本研究利用原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞和H9C2心肌细胞系观察mir-181a在缺血再灌注所诱导的心肌细胞自噬中的作用及其机制.通过缺氧10h复氧2h,体外模拟缺血再灌注损伤,实时定量PCR测定原代心肌细胞和H9C2细胞内mir-181a在缺血再灌注前后的表达变化.将H9C2细胞随机分为4组,分别转染mir-181a up(up组)、mir-181a control up(con up组)、mir-181a down(down组)和mir-181a control down(con down组)4种质粒,模拟缺血再灌注损伤后,通过倒置荧光显微镜观察转染24h和48h时细胞的转染效率,运用实时定量PCR技术测定各组在转染24h和48h时mir-181a的变化,免疫印迹法测定各组转染24h和48h时的Atg5(Atg5为mir-181a的靶基因)和LC3Ⅱ的表达变化.
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