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16 篇 河南农业大学
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沙门氏菌RND外排泵系统及其它外排泵系统间的相互影响机制

沙门氏菌RND外排泵系统及其它外排泵系统间的相互影响机制

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨磊任思琪张传珍蒋红霞华南农业大学兽医学院

[目的]在革兰氏阴性菌中,活化的外派泵系统如acrAB-tolC是引起细菌多重耐药性的重要机制之一。在沙门氏菌中共有五种RND系统:AcrAB、AcrD、AcrEF、MdtABC和MdsABC,另外还存在其它家族的外排泵系统,如MacAB、MdtK、EmrAB和MdfA。沙门氏... 详细信息

[目的]在革兰氏阴性菌中,活化的外派泵系统如acrAB-tolC是引起细菌多重耐药性的重要机制之一。在沙门氏菌中共有五种RND系统:AcrAB、AcrD、AcrEF、MdtABC和MdsABC,另外还存在其它家族的外排泵系统,如MacAB、MdtK、EmrAB和MdfA。沙门氏菌外排泵的调控比较复杂,其转录调控是多层次的。在大肠和沙门氏菌中,acrAB的调节机制研究得最详细。acrA和acrB基因位于同一个操纵子上并被共同调节。在局部水平,acrABB被阻遏因子抑制。在全局水平,acrAB-tolC的表达会受到AraC/XylS家族的转录调控因子MarA、SoxS、Rob和RamA的影响。AcrAB-TolC作为革兰氏阴性菌最重要的外排泵,除受上述调控因子的调控外,它与其它的RND外排泵及非RND外派泵或许在功能存在着某种紧密的联系。本文主要探讨沙门氏菌acrAB外排泵与其它RND外排泵及非RND外排泵间是否存在着相互影响的关系。[方法]对近十年来国内外报道的关于沙门氏菌外排泵AcrAB-TolC与其它外排泵系统间相互影响的文献进行归纳总结,论述外排泵系统在功能上的相互影响的机制。[结论](1)在大肠杆菌中,当敲除外排泵acrB或者失活acrAB时,细菌的外排作用受阻,一些细胞代谢产物会在菌体内蓄积,进而会促进一些全局性转录调控因子的表达,反馈性地促进acrAB系统的表达。因此,我们推测在沙门氏菌中,当外排泵acrAB-tolC失活时,同样存在着类似的acrAB对自身进行反馈性地调节的机制。(2)沙门氏菌中RND外排泵系统间存在着紧密的,相互调节的机制,一旦一种RND外排泵失活后,细菌其它的RND外排泵能感知这种变化,并使其进行补偿性表达增加,细菌在表型上表现为对某些抗菌药的敏感性增加,而对另一些抗菌药的敏感性降低。RND外派泵系统间的相互调节也是通过全局性调控因子进行调节。此外,缺失任何一种acr基因都会引起细菌致病力显著降低。(3)在已知的9种沙门氏菌药物外排泵系统中,缺失除acrAB外的任何一种外派泵系统都不会对细菌的耐药性产生显著的影响。但是,当连续缺失沙门氏菌中的9中外排泵后,沙门氏菌缺失菌对某些化合物的敏感性甚至要高于acrAB缺失株的敏感性。而且,缺失这9种外排泵后,沙门氏菌对小鼠的毒性消失。但是,在沙门氏菌中,RND、MFS、MATE和ABC家族外派泵系统间是否也存在相互的影响,缺失其中一种是否会改变其它外排泵的表达量还有待进一步研究。

关键词：沙门氏菌 RND外排泵系统基因敲除调节机制

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猪源致病性大肠杆菌生物被膜建模、氟喹诺酮类药物和木糖醇对生物膜的体外作用研究

猪源致病性大肠杆菌生物被膜建模、氟喹诺酮类药物和木糖醇对生物...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：虞惠贞姜中其浙江大学动物科学学院

【目的】大肠杆菌可引起仔猪腹泻、增重减缓甚至生长抑制,常给养猪业常造成重大经济损失。当形成生物被膜时,生物被膜为细菌提供保护性环境,将提高其耐药性。本试验在构建仔猪大肠杆菌生物被膜模型基础上,开展浮游大肠杆菌与生物被膜菌... 详细信息

【目的】大肠杆菌可引起仔猪腹泻、增重减缓甚至生长抑制,常给养猪业常造成重大经济损失。当形成生物被膜时,生物被膜为细菌提供保护性环境,将提高其耐药性。本试验在构建仔猪大肠杆菌生物被膜模型基础上,开展浮游大肠杆菌与生物被膜菌的耐药对比并考察木糖醇对生物被膜的抗粘附作用及其与氟喹诺酮类药物联用时对生物膜的体外抑制作用,旨在为仔猪大肠杆菌耐药性研究及临床上更合理地治疗生物被膜大肠杆菌感染提供依据。【方法与结果】(1)采用卡尔加里生物被膜发生装置定量法和12孔细胞培养板内置载体片定性法,比较不同培养基、不同培养时间和不同浓度葡萄糖、不同材质(聚氯乙烯、硅胶破片和普通盖玻片)的载体片对大肠杆菌生物膜形成的影响,通过光学显微镜比较三种载体上生物膜形态,结果表明,在LB培养基,37℃,PVC材料作为载体片,培养6天后可得成熟的大肠杆菌生物被膜。(2)采用MBEC生物被膜发生装置,应用结晶紫染色法对120株临床分离的致仔猪腹泻的大肠杆菌生物被膜形成能力进行了筛选,发现猪源致病性大肠杆菌生物被膜形成率高达83.3%。(3)采用CLSI标准,用96孔板微量稀释法测定临床分离大肠杆菌生物被膜菌、浮游菌和脱膜菌对氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类等19种抗菌药物的敏感性,结果显示,19种抗菌药物对已形成生物被膜的分离株的MBIC和MBEC均比相应的浮游菌的MIC以及MBC高2-32倍。(4)通过分离菌落形成单位计数法和激光扫描共聚焦显微镜的观察,结果表明,与阳性对照相比,经0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后的菌落数均表现出显著差异性(P<0.05)。(5)通过0.5%、2.5%、5%的木糖醇处理,检测氟喹若酮类药物对大肠杆菌生物膜的MBIC和MBEC,结果提示:与无木糖醇处理组相比,经过0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后,环丙沙星和恩诺沙星对大肠杆菌的MBIC以及MBEC均显著降低(P<0.05);不同浓度木糖醇对仔猪大肠杆菌成熟生物被膜的破坏试验中,与无木糖醇处理组相比,经过0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后,环丙沙星和恩诺沙星的MBIC以及MBEC也显著下降(P<0.05)。结论猪源致病性大肠杆菌临床分离株形成生物被膜后耐药性显著增高,氟喹诺酮类药物单独使用或与木糖醇联合应用可干扰该菌生物被膜的形成和破坏已经形成的生物被膜,二者具有协同作用。

关键词：仔猪病原性大肠杆菌生物被膜耐药性抗菌药物木糖醇

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大蒜素对副猪嗜血杆菌的抑制作用及机理的研究

大蒜素对副猪嗜血杆菌的抑制作用及机理的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：林晶马宗兵杨德智汪燕秋马玉芳黄一帆俞道进福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

【目的】***病(格拉泽氏病)的广泛流行,已给养殖业造成严重的经济损失。随着H parasuis对传统抗生素耐药性的增强,开发新型的治疗药物以及选择可持续性的防治策略已经显得尤为必要。本研究集中探讨大蒜素对***的抑菌效果以及抑菌的分子... 详细信息

【目的】***病(格拉泽氏病)的广泛流行,已给养殖业造成严重的经济损失。随着H parasuis对传统抗生素耐药性的增强,开发新型的治疗药物以及选择可持续性的防治策略已经显得尤为必要。本研究集中探讨大蒜素对***的抑菌效果以及抑菌的分子机理,评价大蒜素的毒力抑制作用。为兽医临床防治***提供理论基础。【方法】临床无菌采集病料进行***的分离鉴定和培养;采用试管结晶紫染色法和微孔板结晶紫法对***临床分离株的生物被膜形成能力进行定性和定量分析;筛选具有强生物被膜形成能力的强毒力菌株;参照CLSI所介绍的药敏方法检测大蒜素对H parasuis的最小抑菌浓度(MIC);通过生长曲线分析梯度浓度的大蒜素对H parasuis生长的影响;检测大蒜素对H parasuis的生物被膜形成的影响;通过荧光定量PCR分析大蒜素对H parasuis部分基因表达水平的影响。【结果】在华南和东南地区共分离得到H parasuis 32株,通过生物被膜形成能力分析,成功筛选到具有强生物被膜形成能力的V型强毒力菌株HPS-46。通过药物敏感性试验发现大蒜素对***最小抑菌浓度(MIC)范围在16-32μg/mL;其中大蒜素对HPS-46菌株的MIC为32μg/mL。通过大蒜素对***生长曲线影响的分析发现大蒜素对体外培养的HPS-46有明显的抑制作用,实验结果表明亚抑菌浓度的大蒜素可将HPS-46到达稳定期的时间推迟1倍的时间。进一步的研究发现8μg/mL和16μg/mL的大蒜素能够显著抑制HPS-46生物被膜的形成。荧光定量PCR分析发现,经过8μg/mL和16μg/mL的大蒜素处理的***,溶血毒素的主亚基hhdA的表达显著下降;黏附侵袭相关的基因ompP-5、ompP-2、pilA和侵袭性酶prtC的表达水平明显下降;由群体感应系统调控的潜在毒力因子mviN的表达下调;超氧化物歧化酶的基因sodC表达水平上升,而抗生素外排泵相关基因norM表达水平下降。这说明大蒜素对H parasuis有明显的抑制效果,并且可影响溶血毒素、黏附侵袭、氧化代谢以及抗生素外排泵等相关基因的表达。【结论】本次课题共分离到临床菌株32株,优化了H parasuis分离培养及鉴定的方法,大蒜素对Hparasuis具有强力抑菌作用,大蒜素对***的MIC为16-32μg/mL,亚抑菌浓度即可明显抑制***的生长。大蒜素对***生物被膜的形成具有显著的抑制作用。大蒜素具备抑制***毒力的潜质。大蒜素对毒素基因(hhdA)、黏附侵袭相关基因(ompP-5,ompP-2,prtC)、生长代谢相关基因(sodCmviN)的表达有抑制作用。大蒜素可以抑制抗生素外排泵norM基因的表达。

关键词：生物被膜最小抑菌浓度溶血毒素黏附侵袭抗生素外排泵副猪嗜血杆菌

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螺杆结构对盐酸恩诺沙星热熔挤出固体分散体在人工唾液中溶出效果的影响

螺杆结构对盐酸恩诺沙星热熔挤出固体分散体在人工唾液中溶出效果...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：聂海英彭健波梁海健梁正敏黄宏业杨善忠何家康广西大学动物科学技术学院广西兽药制剂工程技术研究中心

【目的】盐酸恩诺沙星(Enrofloxacm hydrochloride,EH)易溶于中性或偏碱性溶液,根据生物药剂学分类系统(BCS),该药属于I类(高溶解性—高渗透性),由于药物在口腔内快速溶解易于与口腔味觉受体接触,从而表现出明显的苦味。本研究旨在制各... 详细信息

【目的】盐酸恩诺沙星(Enrofloxacm hydrochloride,EH)易溶于中性或偏碱性溶液,根据生物药剂学分类系统(BCS),该药属于I类(高溶解性—高渗透性),由于药物在口腔内快速溶解易于与口腔味觉受体接触,从而表现出明显的苦味。本研究旨在制各掩味EH固体分散体,并考察它的体外溶出效果。【方法】以乙基纤维素(Ec)为载体,PEG-6000为增塑剂、碳酸钙为致孔剂(释放调节剂),采用热熔挤出法制备EH掩味固体分散体,重点考察、比较三种螺杆结构(标准螺杆、单捏合块螺杆和全输送元件螺杆)制得的固体分散体的体外溶出效果;用X-射线粉末衍射法(PXRD)和傅立叶变换红外光谱学(FT-IR)对固体分散体进行表征。【结果】(1)表征结果:①PXRD图谱表明,三种螺杆结构制备而得的固体分散体和物理混合物一样,都检测到药物结晶峰,只是强度有所不同,强度大小依次是:单捏合块螺杆结构固体分散体(SD2)>全输送元件螺杆结构固体分散体(SD3)>标准螺杆结构固体分散体(SD1),表明SD2样品中晶型药物在载体中所占的比例最高;②FT-IR图谱表明,与SD1、SD3相比较,SD2所得的红外光谱图中高黄色区域所占的比例更高,即晶型簇更多;综合PXRD和FT-IR图谱结果,表明SD2保留更多量的晶型药物,预示着该固体分散体中药物在人工唾液中溶出更少。(2)体外溶出度:比较三种螺杆结构制备的固体分散体体外溶出度,SD1、SD2、SD3在pH 4.5醋酸盐缓冲液中30min内溶出均超过85%,而在人工唾液(pH 6.8)中60s内的溶出分别为5.21%、1.22%和3.48%,物理混合物的溶出为11.03%,表明经过掩味处理后三种固体分散体均具有阻止药物在人工唾液中释放的效果,其中以SD2效果最佳,同时,三者在pH 4.5醋酸盐缓冲液中溶出速率相似,仍然保持药物的溶出效果。试验结果表明,SD2更适合做进一步的掩味效果(如电子舌分析、动物适口性试验)研究。【结论】热熔挤出技术制备的盐酸恩诺沙星掩味固体分散体在人工唾液(模拟口腔环境)中释放较少,预示着该工艺制备的制剂具有良好的掩味效果。

关键词：盐酸恩诺沙星热熔挤出技术固体分散体溶出速率人工唾液

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喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王旭白毅杰程古月郝海红刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细... 详细信息

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细胞系为细胞模型进行基因组学研究。结果显示,10μM喹烯酮处理组与空白组相比有349个差异表达基因,其中上调基因有210个(名称和功能己知的基因有150个),下调基因有139个(己知基因有98个);20μM喹烯酮处理组与空白组相比有4583个差异表达基因,上调的有2835个(名称和功能已知的基因有1931个),下调的有1748个(已知基因有1095个)。将这些差异基因按生物学进程分为6类:与细胞内物质和能量合成代谢相关、与转运相关、与细胞应激相关、与信号转导相关、与细胞发育过程相关及与转录调控相关。分析相关基因功能,与无机离子、氨基酸、神经递质、糖类、嘌呤和脂肪酸等物质转运相关的基因的表达量发生改变,提示喹烯酮干扰了细胞内正常的生命活动。参与类固醇激素合成和代谢的基因表达量也发生了改变,特别是与胆固醇合成相关的一些基因的表达量均上调,而负责将胆固醇外排出细胞的脂质转运体也发生上调表达;同时,胆固醇合成原料乙酰辅酶A提供者-脂肪酸在一种高度上调表达的SREBF1的作用下合成甘油三酯的进程加剧,三者协同作用影响醛固酮合成原料-胆固醇的浓度;控制类固醇激素合成方向的基因CYP17A1表达量上调,导致醛固酮合成受阻;另外调控CYP11B2转录的一种重要转录因子NR4A2的表达量下调,抑制其转录;同时与氧化应激相关的一些基因表达量下调,提示QCT可能通过抑制Nrf2/Keap1/ARE通路的下游基因NQO1、HMOX1、G6PD和SRXN1等的表达,加剧药物造成的氧化应激现象,进而造成ROS的大量蓄积,引起肾上腺皮质细胞毒性。综上所述,本研究首次运用基因组技术发现ABCG1、SREBF1等与调控胆固醇浓度的相关基因及CYP1 7A1、NR4A2、G6PD等与醛固酮合成相关基因是喹烯酮下调醛固酮合成和分泌的重要分子靶点。

关键词：喹烯酮 H295R细胞毒性醛固酮基因组肾上腺

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THE BOARD MEMBER OF TRANSACTIONS OF THE CHINESE SOCIETY OF MALACOLOGY

THE BOARD MEMBER OF TRANSACTIONS OF THE CHINESE SOCIETY OF M...

引用

中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第五次代表大会暨第七次学术讨论会

关键词：

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喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：戴梦红涂名邵羊阳王旭刘振利王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点开放实验室华中农业大学

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PC... 详细信息

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测L-02细胞中EGF mRNA的表达水平,以验证结构改造物的生物活性。将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧与富含氨基的树脂基质ToyopearlAF-Amino-650M偶联,并利用高效液相色谱(HPLC)检测偶联效率。将固定化配体喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧-亲和基质与L-02细胞各亚细胞组分蛋白裂解液分别进行连续亲和层析(SAC)实验,通过生物质谱技术鉴定差异蛋白,并利用WesternBlot技术验证质谱结果的可靠性。利用RT-qPCR方法检测喹赛多孵育L02细胞后hnRNPA2/B1 mRNA、原癌基因c-mycmRNA、细胞增殖抗原Ki-67蛋白的基因mki-67mRNA及细胞周期基因p21、ccnd2mRNA的表达变化。【结果】与喹赛多作用类似,2μM喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧孵育L-02细胞1 h后,即可显著(p<0.05)上调EGFmRNA的表达水平,而且将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧作为配体与树脂基质进行偶联的效率能够达到75%以上。通过偶联得到的固定化配体捕获到5个差异蛋白,并成功鉴定3个,分别是核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)、核内不均一核糖核蛋白U(hnRNP U)以及核内不均一核糖核蛋白H(hnRNP H),均为细胞核蛋白。Western Blot结果显示,随着蛋白裂解液与固定化配体孵育次数的增加,hnRNP A2/B1蛋白丰度逐渐减小,因此说明hnRNP A2/B1蛋白是喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧的特异性结合蛋白。2μM喹赛多孵育L-02细胞1 h后,hnRNPA2/B1与mki-67基因分别出现显著性(p<0.05)下调与上调表达。10μM喹赛多作用细胞0.5 h后即可检测到mki-67 mRNA的表达水平上调显著(p<0.05),但是细胞周期蛋白D2相关基因ccnd2 mRNA在1 h时出现显著性(p<0.05)上调表达。因此我们推测喹赛多与hnRNP A2/B1蛋白结合后,通过调控细胞增殖与细胞周期等相关基因的表达,促进细胞生长。【结论】喹赛多能进入细胞核内与靶蛋白hnRNPA2/B1结合,调节下游基因的表达,从而促进细胞生长。

关键词：喹赛多结合蛋白连续亲和层析质谱分析技术

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THE BOARD MEMBER OF THE CHINESE SOCIETY OF MALACOLOGY

THE BOARD MEMBER OF THE CHINESE SOCIETY OF MALACOLOGY

引用

中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第五次代表大会暨第七次学术讨论会

关键词：

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中国圆田螺生物学初步研究

中国圆田螺生物学初步研究

引用

中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第四次代表大会暨第五次学术讨论会

作者：陈加林陈其羽向启华珠海市万山管理区珠海市白藤湖旅游农渔业研究所中国科学院水生生物研究所

我们于1983年至1984年间在武汉东湖进行网箱放养中国圆田螺的试验,得出以下结论： (1)中国圆田螺在武汉地区的生殖季节自3月中旬至11月底,其中以5—6月份产螺达高峰, (2)雌螺长至壳高36—37毫米时开始繁殖子代。(3)在自然种群中,中国圆... 详细信息

我们于1983年至1984年间在武汉东湖进行网箱放养中国圆田螺的试验,得出以下结论： (1)中国圆田螺在武汉地区的生殖季节自3月中旬至11月底,其中以5—6月份产螺达高峰, (2)雌螺长至壳高36—37毫米时开始繁殖子代。(3)在自然种群中,中国圆田螺每雌每年平均产螺达50—60个．(4)初生仔螺(壳高7毫米)死亡率最大,高达50％以上。(5)刚出生的中国圆田螺雌体,经过几个月正常生长,当年开始或至次年开春部可繁殖后代。

关键词：中国圆田螺繁殖武汉

来源：评论

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彩虹明樱蛤Moerella iridescens(Benson)生殖周期的初步研究

彩虹明樱蛤Moerella iridescens(Benson)生殖周期的初步研究

引用

中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第四次代表大会暨第五次学术讨论会

作者：尤仲杰王一农吕朝晖浙江水产学院浙江水产学院浙江水产学院

本文研究了浙江舟山沿海彩虹明樱蛤的生殖周期,结果表明：1月至4月中旬性腺处于增殖期,4月下旬至6月上中旬为生长期,6月下旬至8月下旬为成熟期,7月初至9月底为排放期,10月初至12月底为休止期,该蛤性腺发育一年一个周期,6月底至7月初和8... 详细信息

本文研究了浙江舟山沿海彩虹明樱蛤的生殖周期,结果表明：1月至4月中旬性腺处于增殖期,4月下旬至6月上中旬为生长期,6月下旬至8月下旬为成熟期,7月初至9月底为排放期,10月初至12月底为休止期,该蛤性腺发育一年一个周期,6月底至7月初和8月中下旬为两个产卵高峰。属一次成熟分批排放生殖类型;性成熟年龄为一龄;生物学最小型为壳长10毫米左右;自然海区该蛤种群的性比为雌雄1．1：0．9．

关键词：舟山沿海彩虹明樱蛤生殖周期

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