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作者

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超敏双酶-可见光底物循环方法的建立和应用

超敏双酶-可见光底物循环方法的建立和应用

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湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

作者：段秋红王西明王小川王建枝何善述华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系

目的:利用酶联免疫吸附法（ELISA）的高特异性和双酶底物循环的高灵敏度,以及可见光分光光度法的稳定性,建立了ELISA-可见光双酶底物循环扩增检测法。原理:由两部分组成:常规ELISA部分和双酶循环信号放大部分:简而言之,利用标记在二抗... 详细信息

目的:利用酶联免疫吸附法（ELISA）的高特异性和双酶底物循环的高灵敏度,以及可见光分光光度法的稳定性,建立了ELISA-可见光双酶底物循环扩增检测法。原理:由两部分组成:常规ELISA部分和双酶循环信号放大部分:简而言之,利用标记在二抗上的碱性磷酸酶,催化底物NADP水解成NAD,NAD进入双酶循环—乙醇脱氢酶将NAD还原为NADH,NADH又被黄传酶氧化为NAD,同时INT生成显色产物INT formazan。NAD又进入下一循环,每循环一次,产物也相应增加。因此此体系可将ELISA的酶信号放大很多倍,可检测出样品中极微量的成分。结果:常规ELISA结果显示:tau蛋白在3.6ng～57.6ng之间与光密度值呈线性关系,而AD患者p-tau在112pg～30ng之间与其光密度值有线性关系。ELISA-双酶底物循环法的测定结果:tau在0.2～14.4ng范围内与光密度值呈线性关系,p-tau在2pg-500pg范围内呈线性关系。ELISA-双酶底物循环法检测tau和p-tau的灵敏度比常规ELISA的灵敏度分别提高16倍和56倍,线性范围分别增加4倍和1倍。该研究为ELISA-双酶底物循环法进一步向临床推广使用奠定了基础。

关键词： ELISA—可见光双酶底物循环 tau蛋白异常磷酸化tau蛋白阿尔茨海默病

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谷氨酸对培养的星形胶质细胞的钙活动的影响

谷氨酸对培养的星形胶质细胞的钙活动的影响

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：董其平何敬全柴真北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室

星形胶质细胞参与中枢神经系统中众多的生理及病理过程,而其钙活动在其中发挥了重要作用,如钙依赖的胶质递质释放对神经元的活性调节等。在缺血等应激条件下,星形胶质细胞的电压门控型钙通道表达上调,提示钙通道在病理过程中的作用。然... 详细信息

星形胶质细胞参与中枢神经系统中众多的生理及病理过程,而其钙活动在其中发挥了重要作用,如钙依赖的胶质递质释放对神经元的活性调节等。在缺血等应激条件下,星形胶质细胞的电压门控型钙通道表达上调,提示钙通道在病理过程中的作用。然而,对星形胶质细胞的钙活动的调控机制及其意义仍不清楚。为了揭示星形胶质细胞在中枢神经系统功能调控及在缺血致脑损伤等病理过程中所发挥的作用,我们以钙成像、电生理及分子生物学方法对星形胶质细胞的钙活动的调控进行研究。谷氨酸是参与神经元与星形胶质细胞对话的重要分子,并且介导重要的生理及病理过程。因此,我们以谷氨酸处理培养的星形胶质细胞并检测其对星形胶质细胞钙活动的影响。我们用高钾刺激使星形胶质细胞去极化,并用Fluo-4指示胞内Ca水平的变化。我们发现高钾刺激可以引发星形胶质细胞钙升高,该过程可以被Cd或无Ca的外液所阻断,而谷氨酸受体阻断剂CNQX及APV则无影响,表明此钙升高为电压门控钙通道介导的。清空星形胶质细胞内质网内钙后无可检测到的钙升高,说明由电压门控钙通道介导的外钙流入触发了内质网释放Ca。我们用谷氨酸处理星形胶质细胞后,钙升高显著增加。我们用膜片钳记录星形胶质细胞电压门控钙通道电流,发现谷氨酸或与神经元共培养诱导星形胶质细胞有功能的钙通道表达。硝苯地平可以部分阻断该电流,证明有L型钙通道与其它钙通道表达。

关键词：星形胶质细胞电压门控钙通道谷氨酸

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The genotype of p21 codon 31 polymorphism and the susceptibility of cervical carcinoma in Chinese high-incidence area

The genotype of p21 codon 31 polymorphism and the susceptibi...

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湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

Objective To study the relationship of polymorphism of p21 codon 31 and the susceptibility of cervical carcinoma in Chinese high-incidence area. Methods A case-control study was carried out. There are 44 patients with HPV positive in case group, and there are 92 non-cancer but with HPV positive women in control group. All subjects were from Wufeng county, Yichan City, Hubei Provinces of South-middle district of China, where was a famous high incidence area of cervical carcinoma. The pathologic type were all squamous carcinoma of the cervix. We analyzed leukocyte DNA of control group and tissue DNA of case group. The genotype of p21 codon 31 was analyzed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The statistic method is ÷*** The distribution of p21 genotypes was not significantly ,different in study *** We found no relationship between polymorphism at codon 31 of p21 and the squamous carcinoma of the cervix in the population from the high-incidence area of China.

关键词： HPV The genotype of p21 codon 31 polymorphism and the susceptibility of cervical carcinoma in Chinese high-incidence area

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Biochemical Characterization of N-terminus of PILB from Neisseria meningitidis reveals a thioredoxin

Biochemical Characterization of N-terminus of PILB from Neis...

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湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

作者： Wu Junzhu (Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, Wuhan University,430071)

It is unknown about N-terminus of PILB from Neisseria meningitides. We overexpressed and purified the N-terminal 33 residue truncated Domainl of PILB, namely CG33. The results showed that CG33 has a closer redox potential (-0.232V) to thioredoxins (-0.175 to -0.270V), and a similar CD spectra with *** Trxl. CG33 can reduce oxidized PILR-MsrA and PILB-MsrB by MetSO, and PILR-MsrB is better substrate to CG33 than *** thioredoxinl(CG33 vs PILB-MsrB Kin, 96.29±41.16μM, and *** thioredoxinl vs MsrB, 440±75μM). DHB4 with CG33 can grow in mini-medium without methionine, in stead of MetSO, but DHB without CG33 not. Domainl in PILB from Neisseria meningitides is one of thioredoxins.

关键词： Biochemical Characterization of N-terminus of PILB from Neisseria meningitidis reveals a thioredoxin

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缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机理研究

缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机理研究

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湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

作者：韩义香王西明段秋红卢涛何善述华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系

本研究以原代培养的小脑颗粒细胞的模拟缺血再灌注(imitative ischemia-reperfusion,IIR)模型为研究对象,进一步探讨体外模拟缺血再灌注(IIR)引起神经元凋亡的途径以及褪黑素(Melatonin,MT)对神经元凋亡的保护作用机制。本研究采用DNA... 详细信息

本研究以原代培养的小脑颗粒细胞的模拟缺血再灌注(imitative ischemia-reperfusion,IIR)模型为研究对象,进一步探讨体外模拟缺血再灌注(IIR)引起神经元凋亡的途径以及褪黑素(Melatonin,MT)对神经元凋亡的保护作用机制。本研究采用DNA凝胶电泳观察在该模型中小脑颗粒细胞的损伤是否引起凋亡以及MT能否抑制凋亡的产生;以荧光比色法检测细胞内的活性氧(reactire oxygen species,ROS)的产生;激光共聚焦显微镜及荧光比色法观察线粒体跨膜电位的变化;western-blotting及ELISA检测线粒体细胞色素C释放;比色法检测胞内caspase-3的活性,观察缺血再灌注引起的小脑颗粒细胞凋亡是否通过线粒体途径以及MT能否通过阻止线粒体凋亡保护神经元。结果显示(1)原代培养的小脑颗粒细胞在模拟缺血90分钟再灌注24h,琼脂糖凝胶电泳出现凋亡的典型生化特征-DNA梯状条带,MT能减轻DNA梯状条带的产生。(2)在再灌注卮细胞内的ROS在工IR1h内明显增加,Omin达到最高,MT能显著降低细胞内ROS的生成并存在一定的剂量依赖关系。(3)经模拟缺血再灌注处理的细胞其线粒体跨膜电位呈现先低(再灌注1h)后高(再灌注3h)再低(6h以后)的动态变化,MT可以抑制线粒体跨膜电位的降低;再灌注6h,与正常组相比OGD组线粒体细胞色素C减少,胞浆细胞色素C增加,而MT可以减少线粒体细胞色素C的释放,并呈一定的剂量依赖性:(4)细胞再灌注6h到24h,caspase-3活性随再灌注时间的延长逐渐增强,MT可以抑制caspase-3的活化,并呈一定的剂量依赖性。结论:(1)模拟缺血再灌注引起的神经元凋亡机理之一是由线粒体凋亡途径所致:(2)MT可通过抗氧化作用和阻止线粒体凋亡途径的作用因子而抑制模拟缺血再灌注诱导的小脑颗粒细胞凋亡。

关键词：小脑颗粒细胞缺血再灌注活性氧细胞色素C 褪黑素

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脑源性神经营养因子对内脏痛调节的实验研究

脑源性神经营养因子对内脏痛调节的实验研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：魏蓉高盈张建一戴茹萍李昌琪中南大学中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系中南大学湘雅二医麻醉科

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对雌、雄大鼠内脏痛的作用。方法雌、雄大鼠以腹腔注射乙酸建立内脏痛模型;在注射乙酸之前15min,大鼠腹腔注射anti-BDNF抗体,然后观察注射乙酸后60min内的行为学变化,计算内脏痛指数;行为学观察完成后... 详细信息

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对雌、雄大鼠内脏痛的作用。方法雌、雄大鼠以腹腔注射乙酸建立内脏痛模型;在注射乙酸之前15min,大鼠腹腔注射anti-BDNF抗体,然后观察注射乙酸后60min内的行为学变化,计算内脏痛指数;行为学观察完成后,大鼠立即处死,用免疫组织化学方法观察c-FOS在前扣带皮质(ACC)的表达。结果雌、雄大鼠腹腔注射乙酸后出现明显的内脏痛反应,内脏痛指数明显增加。对于雌性大鼠,腹腔注射乙酸之前给予anti-BDNF抗体可明显降低内脏痛指数;而对于雄性大鼠,腹腔注射乙酸之前给予anti-BDNF抗体可明显增加内脏痛指数。免疫组织化学染色显示,雌、雄大鼠腹腔注射乙酸后ACC内出现大量c-FOS免疫阳性产物;对于雌性大鼠,腹腔注射乙酸之前给予anti-BDNF抗体可明显降低ACC内c-FOS免疫阳性产物的数量;而对于雄性大鼠,腹腔注射乙酸之前给予anti-BDNF抗体可明显增加ACC内c-FOS免疫阳性产物的数量。结论 BDNF参与大鼠内脏痛的调节,并具有性别差异。对于雌性大鼠BDNF可能促进内脏痛反应,而对于雄性大鼠BDNF可能具有相反的作用。

关键词：内脏痛 BDNF 前扣带皮质 c-FOS 大鼠

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跨膜区段中内质网滞留/返留信号调控电压门控钠离子通道1.8在细胞膜上的表达

跨膜区段中内质网滞留/返留信号调控电压门控钠离子通道1.8在细胞...

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：李乾苏园园王浩李磊王琼鲍岚中科院生化细胞所中科院分子细胞生物学重点实验室神经元蛋白运输研究组

目的电压门控钠离子通道在动作电位产生和传播中起了很重要的作用,其亚型1.8（Nav1.8）特异分布于外周神经系统,并对神经病理性痛和炎性痛有着很重要的贡献。我们以前的研究发现Nay1.8主要定位于背根神经节神经元的细胞内,在外源转染的... 详细信息

目的电压门控钠离子通道在动作电位产生和传播中起了很重要的作用,其亚型1.8（Nav1.8）特异分布于外周神经系统,并对神经病理性痛和炎性痛有着很重要的贡献。我们以前的研究发现Nay1.8主要定位于背根神经节神经元的细胞内,在外源转染的细胞中显示Nav1.8主要定位在内质网中,而Nav1.8第一个胞内段中的一个经典的内质网滞留/返留信号RRR对其滞留在内质网中有着很重要的贡献。但是即使将RRR信号突变后,通道在细胞膜上的表达水平仅仅增加了2倍左右,暗示了在通道其它区域仍存在内质网滞留/返留信号。Nav1.8由四个相似的结构域组成,每一个结构域含有六个跨膜区段。在这个研究中,我们建立了两套筛选系统来寻找Nav1.8中跨膜区段中潜在的内质网滞留/返留信号。方法我们利用人源的转铁蛋白Ⅰ型受体（TFR1,trans-ferrin receptor 1）作为模式分子来筛选奇数跨膜段中的信号,而利用大鼠源性的CD8α受体来筛选偶数跨膜段中的信号,进而把模式分子的跨膜区段分别用Nav1.8的相应跨膜区段取代。将这些杂合分子转染到COS7细胞中,利用活细胞染色以及生物素标记细胞膜表面蛋白技术鉴定蛋白在细胞膜上表达的差异。结果（1）Nav1.8每一个结构域中的第一个和第三个跨膜区段能引起复合分子滞留在内质网中,而第二个跨膜区段同样具有此效果;（2）第一个和第三个跨膜区段中的酸性氨基酸在内质网滞留效果中起着很重要的作用,第二个跨膜区段中的带电荷氨基酸同样也起着很重要的作用。结论我们的结果表明Nav1.8在细胞膜上的表达受多个内质网滞留信号的调控。我们的研究有助于深入理解Nav1.8的转运机制和调控机制。

关键词：电压门控钠离子通道内质网滞留/返留信号跨膜区段模式分子

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三七总皂苷(TSPN)对大鼠脊髓半横断损伤后的保护作用及机制的初步研究

三七总皂苷(TSPN)对大鼠脊髓半横断损伤后的保护作用及机制的初步...

引用

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：李花赵子进潘丁陈璐瑶陈旦蔡维君罗学港中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系

目的观察TSPN对大鼠脊髓半横断损伤后的保护作用及对星形胶质细胞活化的影响。方法用眼科膜状内障剪横断大鼠T10段右侧脊髓,大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和TSPN组,术后每天腹腔注射TSPN1次,剂量20mg/kg,模型组给予等量的生理盐... 详细信息

目的观察TSPN对大鼠脊髓半横断损伤后的保护作用及对星形胶质细胞活化的影响。方法用眼科膜状内障剪横断大鼠T10段右侧脊髓,大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和TSPN组,术后每天腹腔注射TSPN1次,剂量20mg/kg,模型组给予等量的生理盐水,动物分别存活1d,3d,7d,14d和28d,各个时间点对其进行BBB评分和斜板实验检测TSPN对脊髓损伤后神经功能恢复的影响,并采用免疫组化和westernblotting方法检测脊髓不同节段以及脑内运动皮质区GFAP的表达,研究TSPN对星形胶质细胞活化的调节作用。结果大鼠T10右侧脊髓半横断后,TSPN组7d和14d的BBB评分结果明显强于模型组,两组差异具有显著性。免疫组化和western blotting结果显示模型组GFAP的表达较正常组和假手术组增强,且有明显的左右侧差异,损伤侧(右)表达强于非损伤侧(左),尤其是后索内GFAP的表达左右侧差异显著,而脑内左侧运动皮质区表达强于右侧。给予TSPN后,自1d起GFAP的这种左右侧差异表达明显减弱,两侧的GFAP表达基本无差异,但都强于正常组和假手术组。结论三七总皂苷可以明显促进大鼠脊髓半横断损伤的神经功能的恢复,而且对星形胶质细胞的活化有明显的调节作用,这可能是其促进神经损伤恢复的机制。但其对AS活化的具体调节机制还有待进一步深入研究。

关键词：脊髓半横断三七总皂苷胶质细胞 GFAP 大鼠

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Lily (Lilium longlflorum L.) pollen protoplast adhesion is increased in the presence of the peptide SCA (stigma/stylar cysteine-rich adhesin)

Lily (Lilium longlflorum L.) pollen protoplast adhesion is i...

引用

中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会

作者： Jean-Claude Mollet E.M.Lord Laboratoire de Glycobiologie et Physiologie Vegetale Facultie Jean Perrin Universite d'Artois 62307 Lens Cedes France Center for Plant Cell Biology Department of Botany and Plant Sciences University of California Riverside California 92521 USA

The style of lily produces a specialized extracellular matrix (ECM) in the transmitting tract epidermis that functions to guide pollen tubes to the ovary. This adhesive ECM contains low esterified pectins and a peptide SCA (stigma/stylar cysteine-rich adhesin). Together they form a matrix to which pollen tubes adhere as they grow through the style. Adhesion also occurs between the pollen tubes themselves when they grow in vivo, an event that does not occur in vitro. Pollen does not produce SCA, but when SCA is added to an in vitro growth medium, it binds to pollen tubes which have esterified and low-esterified pectins in their walls. The pollen partner in the adhesive interaction is not known. Here, we use a pollen protoplast system to examine the effect of SCA on protoplast adhesion when it is added to the growth medium. We found that SCA induces a two-fold increase in protoplast adhesion when it is added at the start of protoplast culture. This adhesion is more extensive than that seen in the control as measured by the length of the adhesion zone. This effect is less when SCA is added to the medium after the cell wall on the protoplast has begun to regenerate. Reformation of the wall on the pollen protoplast at 6 hours of culture was detected by Calcofluor white staining for glucans. Using MAbs to arabinogalactan proteins (AGPs) (JIM 13) and to pectins (JIMs 5,7), we were able to show that among the first components deposited in the new wall were AGPs (patchy labeling at 1-3 hours and continuous at 6 hours) and highly esterified pectins (patchy labeling at 3-6 hours and continuous at 24 hours). We saw no labeling for low esterified pectins even after 3 days of culture. This is interesting since it is the low esterified pectins from the style that bind SCA and form the adhesive matrix. In the pollen protoplast culture, adhesion occurs in the absence of the low esterified pectin. The newly formed wall on the protoplast mirrors that of the pollen tube tip in lily tha

关键词： adhesion, AGPs, LTP, pectins, pollen protoplasts, SCA

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Changes of uPA and uPA-R expression in the cornea after alkali burn

Changes of uPA and uPA-R expression in the cornea after alka...

引用

中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会

作者：严军杨恬李国平张艺曾益军杨进 Department of Cell Biology Third Military Medical University Chongqing 400038 P R China Dept.of Cell Biology Third Military Medical Univ Department of Cell Biology Third Military Medical University Chongqing 400038 P R China Department of Cell Biology Third Military Medical University Chongqing 400038 P R China Department of Cell Biology Third Military Medical University Chongqing 400038 P R China Department of Cell Biology Third Military Medical University Chongqing 400038 P R China

In order to investigate the expression levels of uPA and uPA-R in corneal repair after alkali burn, we first established the corneal alkali burn models in vitro and in vivo, then we performed immunocytochemistry(ICC) of uPA /uPA-R and image analysis and statistical evaluation to determine their expression levels both in vitro and in vivo. Compared with control group, the expressions of uPA and uPA-R after alkali burn had no significant increases till 6h,then increased rapidly from 12h to 24h and reached their maxima at 24h. From 24h their expression levels decreased rapidly. In vivo they rebounded again after 48 hours and attained their second peaks at 96h respectively. After that, their expressions decreased again. TheuPA-positive reaction mainly distributed in the cytoplasm while that of uPA-R mostly distributed on the cellular membrane. Their expression changes were similar to each other, both in vivo and in vitro. In vivo, uPA and uPA-R expressed and gathereid in the basal layer of corneal epithelium. These results suggest that the time phase of 24h after wound is the typical stage associating with the expressional maximum of uPA and uPA-R both in vivo and in vitro. Furthermore, the results also imply that the expression changes of uPA and uPA-R correlate to the wound healing after the corneal alkali burn, uPA and uPA-R coordinate with each other to stimulate the wound healing.

关键词： uPA uPA-R cornea alkali burn

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