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排序：

Involvement of endothelial progenitor cells in the formation of plexiform lesions in broiler chickens:possible role of local immune/inflammatory response

Involvement of endothelial progenitor cells in the formation...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：邵冯金谭勋浙江大学动物科学学院

Plexiform lesions(PLs),which are often accompanied by perivascular infiltrates of mononuclear cells,represent the hallmark lesions of pulmonary arteries in humans suffering from severe pulmonary arterial hypertension(PAH).Endothelial progenitor cells(EPCs) have been recently implicated in the formation of PLs in human *** rarely develop in rodent animal models of PAH but can develop spontaneously in broiler *** aim of the present study was to confirm the presence of EPCs in the PLs in *** immune mechanisms involved in EPC dysfunction were also *** were collected from commercial broilers at 1 to 4 weeks of *** right/total ventricle ratios indicated normal pulmonary arterial pressures for all sampled *** was performed to determine the expression of EPC markers(CD133 and VEGFR-2) and proangiogenic molecule hepatocyte growth factor(HGF) in the lung *** EPC/lymphocyte co-culture system was used to investigate the functional changes of EPCs under the challenge of immune *** with different cellular composition were detected in the lungs of broilers regardless of age,and they were commonly surrounded by moderate to dense perivascular mononuclear cell *** analyses revealed the presence of CD133+ and VEGFR-2+cells in *** structures also exhibited strong expression of *** co-culture enhanced EPC apoptosis and completely blocked HGF-stimulated EPC survival and in vitro tube *** together,this work provides evidence for the involvement of EPCs in the development of PLs in *** is suggested that the local immune cell infiltrate might serve as a contributor to EPC dysfunction by inducing EPC death and limiting their response to angiogenic *** chickens may be valuable for investigating reversibility of plexogenic arteriopathy using gene-modified inflammation-resistant EPCs.

关键词： Plexiform lesions Endothelial progenitor cells Immune response Hepatocyte growth factor Broiler chicken

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RIG-1 and MDA-5 signaling pathways contribute to IFN-β production and viral replication in Porcine circovirus virus type 2 infection cells

RIG-1 and MDA-5 signaling pathways contribute to IFN-β prod...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者： Bei Huang Jiansheng Li Xinchen Zhang Qiling Zhao Mingqing Lu Yingjun Lv College of veterinary science Nanjing agricultural university

Interferon(IFN) is known for its antiviral ***,it is surprising that treatment of IFN-α and IFN-β in vitro enhanced replication of porcine circovirus type 2(PCV2),indicating that complex relationship between interferon and *** now,it is unclear how the interferon is produced during PCV2 infection and also not knowing whether the interferon induced by PCV2 itself can promote the viral *** the study,PCV2 induced up-regulation of IFN-β in PK-15 cell,and treatment of PCV2-infected cell with NF-κB inhibitor BAY11-7082 decreased the expression of INF-β,while treatment with IRF3 inhibitor BX795 do not,indicating that PCV2 can induce IFN-β production and the induction of IFN-β via IRF3 rather than NF-κB mediated signal ***,PCV2 increased the protein expressions of IRF3,p-IRF3,MAVS,RIG-1 and MDA-5,and knockdown of RIG-1 and MDA-5 decreased the level of IFN-β.These results demonstrate that PCV2 induces the IFN-β production by RIG-1/MDA-5/MAVS/IRFs signal ***,the viral load of PCV2 and PCV2 infection decreased after knockdown of RIG-1 and MDA-5,indicating that RIG-1 and MDA-5 signal pathway contribute to the viral *** conclusion,PCV2 induces the production of IFN-β by RIG-1 and MDA-5 signaling pathway,and the IFN-β produced during PCV2 infection facilitate the viral replication.

关键词： PCV2 Interferon Viral replication RIG-1 MDA-5

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Generation and characterization of a reporter-expressing C-strain of classical swine fever virus by genetic engineering of the Npro protein

Generation and characterization of a reporter-expressing C-s...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会

作者：李永锋 Lingkai Zhang Xiao Wang Libao Xie Dongming Zhao Yuan Sun Su Li Yuzi Luo Hua-Ji Qiu State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural Sciences

Reporter-expressing viruses are useful tools for viral biology.C-strain（also known as HCLV s train） of classical swine fever virus（CSFV） is a lapinized live attenuated vaccine against classical swine fever（CSF）.However,it remains elusive whether C-strain can be engineered as a reporter *** this end,we generated and characterized C-strain-based reporter viruses expressing the enhanced green fluorescent protein（EGFP）(rHCLV-EGFP) or nanoluciferase（NanoLuc）(rHCLV-Na noLuc) fused in frame with the N protein,*** rHCLV-NanoLuc expressed the N anoLuc reporter,viable rHCLV-EGFP containing an intact EGFP gene was expressed as an N-E GFP fusion protein of an unexpectedly higher size and not ***,the EGFP flu orescence was restored in rHCLV-N（SM）-EGFP derived from rHCLV-EGFP,in which the N ge ne was replaced with the counterpart of the highly virulent CSFV Shimen（SM） strain in the cont ext of *** addition,vaccination-challenge experiment results showed that rHCLV-N（SM）-EGFP and rHCLV-NanoLuc retained all the biological properties of the parental virus in rabbits,i ncluding fever response,replication,as well as ***,spleen lymphocytes were f irstly identified to support the replication of C-strain using *** together,we g enerated,characterized and applied recombinant C-strain expressing reporters fused with the N ge ne.

关键词： Classical swine fever virus C-strain Npro protein NanoLuc EGFP reporter

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不同理化因素对鼠伤寒沙门菌SL1344 crp基因缺失株黏附HeLa细胞能力的影响

不同理化因素对鼠伤寒沙门菌SL1344 crp基因缺失株黏附HeLa细胞能...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：牟霄慧张依盟王月平伟梦亢君芳刘文慧董云翔李静河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室

研究目的:鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)为肠杆菌科沙门菌属成员,是一种条件性胞内寄生的革兰氏阴性肠杆菌,具有广泛的宿主感染谱,主要引起动物的肠道性和人类的食源性疾病,在公共卫生学方面具有重要意义[1,2]。本研究的目的是... 详细信息

研究目的:鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)为肠杆菌科沙门菌属成员,是一种条件性胞内寄生的革兰氏阴性肠杆菌,具有广泛的宿主感染谱,主要引起动物的肠道性和人类的食源性疾病,在公共卫生学方面具有重要意义[1,2]。本研究的目的是检测不同理化因素对鼠伤寒沙门菌SL1344 crp基因缺失株(SL1344Δcrp)黏附HeLa细胞能力的影响。材料方法:本研究将实验室构建并保存的鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp在LB固体培养基37℃培养12 h后,挑取单菌落于LB液体培养基中振荡培养过夜,然后按1:33的比例转接到新鲜的LB液体培养基中培养约3.5 h,选取对数生长晚期的菌液感染HeLa细胞。在检测菌液浓度对鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp黏附HeLa细胞能力的影响时,选取感染复数MOI分别为200、100、50感染HeLa细胞;为了检测孵育时间对鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp黏附HeLa细胞能力的影响,本试验将SL1344Δcrp菌株按MOI=100感染HeLa细胞,孵育时间分别为30 min、1 h和2 h;在检测胰酶对鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp黏附HeLa细胞能力的影响时,将胰酶处理10 min,30 min的SL1344Δcrp菌株以及胰酶未处理组按MOI=100分别感染HeLa细胞,感染时间为30 min。同时设立鼠伤寒沙门菌野生型菌株SL1344为对照组。用含0.5%Triton X-100的PBS裂解HeLa细胞10 min,最后经倍比稀释后涂板计数,计算黏附率。结果:相同感染复数情况下,与野生株SL1344相比,鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp对HeLa细胞的黏附力均降低,且MOI为100时鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp较野生株SL1344相比黏附率发生了极显著的降低(P <0.01)。同一菌株的不同孵育时间之间的黏附率差异极显著(P <0.01),并且随着孵育时间的延长,两个菌株的黏附率均下降,因此,孵育时间为30 min时,鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp对HeLa细胞的黏附能力最佳。SL1344Δcrp经胰酶处理后对HeLa细胞的黏附能力降低。本研究结果为鼠伤寒沙门菌SL1344Δcrp感染HeLa细胞模型的建立以及在此模型基础上的相关科学研究奠定了基础。

关键词：黏附能力基因缺失株鼠伤寒沙门菌 SL1344 crp 理化因素

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动物园圈养野生动物肝脏组织病理学观察

动物园圈养野生动物肝脏组织病理学观察

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：任欣欣佘锐萍刘天龙张成林苑雪瑞李恒张洋中国农业大学动物医学院

不同种属的动物肝脏在组织结构上有共性,但也存在显著差异。若不同种属的动物肝脏发生病变,其病变种类以及病变程度会存在一定的差异性。因此本研究针对对不同种属的圈养野生动物肝脏的组织病理学的进行观察、比较并分析。方法:本研究... 详细信息

不同种属的动物肝脏在组织结构上有共性,但也存在显著差异。若不同种属的动物肝脏发生病变,其病变种类以及病变程度会存在一定的差异性。因此本研究针对对不同种属的圈养野生动物肝脏的组织病理学的进行观察、比较并分析。方法:本研究选取北京动物园送来的67例圈养野生动物的肝脏固定组织作为样本,其中33例食草类动物,9例杂食类动物,14例肉食类动物,11例鸟类动物,进行石蜡包埋,切片制作,通过H.E.染色,显微镜观察,并统计病变种类及比例,最后进行比较分析讨论。结果:(1)食草类动物肝脏组织中肝细胞变性坏死、肝小叶排列紊乱、中央静脉淤血、炎性细胞浸润检出率高,分别高达78.7%、78.7%、63.6%、57.6%,其中,以肝细胞变性坏死和肝小叶排列紊乱为主,两者的检出率最高。同时,伴发一些不常见但较为典型的病理变化,如肝窦水肿、纤维组织增生以及含铁血黄素沉着。(2)杂食类动物肝脏组织中肝细胞变性坏死、肝小叶排列紊乱检出率较高,分别高达88.9%、78.7%,且肝细胞变性坏死检出率最高,并未检出纤维组织增生的病变样本。(3)肉食类动物肝脏组织中肝细胞变性坏死、肝小叶排列紊乱检出率高,分别高达92.9%、78.6%。同时,肉食类动物肝脏组织中肝窦明显扩张充血,检出率高达71.4%,仅有7.1%的检出率为出血。(4)鸟类动物肝脏组织中肝细胞变性坏死、肝小叶排列紊乱以及中央静脉淤血检出率高,分别高达90.9%、81.8%、81.8%。且并未检出肝细胞脂肪变性、纤维组织增生及出血等病变样品。结论:通过H.E.染色镜检,可以发现肝脏组织的病变主要以各类动物的肝细胞变性坏死、肝小叶排列紊乱为主;同时伴发有不同程度的肝细胞脂肪变性、纤维组织增生、出血、充血及含铁血黄素沉着。不难发现,肉食类动物相对于其他三类动物的肝细胞变性坏死率最高;食草类动物的出血率明显高于其他三类动物;此外,四类动物均有不同程度的肝窦充血或出血病变,且炎性细胞浸润的病变程度大致相当。

关键词：圈养野生动物不同种属动物肝脏纤维组织增生肝脏组织病理学动物园

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病、死雏鸡病原菌分析

病、死雏鸡病原菌分析

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：李博刘娜刘彦威张欣邢鑫沈洁史瑞雅刘建钗河北工程大学生命科学与食品工程学院河北省禽病工程研究中心

出壳雏鸡的成活率直接影响孵化场和种鸡场的经济效益,为了解导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌,减少出壳雏鸡的病死率,提高养鸡业的经济效益,我们先后对两个孵化场的病、死出壳雏鸡做了调查研究。把先后两批共90只病、死出壳雏鸡解剖,肝... 详细信息

出壳雏鸡的成活率直接影响孵化场和种鸡场的经济效益,为了解导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌,减少出壳雏鸡的病死率,提高养鸡业的经济效益,我们先后对两个孵化场的病、死出壳雏鸡做了调查研究。把先后两批共90只病、死出壳雏鸡解剖,肝脏分离菌株,培养、纯化,革兰氏染色观察菌落形态,使用鉴别培养基初步判断菌种;又通过DNA提取,16S r RNA通用引物PCR扩增,扩增产物经0.7%琼脂糖凝胶电泳检测;测序结果在Gen Bank数据库中进行Blast分析比对,用DNAStar软件对相近序列进行同源性分析,确定菌种。采用纸片琼脂扩散法对分离出的菌株进行药敏试验,测出对主要病原菌敏感性较高的药物。分离出67株病原菌,经形态学观察、鉴别培养基培养、鉴定检测、Blast分析比对,结果如下:肠球菌35株,占52.2%;大肠杆菌9株,占13.4%;葡萄球菌8株,占11.9%;奇异变形杆菌6株,占8.9%;不动杆菌3株,占4.5%;考克氏菌2株,占3%;地衣芽胞杆菌、无色杆菌、柠檬酸菌属、未知菌各1株,各占1.5%。导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌是肠球菌、大肠杆菌和葡萄球菌,其中肠球菌占52.2%,有此可见肠球菌是最主要的病原菌。所以对肠球菌做了药敏试验,试验结果发现:氧氟沙星、氨苄西林、新霉素、左氟沙星、青霉素、大观霉素、恩诺沙星、庆大霉素、万古霉素对肠球菌敏感性较高;强力霉素、链霉素对肠球菌中度敏感;头孢噻肟、林可霉素对肠球菌不敏感。经试验的分离鉴定,导致雏鸡病死的主要病原菌并非之前所报道的沙门氏菌和大肠杆菌,而是肠球菌。据了解,现在肠球菌作为一种致病菌已经严重危害了养殖业的健康发展,所以研究肠球菌耐药性对于防治肠球菌引起的疾病具有很重要意义。我们的调查结果,对导致出壳雏鸡病、死的主要病原菌有了新的发现,有利于出壳雏鸡成活率的提高,药敏试验的结果也对肠球菌引发疾病的防治提供了有力的科学依据。

关键词：大肠杆菌肠球菌主要病原菌病原菌分析

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牛和羊住肉孢子虫病病理学研究

牛和羊住肉孢子虫病病理学研究

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：董辉陆瑶瑶党盛源杨玉荣河南农业大学牧医工程学院

研究目的:住肉孢子虫是呈世界性分布的食源性寄生虫,而人类是黄牛住肉孢子虫***和***的终末宿主,感染后可引起肠胃不适。我国黄牛和绵羊住肉孢子虫流行率在3.64%-98.1%,0.67%-100%,而河南地区牛、羊住肉孢子虫病的研究调查仅有一项膈肌... 详细信息

研究目的:住肉孢子虫是呈世界性分布的食源性寄生虫,而人类是黄牛住肉孢子虫***和***的终末宿主,感染后可引起肠胃不适。我国黄牛和绵羊住肉孢子虫流行率在3.64%-98.1%,0.67%-100%,而河南地区牛、羊住肉孢子虫病的研究调查仅有一项膈肌住肉孢子虫病的报道（82.5%,33/40）,所以本研究统计分析河南地区牛羊心肌住肉孢子虫的感染率、感染密度、感染强度、炎症反应。材料和方法:运用石蜡切片H&E染色技术和PCR技术,调查分析2014～2016年牛和羊心肌（黄牛405份,绵羊311份）食源性住肉孢子虫病的流行情况和感染强度。结果:黄牛住肉孢子虫感染率为49.38%（200/405,95%CI=44.54-54.23）,感染密度为5.17～8.73个/cm2,绵羊住肉孢子虫的感染率为32.48%（101/311,95%CI=27.51-37.87）,感染密度为7.06～32.02个/cm2。其中黄牛住肉孢子虫薄壁包囊占88.00%,厚壁包囊2.00%,混合感染10.00%,而绵羊住肉孢子虫薄壁包囊、厚壁包囊、混合感染的感染率分别为38.61%,31.68%,29.71%。牛、羊心肌消化液成功扩增出DNA长度为350 bp的牛住肉孢子虫基因片段、羊住肉孢子虫600 bp的基因片段,进而验证形态学结果。讨论:国外牛、羊住肉孢子虫的流行率分别在0.23%00%和16.58%3.3%[2]。国内关于牛、羊心肌住肉孢子虫报道的调查地域只有湘西,青海省等地,而流行率分别为3.64%-98.1%和0.67%-100%。本次调查河南七个地区牛、羊住肉孢子虫感染情况,牛、羊心肌住肉孢子虫阳性率分别为49.38%和32.48%。与国内外可查报道进行比较后,发现该寄生原虫在我国分布面积广,且感染程度高,从而给防控工作带来极大的困难;住肉孢子虫可以寄生于人和多种动物的横纹肌,且分布具有选择性,结合住肉孢子虫包囊壁薄厚的形态学特点可以作为鉴别住肉孢子虫的方法,而病理组织学观察和PCR结果显示牛和羊心肌中分别存在住肉孢子虫***、***和***、***,均对牛羊存在致病性,并且危害肉品质量安全。该研究为防控牛羊住肉孢子虫病,牛、羊肉品的安全监测提供参考依据。中原地区牛、羊心肌住肉孢子虫病流行情况首次报道。

关键词：牛羊住肉孢子虫病理学心肌

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药物安全性评价毒性病理学家培训现状

药物安全性评价毒性病理学家培训现状

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：霍桂桃吕建军屈哲林志杨艳伟张頔李波中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室中国食品药品检定研究院

目的:毒性病理学是药物非临床安全性评价的重要组成部分,毒性病理学从形态学的侧面,研究实验动物给予外界因素后,所引起的器官、组织、细胞及亚细胞形态结构的变化差异,阐明外界因素所引起形态变化差异的剂量-效应关系,确定病变的靶器... 详细信息

目的:毒性病理学是药物非临床安全性评价的重要组成部分,毒性病理学从形态学的侧面,研究实验动物给予外界因素后,所引起的器官、组织、细胞及亚细胞形态结构的变化差异,阐明外界因素所引起形态变化差异的剂量-效应关系,确定病变的靶器官、靶部位、形态变化的性质特点和程度,以及其变化过程和转归,分析其可能的致病机制,为药物非临床安全性评价提供形态学依据和结论。本文拟对非临床药物安全性评价的国内外毒性病理学家培训现状进行详细说明,以期为我国药物非临床安全性评价领域更好地培训毒性病理学家提供一定建议和启示。材料方法:对毒性病理学的概念、毒性病理学家的作用、毒性病理学家需掌握的理论知识和实验技能以及获取理论知识合适的教育方法、毒性病理学家所需实验技能的获得途径、毒性病理学家培训方案、毒性病理学家继续教育活动以及我国毒性病理学家培训的现状等内容进行详细阐述及分析。结果:通过对上述内容的阐述及分析,明确了毒性病理学家的概念、在药物安平中的作用、受教育培训的方法及各地区毒性病理学家的资质认证及培训。讨论:中国毒性病理学会的建立时机和条件不成熟,未建立与国际接轨的培训体系和资质认证制度,我国非临床毒理学实验毒性病理学家有医学病理学家、兽医病理学家、医学生物学家及其它专业人员。中国畜牧兽医学会兽医病理学分会兽医病理学家委员会(CCVP)于2009年开始进行"中国兽医病理学家"资质考试,是目前我国第一个兽医病理学家资质认证考试制度。我国于2015年3月成立了中国药学会毒性病理专业委员会,2015年4月成立了中国毒理学会毒性病理学专业委员会。希望本文介绍的国内外非临床毒性病理学家的培训能够为我国毒性病理学家教育、培训以及非临床毒理学实验毒性病理学数据的产生、解释、整合及交流提供一定帮助,也为将来建立我国非临床毒理学实验毒性病理学家资格认证做好准备。

关键词：药物安全性评价毒性病理学家培训启示

来源：评论

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TW1型禽传染性支气管炎病毒的进化分析

TW1型禽传染性支气管炎病毒的进化分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会

作者：左磊杨鑫曾凡亚周泷田益明关茹韩潇潇吴暄王红宁四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室

引言禽传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）是冠状病毒科（family Coronavirnda e）、冠状病毒亚科（subfamily Coronavirinae）、γ冠状病毒属（gammacoronavirus）的代表种。IB V能引起鸡群呼吸道疾病,造成蛋鸡产蛋量下降和鸡群死亡率增高,给养鸡业造成严重的经济损失。台湾1（Taiwan group 1,TW1）型IBV最早于1992年在台湾被分离,近年在鸡群中呈现增加趋势,本研究从病毒进化角度对TW1型IBV进行分析,为IBV研究及防控提供参考。材料和方法结合本实验室完成全基因组序列测定的大陆分离TW1型IBV毒株SCZJ-2,以及从GeneBan k下载的TW1型IBV毒株序列（S1基因:34条,全基因组:8条）和其他基因型参考全基因组序列11条。通过MEGA、DNAstar等软件对下载的序列进行序列比对、同源性及进化分析。结果讨论结果显示:TW1型IBV S1基因均由540个氨基酸组成,其序列一致性为88.7%00%;全基因组序列一致性为85.0%7.9%。全进组进化分析显示TW1型IBV分为台湾流行株（TW2575/98及3575/98）、大陆早期毒株（SCZJ-2）及目前流行毒株三个小群。此外,相比于TW1型IBV参考毒株TW2575/98,其他毒株S1基因氨基酸存在七个一致的氨基酸替换（P56T、A94S、K154N、N282T、D320A、S393L和V479F）,可以逃避TW2575/98衍生疫苗免疫的台湾流行毒株3575/08在S1基因区域也包含P56T、A94S、D320E和S393L四个氨基替换。Leyson C等研究表明,ArkD PI型IBV S1基因Y43H及344位氨基酸缺失分别引起其组织嗜性及抗原性变化,结合本研究结果,推测K154N、N282T、D320A和V479F四个S1基因区域的氨基替换对TW1型IBV的流行传播具有促进作用。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 TW1型毒株氨基替换进化

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NF-κB信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响

NF-κB信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：易继海王月丽王震陈创夫石河子大学动物科技学院

研究目的:布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生致病菌,侵染力和传染性强,传播途径传播范围广泛。布鲁氏菌病现已波及全球近90%的国家和地区,每年造成数以亿计的经济损失[1]。布鲁氏菌有自己特有的生物活性,具有独特的生物学功能,与... 详细信息

研究目的:布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生致病菌,侵染力和传染性强,传播途径传播范围广泛。布鲁氏菌病现已波及全球近90%的国家和地区,每年造成数以亿计的经济损失[1]。布鲁氏菌有自己特有的生物活性,具有独特的生物学功能,与宿主的免疫间存在相互联系,具有复杂的信号调控网络,因此在粗糙型牛种布鲁氏菌感染下探索NF-κB信号通路是否直接调控细胞的凋亡,来影响布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活是十分重要的,为进一步明确布鲁氏菌感染后逃避宿主免疫系统的机制,为我们寻找新型的布鲁氏菌控制策略提供新的方向和奠定理论基础。本实验首先建立布鲁氏菌侵染模型,应用Western-blot技术检测布鲁氏菌RB51侵染下NF-κB信号通路的活性;对抑制剂进行毒性检测后,RB51侵染用不同浓度抑制剂处理后的巨噬细胞,Western-blot检测NF-κB信号通路的活性;RB51侵染下流式细胞仪检测不同时间段细胞凋亡。材料方法:1.粗糙型牛种布鲁氏菌RB51的PCR鉴定;2.粗糙型牛种布鲁氏菌RB51分别以0,6,12,24,48 h侵染巨噬细胞后收集蛋白后进Western Blot检测NF-κB信号通路激活状态(0 h是对照组);***-κB抑制剂5、10、15μmol/L孵育细胞后,用粗糙型布鲁氏菌RB51侵染12h后Western-blot检测NF-κB信号通路激活状态;4粗糙型牛种布鲁氏菌RB51侵染细胞流式细胞仪检测巨噬细胞的凋亡率。结果:本试验中我们发现在RB51侵染下,能够强烈激活NF-κB信号通路,且存在时间依赖性,在12h左右激活能力最高,同时不同浓度的抑制剂BAY11-7082对该通路的抑制作用也有差异,在加入10μmol/L抑制剂后NF-κB p-p65的磷酸化程度迅速降低,且存在最佳抑制浓度;NF-κB信号通路抑制剂BAY11-7082可以影响布鲁氏菌侵染下细胞的凋亡。讨论:粗糙型布鲁氏菌能够激活NF-κB信号通路,可能由于缺失了Wbo A基因,强烈激活NF-κB通路,促进了细胞凋亡,降低了布鲁氏菌的部分逃逸能力,LPS介导的细胞炎症反应是一个典型的病原体与机体相互作用的过程[2],由此可以猜测是布鲁氏菌LPS影响着通路的活性从而通过通路的调控进而影响细胞的凋亡,为布鲁氏菌在细胞内的存活提供条件。总而言之,NF-κB信号通路在粗糙型布鲁氏菌RB51侵染巨噬细胞的过程中发挥了重要作用,影响着布鲁氏菌在胞内的存活,为研究布鲁氏菌免疫逃逸以及胞内持续感染的初步机制研究奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌细胞凋亡信号通路

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