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食品源大肠杆菌中cfr检出率及耐药情况

食品源大肠杆菌中cfr检出率及耐药情况

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：赵丽青刘小琴李伟张秀凤刘建华曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】多重耐药基因cfr可同时介导苯丙醇类、林可胺类、截短侧耳素类、链阳菌素A类和恶唑烷酮类五类抗菌药物耐药,且多次在动物及人医临床分离的革兰氏阳性菌中报道发现,在革兰氏阴性菌中的普通变形杆菌和大肠杆菌中也有零星的报道发... 详细信息

【目的】多重耐药基因cfr可同时介导苯丙醇类、林可胺类、截短侧耳素类、链阳菌素A类和恶唑烷酮类五类抗菌药物耐药,且多次在动物及人医临床分离的革兰氏阳性菌中报道发现,在革兰氏阴性菌中的普通变形杆菌和大肠杆菌中也有零星的报道发现。本文旨在调查2014年cfr在我国11个省的检出率及其耐药现状。【方法】从广东、山东、江苏、辽宁、北京、内蒙、重庆、黑龙江、河南、吉林和安徽11个省份的118个养殖场采集来自猪、鸡、鸭、鹅、牛的样品,其中鸭和鹅的样品量较少,分别为79个,12个。采用实验室常规方法分离大肠杆菌,PCR及序列分析方法检测鉴定大肠杆菌中cfr基因,琼脂二倍稀释法测定cfr阳性大肠杆菌对17种人医及兽医临床常用抗菌药的敏感性。采用PFGE分析菌株相关性。【结果】PCR共鉴定4702株大肠杆菌,检出9株携带cfr基因。总检出率为0.19%,其中广东0.36%,重庆0.97%,其他地方没有检测到。其中7株为猪源,1株鸡源,1株鹅源,检出率分别为0.3%,0.05%,8.3%。药敏结果显示,这9株菌对氯霉素、氟苯尼考、克林霉素、氨苄西林、四环素耐药,且耐药水平达到64μg/m1以上,对头孢西丁、庆大霉素、链霉素、新霉素、多西环素的耐药率在60%以上,对头孢喹肟、头孢他啶、头孢噻肟、阿米卡星、安普霉素、环丙沙星的耐药率为20%以上。对亚胺培南均表现为敏感。对比发现,广东地区β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类药物的MIC值高于重庆地区。PFGE结果显示,有2株来自于重庆的菌为克隆传播,其它均不相关。【结论】来自于广东和重庆的部分养殖场是食品源大肠杆菌的检出区。9株cfr阳性大肠杆菌对兽医临床常用抗菌药物耐药严重,用药情况可能是导致大肠杆菌中能够检出cfr的原因之一。

关键词：大肠杆菌多重耐药耐药性

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黄芪3种成分对Chang Liver细胞氧化应激的抑制作用

黄芪3种成分对Chang Liver细胞氧化应激的抑制作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李健秦韬韩林马玉芳黄一帆福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

【目的】黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素是黄芪主要药效成分,可分别作为皂苷、异黄酮苷和异黄酮类成分的代表。前期研究表明,这三种成分均具有较为显著的抗氧化作用,但其对抗肝细胞氧化应激的作用比较研究却鲜见报道。本试验选... 详细信息

【目的】黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素是黄芪主要药效成分,可分别作为皂苷、异黄酮苷和异黄酮类成分的代表。前期研究表明,这三种成分均具有较为显著的抗氧化作用,但其对抗肝细胞氧化应激的作用比较研究却鲜见报道。本试验选取Chang Liver细胞为研究对象,以H2O2建立氧化应激模型,以联苯双酯作为阳性对照药物进行验证,从内源性抗氧化体系、活性氧、CYP2E1表达等多个角度考察黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷和芒柄花素对抗氧化应激的能力,为更全面的评价黄芪抗氧化能力提供依据。【方法】以人正常肝实质细胞Chang Liver细胞为研究对象,同时选取具有明确保肝作用的联苯双酯为阳性对照药物,通过H2O2诱导氧化应激建立损伤模型进行实验。设立空白对照组、氧化应激组、黄芪甲苷组、毛蕊异黄酮葡糖苷组、芒柄花素组、阳性对照组。通过微板法、比色法检测内源性抗氧化体系相关指标,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平,分光光度法、Real-time PCR法、Western Blot法分别检测细胞肝微粒体CYP2E1的活性及其mRNA和蛋白的表达变化。【结果】从实验结果中可以看出,H2O2的诱导使ChangLiver细胞抗氧化能力降低,细胞内活性氧水平及CYP2E1表达的升高,而3种黄芪成分对细胞的预处理均可显著或极显著的改变上述氧化应激状态(与氧化应激组比,P<0.05或P<0.01),总体效果与阳性对照组药物(联苯双酯)作用相当。【结论】由此表明,3种黄芪成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷、芒柄花素)对H-2O2诱导所致Chang Liver细胞氧化应激均有显著或极显著的抑制作用,细胞的氧化损伤得到明显缓解。

关键词：黄芪 Chang Liver细胞 H2O2 氧化应激

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宠物源氟苯尼考耐药菌的筛查和确证研究

宠物源氟苯尼考耐药菌的筛查和确证研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：沈应博汪洋中国农业大学动物医学院

【目的】氟苯尼考作为20世纪90年代以来用于治疗牛、猪、禽及鱼类的细菌性疾病起到了至关重要的作用,但是并没有批准在宠物临床上使用。本研究目的在于筛查中国农业大学动物医院就诊宠物的氟苯尼考耐药菌的分离率,以及其耐药的基因表型... 详细信息

【目的】氟苯尼考作为20世纪90年代以来用于治疗牛、猪、禽及鱼类的细菌性疾病起到了至关重要的作用,但是并没有批准在宠物临床上使用。本研究目的在于筛查中国农业大学动物医院就诊宠物的氟苯尼考耐药菌的分离率,以及其耐药的基因表型。【方法】采集来中国农业大学动物医院就诊的宠物鼻腔拭子、肛门拭子以及创口拭子,在含8ug/ml氟苯尼考的BHI培养基上筛选耐药菌株。氟苯尼考耐药菌用微量肉汤稀释法测其对氟苯尼考的MIC值。提取耐药菌基因组通过PCR检测其是否含有已知氟苯尼考耐药基因(floR、fexA、fexB、cfr)。【结果】2012年3月至6月期间从中国农业大学动物医院182只宠物(猫、狗)共计286个鼻腔拭子、肛门拭子、创口拭子中,从49只宠物(26.9%)中分离到68株耐氟苯尼考菌株,包括61株(89.7%)革兰氏阴性菌和7株(10.3%)革兰氏阳性菌。60株(88.2%)MIC值≥16,其中45株(66.2%)MIC值≥128。61株革兰氏阴性菌中检测到60株(98.4%)含有floR基因,7株革兰氏阳性菌中检测到4株(57.1%)含有fexA基因,1株(14.3%)含有fexB基因,3株(4.4%)不含有任何已知floR、fexA、fexB、cfr基因。【结论】可见在宠物临床没有批准使用氟苯尼考的情况下,还是出现了较高的耐药菌株分离率(23.8%),并且大部分表现出了很高的耐药表型(MIC≥128)。通过基因型的鉴定,发现3株没有含已知耐药基因的菌株,可能存在其他的新耐药机制。同时未检测出多重耐药基因cfr。但是宠物源细菌表现出的严重的氟苯尼考耐药性值得大家的关注,对于宠物临床的合理用药,病原菌耐药性的监测,以及宠物与主人之间耐药菌的互相传播都是一个警醒。

关键词：宠物氟苯尼考

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沙咪珠利在大鼠血浆中UPLC-MS分析方法及其毒代动力学研究

沙咪珠利在大鼠血浆中UPLC-MS分析方法及其毒代动力学研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：赵娟张可煜薛飞群费陈忠张丽芳王霄旸王米郑文丽肖隧中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫病学重点开放实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室

[目的]为通过毒代动力学评价新药沙咪珠利的安全性,建立了UPLC-MS法监测30天亚慢毒性实验大鼠血浆中沙咪珠利的血药浓度。UPLC条件:色谱柱:ACQUITY UPLC(?)BEHC18柱;流动相:A1相:乙腈;B1相:0.1%甲酸水,流速:0.3ml/min,进样量:3μl;柱温... 详细信息

[目的]为通过毒代动力学评价新药沙咪珠利的安全性,建立了UPLC-MS法监测30天亚慢毒性实验大鼠血浆中沙咪珠利的血药浓度。UPLC条件:色谱柱:ACQUITY UPLC(?)BEHC18柱;流动相:A1相:乙腈;B1相:0.1%甲酸水,流速:0.3ml/min,进样量:3μl;柱温:30℃。MS条件:电喷雾离子源,负离子电离模式,进行选择离子扫描(SIR)检测。分别以120、60、20、5 mg/kg沙咪珠利4个剂量的饲料饲喂SD大鼠30天,并在给药的第1、2、3、4和第27、28、29及恢复期的第7天采集血液,每天的采集时间点分别为7:00、10:00、16:00、20:00,测定其血药浓度。[结果]:沙咪珠利血药浓度线性范围为0.1-100μg/ml,最低定量限为0.1μg/ml;日内和日间精密度良好,RSD均小于10%,准确度均在15%以内。所测沙咪珠利血药浓度与给药剂量成正相关,雄性大鼠在第4天药物浓度达到稳定,各剂量组大鼠平均血药稳态浓度分别为65.97±8.31、30.88±-4.09、11.37±-2.77、2.70±0.63μg/ml;雌性大鼠的在第3天药物浓度达到稳定,各剂量组大鼠平均血药稳态浓度分别为43.15±5.39、24.10±5.34、6.3±1.55、1.67±0.44μg/ml。但停药后即在恢复的第7天,除高剂量组血液尚能检测到药物外其它的各剂量组均已低于检测限。

关键词：沙咪珠利 UPLC-MS 稳态浓度毒代动力学大鼠血浆

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在2008-2014年间中国食品动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的流行趋势

在2008-2014年间中国食品动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的流...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王爽吴聪明汪洋何涛林居纯四川农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院

产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌是对普通的β-内酰胺类抗生素(像氨苄西林,头孢唑林,头孢噻呋等)耐药的大肠杆菌,不但对兽医临床用药的有效性产生直接的影响,而且对食品安全性,人类用药有效性也存在巨大的隐患。(目的)本次研究着重调查国... 详细信息

产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌是对普通的β-内酰胺类抗生素(像氨苄西林,头孢唑林,头孢噻呋等)耐药的大肠杆菌,不但对兽医临床用药的有效性产生直接的影响,而且对食品安全性,人类用药有效性也存在巨大的隐患。(目的)本次研究着重调查国内10个省份(广州,上海,四川,山东,内蒙,河南,安徽,重庆,湖南,山西)猪源和鸡源大肠杆菌在2008年-2014年间产超广谱β-内酰胺酶的流行趋势。(方法)用16种抗生素(氨苄西林,阿莫西林,阿莫西林+克拉维酸,头孢唑林,多西环素,氟苯尼考,庆大霉素,环丙沙星,复方磺胺,多粘菌素E,萘啶酸,头孢噻呋,头孢噻肟,头孢他啶,头孢喹肟,美罗培南)测定产超广谱β-内酰胺酶的阳性菌株的耐药情况,PCR测定其携带的基因型,PFGE及肉汤结合法判定其传播特性。(结果)在1084株大肠杆菌中有397株确定为产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌,在年份中呈升高趋势。在16种抗生素测试中,6种呈现高度耐药(氨苄西林,多西环素,阿莫西林,萘啶酸,头孢噻呋和复方新诺明),2012年后耐药率均达到100%,除美罗培南在外,对其他抗生素也呈现出不同程度的耐药。在本次调查中,BlaCTX-M基因型为最流行的基因型,共检测出12种BlaCTX-M基因型,其中BlaCTX-M-55占41.55%,BlaCTX-M-65占22.44%,BlaCTX-M14占18.56%,9.32%的阳性菌株检测出含有AMPc基因,对于产超广谱β-内酰胺酶的阳性菌株,同源性不明显,但有46.67%的含多重耐药基因的阳性菌株成功的将耐药基因转移给受体,且受体耐药性有明显增强。(结论)国内产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌比例在不断升高,其耐各种抗生素情况也愈发严重,多重耐药性及传播特点不容小觑,整顿兽药市场,规范兽医临床用药,实时监测耐药趋势势在必行。

关键词：产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌动物源流行趋势

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氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：谢三磊谢洁裴星瑶王旗陈敏江海洋中国农业大学动物医学院基础兽医系

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度... 详细信息

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度后,采取RT-PCR扩增出336 bp的VH基因和357 bp的VL基因;通过在引物上设计linker序列,引入(Gly4Ser)3柔性短肽,拼接出完整scFV基因序列。再次设计引物在单链抗体C端添加C-myc标签和6×His标签便于后续免疫学检测和蛋白纯化。将测序结果正确的scFv基因克隆在表达载体pJB33,转入感受态细胞*** RV308进行可溶性表达鉴定。使用可溶性表达蛋白周质腔提取和包涵体纯化两种方法对得到的单链抗体进行纯化,采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA分析两种纯化方法单链抗体表达水平、特异性及与抗原结合活性。【结果】结果显示,本实验成功从分泌抗氯霉素的单克隆抗体杂交瘤细胞2E4中PCR扩增出抗体的重链和轻链可变区基因,成功构建抗氯霉素单链抗体,单链抗体基因全长819 bp,编码约273个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,氯霉素scFv基因在大肠杆菌中表达出30KD左右的抗体,但包涵体纯化方法得到的抗体纯度较高。间接ELISA结果表明,周质腔提取和包涵体纯化得到的单链抗体与氯霉素结合活性相差不大。【结论】成功制备出抗氯霉素药物单链抗体,周质腔提取方法能在较短时间内得到活性较好氯霉素单链抗体,包涵体纯化方法得到纯度较高、活性较好的单链抗体。为进一步研究氯霉素残留检测奠定实验基础。

关键词：氯霉素单链抗体可溶性表达纯化

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10%磷酸替米考星可溶性粉在鸡体内残留消除研究

10%磷酸替米考星可溶性粉在鸡体内残留消除研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：吴天兴施景灏冯全利陆小松刘芳卜仕金扬州大学兽医学院中国农业科学院家禽研究所

【目的】通过对10%磷酸替米考星可溶性粉在鸡体内残留消除研究,了解替米考星在鸡体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】鸡可食性组织中替米考星残留采用乙腈提取,C18固相萃取小柱净化,HPLC紫外检测器检测,外标法定量。流动... 详细信息

【目的】通过对10%磷酸替米考星可溶性粉在鸡体内残留消除研究,了解替米考星在鸡体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】鸡可食性组织中替米考星残留采用乙腈提取,C18固相萃取小柱净化,HPLC紫外检测器检测,外标法定量。流动相为乙腈-四氢呋喃-二丁胺磷酸盐缓冲液-水溶液。替米考星在0.05～50μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系,鸡各可食性组织中替米考星在0.05、0.5和5μg/g添加浓度时,回收率在80%00%之间,检测限为0.025μg/g,定量限为0.050μg/g。磷酸替米考星可溶性粉以75mg/L,（以替米考星计）剂量混饮,连用3天,分别于停药后第1d、4d、7d、10 d和13d各屠宰6只鸡采集其可食性组织,采用经验证的鸡可食性组织中替米考星残留量检测方法测定用药后鸡各可食性组织中替米考星的残留量。将替米考星在鸡各组织中残留量检测的实测数据采用WT1.4计算软件拟合计算休药期。【结果】替米考星在肝脏中残留最高,其次是肾脏,而肌肉和皮脂中残留较低。将替米考星在鸡各组织中残留量检测的实测数据采用WT1.4计算软件拟合,得到替米考星在肝脏、肾脏、皮脂和肌肉组织的休药期分别为13.10、13.54、7.32和8.59 d。按双单侧95%置信区间计算替米考星按推荐方案混饮给药建议在鸡的休药期可暂定为14d。【结论】10%磷酸替米考星可溶性粉按推荐方案给鸡混饮,连用3天,建议休药期为14d。

关键词：替米考星高效液相色谱残留消除鸡休药期

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一种新型抗菌脂肽的分离、鉴定与生物学特性研究

一种新型抗菌脂肽的分离、鉴定与生物学特性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘源朱奎崔一芳刘晓晔丁双阳中国农业大学动物医学院

【目的】抗菌脂肽是一种细菌的次级代谢产物,该种脂肽并不是通过以mRNA为模板和以tRNA为运输载体的转录和翻译过程进行合成和加工,而是主要通过非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetases,NRPSs）来合成和修饰。近年来由于... 详细信息

【目的】抗菌脂肽是一种细菌的次级代谢产物,该种脂肽并不是通过以mRNA为模板和以tRNA为运输载体的转录和翻译过程进行合成和加工,而是主要通过非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetases,NRPSs）来合成和修饰。近年来由于细菌耐药性越来越严重,抗菌脂肽作为一种新型的抗菌物质受到越来越多的重视。本研究旨在对一株枯草芽孢杆菌产生的抗菌脂肽进行分离纯化、鉴定并对其生物学特性进行初步研究。【方法与结果】本试验中通过甲醇提取,Sephadex LH-20凝胶过滤层析和C18反向高效液相色谱分离技术,一种枯草芽孢杆菌产生的新型抗菌脂肽被分离纯化得到。傅里叶红外光谱测定表明该类物质含有氨基酸和酰胺键的特征吸收峰,为多肽类物质。超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的一级质谱扫描表明该种抗菌脂肽的分子量为1036.7Da。分子离子峰的二级质谱扫描结合氨基酸组成分析发现该种脂肽由14个C的β-羟基脂肪酸链和7个氨基酸连接而成。抑菌试验表明该种脂肽对革兰氏阳性菌有很强的抗菌作用,尤其对致病菌金黄色葡萄球菌。值得注意的针对携带mecA基因的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,该种脂肽的抗菌能力保持不变。生物学特性研究表明该种脂肽可以在80以下和PH=4-8之间能完全保持其生物活性,但是该种脂肽对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶较为敏感,对胃蛋白酶和蛋白酶K不敏感。【结论】这些结果表明在食品工业和动物性疾病防治领域,这种新型的抗菌脂肽可能对于控制和抑制致病菌金黄色葡萄球菌可以起到较好的效果。

关键词：抗菌脂肽分离鉴定生物活性

来源：评论

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槲皮素通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细胞的氧化应激及遗传毒性

槲皮素通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：代重山李道稳汤树生周延赵科娜肖希龙中国农业大学动物医学院

【目的】本文旨在探究MAPK信号通路及Nrf2信号通路在喹烯酮细胞毒性中的作用及槲皮素的保护作用。【方法】以人正常肝细胞L02细胞为研究对象,在喹烯酮暴露L02细胞前预处理不同浓度槲皮素2 h,检测DNA损伤及氧化应激损伤情况,并进一步通... 详细信息

【目的】本文旨在探究MAPK信号通路及Nrf2信号通路在喹烯酮细胞毒性中的作用及槲皮素的保护作用。【方法】以人正常肝细胞L02细胞为研究对象,在喹烯酮暴露L02细胞前预处理不同浓度槲皮素2 h,检测DNA损伤及氧化应激损伤情况,并进一步通过使用MAPKs家族抑制剂SB203580(p38抑制剂)、PD98059(ERK抑制剂)、SP60025(JNK抑制剂)单独或联合槲皮素预处理,检测对喹烯酮诱导的L02细胞的凋亡的影响。【结果】结果证实,不同浓度(0,2,4,8,12μg/mL)喹烯酮处理24h后,线粒体功能失调(线粒体膜电位下降)、细胞凋亡呈剂量依赖性增加趋势,同时可导致磷酸化(p)-JNK,p-p38,p-ERK,Nrf2,HO-1表现出先增加后降低的动态变化趋势,但均显著高于对照组;预处理槲皮素(15、30μM)后,可明显改善喹烯酮(4、8、12μg/mL)诱导的细胞凋亡及线粒体膜电位的下降,并可明显降低喹烯酮诱导的氧化应激、DNA损伤及微核率,且较喹烯酮处理组相比,槲皮素预处理进一步可在不同程度上激活(p)-JNK,p-p38,p-ERK,nrf2,HO-1表达;预处理SB203580、PD98059、SP60025可在不同程度上加剧喹烯酮诱导的凋亡,同时明显抑制了槲皮素诱导的Nrf2、HO-1的激活,从而抑制了槲皮素的保护作用。【结论】MAPKs及Nrf2信号通路在喹烯酮诱导的氧化应激及DNA损伤过程中扮演者保护角色,槲皮素可通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细胞的氧化应激及遗传毒性。

关键词：槲皮素喹烯酮氧化应激遗传毒性 MAPKs信号通路 Nrf2/HO-1信号通路

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蜡样芽胞杆菌非溶血性肠毒素致细胞毒性的分子机制研究

蜡样芽胞杆菌非溶血性肠毒素致细胞毒性的分子机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘晓晔朱奎崔一芳丁双阳中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心 Institute of Food Safety Department of Veterinary SciencesLudwig-Maximilians-University Munich

蜡样芽胞杆菌引发的食物中毒包括呕吐和腹泻两种类型,不仅对畜牧业造成严重的经济损失,对人类的健康也存在着安全隐患。非溶血型肠毒素(non haemolytic enterotoxin,Nhe)是蜡样芽胞杆菌致腹泻的毒力因子。Nhe是一种包含三种组分(NheA(41... 详细信息

蜡样芽胞杆菌引发的食物中毒包括呕吐和腹泻两种类型,不仅对畜牧业造成严重的经济损失,对人类的健康也存在着安全隐患。非溶血型肠毒素(non haemolytic enterotoxin,Nhe)是蜡样芽胞杆菌致腹泻的毒力因子。Nhe是一种包含三种组分(NheA(41.0kDa),NheB(39.8 kDa),andNheC(36.5kDa)的毒素,它对细胞膜有损伤作用,但是Nhe对细胞内的毒性作用还不清楚,其致腹泻及肠炎的机制还不完善。【目的】为了研究Nhe对Vero细胞的胞内毒性机制,【方法】通过WST-1细胞毒性试验发现不同稀释度下的Nhe对Vero等上皮类细胞毒性较大,IC50达到1:2000的稀释度。DNA Ladder实验结果表明1:100和1:500稀释度的Nhe使Vero细胞DNA片段化;Hoechst 33342免疫荧光实验发现毒素诱导的Vero细胞核有凋亡所特有的致密浓染;流式细胞术(Annexin-V和PI染色)发现1:500稀释度下的Nhe诱导Vero细胞的凋亡率达到43.3%,而无毒素作用的凋亡阴性对照以及0.1μM星形孢菌素(Staurosporine,STAU)的凋亡阳性对照的凋亡率分别是5.73%和33.3%;与此同时,发现ZVAD-fmk(caspase酶抑制剂)能减少Nhe诱导的细胞凋亡,表明Nhe诱导的Vero细胞凋亡可能通过是caspase依赖途径。通过Western blot分析发现凋亡蛋白caspase-3,caspase-8,和caspase-9均随Nhe浓度的提高而不同程度的激活,进一步证实Nhe诱导的Vero细胞凋亡是通过外源性和内源性(线粒体依赖)凋亡通路同时激活的。【结论】综上,Nhe诱导Vero细胞凋亡通过内源性和外源性的凋亡途径,阐明了Nhe致细胞毒性的机制,进一步揭示蜡样芽胞杆菌致腹泻的病理机制,从而为临床用药提供理论依据。

关键词：蜡样芽胞杆菌非溶血性肠毒素细胞毒性细胞凋亡

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