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作者

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猪-鱼复合养殖模式中气单胞菌Ⅰ类整合子的流行情况及其耐药特征

猪-鱼复合养殖模式中气单胞菌Ⅰ类整合子的流行情况及其耐药特征

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：邓玉婷冯永永姜兰谭爱萍张瑞泉罗理中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了解广东地区猪-鱼复合养殖模式下气单胞菌整合子流行情况及其耐药特征,从广东省佛山和肇庆市5个不同猪-鱼复合养殖场采集分离猪粪、鱼、池塘水及池塘底泥的气单胞菌（Aeromonas）共3 17株,通过微量二倍稀释法测定其对7类20种药物的... 详细信息

为了解广东地区猪-鱼复合养殖模式下气单胞菌整合子流行情况及其耐药特征,从广东省佛山和肇庆市5个不同猪-鱼复合养殖场采集分离猪粪、鱼、池塘水及池塘底泥的气单胞菌（Aeromonas）共3 17株,通过微量二倍稀释法测定其对7类20种药物的敏感性;PCR扩增Ⅰ类整合子整合酶基因intI1,并分析其基因盒阵列结构。结果表明,317株气单胞菌对20种药物耐药程度不一,氨苄西林、磺胺间甲氧嘧啶、萘啶酸的耐药率相对较高。intI1的检出率为15.77%,鱼源和猪源的整合子检出率高于环境源的。整合子阳性菌对测试的12种药物的耐药率显著高于阴性菌,且表现为多重耐药;50个Ⅰ类整合子共检测到16种耐药基因盒,包括了编码氨基糖苷类耐药基因aadA1、aadA2、aac6-Ⅱ、aacA4,甲氧苄啶耐药基因drfA1、dfrA12、dfrA15、dfrA17、dfrB4,β内酰胺类耐药基因bla、bla,氯霉素耐药基因catB3、catB8,利福平耐药基因arr2、arr3以及质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac（6'）-Ib-cr。携带了不同类耐药基因盒的整合子阳性菌还表现出所对应的对甲氧苄啶、链霉素、氯霉素类等的耐药表型,由此推测整合子的存在与细菌的多重耐药密切相关。研究表明,Ⅰ类整合子分布存在于广东地区猪-鱼复合养殖模式下不同来源气单胞菌,并介导细菌对多种抗菌药物耐药。有必要开展畜禽-鱼复合养殖模式下细菌耐药性的传播机制研究,为水产养殖合理用药提供依据。

关键词：复合养殖模式气单胞菌 I类整合子耐药

来源：评论

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iTRAQ联合LC-MS/MS技术分析痢疾杆菌耐酸性研究

iTRAQ联合LC-MS/MS技术分析痢疾杆菌耐酸性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：魏小娟张继瑜周绪正李冰程富胜牛建荣王娟娟中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所

【目的】应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测痢疾杆菌168株在不同处理条件下(普通培养与酸处理组)蛋白的差异情况,从而筛选出与痢疾杆菌耐酸性相关的潜在菌体蛋白。【方法】以痢疾杆菌301标准... 详细信息

【目的】应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测痢疾杆菌168株在不同处理条件下(普通培养与酸处理组)蛋白的差异情况,从而筛选出与痢疾杆菌耐酸性相关的潜在菌体蛋白。【方法】以痢疾杆菌301标准株为对照,通过模拟建立耐酸性菌株,采用iTRAQ技术和生物信息学鉴定并相对定量各菌株菌体蛋白。质谱数据经DataAnalysis4.0软件分析,用Mascot 2.3.02蛋白质鉴定软件对SwissProt下载的痢疾杆菌数据库进行搜索,软件依据同位素报告基团的相对含量进行蛋白质定量,以报告基团113为参照,选择差异性显著(P<0.05)的结果进行报告。当差异倍数大于2.0倍以上,且经统计检验其P<0.05时,视为差异蛋白。鉴定得到的蛋白进行基因功能聚类分析(GO)及基因路径分析。【结果】质谱共鉴定到1632个蛋白,其中差异表达蛋白有646种,其理论相对分子质量分布较为泛,相对分子质量的范围为5.26～345.82,其中分子质量在20～30 kDa的蛋白所占的比例最高为20.2%,分子质量在80～100 kDa之间的蛋白所占比例最少,为4%。酸处理组和正常组相比,上调的蛋白有212种,下调的蛋白434种。其生物进程主要参与中间代谢、细胞作用和生物调节,分子功能主要为催化活性功能、结合功能及转运活性功能。通过GO分析及pathway分析发现,这些差异蛋白分别参与了19个生物学过程,有21种分子功能,共涉及到109个生物代谢通路。排名前3位的生物学过程分别为新陈代谢过程(28.79%)、细胞代谢过程(26.66%)、有机物质的代谢过程(9.40%);分子功能分别为催化活性(81.9%)、离子结合功能(43.9%)、杂环化化合物的结合(42.8%);生物代谢通路为代谢通路(34.13%)、次级代谢产物的生物合成途径(19.57%)、不同环境中的微生物代谢途径(11.74%)。【结论】筛选出多种与耐酸性相关的差异蛋白,从而为进一步探讨痢疾杆菌致病机理奠定了基础。

关键词：分子功能耐酸性 iTRAQ 痢疾杆菌 LC-MS/MS 代谢通路

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查尔酮噻唑酰胺类化合物的合成及其抑菌研究

查尔酮噻唑酰胺类化合物的合成及其抑菌研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘希望郭沂涛杨亚军孔晓军李世宏秦哲杜文斌李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室

【目的】查尔酮是一类广泛存在于天然产物中黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性,包括抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗寄生虫等。艰难梭菌是一种专性厌氧菌,普遍存在与马、牛、猪及人的肠道中,可引起腹泻等疾病。本研究通过羟醛缩合及酰胺两步反... 详细信息

【目的】查尔酮是一类广泛存在于天然产物中黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性,包括抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗寄生虫等。艰难梭菌是一种专性厌氧菌,普遍存在与马、牛、猪及人的肠道中,可引起腹泻等疾病。本研究通过羟醛缩合及酰胺两步反应,合成了一系列新化合物并考察其抑菌活性,以期发现新的对艰难梭菌有抑制作用的活性小分子。【方法】选择系列取代苯甲醛,与4-乙酰基苯甲酸发生克莱森-斯密特缩合反应,得到具有查尔酮结构的苯甲酸类中间体。中间体进而与2-氨基-5-硝基噻唑反应生成酰胺类化合物。利用核磁共振氢谱、碳谱、高分辨质谱对合成的目标化合物结构予以确证。通过琼脂稀释法和液体稀释法测定了目标产物对艰难梭菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。同时,考察了部分化合物对结人肠癌细胞(Caco2)和人正常肝细胞(HL7702)的细胞毒活性。【结果】结果显示,目标化合物结构正确,部分化合物对艰难梭菌显示出一定的抑菌活性,MIC值在1-8μg/mL之间。其中化合物1b,12b的MIC值分别为2和1μg/mL,与对照药物甲硝唑和硝唑尼特相当。部分目标产物对产气荚膜梭菌显示出中等的抑制作用,几乎全部目标产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌无明显抑制作用,MIC值均大于64μg/mL。同时细胞毒研究显示活性目标产物对两种人细胞株无明显抑制作用。【结论】以上研究表明,合成的目标产物查尔酮噻唑酰胺类化合物对艰难梭菌显示出较强的抑菌活性,无明显细胞毒活性,可用于治疗由艰难梭菌引起的相关疾病,值得进一步研究和探索。

关键词：查尔酮噻唑酰胺合成抑菌艰难梭菌

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p21基因慢病毒shRNA载体质粒的构建及鉴定

p21基因慢病毒shRNA载体质粒的构建及鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李道稳汤树生周延代重山杨夏云肖希龙中国农业大学动物医学院

【目的】目的构建p21基因慢病毒shRNA载体并进行鉴定,为进一步探讨p21基因在喹乙醇诱导细胞凋亡及其S期阻滞的机理研究提供实验材料。【方法】方法1.构建3条p21基因慢病毒shRNA载体:将目的基因干扰序列连接到pLKO.1干扰慢病毒载体后将... 详细信息

【目的】目的构建p21基因慢病毒shRNA载体并进行鉴定,为进一步探讨p21基因在喹乙醇诱导细胞凋亡及其S期阻滞的机理研究提供实验材料。【方法】方法1.构建3条p21基因慢病毒shRNA载体:将目的基因干扰序列连接到pLKO.1干扰慢病毒载体后将其转进细菌感受态细胞中,等生成克隆菌落后进行PCR测序鉴定,测序比对正确的克隆即为所需的p21基因RNAi慢病毒载体。2.包装慢病毒及测定病毒滴度:抽提高纯度、无内毒素的慢病毒shRNA载体及其辅助包装原件载体质粒,使用HP transgene reagent将两者共转染到293T细胞,通过促转染、换液、培养等处理后,获取细胞上清液,进一步经浓缩后获得高滴度慢病毒浓缩液,在293T细胞中标定其病毒滴度。3.干扰载体对HepG2细胞内p21的沉默评价:用包装好的慢病毒以及慢病毒阴性对照感染靶细胞HepG2,感染成功后通过Western Blot和RT-PCR方法评价干扰载体对靶基因的干扰效果。【结果】1.对构建好的3条慢病毒干扰载体经PCR测序鉴定,DNA序列均无位点突变,证明质粒构建成功。2.将构建好的慢病毒载体质粒阳性克隆菌株转染293T细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;在293T细胞中进行病毒包装,最终纯化出pLKO.1-p21慢病毒颗粒,并测得其滴度为1*10～9TU/ml。3.病毒感染HepG2细胞后,经Western blot及RT-PCR验证,3条shRNA均有一定的沉默,其中以p21-shRNA3最明显。【结论】1.通过RNA干扰技术,成功构建了p21基因慢病毒shRNA载体。2.构建的干扰载体能够顺利的进行慢病毒的包装,并获得较高的病毒滴度。***-PCR及Western blot检测结果表明,p21-shRNA3为p21三个靶点中沉默效果最佳者,由其感染的HepG2细胞株为探讨p21基因在喹乙醇诱导细胞凋亡及其S期阻滞的机理研究提供实验材料JNK/GADD45a信号通路的激活参与喹乙醇诱导的DNA损伤及S期阻滞。

关键词： p21 RNA干扰慢病毒质粒构建

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抑制自噬促进黏菌素诱导的神经元N2a细胞凋亡依赖于caspase激活

抑制自噬促进黏菌素诱导的神经元N2a细胞凋亡依赖于caspase激活

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：代重山汤树生李继昌周延李道稳肖希龙中国农业大学动物医学院东北农业大学动物医学院

【目的】多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚。【方法】以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素毒性模型,不同剂量黏菌素(0-200μM)处理24h后,细胞活力(MTT... 详细信息

【目的】多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚。【方法】以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素毒性模型,不同剂量黏菌素(0-200μM)处理24h后,细胞活力(MTT法)、细胞膜损伤程度(LDH活力)、细胞死亡方式(Hoccest33342及AV/PI法)、氧化应激标志物(ROS、SOD、GSH、CAI)、线粒体功能(线粒体膜电位、Bcl-2/Bax)、自噬标志物(LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62)及caspase-3、8及9活力被分别检测;并进一步通过自噬抑制剂(氯喹,CQ)及凋亡抑制剂(caspase泛抑制剂,Z-VAD-FMK)联合探究细胞自噬及凋亡的cross-talk机制。【结果】与对照组相比,黏菌素处理的N2a发生凋亡性细胞死亡并伴随明显的剂量依赖性(黏菌素200μM,细胞凋亡率达49%);进一步研究发现,黏菌素可显著增加细胞内ROS水平、同时抑制细胞内抗氧化酶SOD、CAT活力及抗氧化物质GSH活力(all p<0.05 or 0.01);此外,黏菌素处理可导致线粒体膜电位及Bcl/Bax比值显著降低,并伴随caspase-3、8及9活力的显著升高(all p<0.05 or 0.01);MDC法荧光观察及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62检测发现,黏菌素可剂量依赖性激活N2a细胞内自噬水平,进一步通过LC3及activated-caspase-3免疫荧光共染证实黏菌素诱导的自噬及凋亡发生于同一细胞。与黏菌素模型组相比,晚期自噬抑制剂CQ可明显激活黏菌素(200μM)诱导的细胞凋亡(凋亡率增至85%),caspase--3酶活力也被进一步激活。CQ+Z-VAD-FMK+colistin联合处理后可明显抑制CQ+colistin诱导的细胞凋亡及caspaSe-3活力及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62的激活。【结论】黏菌素介导神经元细胞凋亡涉及ROS介导的氧化应激及线粒体功能失调,从而导致caspase依赖性的凋亡和自噬;自噬可能扮演者保护性角色。

关键词：黏菌素神经毒性 N2a细胞凋亡自噬 caspase激活

来源：评论

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黄芪多糖提取物对三种动物脾细胞活性的影响

黄芪多糖提取物对三种动物脾细胞活性的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李睿君苏接瑜廖黎黎曾芸广西大学动物科学技术学院

【目的】本研究采用MTT比色法,观察黄芪多糖提取物对小鼠、鸡、蛇三种动物脾细胞的影响,探索蛇脾细胞体外培养条件,为蛇类疾病研究或产品研发奠定基础。【方法】选取健康的5周龄昆明小鼠、1月龄凤翔公鸡、6月龄王锦蛇,处死后无菌采取脾... 详细信息

【目的】本研究采用MTT比色法,观察黄芪多糖提取物对小鼠、鸡、蛇三种动物脾细胞的影响,探索蛇脾细胞体外培养条件,为蛇类疾病研究或产品研发奠定基础。【方法】选取健康的5周龄昆明小鼠、1月龄凤翔公鸡、6月龄王锦蛇,处死后无菌采取脾脏,常规方法处理制备脾细胞悬液,调整脾细胞浓度为2×10～6/mL。用10%FBS-RMIP1640培养液配制32mg/mL黄芪多糖提取物溶液,过滤除菌,依次倍比稀释为8个浓度,备用。取96孔板,每孔分别加入90μl脾细胞悬液,第1孔为阴性对照组,8个平行,加入10μl 10%FBS-RMIP1640培养液,第2孔为阳性对照组,8个平行,加入10μLConA溶液（400μg/m1）,第3孔至第10孔为实验组,每个浓度8个平行,加入不同浓度的黄芪多糖提取物溶液10μL,使黄芪多糖提取物的终浓度分别为3200μg/ml,1600μg/ml,800μg/ml,400μg/ml,200μg/ml,100μg/ml,50μg/ml,25μg/ml,混匀,置CO培养箱37℃恒温培养20h,每孔加入10μL MTT（5mg/mL）,继续培养4h,离心5min,弃上清,分别加入DMSO 100μL混匀,测定OD值。试验数据用SPSS 18.0软件进行分析。【结果】1、在本试验中,小鼠和鸡脾细胞在黄芪多糖提取物终浓度为50μg/ml,25μg/ml时,促进效果与ConA阳性对照组持平,在100-3200μg/ml时,促进效果显著;蛇脾细胞在各浓度实验组促进效果均显著;2、在阴性对照组中,通过用酶联免疫测定仪测定OD值可以得到:在上述三种动物中,蛇脾细胞活性最好,其次为鸡脾细胞,最后为小鼠脾细胞。【结论】各浓度的黄芪多糖提取物均可以增强蛇脾细胞的活性,且在高浓度时对蛇脾细胞的活性促进最为显著;而黄芪多糖提取物在低浓度时对小鼠和鸡脾细胞影响不显著,在中高浓度时对其活性有显著促进。蛇为冷血动物,其脾细胞的体外培养条件为5%CO、30.5℃,这与小鼠、鸡有一定差别。这一实验为针对蛇临床的下一步研究提供了实验基础。

关键词：细胞活性多糖提取物促进效果

来源：评论

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谷甾醇葡萄糖苷抗肺炎链球菌感染分子机制的研究

谷甾醇葡萄糖苷抗肺炎链球菌感染分子机制的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李洪恩邓旭明吉林大学动物医学学院

肺炎链球菌是一种重要的全球性的上呼吸道传染性病原菌,是人体的常在革兰氏阳性病原菌,机会性致病,可以引起例如肺炎,中耳炎,关节炎,脑膜炎等一系列疾病,同时也是引发社区获得性肺炎的重要诱因。目前针对肺炎链球菌感染,多用青霉素类抗... 详细信息

肺炎链球菌是一种重要的全球性的上呼吸道传染性病原菌,是人体的常在革兰氏阳性病原菌,机会性致病,可以引起例如肺炎,中耳炎,关节炎,脑膜炎等一系列疾病,同时也是引发社区获得性肺炎的重要诱因。目前针对肺炎链球菌感染,多用青霉素类抗生素进行治疗,然而,人类早在1985年就已经在非洲分离到了5株能够对青霉素产生耐药的肺炎链球菌,更为严重的是,能够耐受人类抗感染最后的一道防线一万古霉素的肺炎链球菌也开始在全世界各地陆续被分离发现。肺炎链球菌溶血素(PLY)能够对淋巴细胞产生伤害,避免其被免疫系统识别以及清除,导致急性致死性肺炎,同时与肺链的定殖与迁移关系密切。至于肺链神经氨酸酶A(NanA)可以为肺链提供重要的定殖信号分子-唾液酸,而且NanA的两个重要功能域均与肺链入脑导致脑膜炎有着密切的关系,有意思的是,上述的两种重要肺链毒力蛋白在所有临床分离到的肺链链球菌中均存在,而且保守程度非常高。我们的研究发现,一种主要存在于贝母茎中的天然小分子—谷甾醇葡萄糖苷,对这两种以上两种蛋白有着直接或者间接的抑制作用,而其本身对肺炎练球并没有抑菌或者杀菌活性。谷甾醇葡萄糖苷的β-谷甾醇集团能够与PLY特异性受体—胆固醇竞争结合PLY,阻断PLY的细胞毒性。而谷甾醇葡萄糖苷的葡萄糖苷集团也能够抑制肺炎链球菌sortaseA的活性。由于NanA在其C段有一段保守的LPETG序列,因此可以被肺炎链球菌sortaseA特异性的识别加工后锚定到肺链的细胞壁上,而葡萄糖苷集团由于可以抑制sortaseA活性从而使得NanA无法被正确的锚定到细菌细胞壁上,无法充分发挥其生物学功能。动物实验表明,谷甾醇葡萄糖苷能够显著提高肺炎链球菌感染小鼠模型的存活时间,显著降低肺炎链球菌在小鼠鼻腔以及肺部的定殖。综上所述,我们认为谷甾醇葡萄糖苷能够成为一种抗肺炎链球感染的全新化合物,而且,其双靶点的特性,可以使其相比其他单一靶点化合物寿命更长。

关键词：肺炎链球菌谷甾醇葡萄糖苷抗毒力

来源：评论

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槲皮素提取液的急性和亚急性毒性研究

槲皮素提取液的急性和亚急性毒性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈鸿雨李宇琛李龙飞王东亮聂巧吴天兴曹杰陆小松韩孝欣刘芳卜仕金扬州大学兽医学院

【目的】通过大鼠急性毒性试验评价槲皮素的急性毒性,确定槲皮素对Wistar清洁大鼠的经口LD;通过30天亚急性毒性试验评价槲皮素的亚急性毒性,得出未观察到的有害毒作用剂量。【方法】急性毒性试验采用最大剂量灌喂法。20只体重在18～22g... 详细信息

【目的】通过大鼠急性毒性试验评价槲皮素的急性毒性,确定槲皮素对Wistar清洁大鼠的经口LD;通过30天亚急性毒性试验评价槲皮素的亚急性毒性,得出未观察到的有害毒作用剂量。【方法】急性毒性试验采用最大剂量灌喂法。20只体重在18～22g的Wistar清洁大鼠,雌雄各半。给药前禁食12小时后经口给予6000mg/kg b.w.（以生药计）槲皮素提取液。给药后观察期为7天,期间主要观察动物是否出现毒性反应鸡毒性反应性质。32日龄Wistar清洁80只大鼠随机分为4组（每组20只,雌雄各半）进行亚急性试验。。根据槲皮素提取液的半数致死量及动物可能摄入量,设3000mg/kg b.w、1500mg/kg b.w、750mg/kg b.w三各染毒剂量组和一个生理盐水对照组,连续灌服30天。染毒期间每天观察大鼠的一般状况及药效反应;每周对大鼠进行体重称重、饲料称重,计算平均的摄饲量、增重和饲料利用率,在第31天扑杀所有大鼠,进行大体病理学检查,对高剂量组和对照组中宰杀的大鼠进行组织病理学检查,并根据检查结果决定是否对中剂量组或推荐剂量组中的动物是否进一步检查;剖检时对心、肝、肾、脾、肺脏、胃、睾丸、卵巢、子宫等主要脏器称重,计算脏器系数;在每组里随机抽取10只大鼠,雌雄各半,从腹主动脉采血作血常规和生化指标检验。【结果】急性毒性试验中,在槲皮素剂量达到6000mg/kg b.w.的情况下,大鼠无任何异常表现,无一死亡,剖检内脏也无明显变化,因此槲皮素LD大于6000mg/kg b.w.;亚急性毒性试验中,各组试验大鼠一般状况良好,雌、雄大鼠的体重增重、摄饲量、饲料利用率与对照组无显著差异（P>0.05）,血常规、生化指标、脏器系数及组织病理学检查也未见明显异常。【结论】槲皮素提取液属于实际无毒类物质。槲皮素的30天亚急性毒性试验无作用剂量达3000mg/kg b.w.。

关键词：槲皮素急性毒性试验亚急性毒性试验大鼠

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复方双氯芬酸钠注射液在猪体内药动学和生物利用度研究

复方双氯芬酸钠注射液在猪体内药动学和生物利用度研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李宇琛吴天兴陆小松韩孝欣刘芳王东亮李龙飞卜仕金扬州大学兽医学院

【目的】通过测定复方双氯芬酸钠注射液在猪肌内注射给药的血药浓度-时间数据,获得相关药动学参数,了解其中活性组分在猪体内的药动学特征,以指导临床合理用药。【方法】采用交叉试验设计。8头体重较一致的健康断奶仔猪随机分为两组,分... 详细信息

【目的】通过测定复方双氯芬酸钠注射液在猪肌内注射给药的血药浓度-时间数据,获得相关药动学参数,了解其中活性组分在猪体内的药动学特征,以指导临床合理用药。【方法】采用交叉试验设计。8头体重较一致的健康断奶仔猪随机分为两组,分别单剂量静脉注射和肌内注射复方双氯芬酸钠注射液,静注和肌内注射剂量均为1 mg/kg bw（以双氯芬酸钠计）,两阶段给药洗脱期为2周。给药后按预定时间采集血样。血浆中双氯芬酸和对乙酰氨基酚含量采用HPLC紫外检测器进行分析,紫外检测波长分别为276 nm和248 nm,外标法定量。双氯芬酸和乙酰氨基酚的实测血药浓度-时间数据分别采用WinNonlin5.2版药动学分析软件拟合药动学参数。【结果】猪单剂量静脉注射复方双氯芬酸钠注射液后,双氯芬酸平均T约为1.360 h,T和C分别约为0.083 h和7.519μg/ml,MRT约为1.304 h,AUC约为8.076 hr·μg/ml,V约为236.102 ml/kg,CL约为124.166 ml/h/Kg;对乙酰氨基酚平均T约为1.705 h,T和C分别约为0.083 h和7.698μg/ml,MRT约为1.620 h,AUC约为11.350 hr·μg/ml,V约为1333.296 ml/kg,CL约为544.644 ml/h/Kg。猪单剂量肌内注射复方双氯芬酸注射液后,双氯芬酸平均T约为1.548 h,T和C分别约为0.500 h和3.994μg/ml,MRT约为1.976 h,AUC约为9.157 hr·μg/ml,绝对生物利用度为113.608%;对乙酰氨基酚平均T约为1.929 h,T和C分别约为0.625 h和5.611μg/ml,MRT约为2.364h,AUC约为14.104 hr·μg/ml,绝对生物利用度为124.264%。【结论】双氯芬酸和对乙酰氨基酚在猪体内均能迅速消除,但双氯芬酸在猪体内分布较差,其中对乙酰氨基酚则广泛分布;肌内注射双氯芬酸和对乙酰氨基酚自注射部位吸收均迅速且完全。药动学研究结果也表明,复方双氯芬酸钠注射液无论静注还是肌内注射给药,两种活性成分在猪体内具有相似的药动学特征,这为其联合用药发挥协同或相加作用奠定了物质基础。

关键词：复方双氯芬酸钠注射液猪药动学 HPLC

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彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：梁雯霏孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生... 详细信息

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生物,在室内土壤模拟环境中设洛克沙胂浓度组20mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg（以As计）和空白组;2.以鲫鱼为水体环境指示生物,设洛克沙胂50μg/L、150μg/L、300μg/L、500μg/L（以As计）浓度组和空白组,每组为15尾鲫鱼,蚯蚓和鲫鱼均分别于暴露第7、14、21 d采样,采用单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）进行了洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞DNA损伤的遗传毒性试验,应用CASP软件分析彗星尾部DNA百分含量、彗星尾部长度和Olive尾距等指标,导入统计分析软件SPSS17.0进行分析,对洛克沙胂与DNA损伤之间的时间与剂量依赖关系进行了探讨。（结果）结果表明:1.蚯蚓连续7 d、14 d和21 d暴露于20mg/kg00 mg/kg洛克沙胂中均能引起蚯蚓体腔细胞出现明显的DNA损伤,与空白对照组比较呈显著性差异（P<0.05）,在暴露第21d后,在20 mg/kg00 mg/kg浓度范围内出现明显的剂量-效应关系,并且随着暴露时间的延长,100mg/kg和200 mg/kg浓度的洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞的损伤表现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系;2.在50μg/L00μg/L暴露浓度中,洛克沙胂对鲫鱼肝细胞DNA可造成明显的损伤,与空白对照组相比呈极显著差异（P<0.01）,在暴露第7天、14天后,50μg/L00μg/L浓度范围内表现一定的剂量-效应关系,且随着暴露时间的延长,50μg/L、150μg/L和500μg/L浓度组洛克沙胂对鲫鱼肝细胞的损伤呈现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系。（结论）本文初步探讨了洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼的分子毒性效应,洛克沙胂可致使蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞的DNA损伤,预示着洛克沙胂的环境暴露存在着潜在的遗传毒性效应,单细胞凝胶电泳技术可作为有机胂DNA损伤的有效检测手段。

关键词：洛克沙胂蚯蚓鲫鱼彗星实验 DNA损伤

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