EB病毒(EBV)是淋巴瘤发生的一个重要因素,EB病毒基因表达产物潜伏膜蛋白(1atentmembrane protein LMP)包括LMP-1、LMP-2A和LMP-2B。LMP-1通常被认为是病毒致瘤基因,是肿瘤形成过程中的主要促进因子。近年来研究表明LMP-1具有介导细胞增...
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EB病毒(EBV)是淋巴瘤发生的一个重要因素,EB病毒基因表达产物潜伏膜蛋白(1atentmembrane protein LMP)包括LMP-1、LMP-2A和LMP-2B。LMP-1通常被认为是病毒致瘤基因,是肿瘤形成过程中的主要促进因子。近年来研究表明LMP-1具有介导细胞增殖、抑制细胞凋亡的功能。采集健康献血员的外周静脉血,分离正常人淋巴细胞,移植到严重联合免疫缺陷动物SCID小鼠体内,建立SCID小鼠体内EBV感染诱发淋巴瘤的动物模型。病理学检查确定诱发瘤是人缘性B细胞淋巴瘤。应用实时定量PCR方法检测正常人淋巴细胞、诱发淋巴瘤细胞中Lmp(LMP-1、LMP-2A、LMP-2B)的差异表达情况。实时定量PCR结果表明:LMP-1、LMP-2A在诱发淋巴瘤细胞中均表达上调,LMP-2B在"正常人"淋巴细胞、诱发淋巴瘤细胞中均表达。Western-blot检测LMP-1在诱发淋巴瘤细胞中表达比在正常人淋巴细胞中增强,这些结果提示在EBV诱导淋巴瘤发生过程中LMP可能起重要作用。
褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三型组蛋白的高乙酰化表达,提示组蛋白乙酰化修饰途径可能是褪黑素对可卡因抑制作用的机制之一。本研究应用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)和共聚焦激光扫描显微镜技术等检测了褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的作用并初步探索了其DNA甲基化修饰机制。结果显示:褪黑素的小剂量、慢性给药可抑制可卡因奖赏效应的表达强度;可卡因诱导海马神经元5-甲基胞嘧啶的高表达,而褪黑素抑制这种高表达。海马是中枢奖赏通路中的重要结构,其不但向前额叶皮层有直接或间接的纤维投射,还通过谷氨酸能神经元和伏核有直接联系,在药物成瘾记忆和突触可塑性变化中发挥重要作用。我们的实验结果提示,DNA甲基化修饰机制可能是精神活性药物引起精神和行为变化的一个重要的调节机制。
脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是X连锁先天性智力低下中最常见的疾病之一,在智力低下患者中所占比例仅次于唐氏综合征。FXS是由于脆性X智力低下基因1(fragile X mentalretardation 1 gene,FMRl)所编码的脆性X智力低下蛋白(fragil...
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脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是X连锁先天性智力低下中最常见的疾病之一,在智力低下患者中所占比例仅次于唐氏综合征。FXS是由于脆性X智力低下基因1(fragile X mentalretardation 1 gene,FMRl)所编码的脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)表达缺失所致。基于FMRP的抗体检测可以诊断出包括CGG重复增加以及点突变等各种原因导致FMRP缺失的患者。本实验以表达并纯化得到FMRP蛋白为目的,克隆FMRl cDNA至含有谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合标签的表达载体pGEX-6P-l,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为宿主进行融合表达,SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达。通过GST融合表达标签,以Glutathione sepharose 4B树脂进行亲和层析,从而纯化得到GST-FMRP蛋白。实验中我们成功表达并纯化得到足够的可溶性重组FMRP isoform 10,可以满足后续抗体制备及FXS诊断试剂盒开发。
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