用。结论我们的结果表明Nav1.8在细胞膜上的表达受多个内质网滞留信号的调控。我们的研究有助于深入理解Nav1.8的转运机制和调控机制。

关键词：电压门控钠离子通道内质网滞留/返留信号跨膜区段模式分子

来源：评论

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5羟色胺1A受体亚型的内在化研究

5羟色胺1A受体亚型的内在化研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：金艳燕李晓晓吕琼徐志卿北京首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室

目的 5-羟色胺是脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为,5-羟色胺通过与不同受体亚型结合,发挥各种生理及病理作用,参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。5羟色胺1A型受体亚型（... 详细信息

目的 5-羟色胺是脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为,5-羟色胺通过与不同受体亚型结合,发挥各种生理及病理作用,参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。5羟色胺1A型受体亚型（5HT1A受体）属于G蛋白偶联受体,激活后可与Gi/o/z蛋白偶联,抑制腺苷酸环化酶的活性,促使神经元K电导增加并发生超极化。本文的目的是运用带有荧光蛋白标记的5HT1A受体,在活细胞内实时观察受体的表达及内在化过程,采用Texas-red转铁蛋白标记细胞内体,并对5HT1A受体的内在化机制做初步探讨。为进一步研究5HT1A受体在细胞内的转运和信号转导机制做准备。方法通过分子克隆方法构建出表达5HT1A-EGFP融合蛋白的真核表达质粒,瞬时转染PC12细胞系中,并通过药物G418筛选,培养出能够稳定表达羧基端带有绿色荧光蛋白标签的5HT1A受体的PC12细胞系。在此基础上,给予细胞浓度在10-4 M的5-HT刺激,分别在0min、5min 30min、60min、120min时间点观察5HT1A-EGFP内在化的过程。结果通过激光共聚焦显微镜的观察,在无药物刺激的情况下,大部分5HT1A-EGFP在PC12细胞膜表面分布。5-HT刺激5min时5HT1A-EGFP仍然在细胞膜表面,没有明显的下膜改变。30min开始,有极少量的细胞出现5HT1A-EGFP内在化,120mim达到最大,内在化率约为10-15%。Texas-red转铁蛋白标记细胞内体,内在化的5HT1A-EGFP在内体与转铁蛋白有共定位。结论我们的结果显示在稳定表达5HT1A-EGFP的PC12细胞系5-HT刺激可引起5HT1A内在化但不明显,且其过程可能是由内体-网格蛋白包被小凹的受体内在化途径介导的。

关键词： G蛋白偶联受体 5羟色胺1A受体内在化网格蛋白

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