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26 篇 浙江大学
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20 篇 中山大学
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17 篇 西南大学
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17 篇 军事医学科学院军...
17 篇 西北农林科技大学
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作者

19 篇 黄良民
18 篇 程相朝
17 篇 廖成水
17 篇 张春杰
16 篇 尹仁福
15 篇 赵德明
15 篇 周向梅
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14 篇 丁壮
14 篇 王海燕
13 篇 余祖华
13 篇 杨利峰
11 篇 杨莹莹
11 篇 郑世军
11 篇 钟金城
11 篇 黄娇玲
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11 篇 曹红
11 篇 谢丽基
11 篇 李俊姣

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siIRE1α重组腺病毒构建及对C2C12细胞增殖凋亡的影响

siIRE1α重组腺病毒构建及对C2C12细胞增殖凋亡的影响

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：韩晓凤李美玲张鹏夏飞郭风劲重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室

目的构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α（inositol-requiring enzyme 1α,IRE 1α）基因干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）重组腺病毒,在小鼠成肌细胞系C2C12中鉴定其干扰作用,并探讨其对C2C12细胞增殖凋亡的影响。方法利用OligoEngin... 详细信息

目的构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α（inositol-requiring enzyme 1α,IRE 1α）基因干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）重组腺病毒,在小鼠成肌细胞系C2C12中鉴定其干扰作用,并探讨其对C2C12细胞增殖凋亡的影响。方法利用OligoEngine软件在线设计靶向IRE1α的siRNA干扰序列,送公司合成。用分子克降的方法插入到穿梭载体pSES-HUS上,酶切及基因测序鉴定。经pmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1通过电转法在大肠杆菌BJ5183感受态中进行同源重组,得到pAd-SES-HUS-IRE1αsiRNA重组质粒,pacI酶切鉴定。通过脂质体介导感染HEK293细胞,进行包装并扩增重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA,然后感染C2C12细胞,用RT-PCR和Western Blot方法检测其对IRE1 mRNA和蛋白表达的干扰效果。并通过FCM法检测在有和无Tm（tunicamycin）的条件下,对C2C12细胞增殖凋亡的影响。影响。结果酶切及基因测序证实,成功构建了pAd-IRE1αsiRNA重组干扰质粒,得到高滴度的Ad-IRE1αsiRNA重组腺病毒,病毒滴度约为4.3×10;RT-PCR和Western Blot结果表明,该重组腺病毒有效的抑制了C2C12细胞中IRE1的表达;FCM检测结果表明,ERS条件下,Tm+Ad-IRE1αsiRNA处理组G1期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组低14.47%和15.82%（P<0.5）,S期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组高12.62%和14.80%（P<0.5）;凋亡率比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组低出16.64%和16.26%（P<0.5）。结论成功构建了靶向IRE1αsiRNA的重组腺病毒,在C2C12细胞中实现了IRE1α表达的抑制;RNA干扰IRE1α基因可促进C2C12细胞的增殖,抑制其凋亡。为进一步研究IRE1基因功能奠定了基础,也为内质网应激相关的骨骼肌疾病提供了一定的参考价值。

关键词： IRE1α基因 RNA干扰重组腺病毒 C2C12细胞

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牦牛MC1R基因的克隆测序及其多态性研究

牦牛MC1R基因的克隆测序及其多态性研究

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：陈思钟金城王永柴志欣马志杰西南民族大学动物遗传育种学国家民委-教育部共建重点实验室青海高原牦牛研究中心

牦牛是青藏高原的特有畜种之一,能充分利用高寒草地的牧草资源,对高寒草地的生态环境条件具有极强的适应性,可为当地牧民提供奶、肉、毛、役力、燃料等生产生活必需品,其中牦牛毛（包括尾毛、毛绒）作为特种动物毛,产量大,质量好,除供... 详细信息

牦牛是青藏高原的特有畜种之一,能充分利用高寒草地的牧草资源,对高寒草地的生态环境条件具有极强的适应性,可为当地牧民提供奶、肉、毛、役力、燃料等生产生活必需品,其中牦牛毛（包括尾毛、毛绒）作为特种动物毛,产量大,质量好,除供应国内需求外,是我国出口畅销的畜产品之一,并以白牦牛毛最为驰名。牦牛毛、绒制品深受喜爱,但由于牦牛多为黑色、褐色或黑白色,颜色较深不易染色,导致牦牛毛制品出现颜色单一,不能满足广大消费者的需求。而天祝牦牛被毛纯白,可染性强,是独特的轻纺工业原料,与其他牦牛毛和绒相比具有光泽好,柔软且有弹性等特点,据研究白牦牛的经济价值为其他牦牛的4倍。黑色素皮质素受体1（MClR）基因是控制动物毛色的关键基因,本研究以天祝牦牛、九龙牦牛两个毛色不同的牦牛品种为研究对象,对MCIR基因进行克隆测序、多态性分析和分子调控机理研究。结果表明:①牦牛的MClR基因编码区全长955bp,编码317个氨基酸;牦牛的MC1R蛋白不存在信号肽,为7次跨膜蛋白。②大祝牦牛、九龙牦牛和普通牛的MC1R基因在编码区内共有9处碱基替换,九龙牦牛与普通牛之间在296bp（C/T）、375bp（C/T）、663 bD（T/C）、725bp（A/C）位点上分别发生转换或颠换;天祝牦牛与普通牛之间在219（A/G）、538（A/G）、275（T/C）、499（T/C）、663（T/C）、296（C/T）、375（C/T）、624（C/G）、725（A/C）位点上分别发生转换或颠换;天祝牦牛与九龙牦牛之间209（A/G）、538（A/G）、275（T/C）、509（T/C）、642（C/G）位点上分别发生转换或颠换。③天祝牦牛、九龙牦牛及普通牛的MC1R由317个氨基酸残基组成,其中在第209、275、509、539位上普通牛和九龙牦牛分别为H、V、V、I,而大祝牦牛分别为R、A、A、V;在296、725位上九龙牦牛与天祝牦牛分别为L、T,而普通牛分别为P、N。④PCR-SSCP多态性检测发现,在MCIR扩增片段中,天祝牦牛和九龙牦牛均有3种基因型（AA、BB、AB）,A为优势等位基因;天祝牦牛的多态性较低（P<0.25）,而九龙牦牛表现为中度多态（0.25

关键词：牦牛 MC1R基因克隆测序 PCR-SSCP

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HLA-G基因3'UTR区14bp多态性与云南汉族系统性红斑狼疮的关联性

HLA-G基因3'UTR区14bp多态性与云南汉族系统性红斑狼疮的关联性

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：陈婷婷于亮黄凯孙浩林克勤黄小琴褚嘉祐杨昭庆北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所

人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)是机体内一类重要的免疫调节分子。HLA-G可通过与受体结合直接抑制多种免疫活性细胞的生物学功能,或通过诱导产生免疫调节细胞间接抑制机体的免疫应答,在自身免疫疾病的发生发展有重... 详细信息

人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)是机体内一类重要的免疫调节分子。HLA-G可通过与受体结合直接抑制多种免疫活性细胞的生物学功能,或通过诱导产生免疫调节细胞间接抑制机体的免疫应答,在自身免疫疾病的发生发展有重要意义。其3'端非翻译区(3'UTR)14bp的插入/缺失是一功能性的多态性,能够影响HLA-G的表达水平和剪接体的形式。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种临床表现多样的自身免疫疾病,遗传和环境因素在SLE的发病过程中均起重要作用,HLA-G基因多态性和SLE疾病易感性相关,但是关联程度在不同群体中存在差异。为了解HLA-G基因3'UTR区14 bp多态性与云南地区汉族系统性红斑狼疮的关联性.文章采用聚合酶链式反应(PCR)及DNA序列测序对271例云南汉族SLE患者及292名健康对照者的HLA-G基冈3'UTR区域14bp插入/缺失多态性和基因型进行检测和分析,并分性别对男女(两组分别分析。结果表明,HLA-G 14 bp插入等位基因频率在SLE组和对照组分别为0.362和0.330,+14bp/+14bp、+14bp/-14bp、-14bp/-14bp基因型频率在SLE组和健康体检组分别为0.148,0.428,0.424和0.120,0.42l,0.459,HLA-G14 bp插入/缺失等何基因和基因型频率的分布在SLE组和对照组问均无统计学差异(P均>0.05),男女两组问的等位基因和基因型频率也未见统计学差异(P>0.05)。提示HLA-G14bp插入/缺失多态性与云南汉族系统性红斑狼疮易感性无显著关联,HLA-G基因3'UTR区14 bp多态性与SLE的关联性存在群体和地域的差异,进一步研究HLA-G 3'UTR区其他多态位点及其与14bp多态位点形成的单倍犁与SLE的关联性,可为深入探索云南地区SLE的发病机制和遗传因素提供更多的依据。

关键词： HLA-G 系统性红斑狼疮多态性

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多种羧化酶缺乏症相关HLCS基因致病新突变的鉴定

多种羧化酶缺乏症相关HLCS基因致病新突变的鉴定

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：刘双邢雪莎宋莹麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的多种段化酶缺乏症（multiple carboxylase deficiency,MCD）是一种罕见的常染色体隐性遗传病,临床上主要农现为神经系统及皮肤的损害。根据缺陷酶的不同,可分为生物索酶缺陷症（BTD）和全羧化酶合成酶缺陷症（HLCSD）两类,分别由BT... 详细信息

目的多种段化酶缺乏症（multiple carboxylase deficiency,MCD）是一种罕见的常染色体隐性遗传病,临床上主要农现为神经系统及皮肤的损害。根据缺陷酶的不同,可分为生物索酶缺陷症（BTD）和全羧化酶合成酶缺陷症（HLCSD）两类,分别由BT基因和HLCS基因突变引起。其中BTD的发病率约1/6万,而HLCSD的发病率目前还没有报道。BT基因定位于3p25,有4个外显子,HLCS基因位于21q2211,有14个外显子。该病临床表现复杂多样,无特异性,新生儿、婴儿早期发病较危重,表现为喂养困难、呕吐:、腹泻、难治性皮疹、脱发、肌张力低下、惊厥、意识障碍、共济失调、智力和运动发育落后。本研究以1例临床确诊MCD的中国患儿为研究对象,旨在通过对其致病基因进行突变分析,为临床诊断提供依据。方法经知情同意后采取MCD患者及父母外周血并提取基因组DNA,利用PCR技术,对BT基因和HLCS基因的编码区进行扩增。PCR产物直接进行测序,运用Chromas软件进行测序结果分析。结果首先对BT基因进行突变检测,测序结果显示BT基因编码区未发现致病突变。随后俭测HLCS基因的编码区,共发现两个杂合突变,1个是缺失突变:c.286delG（***96Leufs162）,该突变导致HLCS编码蛋白发生框移突变第96化由缬氨酸变为亮氨酸并在第258位终止;另1个为错义突变:c.1648G>A（p.V550M）,该突变导致HLCS基因编码货白第550位氨基酸由缬氨酸变为甲硫氨酸。经人类基因突变数据库检索,HLCS基因c.1648G>A碱基改变为已报道突变,未见关于c.286delG突变的报道。对患者父母进行相应位点的测序,发现患儿父亲为c.1648G>A杂合突变携带者,母亲为c.286delG杂合突变携带行。结论 HLCS基因中c.286delG和c.1648G>A是导致患者发生MCD的致病突变,丰富HLCS基因突变谱,为临床诊断提供依据。

关键词：多种羧化酶缺乏症 HLCS基因基因突变

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人类遗传性疾病传递规律的研究与探讨

人类遗传性疾病传递规律的研究与探讨

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：高明武

人类遗传性疾病的后代传递规律与人类性别遗传规律是密切相关的,只有了解和认识人的性别与表型遗传规律,才能够事先预见或规避后代遗传病患儿的产生,配偶的子代遗传规律四种,即性别生育比例、性别生育顺序、表型出生比例、表型出生顺序... 详细信息

人类遗传性疾病的后代传递规律与人类性别遗传规律是密切相关的,只有了解和认识人的性别与表型遗传规律,才能够事先预见或规避后代遗传病患儿的产生,配偶的子代遗传规律四种,即性别生育比例、性别生育顺序、表型出生比例、表型出生顺序。1人类配偶类型A型配偶:丈夫表型随父,性别基因Y为显性(来自父亲)。妻子表型随父,性别基因X为显性(来自父亲)。B型配偶:丈夫表型随父,性别基因Y为显性(来自父亲)。妻子表型随母,性别基因x为显性(来自母亲)。c型配偶:丈夫表型随母,性别基因x为显性(来自母亲)。妻子表型随父,性别基因X为显性(来自父亲)。D型配偶:丈夫表型随母,性别基因x为显性(来自母亲)。妻子表型随母,性别基因X为显性(来自母亲)。2人的性别遗传规律A型配偶了代男性平均占95%,女性甲均占5%。(前四胎子女理论统计数据,下同)B型配偶子代男性平均占72%,女性平均占28%。C型配偶子代女性平均占72%,男性平均占28%。D型配偶子代女性平均占95%,男性平均占5%。3人的表型遗传规律A型配偶子代表型随父男孩占47%,表型随母男孩占48%。表型随父女孩占3%,表型随母女孩占2%。B型配偶子代表型随父男孩占42%,表型随母男孩占30%。表型随母女孩占20%,表型随父女孩占8%。C型配偶子代表型随母女孩占42%,表型随父女孩占30%。表型随父男孩占20%,表型随母男孩占8%。D型配偶子代表型随母女孩占47%,表型随父女孩占48%。表型随母男孩占3%,表型随父男孩占2%。4人类遗传性疾病传递规律丈夫显性带病遗传:在A、B型配偶中:传男不传女。表型随父的男孩显性带病,表型随母的男孩隐性带病。在C、D型配偶中:传女不传男。表型随父的女孩显性带病,表型随母的女孩隐性带病。妻子显性带病遗传:在A、B型配偶中:传男不传女。表型随母的男孩显性带病,表型随父的男孩隐性带病。在C、D型配偶中:传女不传男。表型随母的女孩显性带病,表型随父的女孩隐性带病。丈夫隐性带病遗传:在A、B型配偶中:传女不传男。表型随父的女孩显性带病,表型随母的女孩隐性带病。在C、D型配偶中:传男不传女。表型随父的男孩显性带病,表型随母的男孩隐性带病。妻子隐性带病遗传:在A、B型配偶中:传女不传男。表型随母的女孩显性带病,表型随父的女孩隐性带病。在C、D型配偶中:传男不传女。表型随母的男孩显性带病,表型随父的男孩隐性带病。

关键词：性别遗传规律疾病传递规律

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望水白及其感赤霉病突变体受赤霉菌诱导基于基因芯片的转录谱分析

望水白及其感赤霉病突变体受赤霉菌诱导基于基因芯片的转录谱分析

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中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：贾新平肖进赵维萍金夏红陈启广何立强曹爱忠王海燕王秀娥南京农业大学细胞遗传研究所作物遗传与种质创新国家重点实验室江苏省农业科学院生物技术研究所安徽省滁州学院

小麦品种望水自是商抗赤霉病的地方品种,利用快中子辐射望水白获得了一个稳定的干赤霉病突变体。前期研究表明,该突变体由于定位于小麦3B染色体短臂上的主效QFL缺失,导致其感病性提高。为了研究望水白响应赤霉菌侵染的分子机制,本研究利... 详细信息

小麦品种望水自是商抗赤霉病的地方品种,利用快中子辐射望水白获得了一个稳定的干赤霉病突变体。前期研究表明,该突变体由于定位于小麦3B染色体短臂上的主效QFL缺失,导致其感病性提高。为了研究望水白响应赤霉菌侵染的分子机制,本研究利用AffymetrixWheat Genome GeneChip进行基于基因芯片杂交的转录组分析,比较抗感材料中受赤霉菌诱导前后差异表达基因。结果表明,在望水白中检测到的上调表达基因有1,874个,下调表达基因有1,107个;在NAUH117中检测到的上调表达基因有2,143个,下调表达基因有1,670个。利用Blast2go对上述差异表达基因分别进行功能注释特征分析和GO分析,发现望水白受赤霉菌诱导的上调表达基因中,1,523个具有功能注释信息,753个具有GO信息;NAUH117受赤霉菌诱导的上调表达基因中,1,846个具有功能注释信息,1,041个具有GO信息。对望水白利NAUH117中的上调表达基因进行GO分类,发现与生物品质调控、解剖学结构发育、多细胞生物发育、核苷结合、裂解酶活性等相关的功能基因仅存NAUH117受赤霉菌诱导的上调表达基因中存住。KEGG代谢通路分析表明,望水白和NAUH117中的上调表达基因中有多个基因参与植物信号转导途径和植物与病原菌互作等抗病通路。其中,信号转导途径包括植物次生代谢、活性氧爆发、钙离子、磷脂酸分子、水杨酸、茉莉酸和乙烯等信号途径;植物与病原菌互作涉及PTI和ETI反应,推测这些抗病通路参与小麦抗赤霉病反应。染色体电子定位结果表明,望水白受赤霉菌诱导的上调表达基因中,具有定位信息的有231个(12.40%),定位到501个化点;NAUH117受赤霉菌诱导的上调表达基因中,具有定化信息的有197个(9.20%),定位到416个位点。

关键词：小麦赤霉病基因芯片差异表达基因基因电子定位

来源：评论

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拟南芥耐盐相关基因AtSTK的克隆与功能研究

拟南芥耐盐相关基因AtSTK的克隆与功能研究

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：邴雷李晶岚李晓旭赵宝存沈银柱黄占景葛荣朝河北师范大学生命科学学院淄博市高新区实验中学

研究表明,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是生物酶中的一个大家族,参与环境胁迫信号的传递是其重要功能之一。TaSTK是我们筛选获得的一个盐诱导后表达增强的小麦基因,通过在拟南芥中的异源功能验证,表明TaSTK基因的过量表达能够显著提高转基因... 详细信息

研究表明,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是生物酶中的一个大家族,参与环境胁迫信号的传递是其重要功能之一。TaSTK是我们筛选获得的一个盐诱导后表达增强的小麦基因,通过在拟南芥中的异源功能验证,表明TaSTK基因的过量表达能够显著提高转基因拟南芥的耐盐性。拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因AtSTK是与小麦耐盐相关基因TaSTK高度同源的蛋白激酶基因。本研究对基因AtSTK进行了克隆和功能研究。结果发现,AtSTK基因的过量表达可以明显提高拟南芥对盐、PEG和ABA胁迫的耐受性。生理特性检测表明,AtSTK的过量表达造成拟南芥质膜透性显著降低,脯氨酸含量明显升高,MDA含量下降,这也许AtSTK挝表达造成拟南芥抗逆性提高的生理原因。在高浓度的外源ABA条件下,AtSTK基因的过量表达明显拮抗了ABA对种子萌发的抑制作用。亚细胞定位结果表明,AtSTK普遍分布于细胞质和细胞核。组织表达特异性检测表明,AtSTK基因在拟南芥的生长点具有较强表达。信号通路的RT-PCR检测表明,AtSTK可能主要通过拟南芥的MAPK信号通路传递盐胁迫信号。从拟南芥基因组DNA扩增获得AtSTK基因的全长启动子序列,并根据启动子结构分析结果,对其启动子序列进行了5'端系列缺失。然后在拟南芥中利用GUS报告基因,对这一系列5'端序列缺失启动子序列的启动能力进行了检测,同时对其转基因拟南芥200mmol/LNaCl盐胁迫后的启动能力也进行了检测。最终确定AtSTK基因启动子-99bp～-180bp和-457bp～-779bp区域有增强子作用,位于-115位点的CAAT框可能对基因表达起到了增强作用。启动子片段一旦缺失-29位点的TATA框,会造成其启动下游基因表达的能力丧失。

关键词：拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶过量表达抗逆性抗逆机理

来源：评论

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青稞4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆及表达分析

青稞4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆及表达分析

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：杨晓云杨智敏孔德媛罗小娇刘新春四川农业大学农学院植物遗传育种学系大麦研究中心江苏省农业科学院植物保护研究所

黄酮类化合物(flavonoids)具有抗衰老、抗真菌、抗癌、降血脂和保护心脑血管等多种药理活性,已成为植物界和医药界的研究热点。青稞(Hordeumvulgare *** Hook.F)因在成熟期稃皮与籽粒分离,在植物学上称为裸大麦。是藏族人民制作糌粑主... 详细信息

黄酮类化合物(flavonoids)具有抗衰老、抗真菌、抗癌、降血脂和保护心脑血管等多种药理活性,已成为植物界和医药界的研究热点。青稞(Hordeumvulgare *** Hook.F)因在成熟期稃皮与籽粒分离,在植物学上称为裸大麦。是藏族人民制作糌粑主要原料,并富含黄酮和各种对人体有益的活性成分。4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL;EC 6.2.1.12)位于苯丙烷类化合物生物合成途径的分支点上,催化4-香豆酸及其衍生物生成相应的硫酯酰CoA,直接参与植物次生代谢产物黄酮和木质素合成。本研究采用RT-PCR结合RACE方法,克隆了青稞4-香豆酸辅酶A连接酶基因(4CL)的全长,并利用QRT-PCR对该基因在青稞胚乳发育期的时空表达情况进行研究,青稞4CL基因cDNA全长序列2107bp,其中5-UTR为156bp,3-UTR为289bp,开放阅读框(ORF)1662bp,编码553个氨基酸。系统发育树结果表明青稞(Hordeum vulgare *** Hook.F)的4CL基因与短二柄草、柳枝稷、蒺藜草和玉米的4CL基因亲缘最近,同属于单子叶4CL基因簇。其编码的预测蛋白具有4-香豆酸辅酶A连接酶特征性保守肽基序AMP-binding盒(boxⅠ)和活性中心GEICIRG(boxⅡ),理论分子量为59.251kDa,为亲水性稳定性非分泌蛋白,定位于细胞质。以α螺旋(37.25%)和无规则卷曲(30.20%)为主要形式存在。定量表达结果表明,4CL基因在青稞胚乳发育不同时段和不同组织的表达丰度不同,在茎中表达量最高,其次是叶和籽粒。籽粒中4CL基因表达量在授粉后4天(4 DAP)最高,而后逐渐降低;茎中4CL基因表达量则在授粉后16天(16 DAP)达到峰值;而叶中4CL基因表达量在授粉后12天到16天有一个急剧升高的过程。研究结果为进一步研究4-香豆酸辅酶A连接酶与青稞黄酮生物合成之间的关系提供参考。

关键词：青稞 4-香豆酸辅酶A连接酶 RACE 荧光定量PCR

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氯丝菌素生物合成调控基因——chIF1和chIF2的调控机制

氯丝菌素生物合成调控基因——chIF1和chIF2的调控机制

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：李月刘文谭华荣中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室中国科学院上海有机化学研究所生命有机国家重点实验室

氯丝菌索是S antibioticus DSM 40725产乍的一类螺环乙酰乙酸内酯类抗生素,有着抗感染、抗肿瘤和抑制胆固醇合成等生物活性。本课题主要研究氯丝菌素簇内调控基因chlF1(TetR家族)和chlF2(SARP家族)的调控机制,为理性改造菌株和提高抗生... 详细信息

氯丝菌索是S antibioticus DSM 40725产乍的一类螺环乙酰乙酸内酯类抗生素,有着抗感染、抗肿瘤和抑制胆固醇合成等生物活性。本课题主要研究氯丝菌素簇内调控基因chlF1(TetR家族)和chlF2(SARP家族)的调控机制,为理性改造菌株和提高抗生素产量提供重要理论依据。通过基因敲除、回补、高表达等实验来研究chlF1,chlF2的功能。分别构建了敲除质粒,获得了突变株AchlF1和AchlF2,并以卡那霉素抗性基因为探针,通过Southern blot实验分别获得了5株AchlF1和8株AchlF2。对已经验证的突变株进行发酵,发现两个调控基因被阻断后均不能产生氯丝菌素,推测二者可能在氯丝菌素生物合成中扮演着正调控的功能。同时,以枯草芽孢杆菌为指示菌对发酵液进行生物活性检测,突变株在氯丝菌素出峰时间的收集液无抑菌活性,更加肯定了敲除结果。当敲除chlF2后,住6.5min处吸收峰较野生型明显升高且有生物活性,可能是因为阻断了SARP家族蛋白ChlF2后积累了某种仍具有活性的途径中间体。其次,为进一步研究其功能对突变株进行回补,同时构建高表达重组菌株(增加一个拷贝)并已成功获得了AchlF1/pSE-chlF1和WT/pSE-chlF1,目前正在发酵培养。此外,为确定凋控蛋白ChlF1作用的靶基因,我们已成功构建载体并异源表达ChlF1,对其进行了蛋白纯化,在生物合成基因簇内分析并设计了10对探针进行EMSA实验。实验结果表明ChlF1能够与chlG和chlF1的启动子区结合,并且前者结合能力强于后者。说明chlG(编码ABC transporter)和chIF1(TetR调控蛋白)是ChlF1的靶基因,结果初步表明ChlF1可能通过调控上述基因的表达来有效控制氯丝菌素的生物合成。

关键词：氯丝菌素调控基因靶基因

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短小芽孢杆菌BA06胞外蛋白酶及其调控基因对盐胁迫的转录响应

短小芽孢杆菌BA06胞外蛋白酶及其调控基因对盐胁迫的转录响应

引用

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：黄承林刘蕊芳冯红四川大学生命科学学院

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BA06菌株不仅能够产生具有皮革脱毛功能的碱性蛋白酶(DHAP),而且还可以产生多种胞外蛋白酶。基因组的分析也证实编码这些蛋白酶基因的存在,同时也存在可能的调控基因。因此,我们分析研究了BA06菌株外泌... 详细信息

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BA06菌株不仅能够产生具有皮革脱毛功能的碱性蛋白酶(DHAP),而且还可以产生多种胞外蛋白酶。基因组的分析也证实编码这些蛋白酶基因的存在,同时也存在可能的调控基因。因此,我们分析研究了BA06菌株外泌蛋白酶及其调控蛋白基因在盐胁迫下的转录响应。随着培养基中NaCl浓度的提高(最高0.8 M),虽然细胞在基本培养液中生长差异不大,但胞外蛋白酶的总活性显著降低,并且延后。在此基础上,利用绝对定量PCR技术分析了5个可能的外泌蛋白酶基因和4个可能的调控基因在0.8 MNaCl胁迫下,连续3天的转录情况。结果表明:DHAP蛋白酶的在盐胁迫下转录拷贝数与对照相比在检测的3天中均出现明显的下降,特别是在48 h显著降低1个数量级;在其它几个编码外泌蛋白酶基因中,编码WPR基因的转录拷贝数任整体上略低于DHAP,但也在盐胁迫下转录水平降低;另外两个蛋白酶基因(epr、vpr)的转录拷贝数比DHAP基因低1～2个数量级,在盐胁迫处理后其转录水平变化不大;编码Vpr胞外蛋白酶基因似乎也不受盐胁迫的影响,在非盐胁迫的条件下转录水平略低于DHAP一个数量级。这些结果显示,DHAP确实是BA06菌株编码表达的一个主要胞外蛋白酶,进一步在转录水平上验证了我们前期的实验观察结果。对于分析的4个转录调控基因中,可能的负调控基因hpr的转录水平在盐胁迫条件下变化不大,而且总的转录拷贝数在整个研究的时间内比DHAP低1～2个数量级:盐胁迫导致sinR基因的转录略有下降;双组分系统degU/S基因在盐胁迫下,其转录的拷贝数也出现明显降低,但降低的程度小于1个数量级;并且degS基因的转录拷贝数略低于degU。因此,我们推测在短小芽孢杆菌中,盐胁迫可能通过降低degU的表达,从而抑制胞外蛋白酶DHAP的转录表达。

关键词：短小芽胞杆菌胞外蛋白酶转录调控盐胁迫拷贝数定量PCR

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