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作者

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PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性

PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈新黄世乐江善祥南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室 Department of Biochemistry and Molecular Biology Louisiana State University Health Sciences CenterShreveportLouisianaUnitedStates of America

本研究旨在探讨PP5/JNK/c-Jun通路在马度米星铵(maduramicin ammonium)所致C2C12骨骼肌细胞毒性中的作用。不同浓度马度米星铵(1～1μg/mL)处理C2C12细胞24h,Westernblot检测MAPK通路相关蛋白和蛋白磷酸酶的表达量;腺病毒干扰表达显性失... 详细信息

本研究旨在探讨PP5/JNK/c-Jun通路在马度米星铵(maduramicin ammonium)所致C2C12骨骼肌细胞毒性中的作用。不同浓度马度米星铵(1～1μg/mL)处理C2C12细胞24h,Westernblot检测MAPK通路相关蛋白和蛋白磷酸酶的表达量;腺病毒干扰表达显性失活c-Jun或过表达PP5,0.5μg/mL和1μg/mL马度米星铵处理C2C12细胞24h或48h,Western blot检测相关蛋白的表达量,显微镜下观察细胞形态的变化并拍照,One solution法检测细胞活性;JNK抑制剂SP600125预处理1 h,0.5μg/mL和1μg/mL马度米星铵处理C2C12细胞48 h,显微镜下观察细胞形态的变化并拍照,One solution法检测细胞活性。结果表明,马度米星铵处理24h后,C2C12细胞中p-JNK、p-c-Jun蛋白水平升高,PP5蛋白水平降低;腺病毒干扰表达显性失活c-Jun可削弱马度米星铵对C2C12细胞的细胞毒性;过表达PP5可削弱马度米星铵对JNK和c-Jun蛋白磷酸化的激活及细胞毒性;SP600125预处理可削弱马度米星铵的细胞毒性。结果提示,马度米星铵抑制C2C12细胞PP5蛋白表达,使JNK和c-Jun磷酸化水平升高,PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性。

关键词：马度米星铵 PP5 JNK c-Jun 毒性

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热熔挤出技术提高氟苯尼考溶出速率的研究

热熔挤出技术提高氟苯尼考溶出速率的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：彭健波聂海英滕文珠梁正敏杨善忠何家康广西大学动物科学技术学院广西兽药制剂工程技术研究中心

【目的】氟苯尼考(Florfenicol,FLO)口服临床推荐使用剂量为20-30mg/kg,单次最高剂量强度很大,根据生物药剂学分类系统(BCS),该药应属于Ⅱ类(低溶解性一高渗透性),在这种情况下,药物在胃肠道可能因溶解不完全而影响吸收,进而影响生物利... 详细信息

【目的】氟苯尼考(Florfenicol,FLO)口服临床推荐使用剂量为20-30mg/kg,单次最高剂量强度很大,根据生物药剂学分类系统(BCS),该药应属于Ⅱ类(低溶解性一高渗透性),在这种情况下,药物在胃肠道可能因溶解不完全而影响吸收,进而影响生物利用度。本研究旨在制备增溶性FLO固体分散体,提高药物的体外溶出速率。【方法】以Plasdone S630为载体,采用热熔挤出法制备FLO固体分散体并考察载体的增溶效果,用差示扫描量热法(DSC)和x射线粉末衍射法(PXRD)对固体分散体进行表征。【结果】(1)表征结果:①Dsc图谱表明,FLO-Plasdone S630物理混合物中,药物FLO的结晶峰发生了轻微的左移(由156℃移至153℃),同时变宽和减弱,可能与FLO和载体Plasdone S630混溶性较好有关;而经过融熔挤出后制得的固体分散体在156℃的特征融熔峰全部消失,热重图谱主要保留Plasdone S630特征性图谱,提示药物是以无定形态分散于载体中;②PXRD图谱表明,在FLO-Plasdone S630物理混合物中,几乎检测到所有的药物结晶峰,但强度有所下降。在热熔挤出固体分散体中,未见有药物的结晶峰,结合DSC的结果,表明Plasdone S630已成为玻璃态固态溶液,药物以分子状态分散于载体中。(2)平衡溶解度:与原料药相比较,固体分散体中药物的平衡溶解度提高了3.8倍;(3)体外释放度:固体分散体中药物在水中20 min溶出72.27%,30 min达到95.21%,而物理混合物的溶出分别为29.12%和47.58%,表明制成固体分散体后药物的溶出速率大大提高。【结论】热熔挤出技术制备的氟苯尼考固体分散体提高了药物的溶出速率。

关键词：氟苯尼考热熔挤出技术固体分散体溶出速率

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比较基因组学鉴定猪链球菌新型多重耐药基因嵌合元件

比较基因组学鉴定猪链球菌新型多重耐药基因嵌合元件

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄金虎梁园王丽平南京农业大学动物医学院

(目的)本研究旨在分析猪链球菌的基本遗传特征,鉴定介导多重耐药猪链球菌的可转移遗传元件,为研究其水平转移规律和进化路径提供参考。(方法)通过对临床分离的猪链球菌进行全基因组测序,采用比较基因组学方法,分析其基因组成,鉴定基因... 详细信息

(目的)本研究旨在分析猪链球菌的基本遗传特征,鉴定介导多重耐药猪链球菌的可转移遗传元件,为研究其水平转移规律和进化路径提供参考。(方法)通过对临床分离的猪链球菌进行全基因组测序,采用比较基因组学方法,分析其基因组成,鉴定基因组上的可转移遗传元件,分析其与耐药基因水平传播的关系。(结果)猪链球菌临床败血症病猪分离株YY060816基因组草图由73个contig组成,大小为2,088,157 bp,GC含量为41.1%。在2,097个预测的基因中,2,055个预测编码蛋白;其中1,500个(71.53%)可进行COG功能分类;在356个(17%)移动基因中,绝大部分来源于质粒(69.7%)和原噬菌体(27.5%),基因组合有一个由tet(O)-carrying ICESsu05ZYH33(89K)-like ICE和mef(A)-carryingΦm46.1-like prophage组成的嵌合基因组岛,该基因组岛整合入rum的3'端特异性整合位点CACATAGAAGTTGT;比较菌株SC070731和YY060816的127K表明,该基因组岛可能是由89K-like ICEs部分整合入原噬菌体部分的左侧或右侧的att位点嵌合合成,并可能保持其环化和切除能力;MIC结果显示127K基因组岛介导了包括四环素类和大环内酯类在内的多重耐药。(结论)猪链球菌YY060816基因组中17%的基因为移动基因,提示基因的转移在该类细菌中极为常见;127K是由tet(O)-carrying ICESsu05ZYH33(89K)-like ICE和mef(A)-carryingΦm46.l-like prophage嵌合而成的新型多药耐药嵌合元件,介导了猪链球菌对包括四环素类和大环内酯类在内的药物的多重耐药性。

关键词：猪链球菌多重耐药比较基因组学嵌合元件 ICEs 原噬菌体

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1,8-桉油素体外杀螨活性及其作用机理研究

1,8-桉油素体外杀螨活性及其作用机理研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：胡志强陈振振殷中琼四川农业大学动物医学院天然药物研究中心

【目的】研究1,8-桉油素的体外杀螨作用及其作用机制。方法以除虫菊酯和伊维菌素为对照,采用浸杀方式测定1,8-桉油素对兔疥螨幼虫的离体杀螨活性,并测定其杀螨的半数致死浓度(Median lethal concentraton,LC)和半数致死时间(Median leth... 详细信息

【目的】研究1,8-桉油素的体外杀螨作用及其作用机制。方法以除虫菊酯和伊维菌素为对照,采用浸杀方式测定1,8-桉油素对兔疥螨幼虫的离体杀螨活性,并测定其杀螨的半数致死浓度(Median lethal concentraton,LC)和半数致死时间(Median lethal time,LT)。透射电子显微镜下观察药物对螨虫皮层和实质损伤等情况,初步确定其作用部位和作用形式;进而再测定其对虫体内的保护酶、解毒酶及神经传递影响酶等的影响,确定其作用靶标。【结果】研究结果表明:在药物浓度为100%、10.00%、5.00%、2.50%、1.25%和0.68%时,1,8-桉油素的起效时间为1.00min、30.00min、60.00min、180.00min、300.00min、600.00min,全部死亡时间分别为2.00 min、720.00min、960.00min、1080.00min、1260.00min和1440.00mjn。500 mg/mL除虫菊酯起效时间和全部死亡时间分别为130.00min、825.00 min;20 mg/mL伊维菌素起效时间和全部死亡时间30.00 min、125.00 min。1,8-桉油素在试验24h时的LC为3.01%,LT为3.606h。电镜下,螨虫虫体真皮细胞和体腔细胞细胞膜和核膜溶解、破坏,核染色质消溶;线粒体内脊紊乱脱落,严重者空泡化。通过对各类酶活性的测量发现,1,8-桉油素对疥螨体内具有保护作用的超氧化物歧化酶（SOD）具有轻微的促进作用,能够激活虫体的自我保护系统;对虫体具有解毒作用的谷胱甘肽-S转移酶（GST）、跟神经传递有关的单胺氧化酶（MAO）均具有促进作用,而对乙酰胆碱酯酶（Ache）具有抑制作用;对反映神经变化的一氧化氮合酶（NOS）呈现高浓度抑制,低浓度促进的作用。【结论】桉油具有高效的体外杀螨活性,主要影响与疥螨神经系统有关的各种酶,从而导致虫体快速死亡。

关键词： 1,8-桉油素疥螨杀螨活性电镜酶活性

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猪黄嘌呤氧化还原酶还原代谢喹赛多的机理研究

猪黄嘌呤氧化还原酶还原代谢喹赛多的机理研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：程古月陈持纲郝海红戴梦红王旭黄玲利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)

黄嘌呤氧化还原酶（XOR）是一种存在于细胞浆的含钼蛋白,催化内源性的嘌呤和外源化合物的代谢。前期研究表明猪肝细胞中的XOR可以催化喹噁啉1,4-二-N-氧化物（QdNOs）的N-O基团的还原。为了探索该催化过程的分子机理,本研究克隆了猪XOR... 详细信息

黄嘌呤氧化还原酶（XOR）是一种存在于细胞浆的含钼蛋白,催化内源性的嘌呤和外源化合物的代谢。前期研究表明猪肝细胞中的XOR可以催化喹噁啉1,4-二-N-氧化物（QdNOs）的N-O基团的还原。为了探索该催化过程的分子机理,本研究克隆了猪XOR的cDNA并在杆状病毒-Sf9昆虫细胞中进行表达。以牛XOR的晶体结构为模板（氨基酸序列同源性为91%）,利用同源建模技术构建了猪XOR的三维结构。通过分子对接技术,筛选出猪XOR还原喹赛多的关键氨基酸残基。通过定点诱变技术和酶动力学分析,探究关键氨基酸残基的功能。结果显示Gly47、Asn352、Ser360、Arg427、Asp430、Asp431、Ser1227和Lys1230与喹赛多的距离小于4A。与野生型猪XOR相比,G47A、S360P、D431A、S1227A和K1230A在喹赛多还原代谢中的酶动力学参数发生改变,其变化趋势与黄嘌呤的氧化代谢一致,说明这些氨基酸影响了黄嘌呤的供电子过程,从而影响了喹赛多最后接受电子完成N-O基团的还原过程。与此不同的是,位于424-434环的R427E和D430H在喹赛多还原过程中分别展现较低的K值和较低的V值,表明Arg427可能与底物结合有关,Asp43可能与电子传递有关。本研究首次揭示了猪XOR还原代谢喹赛多的催化机制,为今后研究XOR还原外源二氮氧化物中的结构功能关系提供新思路。

关键词：黄嘌呤氧化还原酶喹赛多同源建模分子对接

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养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄婷孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到... 详细信息

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到遗传、生理阶段、生活、饮食等影响。但是,在生产养殖中,不同生理阶段的猪以及与其长期接触的饲养员的肠道微生物多样性及相关性等方面仍然不甚明了,因此本研究拟开展猪与饲养员中肠道微生物菌群的多样性,以期获得它们之间的相关性。(方法)本实验室采集了育肥猪、哺乳母猪、种猪三种不同生产阶段的猪以及长期与其接触的饲养员的粪便样品,每组样品取六个平行样,利用试剂盒提取总DNA,进行16S rDNA测序,分析每个样品的微生物多样性,并进一步比较分析各个样品的微生物多样性结果,以此探讨不同生产阶段的猪和相关饲养员的肠道微生物多样性的相关性。(结果)研究结果初步显示,从多样性角度来看,不同生产阶段的猪和人的微生物组成是有明显差异的,猪肠道菌群种属丰富度高于饲养员肠道菌群;在饲养员中高丰度的主要有拟杆菌和厚壁杆菌,在猪中高丰度的主要有肠球菌、链球菌以及密螺旋体等,这些也是猪中常见的致病菌;同时在不同生产阶段的猪中发现了甲烷短杆菌——一种动物肠道中能量代谢的重要细菌以及琥珀酸弧菌在猪肠道中也比较多;猪与人之间的微生物差异也与之前文章报道吻合。(结论)人畜肠道微生物多样性之间存着紧密而有复杂的联系,深入研究两者之间的相关性是非常有必要的。

关键词：肠道微生物 16S rDNA 多样性

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猪毛发中8种同化激素的残留检测与甲睾酮蓄积性初步研究

猪毛发中8种同化激素的残留检测与甲睾酮蓄积性初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李艳芹赖丽虹王琴周巧仪余鹏灵蒋攀文方炳虎华南农业大学兽医学院兽医药理毒理研究室

【目的】同化激素是由天然来源的雄性激素经结构改造而得到的半合成激素类药物。由于它可以促进细胞的生长与分化,使肌肉扩增,提高饲料转化率,因此被一些不法分子违规添加到食品动物的饲养过程。本研究建立了群勃龙、宝丹酮、甲睾酮、... 详细信息

【目的】同化激素是由天然来源的雄性激素经结构改造而得到的半合成激素类药物。由于它可以促进细胞的生长与分化,使肌肉扩增,提高饲料转化率,因此被一些不法分子违规添加到食品动物的饲养过程。本研究建立了群勃龙、宝丹酮、甲睾酮、睾酮、群勃龙醋酸酯、苯丙酸诺龙、炔诺酮、诺龙等8种同化激素在猪毛发中的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）残留检测方法,并对甲睾酮在猪毛发中的蓄积性进行了初步研究,以期为临床监控同化激素的违规使用提供新的技术和方法。【方法】毛发样品经TCEP过夜消化、叔丁基甲醚提取后,提取液在37℃下氮气吹干;用1ml乙腈和4ml水复溶,复溶液上C18固相萃取小柱,用10%甲醇淋洗、2ml乙腈洗脱;洗脱液再次吹干之后用1ml流动相（0.1%甲酸水和乙腈溶液）复溶,液相色谱串联质谱分析。【结果】猪毛发中8中激素的检测限为0.03μg/L.3μg/L,定量限为0.075μg/Lμg/L;在LOQ00μg/L的添加范围内,相关系数大于0.99;低中高三个浓度水平的提取回收率为83.0%12.7%,批内变异系数为0.96%.40%,批间变异系数为1.95%.58%。甲睾酮在连续饲喂30天、停药30天后还能检测到至少3.48ng/g的药物含量,且在试验期间随着时间的延长,毛发中的药物含量呈现先上升后下降的趋势。而同样的情况下,在停药后第2天血浆中就检测不到甲睾酮的存在。【结论】本研究首次建立了8种同化激素在猪毛发中的残留分析方法,分析了给药期间以及停药后甲睾酮在猪毛发中的蓄积及消除规律,为临床监控同化激素的违规使用提供了新的技术和手段。

关键词：猪同化激素残留检测液相色谱串联质谱毛发

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金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张一鸣王勉之孙静孙永学华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全性评价重点实验室

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法... 详细信息

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法制备金霉素-蒙脱石缓释微球,并以正交实验设计对工艺进行优化。在体外释放研究中,以模拟胃肠液为释放介质,按照转篮法进行缓释微球和饲用金霉素的体外释放试验,采用高效液相色谱法（HPLC）测定金霉素累积释药量。在体内释放率研究中,选用6头健康断奶仔猪,按2周期2交叉设计原则,口服10%金霉素-蒙脱石缓释微球和20%饲用金霉素,给药剂量为10mg/kg b.w。给药后不同时间点采集仔猪血液和收集粪便,并对样品中金霉素含量进行HPLC法测定。（结果）研究结果:表明,最佳工艺制备的微球形态规整,粒径均匀,载药量为10%左右,包封率为82.58%。体外释放研究结果表明,相对于饲用金霉素,金霉素缓释微球在低pH值难以释放,高pn值时缓慢释放。血浆含量检测结果表明,在稳态水平下,金霉素缓释微球的血药浓度均在0.50～1.20μg/ml范围之间,饲用金霉素的血药浓度均在0.40-.40μg/ml之间,金霉素缓释微球的血药浓度波动较小。粪便检测结果表明,摄入金霉素缓释微球组和饲用金霉素组仔猪的金霉素原形粪便排出的总量分别是摄入量的38.69%和25.72%,两种制剂金霉素在仔猪肠道中的释放量及原形药物经粪便的排泄量比较呈极显著差异（P<0.01）。（结论）本研究制备的金霉素-蒙脱石缓释微球,具有良好的缓释性能,口服多次给药,血药浓度很快达到稳态,相比于饲用金霉素,其在肠道中的金霉素含量能够维持较高水平,对仔猪腹泻可产生更好的防治效果。

关键词：金霉素蒙脱石海藻酸钠缓释微球

来源：评论

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高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈冬梅陶燕飞潘源虎谢书宇黄玲利王玉莲袁宗辉农业部兽药残留检测重点实验室/国家兽药残留基准实验室(HZAU)华中农业大学动物医学院

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善... 详细信息

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善,还存在一些问题,如检测的毒素种类少,只检测毒素毒素原型,对于代谢物关注极少;检测的样品种类单一,动物可食性组织的检测较少;样品前处理复杂、价格昂贵。针对以上问题,本方法旨在建立简便、快速,测定多种动物可食性组织中多种镰刀菌毒素的多残留方法。【方法】采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立猪牛羊肌肉、肝脏中19种镰刀菌毒素的多残留检测方法。组织样品采用β-葡萄糖醛苷酶水解,乙腈和水提取,正己烷脱脂,Bond Elut Mycotoxin柱净化。采用MRM监测模式,正负离子同时扫描。采用C18色谱柱,乙腈和水溶液为流动相,梯度洗脱方式进行色谱分离。【结果】19种镰刀菌毒素在不同样品中最低定量限为0.37μg/kg.41μg/kg,在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于64.8%05.0%之间,变异系数≤18.6%。【结论】本方法采用采用乙腈和水萃取提取动物可食性组织中19种镰刀菌毒素,样品前处理简单,方法回收率高,有机试剂用量少。采用Bond Elut Mycotoxin固相萃取柱进行样品净化,操作简单,同文献报道的免疫亲和柱相比,降低了检测成本,避免了样品基质干扰。本方法首次采用高效液相色谱-串联质谱同时测定了19种镰刀菌毒素,检测限低,特异性好,方法性能参数满足兽药残留监控要求。本方法弥补了真菌毒素在动物性食品中定量确证检测方法的空白,为保障人类和动物健康具有十分重要的意义。

关键词：镰刀菌毒素高效液相色谱-串联质谱固相萃取动物可食性组织

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金葡菌分选酶蛋白SrtA与阿普托名衍生物抑制剂相互作用研究

金葡菌分选酶蛋白SrtA与阿普托名衍生物抑制剂相互作用研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：牛效迪邓旭明吉林大学动物医学学院

分选酶几乎存在在所有的革兰氏阳性菌中,使其成为极具吸引力的药物治疗靶点。[14]随着对SrtA三维结构及其活性位点的逐渐明确,目前研究主要集中在分选酶抑制动力学特性上,并筛选相应的抑制剂作为抗菌药物的基础。很多方法已经被用来寻... 详细信息

分选酶几乎存在在所有的革兰氏阳性菌中,使其成为极具吸引力的药物治疗靶点。[14]随着对SrtA三维结构及其活性位点的逐渐明确,目前研究主要集中在分选酶抑制动力学特性上,并筛选相应的抑制剂作为抗菌药物的基础。很多方法已经被用来寻找分选酶抑制剂,其中包括筛选自然产物,搜索小型化合物库以及通过合成合理设计的类肽物和小分子抑制剂等。近年来分选酶抑制剂的筛选研究进展缓慢,特别是抑制剂与分选酶的相互作用机制尚不明确。首先是由于分选酶作为新的抗感染靶点的重要性刚刚被认识;更重要的是分选酶抑制剂的筛选方法尚不完善,不利于抑制剂的高通量筛选和分选酶性质的深入研究。因此在本文中,通过分子动力学模拟的方法研究了SrtA与四种阿普托名衍生物抑制剂相互作用,采用分子对接方法将四种抑制剂对接到金黄色葡萄球菌分选酶SrtA的活性结合位点中,然后在常规分子动力学优化的稳定构型基础上,对其构象进行了分析。并采用MM.-PBSA方法,进行了结合自由能分解及总的结合自由能的计算。结果表明:复合物SrtA-IAP体系中结合自由能值明显高于其他抑制剂,这主要是由于抑制剂分子结构不同引起的,该计算结果变化趋势与实验结果完全一致。根据能量分解计算,在复合物SrtA-1AP体系中,抑制剂N-1上的甲基及C-9位置上的羟基对稳定配体与蛋白间结合起到了主要作用。初步确定了SrtA的活性结合位点,以及抑制剂的药效团,为今后以SrtA为靶标的抗菌药物的研发奠定理论基础。

关键词：阿普托名衍生物抑制剂金葡菌分选酶

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