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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：刘小林中山大学附属第一医院广东广州 510080

本研究团队独立自主研发出去细胞同种异体神经修复材料(商品名：神桥)。首先建立了用化学脱细胞技术制备去细胞生物基质材料的方法，率先完成了人去细胞神经形态结构、理化性质、生物安全性、免疫原性的系统检测;研制出自动化神经萃取... 详细信息

本研究团队独立自主研发出去细胞同种异体神经修复材料(商品名：神桥)。首先建立了用化学脱细胞技术制备去细胞生物基质材料的方法，率先完成了人去细胞神经形态结构、理化性质、生物安全性、免疫原性的系统检测;研制出自动化神经萃取仪器，建立了去细胞神经的生产规程与质控体系;制订了去细胞同种异体神经修复材料的产品标准与检测方法;在完成前瞻性多中心对照临床研究，取得良好的修复效果的基础上，获得的国家食品药品监督管理局颁发的产品注册证，实现了规模化生产，正式在临床上推广使用。该材料可用于桥接神经缺损，是一种可替代自体神经用于修复周围神经缺损的新型材料，其满足了神经修复材料物理、化学、生物学等方面的要求，这是全球继美国获准临床使用与上市的同类同质材料后，我国自行研发的国内唯一获正式批准的缺损神经修复材料。为了进一步提高去细胞同种异体神经修复材料修复周围神经缺损的效果，采用各类促神经再生物质复合到去细胞同种异体神经的方法，提高其修复性能。这其中包括了对周围神经损伤有确切作用的生物活性因子、药物或生物制剂，研究这些物质在改善周围神经再生的微环境的作用;另外为了防止周围神经支架材料的延迟血管化导致长段神经缺损修复后中央区坏死，从而出现纤维组织增生、移植材料塌陷和轴突再生延迟等问题，研究周围神经再生血管化规律和加速促进支架材料的再血管化的方法，以便通过促进血管化的方法间接加速神经轴突再生;同时利用3D生物打印制备仿生化的周围神经缺损材料，可模拟重建神经再生内环境，并构建天然神经三维空间结构。通过以上不同的方法研发各种类型的修复材料，以适应各种不同的临床情况，达到个体化治疗，提高神经缺损修复疗效。

关键词：去细胞同种异体神经周围神经再生组织工程

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去细胞神经外膜导管的生物学特性研究

去细胞神经外膜导管的生物学特性研究

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：黄麒霖徐强郑百男时冬辰刘芳第二军医大学人体解剖学教研室 200433

目的通过观测去细胞神经外膜导管的三维结构及生物学特性,为周围神经损伤的修复提供一种新型支架材料.方法采用化学萃取法(1％ Triton X-100,40g/L脱氧胆酸钠)对新鲜猪坐骨神经外膜进行去细胞处理(去细胞外膜组),正常猪坐骨神经外膜...

目的通过观测去细胞神经外膜导管的三维结构及生物学特性,为周围神经损伤的修复提供一种新型支架材料.方法采用化学萃取法(1％ Triton X-100,40g/L脱氧胆酸钠)对新鲜猪坐骨神经外膜进行去细胞处理(去细胞外膜组),正常猪坐骨神经外膜为对照组,观察去细胞神经外膜导管的大体形态和显微结构特点,并检测该支架材料的溶胀率、孔隙率和体外降解率等生物学特性.结果与对照组相比较,去细胞外膜组的导管结构较为疏松,镜下观察细胞去除较为彻底,细胞外基质成分保留相对完整,可观察到明显孔隙结构,溶胀率和孔隙率分别为(147.37±20.76)％和(43.20±14.52)％,且该支架材料能在PBS中逐步降解,至第7日可达(67.23±9.35)％.结论利用化学萃取法制备的去细胞神经外膜导管具有良好的孔隙率、溶胀率和体外降解率,可通过进一步的体内实验研究,为周围神经损伤的修复提供一种防止神经粘连、促进神经再生的新型支架材料.

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miR-9靶向Cthrc1抑制施万细胞迁移

miR-9靶向Cthrc1抑制施万细胞迁移

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：周松林孙华林顾芸龚蕾蕾易晟王鸿奎顾晓松南通大学神经再生重点实验室南通226001

周围神经损伤后,由于神经元内在再生能力的激活以及施万细胞提供的再生微环境,周围神经能够实现成功再生,重新支配靶肌.miRNA是一类长约22个核苷酸的非编码RNA,由一段具有发夹结构的单链RNA前体经Drosha酶和Dicer酶剪切后生成.miRNA可...

周围神经损伤后,由于神经元内在再生能力的激活以及施万细胞提供的再生微环境,周围神经能够实现成功再生,重新支配靶肌.miRNA是一类长约22个核苷酸的非编码RNA,由一段具有发夹结构的单链RNA前体经Drosha酶和Dicer酶剪切后生成.miRNA可以靶向目标mRNA分子3'端非翻译区(3'-UTR),使mRNA分子降解或翻译受到抑制,在转录后水平负调控许多基因的表达.研究表明miRNA参与细胞的凋亡、增殖、迁移、分化、发育和代谢等过程,在许多生理和病理过程中起到非常重要的作用.本实验以大鼠坐骨神经损伤为模型,通过miRNA和mRNA芯片,筛选出调控施万细胞表型的miRNA.通过系统性分析坐骨神经损伤后近端神经miRNA的表达谱变化,结合生物信息学分析和功能筛选发现了miR-9通过靶向Cthrc1抑制施万细胞迁移,Rac1抑制剂能削弱miR-9拮抗剂对施万细胞迁移的促进作用.另外,在体内再生小室中过表达miR-9能抑制施万细胞的迁移.这有助我们从新的角度解释周围神经损伤和修复的机制,为将来的临床治疗提供新的思路.

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转录组测序分析坐骨神经夹伤后的分子再生机制

转录组测序分析坐骨神经夹伤后的分子再生机制

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：易晟张红红龚蕾蕾于彬顾晓松南通大学神经再生重点实验室神经再生协同创新中心南通226001

周围神经系统在损伤后有内在的再生能力.为了从分子和细胞水平进一步揭示周围神经再生过程,我们采用成年大鼠的坐骨神经夹伤模型,在神经损伤1、4、7和14天后取损伤的坐骨神经组织,进行基因组深度测序.测序结果表明,坐骨神经损伤大致可分...

周围神经系统在损伤后有内在的再生能力.为了从分子和细胞水平进一步揭示周围神经再生过程,我们采用成年大鼠的坐骨神经夹伤模型,在神经损伤1、4、7和14天后取损伤的坐骨神经组织,进行基因组深度测序.测序结果表明,坐骨神经损伤大致可分为3个阶段：急性期(1天),亚急性期(4天和7天)以及损伤后期(14天).在急性期,很多涉及到急性反应信号通路的基因的表达发生变化,比如白介素-6和白介素-1β表达上调,激活了p38 MAPK信号通路,增加了急性期蛋白在血浆中的浓度,促进了炎症反应的发生.在亚急性期和损伤后期,急性反应信号通路中的基因逐步下调.TREM1信号通路也遵循了类似的模式.在急性期,TREM1信号通路明显上调,促进了细胞的凋亡和吞噬,激发了免疫和炎症反应.在亚急性期和损伤后期,该信号通路中的基因逐步下调.与上述两条信号通路不同,轴突导向信号通路也在损伤的过程中逐步变得愈发重要.神经生长因子及其受体在损伤后一直高表达,调控了夹伤后修复的全过程.而丝氨酸苏氨酸蛋白激酶的表达逐步上调,促进了肌动蛋白和细胞骨架的改组和轴突的导向.基因组深度测序和系统分析的结果初步揭示了周围神经损伤和再生过程中的分子机制,为将来寻求神经损伤治疗的新的靶点提供了理论基础.

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2015国际脑功能与健康研讨会暨神经再生高峰论坛

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中国组织工程研究 2015年第32期 5250-5250页

2015年9月23日,广州暨南大学曾宪梓科学馆国际会议厅1.会议背景中枢神经系统的损伤后再生及修复是神经科学领域的研究热点。近年来,运用包括干细胞、神经营养因子等手段,促进脑和脊髓内神经元的再生和突触发育,在动物模型和临床试验中... 详细信息

2015年9月23日,广州暨南大学曾宪梓科学馆国际会议厅1.会议背景中枢神经系统的损伤后再生及修复是神经科学领域的研究热点。近年来,运用包括干细胞、神经营养因子等手段,促进脑和脊髓内神经元的再生和突触发育,在动物模型和临床试验中取得了一定的突破。但仍面临众多技术和伦理挑战。多种技术手段的有机结合,极有可能开辟神经再生修复和神经疾病治疗的新途径。本次会议,将邀请来自世界各国的干细胞、神经再生和修复、生物医学材料等领域的顶尖学者,共同探讨治疗中枢神经系统损伤及退行性疾病的新策略、新方法。

关键词：神经再生高峰论坛研讨会脑功能

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2015国际脑功能与健康研讨会暨神经再生高峰论坛

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中国组织工程研究 2015年第34期 5417-5417页

2015年9月23-24日,广州暨南大学主办:暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院协办:《中国神经再生研究(英文版)》杂志社1.会议背景中枢神经系统的损伤后再生及修复是神经科学领域的研究热点。近年来,运用包括干细胞、神经营养因子等手段,促... 详细信息

2015年9月23-24日,广州暨南大学主办:暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院协办:《中国神经再生研究(英文版)》杂志社1.会议背景中枢神经系统的损伤后再生及修复是神经科学领域的研究热点。近年来,运用包括干细胞、神经营养因子等手段,促进脑和脊髓内神经元的再生和突触发育,在动物模型和临床试验中取得了一定的突破。但仍面临众多技术和伦理挑战。多种技术手段的有机结合,极有可能开辟神经再生修复和神经疾病治疗的新途

关键词：神经再生研讨会高峰论坛脑功能

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生物活性材料CS浸提液调控人胚胎干细胞的功能

生物活性材料CS浸提液调控人胚胎干细胞的功能

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第十一届全国生物力学学术会议暨第十三届全国生物流变学学术会议

作者：张帆吕东媛李海燕常江龙勉中国科学院微重力重点实验室中国科学院力学研究所生物力学与生物工程中心中国科学院力学研究所工程化构建与力学生物学北京市重点实验室同济大学生物医学工程学院中国科学院上海硅酸盐研究所生物材料与组织工程研究中心

目的:人胚胎干细胞（hESCs）是再生医学和生物医药应用的重要的潜在细胞来源。目前在体外有多种因素可以诱导hESC定向分化,包括生长因子、诱导剂、抑制剂等,其中calcium silicate（CS）是一种具有生物活性的硅酸钙陶瓷材料,可以促进细... 详细信息

目的:人胚胎干细胞（hESCs）是再生医学和生物医药应用的重要的潜在细胞来源。目前在体外有多种因素可以诱导hESC定向分化,包括生长因子、诱导剂、抑制剂等,其中calcium silicate（CS）是一种具有生物活性的硅酸钙陶瓷材料,可以促进细胞的活性、增殖、黏附、分化和基因表达,其富含Si的浸提液还可以促进细胞的成骨、成血管分化。目前已知CS浸提液对多种干细胞都具有促进分化的作用,但是它对ESC的生物学表型的影响还不清

关键词：生物活性材料人胚胎干细胞浸提液

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神经干细胞的分化调控及其治疗脑损伤的研究

神经干细胞的分化调控及其治疗脑损伤的研究

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作者：金国华张新化李浩明谭雪锋衣昕施金洪邹琳清成翔秦建兵张蕾田美玲毛伟峰黄镇朱蕙霞董传明南通大学

决定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的因素有两种,一是神经干细胞所处特定微环境,改变神经干细胞所处的微环境,可诱导神经干细胞向神经元分化;二是细胞自身基因调控,在发育进程或环境刺激下细胞内某些基因如转录因子的表达水... 详细信息

标准号: 1500020453

决定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的因素有两种,一是神经干细胞所处特定微环境,改变神经干细胞所处的微环境,可诱导神经干细胞向神经元分化;二是细胞自身基因调控,在发育进程或环境刺激下细胞内某些基因如转录因子的表达水平改变,可导致神经干细胞向不同谱系神经元分化。本项目应用细胞生物学、分子生物学和组织工程等手段,研究神经营养因子、细胞因子、中药以及转录因子Brn-4神经干细胞向神经元分化的调控。在此基础上,将神经干细胞移植到去神经损伤的海马,应用壳聚糖多孔生物支架作载体联合NGF和神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤,以观察神经干细胞存活和分化情况,以及动物行为学的改变。取得了良好的实验结果,为神经干细胞应用于临床治疗神经退行性病或中枢神经损伤奠定基础。本研究获得了如下具有创新性的结果：⑴采用原代培养和新鲜培养液各半的方法可以提高神经干细胞的单克隆率。⑵神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF),白介素1α(IL-1α)及其与白介素11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)联合应用,以及中药银杏内酯可调控神经干细胞向神经元或胆碱能和多巴胺能神经元分化。⑶去神经损伤后海马微环境对移植或自体神经干细胞的存活、迁移和向神经元分化具有促进作用,NGF可促进海马自体神经干细胞向神经元分化。⑷去神经支配后海马内Brain-4(Brn-4)表达上调;Brn-4参与了海马神经干细胞向神经元分化、成熟的过程。⑸去神经损伤后,前脑非神经发生区的胆碱能区域海马伞、扣带束和基底大细胞核出现神经干细胞增殖,且部分分化为神经元。⑹去神经损伤诱发海马放射状胶质细胞出现增殖,胞体变大,突起变长增粗,染色加深的“激活”现象,并向神经元和胆碱能神经元、胶质细胞分化。(7)创伤性脑损伤后皮层损伤区周围出现神经干细胞再生。(8)壳聚糖多孔生物支架作载体联合NGF和神经干细胞移植治疗创伤性损伤,移植的细胞在损伤脑区分化为神经元,并与宿主建立联系,损伤区边缘胶质细胞增生和海马组织萎缩变形现象得到改善,大鼠认知功能得到恢复。本成果共发表论文107篇,其中SCI收录23篇、国内核心刊物52篇,他引296次,其中SCI他引71次。《神经干细胞治疗创伤性脑损伤研究》、《Brn-4在切割海马伞海马神经干细胞向神经元分化中的作用》分别获得江苏医学科技奖三等奖、南通市科技进步二等奖。“大鼠穹窿海马伞切割对海马伞内神经干细胞再生的影响”获第十二届“挑战杯”全国大学生课外学术科技作品竞赛三等奖。申请专利1项。有20多篇论文在国际、国内学术会议上报告,9篇论文获得南通市和相应学术会议优秀论文一、二、三等奖。研究成果和研究技术如神经干细胞的单克隆、细胞移植、壳聚糖多孔生物支架制备、神经干细胞向神经元分化的调控和检测等,已在南通大学附属医院、南通市第一人民医院、常州市儿童医院等单位得到了推广应用。并得到国外同行在学术著作中积极评价。由于发表论文的影响,受INTECH出版社邀请,参加了《Neural Stem Cells and Therapy》一书的编写,编写了第二章《Neurogenesis in Adult Hippocampus》(page31～58),该书已于2012年2月正式出版(ISBN978-953-307-958-5)。

关键词：神经干细胞分化神经元胆碱能神经元多巴胺能神经元

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丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺水凝胶表面弹性对施万细胞的影响

丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺水凝胶表面弹性对施万细胞的影响

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：孔言赵银馨高明张鲁中李贵才杨宇民南通大学江苏省神经再生重点实验室南通226001

本研究制作了一种丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺的三体系水凝胶.将一定浓度的丝素蛋白溶液,氧化石墨烯溶液和聚丙烯酰胺溶液按照不同的比例混合,再加入促凝剂过硫酸铵后倒人玻璃模具中,采用加热凝固方法,形成凝胶.采用光学显微镜和扫... 详细信息

本研究制作了一种丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺的三体系水凝胶.将一定浓度的丝素蛋白溶液,氧化石墨烯溶液和聚丙烯酰胺溶液按照不同的比例混合,再加入促凝剂过硫酸铵后倒人玻璃模具中,采用加热凝固方法,形成凝胶.采用光学显微镜和扫描电镜对凝胶的形貌进行观察,用接触角测试仪对凝胶的润湿性进行检测,并通过万能试验拉伸机测量凝胶的弹性.采用RSC96施万细胞株评价不同弹性的丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺凝胶对细胞生长及骨架形态的影响.结果表明,各种凝胶表面形貌和润湿性没有明显差异,三体系水凝胶弹性从0.214MPa～0.564MPa不等,根据结果可发现,随着氧化石墨烯比例的增大,压缩强度增大.但是水凝胶的拉伸力学结果基本无差异,抗拉强度都很小,基本都只有0.001 MPa左右.推测氧化石墨烯会明显增大凝胶的力学强度.施万细胞培养1,3,5天后甲苯胺蓝染色结果显示,与对照样纯聚丙烯酰胺凝胶进行对比,在0.5％和40％丝素蛋白浓度下,RSC96细胞长势较好.结合力学及细胞两方面实验结果分析,从二十多种不同比列的水凝胶中筛选出9种丝素蛋白/氧化石墨烯/聚丙烯酰胺三体系水凝胶进行进一步深入优化研究及后续实验.

关键词：水凝胶弹性施万细胞丝素蛋白氧化石墨烯聚丙烯酰胺

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根尖乳头干细胞向牙髓牙本质复合体分化能力的实验研究

根尖乳头干细胞向牙髓牙本质复合体分化能力的实验研究

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中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第六次学术会议暨广东省口腔医学会全科口腔医学专委会2015年年会

作者：于莉高晓蔚袁萍曹蓉蓉吴佩玲新疆医科大学第二附属医院口腔科新疆医科大学第五附属医院

目的:应用组织工程的方法,探讨根尖乳头干细胞(SCAP)分别炎性环境(肿瘤坏死因子-α)及正常环境下向牙髓牙本质复合分化的可能性。方法:分离大鼠根尖乳头组织,采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,鉴定细胞来源,进行MTT生长曲线的测定,分... 详细信息

目的:应用组织工程的方法,探讨根尖乳头干细胞(SCAP)分别炎性环境(肿瘤坏死因子-α)及正常环境下向牙髓牙本质复合分化的可能性。方法:分离大鼠根尖乳头组织,采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,鉴定细胞来源,进行MTT生长曲线的测定,分正常组、炎症组(10 ng/mL TNF-α)及空白对照组行体外成骨能力茜素红及免疫组化实验,并将三个组分别移植到大鼠背部皮下观察8/12周后新生组织的形成情况。结果:MTT结果显示10ng/ml TNF-α组显著高于正常SCAP组,差异有统计学意义(P<0.05);茜素红染色显示均有矿化结节生成,与炎性组(10 ng/mL TNF-α)相比,正常组SCAP染色显著,矿化结节形成的范围大且呈深橘色;免疫组化染色显示SCAP胞浆中DSP/BSP均有表达;正常、炎症组移植物可见牙髓牙本质样结构形成,且DSP/BSP均阳性表达,空白对照组未见矿化组织形成。结论:SCAP具有高增殖及成骨向分化能力,可进行牙髓牙本质复合体的再生,炎性因子TNF-α对SCAP的生长增殖有促进作用同时不同程度上对SCAP矿化及成牙成骨向分化有抑制作用。

关键词：牙髓牙本质复合体 MTT 根尖乳头干细胞分化能力

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