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Standard Method for BmNPV Disease-resistant Varieties of Bombyx mori

Standard Method for BmNPV Disease-resistant Varieties of Bom...

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者： YANG QIONG XING DONDXU LI LI LI QIONGRONG JIANG LIANG XIAO YANG YE MINGQANG State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology Southwest University

Resistance assess silkworm Methods are described for assessing silkworm resistance to Bombyx mori nucleopolyhedrovirus(BmNPV) in the laboratory. Preparation of the pathogen BmNPV, the size of mulberry leaf samples, the volume of pathogen suspension, the rearing cell and the course of infection are described. Resistance to the pathogen obtained by an individual inoculation method and a group inoculation method were compared. The variance of the estimate of the incidence rate and the within-group variance showed the individual inoculation method was more precise and more reliable compared to the group inoculation method.

关键词： silkworm Bombyx mori nucleopolyhedrovirus resistance detection individual inoculation method group inoculation method

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家蚕蛾吐出液的酶活性及蛋白质种类分析

家蚕蛾吐出液的酶活性及蛋白质种类分析

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：祝元锋王赵群何宁佳冯丽春西南大学生物技术学院家蚕基因组学国家重点实验室第三军医大学第一附属医院中心实验室

家蚕蛾羽化时用口腔吐出液溶解前端茧层的丝胶及少量丝素后脱茧而出,测定吐出液中各种酶类的活性以及鉴定吐出液中的蛋白质种类,对解析家蚕羽化过程的溶茧机制具有重要意义。在家蚕羽化前解剖收集嗉囊液,在家蚕羽化时收集蛾吐出液、解... 详细信息

家蚕蛾羽化时用口腔吐出液溶解前端茧层的丝胶及少量丝素后脱茧而出,测定吐出液中各种酶类的活性以及鉴定吐出液中的蛋白质种类,对解析家蚕羽化过程的溶茧机制具有重要意义。在家蚕羽化前解剖收集嗉囊液,在家蚕羽化时收集蛾吐出液、解剖获取蛾下颚晶体,测定3组样品中的蛋白酶、酯酶、纤溶酶和丝胶酶活性:在蛾吐出液和蛾嗉囊液中皆检测到4种酶的活性,2组检测样品除蛋白酶活性接近外,酯酶、纤溶酶和丝胶酶活性则是蛾吐出液比蛾嗉囊液分别高出21%、57%和26%;下颚晶体不具有纤溶酶活性,其它3种酶的活性也皆比蛾吐出液和蛾嗉囊液低。采用液相色谱–串联质谱(LC-MS/MS)分析技术,在家蚕蛾吐出液中鉴定出29种蛋白质,其中包括14种酶类、4种蛋白酶抑制剂、5种30K蛋白、1种转运相关蛋白、2种免疫相关蛋白和3种其它蛋白质。研究结果显示了蚕蛾吐出液成分的复杂性,同时说明家蚕羽化时吐出液对丝胶和部分丝素的水解除了溶茧酶的作用外,可能还有其它成分的参与。

关键词：家蚕羽化吐出液嗉囊液下颚晶体酶活性蛋白质液相色谱–串联质谱

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基于数字基因表达谱分析家蚕子代和亲本杂种优势及差异基因表达

基于数字基因表达谱分析家蚕子代和亲本杂种优势及差异基因表达

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：王华方妍王立鹏朱文娟纪海鹏王海英徐世清司马杨虎苏州大学医学部基础医学与生物科学学院现代丝绸国家工程实验室

杂种优势是所有育种者关注的问题,但杂种优势形成的机制还不清楚。子一代F1的全部遗传物质都来自两个亲本,理论上是没有新基因产生,因此杂种优势的形成可能是由基因表达或修饰上的差异引起。家蚕是鳞翅目代表性昆虫,既是生物学研究的模... 详细信息

杂种优势是所有育种者关注的问题,但杂种优势形成的机制还不清楚。子一代F1的全部遗传物质都来自两个亲本,理论上是没有新基因产生,因此杂种优势的形成可能是由基因表达或修饰上的差异引起。家蚕是鳞翅目代表性昆虫,既是生物学研究的模式动物,也是重要的经济动物。我们以家蚕为研究对象,分雌雄构建正交(75xin×7532)、反交(7532×75xin)子代F1与原种共8个高质量的家蚕脂肪体基因差异表达文库。结果表明这些差异基因可归属为超亲表达/低亲表达/特异低于母本/特异低于父本/特异高于母本/特异高于父本/中亲型不同的表达模式,即包含了已发现的超显性、显性、加性效应等多个混合模式,也有新的归属模式。进一步研究发现有74个基因在正交组合和反交组合中的表达模式呈现一致的趋势,其中超亲表达模式的基因主要与三大物质的代谢功能和Erb B信号通路有关。差异表达模式和基因表达差异水平与蛹体重/茧层量/全茧量/茧层率多个经济性状的杂种优势率存在复杂相关性。我们的结果为研究和利用动物杂种优势机理提供了重要的参考,为在分子水平解释其机制提供依据。

关键词：家蚕杂种优势 Digit Gene Expression Profiling 差异基因

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桑树多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因MaPGIP1的克隆及功能分析

桑树多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因MaPGIP1的克隆及功能分析

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：王晓红朱攀攀梁燕梅韩淑梅赵爱春王传宏鲁成余茂德西南大学生物技术学院

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是一种特异性结合和抑制真菌内切多聚半乳糖醛酸酶(endo-PG)活性的细胞壁结合蛋白。采用RT-PCR从嘉陵40(Morus atropurpurea Roxb.)果实中扩增PGIP基因cDNA,利用生物信息学的方法分析其编码蛋白的结构和... 详细信息

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是一种特异性结合和抑制真菌内切多聚半乳糖醛酸酶(endo-PG)活性的细胞壁结合蛋白。采用RT-PCR从嘉陵40(Morus atropurpurea Roxb.)果实中扩增PGIP基因cDNA,利用生物信息学的方法分析其编码蛋白的结构和功能。结果表明,嘉陵40PGIP开放阅读框全长1017 bp,编码338个氨基酸残基,被命名为MaPGIP1。MaPGIP1蛋白分子量37.9 kD,等电点为为6.65,信号肽为N端26个氨基酸残基,具有4个潜在的N-糖基化位点。MaPGIP1蛋白的核心区域由9个串联的LRRs基序组成。原核表达产物经SDS-PAGE分析,MaPGIP1蛋白以包涵体形式出现,Western blot证实了重组蛋白的特异性,经过Ni-NTA柱纯化和分步透析复性后获得可溶性蛋白,该蛋白能部分抑制果桑肥大性菌核病菌(Ciboria shiraiana)PG(Cs PG)活性,其最适pH值为4.5～5.0,最适温度30℃。抑菌试验结果表明,MaPGIP1蛋白在果桑肥大性菌核病菌菌丝侵染油菜叶片过程中具有一定的抑制效果。

关键词：多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因 MaPGIP1 功能分析

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依赖caspase信号途径的家蚕丝腺退化延迟发育模型中30K蛋白质的合成变化

依赖caspase信号途径的家蚕丝腺退化延迟发育模型中30K蛋白质的合...

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：王永峰陈学东王欢王玉龙吴成家司马杨虎徐世清苏州大学医学部基础医学与生物科学学院现代丝绸国家工程实验室苏州大学农业生物技术与生态研究院

家蚕丝腺是高度特化的专一合成丝蛋白的器官。幼虫-蛹变态期的退化丝腺细胞中,出现了大量合成30K蛋白的功能转换。本文使用了一种家蚕后部丝腺发育突变体模型,比较其丝腺退化过程中的PCD调控信号及其30K蛋白质合成的变化。结果显示,突... 详细信息

家蚕丝腺是高度特化的专一合成丝蛋白的器官。幼虫-蛹变态期的退化丝腺细胞中,出现了大量合成30K蛋白的功能转换。本文使用了一种家蚕后部丝腺发育突变体模型,比较其丝腺退化过程中的PCD调控信号及其30K蛋白质合成的变化。结果显示,突变体在幼虫-蛹变态过程中,20-羟基蜕皮酮引发的PCD启动提前,但PCD进程缓慢,导致整个丝腺退化过程较野生型延长了约1倍。突变体丝腺细胞中Dronc调控的依赖细胞凋亡蛋白酶的通路信号显著减弱,而Atg家族调控的PCD启动信号未推迟或减弱,PCD相关的赖氨酸甲基化、乙酰化和琥珀酰化,以及酪氨酸磷酸化修饰也发生了很大变化。突变体退化过程中,即使在未检测到caspase蛋白的PP1期丝腺细胞中,也一直在高效合成30K蛋白质。家蚕丝腺的退化是一种自噬和凋亡可能都参与的PCD过程,退化进程受到依赖细胞凋亡蛋白酶的信号通路调控,伴随丝腺退化进程的30K合成可能不完全依赖于caspase信号。

关键词：组织退化蛋白质合成细胞凋亡蛋白酶依赖通路信号家蚕

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桑树ASR基因的克隆及表达特征分析

桑树ASR基因的克隆及表达特征分析

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：朱攀攀余建蔡雨翔刘长英吴文铂王传宏赵爱春鲁成余茂德西南大学生物技术学院

ASR(ABA-stress-ripening)基因家族广泛参与植物对逆境胁迫的响应过程,并对植物的生长发育及果实成熟等起着重要调控作用。根据川桑(Morus notabilis)基因组数据库中的ASR基因序列设计引物,在杂交桑品种桂桑优62的幼苗中克隆得到一个AS... 详细信息

ASR(ABA-stress-ripening)基因家族广泛参与植物对逆境胁迫的响应过程,并对植物的生长发育及果实成熟等起着重要调控作用。根据川桑(Morus notabilis)基因组数据库中的ASR基因序列设计引物,在杂交桑品种桂桑优62的幼苗中克隆得到一个ASR基因,命名为Ma ASR(Gen Bank登录号:KP636800.1)。Ma ASR编码区全长399 bp,编码132个氨基酸,蛋白质等电点5.20,分子质量32.18k D。以果叶兼用多倍体桑品种嘉陵40号不同发育成熟期的桑椹为材料,通过实时荧光定量PCR分析显示Ma ASR在果实成熟发育早期的表达量较高,在后期的表达量较低。以桂桑优62幼苗为材料进行实时荧光定量PCR分析的结果表明:Ma ASR在茎和叶中的表达量较高,在根部的表达量最低;幼苗经脱落酸(ABA)、甘露醇处理后根部的Ma ASR表达水平上调,经钨酸钠处理抑制了Ma ASR在根和叶中的表达,经蔗糖与葡萄糖处理使Ma ASR在根和叶中的表达水平上调。推测Ma ASR基因参与桑树果实发育和成熟的调控以及幼苗的生长发育,而且能够响应ABA和甘露醇以及糖类等非生物因子的诱导。

关键词： ASR 甘露醇 ABA 特征分析

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应用响应面法优化蚕体水溶性粗多糖的提取工艺条件

应用响应面法优化蚕体水溶性粗多糖的提取工艺条件

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：肖阳李庆荣杨琼邢东旭沈维治罗国庆叶明强广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所

多糖是家蚕幼虫体中富含的活性成分之一,为了建立高效的蚕体水溶性粗多糖提取工艺,以家蚕5龄第3天幼虫为材料提取水溶性粗多糖。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计对提取温度、提取时间和原料质量浓度3个因素进行中心组合试验,... 详细信息

多糖是家蚕幼虫体中富含的活性成分之一,为了建立高效的蚕体水溶性粗多糖提取工艺,以家蚕5龄第3天幼虫为材料提取水溶性粗多糖。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计对提取温度、提取时间和原料质量浓度3个因素进行中心组合试验,研究各因素交互作用及对蚕体水溶性粗多糖提取率影响,模拟得到二次回归方程。试验结果表明,提取时间和原料质量浓度双因素的交互作用对蚕体水溶性粗多糖提取率具有极显著影响,3个因素对提取率贡献大小的排序为原料质量浓度>提取时间>提取温度。确定的最优提取工艺条件为:提取温度80℃,提取时间97min,原料质量浓度37.5g/L。在此优化工艺条件下提取物中的水溶性粗多糖提取得率为3.042%,与预测值3.055%基本一致,应用Box-Behnken组合设计建立的回归模型可以用于蚕体水溶性粗多糖提取率的预测。

关键词：家蚕幼虫水溶性粗多糖 Box-Behnken组合设计提取条件提取率

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昆虫腹肢发育相关基因的研究进展

昆虫腹肢发育相关基因的研究进展

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：付明月陈鹏代方银鲁成童晓玲西南大学生物技术学院家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室

昆虫躯干外着生有一系列附属器官,主要包括背侧附器和腹侧附器,其中腹肢的多样性表现尤为突出。腹肢的发育过程受到多种调控因子的作用。本文就腹肢发育相关基因的表达、功能及调控因子间的相互作用等方面进行简要的综述。一方面,腹肢... 详细信息

昆虫躯干外着生有一系列附属器官,主要包括背侧附器和腹侧附器,其中腹肢的多样性表现尤为突出。腹肢的发育过程受到多种调控因子的作用。本文就腹肢发育相关基因的表达、功能及调控因子间的相互作用等方面进行简要的综述。一方面,腹肢作为整体受Hox基因和成形素基因（Dpp/Wg）的调控,Hox基因直接决定腹肢的有无,Dpp/Wg通过其表达产物形成浓度梯度调控整个腹肢的发育,两者在腹肢整体发育中的作用不可取代。另一方面,腹肢基部、中部及远端部位分别受到各自特异的调控因子的作用。其中hth,tsh及al等均主要调节腹肢基部的发育,dac通过与Dll和Dpp/Wg相互作用从而调节腹肢中部的发育,bab,Dll及Lim1等对腹肢远端发育发挥重要作用。关节的形成对腹肢分节的形成至关重要,Notch信号通路相关因子如配体基因Dl和Ser,修饰物基因fng及下游靶基因odd,sob,drm和bowl等调节该过程。因此,研究昆虫腹肢发育相关基因,对于深入揭示腹肢的发育及其在进化过程中多样性形成的分子机制具有至关重要的作用。

关键词：昆虫发育附器腹肢基因表达基因调控

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二氧化硅纳米颗粒对家蚕血细胞和造血功能的影响及机制

二氧化硅纳米颗粒对家蚕血细胞和造血功能的影响及机制

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：邢瑞李凯乐张允虎司马杨虎徐世清苏州大学医学部基础医学与生物科学学院现代丝绸国家工程实验室苏州大学农业生物技术与生态研究院

二氧化硅纳米颗粒(Silica nanoparticles,SiNPs)是一种被认为对体外细胞和生物体内组织无毒或毒性很低的新型量子点,并且在生物和医学领域具有诱人的应用前景,但其对动物的影响尚存争议,缺乏对组织功能的系统和深入研究。血细胞代表了... 详细信息

二氧化硅纳米颗粒(Silica nanoparticles,SiNPs)是一种被认为对体外细胞和生物体内组织无毒或毒性很低的新型量子点,并且在生物和医学领域具有诱人的应用前景,但其对动物的影响尚存争议,缺乏对组织功能的系统和深入研究。血细胞代表了一种明确研究先天免疫反应和体内DNA损伤的细胞模型,目前还未见SiNPs对造血功能影响的研究报道。本实验以无脊椎动物家蚕为模型,以背脉给药方式测定了SiNPs对血细胞和造血功能的影响。结果显示:SiNPs进入不同类型循环血细胞的能力和影响具有显著差异。SiNPs快速在循环血淋巴中具有免疫功能的颗粒细胞(Granulocyte,Gra),拟绛色细胞(Oenocytoids,Oen)和小球细胞(Spherulocytes,Sph)中富集,较难进入具有分化和补充这3类血球功能的原白血球(Prohaemocytes,Pro)。进入血球的SiNPs通过溶酶体-线粒体途径,启动细胞自噬和凋亡。高剂量的SiNPs能够弱刺hematopoietic organ中溶酶体的活动,但没有导致该组织中ROS显著增加和细胞的严重自噬和凋亡。结论是高剂量的SiNPs对造血功能可自愈的损害,与SiNPs较少进入循环血淋巴中造血干细胞,以及对造血组织的有限损伤有关。

关键词：二氧化硅纳米颗粒血球入侵造血功能危害家蚕

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利用黑寡妇蜘蛛牵引丝基因培育超强度蚕丝家蚕新品种

利用黑寡妇蜘蛛牵引丝基因培育超强度蚕丝家蚕新品种

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：钟伯雄尤征英叶露鹏钱秋杰叶小刚宋佳浙江大学

蜘蛛牵引丝具有出色的机械性能,本研究采用家蚕丝腺生物反应器获得了黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白三种不同倍数重复单元的重组蛋白1和一种重组蛋白2的复合丝纤维,研究结果表明了重组蛋白1的分子链越长,则复合丝纤维的机械性能越好,两者为极显... 详细信息

蜘蛛牵引丝具有出色的机械性能,本研究采用家蚕丝腺生物反应器获得了黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白三种不同倍数重复单元的重组蛋白1和一种重组蛋白2的复合丝纤维,研究结果表明了重组蛋白1的分子链越长,则复合丝纤维的机械性能越好,两者为极显著线性关系(p<0.01);研究还表明只包含单一种类的决定强度特性的蛋白基序的MaSp1分子构建的丝的强度,比相同蛋白链长度的、既包含决定强度特性又包含决定弹性特性的MaSp2分子的丝的强度强。结果说明一级结构中包含的各种蛋白基序是蜘蛛牵引丝能够获得优异的机械性能的一个保证,而单一种类的蛋白基序且足够长的蛋白分子链,是蛋白类丝纤维优异的机械性能的另一个不可或缺的最终的重要保证。研究已成功获得了16个转蜘蛛丝基因家蚕品系。这些品系的茧丝的机械性能显著提高,与野生型对照品种相比,转蜘蛛丝家蚕丝的应力最高提高1.719倍,应变最高提高1.345倍,杨氏模量最高提高1.576倍,韧性最高提高2.317倍。研究结果能够大幅度提升蚕丝品质,全面提升蚕桑产业的效益,促使蚕桑产业的变革。

关键词：家蚕新品种复合丝黑寡妇机械性能重组蛋白分子链牵引丝

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