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主题

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机构

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31 篇 北京工业大学
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温热体外对人胃癌细胞株生物学行为的影响

温热体外对人胃癌细胞株生物学行为的影响

引用

第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：汤睿朱正纲瞿颖李建芳纪玉宝刘炳亚燕敏林言箴上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所

目的:探讨温热对人胃癌细胞株增殖、生存以及黏附、侵袭能力的影响。方法:对人胃癌细胞株(AGS,MKN45, SGC7901,NCI—N87,SNU—1和SNU—16)行43℃ 2...热处理,以37℃常温培养为对照。处理后用MTT法绘制生长曲线并比较增殖抑制情况,光... 详细信息

目的:探讨温热对人胃癌细胞株增殖、生存以及黏附、侵袭能力的影响。方法:对人胃癌细胞株(AGS,MKN45, SGC7901,NCI—N87,SNU—1和SNU—16)行43℃ 2...热处理,以37℃常温培养为对照。处理后用MTT法绘制生长曲线并比较增殖抑制情况,光镜下动态观察细胞生长情况和形态学变化,Hoechst33342...荧光染色观察细胞核染色等形态学变化,透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)观察细胞超微结构和死亡的具体形式,流式细胞术 (flow cytometry,FCM)定量分析细胞的凋亡和坏死比例,黏附和侵袭试验观察胃癌细胞的黏附和侵袭能力。结果:MTT 提示,温热对SNU-1有显著的增殖抑制作用(d1～d5温热组与对照组A值的比值始终在50％以下,P<0．01),对SNU- 16则无显著影响(d1～d5温热组与常温对照组A值的比值始终在90％以上,P>0．05),对4株贴壁细胞则表现为暂时性的增殖抑制(d1～d3,P<0．05),光镜观察发现温热处理后 SNU-1细胞出现死亡,而其他细胞无,射电镜S在温热处理后2...显著的形态学改变,而SNU-1则出现凋亡和坏死, FCM提示温热处理不增加AGS的自然死亡率(10．4％± 1．0％vs 10．0％±1．2...=0．45,P=0．6788),但能诱导 SNU-1发生凋亡和坏死,增加细胞死亡率(9．7％±1．1％vs 2...％±2...,t=6．54,P=0．002... 黏附试验表明温热能不同程度降低4株贴壁细胞的黏附能力[AGS(100％± 9．0％vs 69．3％±10．0％,t=4．86,P=0．0083),MKN45 (100％±2...vs 90．0％±2...,t=4．50,P=0．0108), SGC7901(100％±4．8％vs 65．6％±7．3％,t=6．83,P= 0．002...N87(100％±0．8％vs 78．8％±10．4％,t=4．16, P=0．0141)侵袭试验表明温热能不同程度降低6株细胞的侵袭能力[AGS(100％±7．1％vs 85．2...．1％,t=2...,P= 0．042...MKN45(100％±2...vs 91．6％±3．1％,t= 3．60,P=0．02...,SGC7901(100％±1．1％vs 87．9％± 4．3％,t=4．70,P=0．0093),N87(100％±4．8％vs 59．9％±3．0％,t=12...,P=0．0002...NU-1(100％±9．1％vs 80．3％±2...,t=3．63,P=0．02...,SNU-16(100％± 10．0％vs 74．9％±1．7％,t=4．13,P=0．0145)]。结论:大多数的胃癌细胞株表现对短时间温热的耐受,除了暂时性的增殖抑制作用外,温热并无细胞杀伤作用,SNU-1是一个例外,温热能导致SNU-1细胞的凋亡和坏死, 同时,温热处理能降低细胞的黏附和侵袭能力。

关键词：温热胃癌细胞株

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一种新型可降解的非病毒载体的构建及体外应用

一种新型可降解的非病毒载体的构建及体外应用

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浙江省第二十次肿瘤防治学术年会

作者：黄宏靓汤谷平王青青李达沈芬平周峻余海浙江大学免疫学研究所浙江大学化学生物和药物化学研究所浙江大学免疫学研究所浙江大学免疫学研究所浙江大学免疫学研究所浙江大学化学生物和药物化学研究所浙江大学免疫学研究所

目的构建一种可应用于肿瘤基因治疗的新型可降解的非病毒载体。方法 1．化学方法构建一种新型的非病毒载体,其是由2...基-β-环糊精 (2...droxypropyl-γ-Cyclodextrin) 作为骨架,使用羰二咪唑 (1,1’-Carbonyldiimidazole,CDI)进行... 详细信息

目的构建一种可应用于肿瘤基因治疗的新型可降解的非病毒载体。方法 1．化学方法构建一种新型的非病毒载体,其是由2...基-β-环糊精 (2...droxypropyl-γ-Cyclodextrin) 作为骨架,使用羰二咪唑 (1,1’-Carbonyldiimidazole,CDI)进行修饰后与小分子量聚乙烯亚胺(PEI 600 Da) 连接。 2...的载体进行质子核磁共振波谱法表征以证实其成功构建。 3．凝胶阻滞试验检测新载体携带DNA的能力。 ***法确定载体的细胞毒性。 5.体外试验:以SKOV-3c(人卵巢癌细胞),SKBR-3细胞(人乳腺癌细胞)作为实验细胞,通过报告基因的检测,观察荧光酶在细胞内的表达,检测新载体的转染效率。结果新载体通过化学表征方法确定其结构和组成,这是一种新的合成的化合物。构建的新型载体具有较强的携带DNA的能力,毒性很低。在体外的SK BR-3,SKOV-3c 细胞转基因试验中其转染效率要高于常规的非病毒载体(PEI 2...Da)。结论使用环糊精与小分子量的PEI600 Da连接构建的新载体是一种新的化合物,可以用作转基因载体。构建的新型的可降解非病毒载体有较强的携带DNA的能力,毒性很低,在体外转基因试验中显示了较高的转染效率。可望作为一种新型的转基因载体应用于肿瘤的基因治疗及其他疾病的转基因的治疗。

关键词：非病毒载体可降解基因载体

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胃肠道间质瘤概念的演变及诊治进展

胃肠道间质瘤概念的演变及诊治进展

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：李威中山大学肿瘤防治中心腹部外科

自1983年Mazur和Clark[1]首先提出胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumal,GIST）达一概念以来,随着组织化学、免疫组织化学、分子生物学及电镜技术等各学科尤其是病理学的不懈的努力,已使其实质逐步被人们所揭示。当前对于GIST... 详细信息

自1983年Mazur和Clark[1]首先提出胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumal,GIST）达一概念以来,随着组织化学、免疫组织化学、分子生物学及电镜技术等各学科尤其是病理学的不懈的努力,已使其实质逐步被人们所揭示。当前对于GIST的确切定义是:GIST是一类既非典型的平滑肌瘤,也非典型雪旺氏瘤的胃肠道间叶源性肿瘤,免疫表型上表达KIT蛋白,CD117染色阳性,遗传学上存在频发 c—ki基因突变,细胞形态为梭形细胞、上皮样细胞或两种细胞混合。由于GIST生物学行为复杂,其良恶判定至今仍缺乏“金标准”。基本上仍是沿袭了Emory等的方案,即:将出现已有病理证实的远处转移或邻近脏器受累,或肿瘤累犯黏膜固有层及肌层的情况均视为恶性的重要标准。在具备以下任一指标者视为具有恶性潜能:（1）肿瘤直径＞5CM,核分裂象＞5／50HPF（2...核异型性明显,细胞丰富,（3）肿瘤中央出现坏死,（4）细胞小,胞浆少,核浆比例增大,呈片巢状或腺泡状排列。良性GIST不应具备以上特征。在诊断方面, 除了病理形态以外免疫组化对GIST的确诊是不可或缺的,其中CD117阳性表达（接近100％）是目前公认的标准,也可伴有CD34的阳性表达（70％）。影像学检查虽不具有定性作用, 但对判断肿瘤的生物学行为、结构特征、病变范围等形态学特性方面具有不容替代的作用。迄今,外科手术切除仍是 GIST的首选治疗,尤其强调首次外科治疗的重要性,有关肿瘤的切除范围,基本上依照软组织肉瘤的切除原则,既距离肿瘤肉眼边界正常组织内3—5CM的完整切除,必要时连带整个脏器的切除也应在考虑选择范围。由于GIST淋巴结转移少见,目前多数主张不清扫或缩小术中清扫淋巴结的范围。 GIST分子靶向治疗的成效堪称为当今用于治疗实体瘤的典范。STI571是目前公认的治疗GIST的一线药物,推荐剂量为400—800MG／d,最大剂量不超过1000MG／d。但随着 STI571的不断推广使用,其耐药问题也日显突出,咎其原因, 主要有:宿主肝脏P450对药物的减效作用,KIT基因型扩增而超表达KIT,酪氨酸ATP位点的突变等,其中c—Kit基因的突变状态被认为是GIST耐药的重要因素。一些针对性的研究提出了多种可能的解决方案,其中一种多靶点酪氯酸激酶抑制剂SU 112...新药问世有望部分地解决这一问题。随着研究的广泛深入,许多问题仍需探讨:如能否在目前的基础上更多地采用基因手段介入该病的治疗,从根本上解决这一顽疾?如何才能借助更多、更可靠的肿瘤相关指标（如:多项免疫组化分子指标等）对现有的判断良、恶及交界性GIST的标准更好地加以诠释和完善而为指导临床治疗所用?能否制订出切实可行的临床病理分期使临床治疗更具合理性以达到治疗上的规范化?如此等等,不一而足,仍是我们今后乃至更长一段时间努力的方向。

关键词：胃肠间质瘤诊断治疗

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三维肿瘤生物模型的创建:体外肿瘤生物学的研究及其应用

三维肿瘤生物模型的创建:体外肿瘤生物学的研究及其应用

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：刘华杨炜瑞金医院集团闵行医院瑞金医院集团闵行医院

目的:肿瘤的体外研究主要依靠肿瘤细胞的单层培养,但其结果并不能真正反映呈三维状态生长的肿瘤。为了克服这一缺点,多细胞的圆球体被用来作为体外三维肿瘤模型。但肿瘤多细胞圆球体并不是一个真正的肿瘤的自然聚积生长过程,也很难直接... 详细信息

目的:肿瘤的体外研究主要依靠肿瘤细胞的单层培养,但其结果并不能真正反映呈三维状态生长的肿瘤。为了克服这一缺点,多细胞的圆球体被用来作为体外三维肿瘤模型。但肿瘤多细胞圆球体并不是一个真正的肿瘤的自然聚积生长过程,也很难直接用于肿瘤的侵袭和转移的研究。另一可供选择的方法是将肿瘤细胞株接种到动物中,观察其三维组织结构的形态和功能。动物实验成本较高。而且不利于连续动态观察。因此,迫切需要开发一种具有与哺乳动物体内的肿瘤相似生物学特性的,可方便地用于肿瘤侵袭和转移研究以及药物筛选的体外三维实体肿瘤模型。方法:将肿瘤细胞置于我们所发明的三维细胞培养单元的空腔中,所述三维细胞培养单元包括用于培养肿瘤细胞的空腔以及界定所述空腔的空腔壁,所述的空腔壁含有可透过营养成分和代谢产物的生物可降解的材料。然后将含有肿瘤细胞的三维细胞培养单元置于液体培养基中,促使肿瘤细胞生长形成肿瘤。所用肿瘤细胞株有人的肝癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胃癌等。结果:所述培养装置中的恶性肿瘤细胞可形成类似于原位癌的微小癌。所形成的恶性肿瘤具有和体内恶性肿瘤相似的生长状态和细胞生物学特性。表现为在显微镜下可观察到肿瘤细胞的快速生长、呈无限制性增生、早期出现中央性坏死、细胞凋亡;细胞有微绒毛和足突的形成、包括叶状和丝状伪足;所形成的肿瘤有多种不规则形态、包括分叶状、圆球状、结节状和菜花状肿瘤。还可观察到肿瘤细胞的播散和种植、黏附和穿透性浸润、运动和／或脱落至肿瘤周围。有些肿瘤可见大量细胞脱离母体肿瘤向周边和远处转移,呈克隆性生长并形成多个继发性肿瘤。构建的肿瘤可分泌肿瘤相关抗原,如结肠癌的癌胚抗原,肝癌的甲胎蛋白, 卵巢癌的癌抗原12...论:(1)首次实现在离体条件下构建肿瘤,所构建的肿瘤具有与体内肿瘤相似的生物学特性, 并可分泌肿瘤相关抗原。(2...体外肿瘤生物模型为癌症的研究提供了介于体外二维肿瘤细胞培养系统和体内动物实验肿瘤模型之间的独特的环境,可广泛深入地用于肿瘤的各种基础和临床研究。(3)例如可用于筛选、分离和鉴定在肿瘤细胞群体中转移性潜能高低不同的细胞亚系,或用于实体肿瘤干细胞的分离和鉴定。(4)还可在体外测定病人的肿瘤对不同治疗药物的反应,优选个体化治疗方案。(5)这一类似于活体环境的肿瘤细胞生长、发展和转移过程的体外实体肿瘤模型将对肿瘤的指导预防、辅助诊断、改进治疗和评估预后多方面的研究提供非常宝贵的作用。

关键词：体外肿瘤三维肿瘤模型肿瘤生物学肿瘤的浸润和转移肿瘤相关抗原

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MGMT阳性恶性脑胶质瘤病人的化疗-附51例体会

MGMT阳性恶性脑胶质瘤病人的化疗-附51例体会

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：张俊平赛克魏大年牟永告张湘衡吴秋良陈忠平华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室华南肿瘤学国家重点实验室

目的:亚硝脲类药物及新药替莫唑（temozolomide, TMZ）是治疗恶性脑胶质瘤的常用药物,文献报道肿瘤细胞内的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine- DNA methyltranferase,MGMT）可使DNA烷基化损伤得到修复,是细胞对亚硝脲类... 详细信息

目的:亚硝脲类药物及新药替莫唑（temozolomide, TMZ）是治疗恶性脑胶质瘤的常用药物,文献报道肿瘤细胞内的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine- DNA methyltranferase,MGMT）可使DNA烷基化损伤得到修复,是细胞对亚硝脲类药物及新药替莫唑胺产生耐药性的主要原因。MGMT表达阳性与恶性脑胶质瘤对亚硝脲类和TMZ耐药相关,而MGMT表达阳性占恶性胶质瘤病人半数以上。我们比较了含亚硝脲类药物方案、含替莫唑胺方案及不含亚硝脲和替莫唑胺三类化疗方案,对MGMT表达阳性的恶性胶质瘤病人的近期疗效和不良反应,以期为MGMT阳性胶质瘤病人的化疗选择提供临床依据。方法:经手术后病理确诊的MGMT表达阳性的恶性脑胶质瘤患者51例,接受三组化疗方案化疗:含亚硝脲类药物化疗组11例,含替莫唑胺化疗组18例,不含亚硝脲和替莫唑胺化疗组2...按WHO 疗效评价标准进行近期疗效评价。不良反应评价按美国国立癌症研究所（National Cancer Institute,NCI）评价标准。结果:51例共进行174个周期,平均3．4个周期（1-6）。总的51例病人的客观有效率（CR+PR）为2...疾病控制率（CR+PR+SD）为59％。含亚硝脲类药物化疗组、含替莫唑胺化疗组、不含亚硝脲和替莫唑胺化疗组的客观有效率及疾病控制率分别为:0％和18．2...6．7％和61．1％、31．8％和77．3 ％。不含亚硝脲和TMZ化疗组的客观有效率和疾病控制率均较含亚硝脲化疗组高,有统计学差异（P＜0．05）。含亚硝脲化疗组、含TMZ化疗组、不含亚硝脲和TMZ化疗组可评价不良反应的周期数分别为14、47、2...期。含亚硝脲化疗组的不良反应主要是血液学毒性和恶心／呕吐,III级粒细胞减少3个周期（2...,III级恶心／呕吐2...（14％）。含 TMZ化疗组不良反应发生率低,IV级粒细胞减少1个周期（2...III级腹痛1个周期（2...III级疲劳2...（4％）。不含亚硝脲和TMZ化疗组不良反应主要为血液学毒性、恶心／呕吐和脱发,III、IV级粒细胞减少分别为3（14％）和 6（2...个周期,IV级血红蛋白降低和III级血小板减少分别为1（5％）和4（18％）个周期,III级恶心／呕吐和脱发分别为1（5％）和7（32...周期。一例粒细胞减少性发热出现在不含亚硝脲和TMZ化疗组。含亚硝脲化疗组一例患者因III级血小板减少而推迟治疗时间2...含亚硝脲和TMZ 化疗组III、IV血液学毒性发生率较高,但大多可在一周内自行恢复或经短期（3～5天）G—CSF对症处理后恢复正常。结论:MGMT阳性表达的恶性胶质瘤病人不加选择地用药,化疗有效率较低,不含亚硝脲和替莫唑胺化疗组有较高的有效率,是MGMT阳性表达的恶性胶质瘤病人值得推荐的方案, 含替莫唑胺化疗组有一定的有效率,耐受性好,不宜放弃在 MGMT阳性表达的恶性胶质瘤病人的应用,但尚许探索更有效的用药方法,含亚硝脲类药物化疗组在MGMT阳性表达的恶性胶质瘤病人疗效不佳。

关键词：恶性脑胶质瘤 MGMT 化学疗法亚硝脲类药物替莫唑胺

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595nm Vbeam激光对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

595nm Vbeam激光对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

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第4届东方国际美容外科大会

作者：滕雯郝立君任丽虹肖志波王敏李芍华哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第二医院

目的观察595nm Vbeam激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中成纤维细胞增殖的抑制作用。方法实验于2...年10月至2...年6月在哈尔滨医科大学附属二院激光美容中心完成。成年大耳白兔2...建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,上皮化后切取一... 详细信息

目的观察595nm Vbeam激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中成纤维细胞增殖的抑制作用。方法实验于2...年10月至2...年6月在哈尔滨医科大学附属二院激光美容中心完成。成年大耳白兔2...建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,上皮化后切取一组瘢痕8处,然后将瘢痕随机分为激光治疗组和对照组,激光治疗组在创面上皮化后按一定参数进行激光照射,开始时每周照射1次,1个月后改为每 2...1次,共2...对照组不进行治疗。在上皮化后1,2...6,8周分别切除两组增生性瘢痕各8 处,每次取材前用游标卡尺测量瘢痕厚度,对切取组织进行苏术精-伊红和Masson染色,并对上皮化后4 周组织进行电镜观察,对上皮化和上皮化后4周组织进行增殖细胞核抗原蛋白测定,对比研究在瘢痕形成过程中595nm Vbeam激光照射对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的影响,观察成纤维细胞超微结构的改变,检测增殖细胞核抗原蛋白表达变化。结果实验大耳白兔2...部进入结果分析。兔耳增生性瘢痕经595nm Vbeam激光照射后,按不同时间段取材与对照组比较,①瘢痕厚度明显变薄:创面上皮化后即出现增生块高出于皮面,且不断增厚,在上皮化后4周时最高,以后逐渐下降。激光照射(即上皮化后)2...6周后激光治疗组瘢痕增生厚度显著小于对照组[激光治疗组:(1．95±0．08),(2...±0．09),(1．53±0．08)mm;对照组:(2...±0．09),(2...±0．11),(1．68±0．09)mm,P<0．05]。②苏木精-伊红染色显示不同时间取材的兔耳增生性瘢痕组织对照组真皮层明显增厚,为周围正常真皮厚度的3～4倍。而激光治疗组真皮层较对照组变薄。Masson染色显示瘢痕胶原纤维呈蓝色,对照组可见蓝染较深的胶原纤维,外形粗大,排列杂乱无章。而经激光照射的瘢痕虽然也可见蓝染的胶原纤维,但与对照组比较蓝染变浅且纤细,胶原排列也趋于一致。③高倍镜下成纤维细胞计数在上皮化后随时间逐渐增多,在上皮化后4周时达到高峰,以后又下降,但在上皮化后1,2...6,8周,激光治疗组成纤维细胞数量与对照组比较未见明显减少(P>0．05)。④透射电镜观察,经595nm Vbeam激光照射4周后成纤维细胞核变小、畸变,胞质中细胞器减少,细胞功能不活跃, 线粒体空泡变性,细胞周围的胶原呈溶解状态。⑤增殖细胞核抗原蛋白表达激光治疗组较对照组明显减弱 (增殖细胞核抗原阳性细胞反应率上皮化后为18．33％,上皮化后4周,激光治疗组为41．93％,对照组为 64．2...P<0．05)。结论 595nm Vbeam激光照射可抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的增殖过程,应用 595nm Vbeam激光预防和治疗瘢痕可行。

关键词：上皮化激光照射兔耳增生性瘢痕 Vbeam 成纤维细胞增殖

来源：评论

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Tiam1基因表达沉默后对结直肠癌细胞蛋白表达谱的影响

Tiam1基因表达沉默后对结直肠癌细胞蛋白表达谱的影响

引用

第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：刘莉丁彦青南方医科大学病理教研室南方医科大学病理教研室

目的:新近的研究发现,T淋巴瘤侵袭作用基因1(T lymphoma invasion and metastasis 1,Tiam1)参与结直肠癌的增殖、转移,但确切的作用机制还不清楚。本研究的目的在于探讨Tiam1介导结直肠癌增殖、转移的分子机制。方法:设计Tiam1 干扰片段... 详细信息

目的:新近的研究发现,T淋巴瘤侵袭作用基因1(T lymphoma invasion and metastasis 1,Tiam1)参与结直肠癌的增殖、转移,但确切的作用机制还不清楚。本研究的目的在于探讨Tiam1介导结直肠癌增殖、转移的分子机制。方法:设计Tiam1 干扰片段,构建含U6启动子的慢病毒载体,将慢病毒载体质粒与辅助质粒共转染2...T病毒包装细胞,收集病毒上清,进行病毒滴度测定,用慢病毒感染结直肠癌细胞,用RT-PCR和Westernblot鉴定有效的干扰载体。用含Tiam1特异性干扰片段的慢病毒感染SW480／EGFP+细胞,用含空载体的病毒做对照。用杀稻瘟菌素筛选抗性克隆,挑取抗性单克隆,荧光定量 PCR和Western blot鉴定干扰后Tiam1基因在细胞中的表达;利用蛋白质组学技术分离SW480／EGFP+／Tiam1-和SW480／ EGFP+／mock细胞的总蛋白,建立重复性和分辨率较好的细胞双向凝胶电泳图谱,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异表达的蛋白质点。利用软件过滤基线峰、识别信号峰,利用Matrixseience公司的在线软件Mascot Distiller进行搜索分析。利用荧光定量PCR、Western blot方法对所获得的差异蛋白质进行鉴定。结果:构建了四个干扰Tiam1基因表达的慢病毒干扰载体,将慢病毒质粒和辅助质粒共转染2...T病毒包装细胞,收获病毒上清,测定病毒滴度为7×105 Transducing Unit(TU)／ml。利用慢病毒感染SW480／EGFP+细胞,荧光定量PCR和Western blot结果发现含片段B的慢病毒干扰载体的干扰效率最高(73％)。利用含干扰片段B的慢病毒和空载体病毒感染SW480／EGFP+细胞,挑取杀稻瘟菌素抗性单克隆,荧光定量PCR和Western blot结果发现Tiam1在干扰克隆2...降低最明显(命名为SW480／EGFP+/Tiam1-),干扰效率达 88％。SW480/EGFP+/Tiam1-细胞为通过RNAi技术使Tiam1表达沉默的细胞,其表达的蛋白质与SW480/EGFP+／mock细胞相比,在数量和表达水平上亦发生了一定的变化,而这些发生改变的蛋白质亦与Tiam1的促进转移作用相关。因此,利用比较蛋白质组学的方法,分析这些细胞蛋白质表达的变化,可发现与Tiam1作用相关的蛋白质,从而了解其发挥作用的分子机制。在本研究中,利用蛋白质组学技术分离细胞的总蛋白,结合图像分析和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对部分差异表达的蛋白质点进行鉴定,共鉴定了2...异表达的蛋白质点。我们对鉴定的蛋白质的功能进行分类,主要为与细胞代谢、细胞增殖、细胞骨架结构相关的蛋白,以及分子伴侣和未知功能的蛋白。这些差异蛋白质中有一些同肿瘤的增殖、转移密切相关。结论:Tiam1基因是结直肠癌增殖、侵袭、转移的促进基因,Tiam1可能参与多条信号通路来介导它在结直肠癌中的作用,在相互作用的蛋白中HMGB1、PGAM1和ANXA4与Tiam1关系密切,他们是Tiam1信号通路中的新蛋白。

关键词： Tiam1 RNA干扰结直肠癌蛋白质组学

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青蒿琥酯抗人食管癌作用研究

青蒿琥酯抗人食管癌作用研究

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：左连富王静刘亮李金梅刘江惠郭建文河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所河北医科大学大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所

目的:观察青蒿琥酯（Artesunate,Art）对人食管癌Eca 109细胞株及裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并进一步探讨 Art对肿瘤细胞的周期阻滞作用。方法:体外培养人食管癌 Eca109细胞株,常规分离正常人外周血淋巴细胞,MTT法测定不同浓度Art对Eca109... 详细信息

目的:观察青蒿琥酯（Artesunate,Art）对人食管癌Eca 109细胞株及裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并进一步探讨 Art对肿瘤细胞的周期阻滞作用。方法:体外培养人食管癌 Eca109细胞株,常规分离正常人外周血淋巴细胞,MTT法测定不同浓度Art对Eca109细胞及淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）测定肿瘤细胞的细胞周期变化,构建荷瘤裸鼠模型,观察Art对裸鼠人食管癌移植瘤的抑制情况。结果:MTT结果显示1μmol／L、10μmol／L、100μmol／ L Art均能显著抑制Eca109细胞的增殖（P＜0．01）,IC50 为（68．80±0．76）μmol／L,最大抑制率可达（78．31±1．48）％,抑瘤水平与顺铂相当（74．2...．41）％。Eca109细胞生长活力随Art浓度的增加以及作用时间的延长而降低,Art的抑制作用呈剂量,时间依赖性。Art对ConA诱导的淋巴细胞的生长增殖仅有轻微的抑制作用,抑制率约为2...％,表明各实验浓度的Art对正常免疫功能影响较小,顺铂对淋巴细胞的抑制率约为15％。流式细胞术检测结果显示,不同浓度Art对Eca109细胞的细胞周期的影响亦不同。对照组处于 S期的细胞多达41．8％,体现了肿瘤细胞生长增殖旺盛的特点。1 μ mol／L、10μmol／LArt可使S期细胞明显减少,细胞的生长被阻滞在G0+G1期,说明低浓度Art可有效阻止肿瘤细胞的基因组DNA的合成。100μmol／L Art亦可使 S期细胞数目减少,但其作用主要表现为将细胞阻滞在 G2...,说明高浓度Art不仅阻止肿瘤细胞的基因组DNA 的合成,还可显著抑制肿瘤细胞的分裂增殖。肿瘤细胞接种于裸鼠一周后,实验各组裸鼠均观察到有Eca 109细胞移植瘤生长,瘤体呈椭圆形或圆形,经组织病理学检查为鳞状细胞癌,可见明显角化细胞、癌细胞排列成巢状结构。实验结束时,各实验组肿瘤的体积及重量均明显小于对照组（P＜ 0．05）,100 mg／kg、2...mg／kg、300 mg／kgArt组体积抑瘤率分别为32...、76．4％、18．0％,重量抑瘤率分别为 11．4％、33．2...1．6％,顺铂组体积抑瘤率为48．3％,重量抑瘤率为39．7％。实验结果显示,Art的抑瘤作用并不随药物浓度的增大而增强,中浓度Art的抑瘤效果最佳,其抑瘤作用与顺铂相当。Art各组用药前后生长、饮食、活动等情况良好,未观察到血尿和便血,体重变化无显著性差异,顺铂组用药后体重明显减轻,并出现进食减少,行动迟缓,皮肤干涩等现象。实验结果表明,各实验浓度Art对裸鼠的毒副作用较小,而顺铂的毒副作用较大。结论:Art可显著抑制肿瘤细胞及裸鼠移植瘤的生长,且无明显的毒副作用,将肿瘤细胞阻滞于G0+G1及G2...,是Art发挥抑瘤作用的重要机制。

关键词：青蒿琥酯食管癌细胞周期裸鼠

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重症肌无力眼外肌无力机制研究

重症肌无力眼外肌无力机制研究

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第九次全国神经病学学术大会

作者：李柱一刘睿王桂平林宏宿长军李宏增苗建亭雷革胜刘煜第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学唐都医院神经内科

目的:重症肌无力(MG)是一种严重危害患者身心健康的神经系统常见疾病,约90％左右MG患者肌无力症状首先“选择性”累及眼外肌,出现眼外肌无力。另外,约15％MG患者眼外肌无力症状终身仅局限于眼外肌。为何往往MG患者眼外肌首先“选择性”... 详细信息

目的:重症肌无力(MG)是一种严重危害患者身心健康的神经系统常见疾病,约90％左右MG患者肌无力症状首先“选择性”累及眼外肌,出现眼外肌无力。另外,约15％MG患者眼外肌无力症状终身仅局限于眼外肌。为何往往MG患者眼外肌首先“选择性”受累,其机制迄今不明。本研究旨在用神经形态学和分子生物学等方法,探讨MG眼外肌无力机制, 为其防治提供实验依据。70年代从MG患者血中检测到乙酰胆碱受体抗体(AChRAb),证实MG患者神经肌接头处(NMJ) 病理改变和用AChR免疫动物制成MG动物模型以来,多数研究集中在MG患者AChRAb的病理作用机制、AChRAb滴度与病情关系、骨骼肌NMJ的AChR结构功能分析、胸腺病理与MG发病之间关系,以及MG发病与免疫功能之间的关系等。而对MG患者最常见的眼外肌无力机制却没有引起足够重视,例如为何MG患者往往首先“选择性”累及眼外肌?有关 MG患者眼外肌,与肌肉收缩密切相关的NMJ终板安全系数(因子,safety factor)及其变化?至今未见研究报道。方法:研制MG动物模型。单克隆抗体的制备。TIB-175细胞株(购自美国ATCC公司)经常规复苏、传代接种裸鼠,2...刺取腹水,以饱和硫酸胺盐析法初步纯化腹水中的免疫球蛋白(为mAb35)。建立EAMG被动免疫模型的。十周龄雌性C57BL/6小鼠2...临床表现评估肌力分级标准:0级、1级、2...级、4级、5级、6级、7级;每6hr测一次体重,每8hr进行肌力测定。MG小鼠临床评估。结果:各实验组小鼠在18-36hr内行为肌力下降到5-6级,而对照组正常。(1)神经电生理。实验组小鼠坐骨神经LFER试验过程中V波幅(-2...46uv)明显降低。(2...肌无力模型眼外肌终板结构、形态学研究。免疫组化结果。各肌组织AchR免疫荧光染色结果显示:实验组小鼠胫前肌AchR密度(灰度值)较各对照组小鼠胫前肌低;空白对照组与上清对照组小鼠胫前肌AchR密度无明显差异。具体统计结果。神经肌接头运动终板光镜观察。经胆碱酯酶染色后,膈肌上的运动终板清晰可见,镜下为棕褐色椭圆形或扁平小圈,分布在眼外肌外围区域,一条肌纤维上只有一个运动终板。所有实验组SD大鼠血清中均可检测到AChRAb,对照组酶标检测均为阴性。与α-BuTx结合的AChR聚集在肌纤维边缘的神经肌接头处发出荧光,其荧光像素密度可反映AChR的数量,而荧光区域面积也可以反映AChR的分布范围。与对照组相比,重症肌无力实验组眼外肌荧光面积缩小,荧光像素密度下降,说明SD大鼠实验组神经肌接头上的AChR数量减少。琥珀酸脱氢酶(SDH)是线粒体的标志酶,其活性强弱可反映肌纤维能量代谢情况。通过SDH染色可将骨骼肌纤维分为三种类型。Ⅰ型肌纤维又称红肌纤维,直径最细,SDH染色呈强阳性,染成蓝黑色,颗粒密集,边界不清,性质上属于慢收缩耐疲劳肌纤维,ATP酶活性低而线粒体酶丰富,代谢类型为氧化型;ⅡA型肌纤维直径较粗,SDH染色呈阳性,染成蓝色, 颗粒细小稀疏,性质上属于快收缩耐疲劳肌纤维,兼有高ATP酶活性和线粒体酶活性,相当于氧化型和酵解型的双重型;Ⅱ B型肌纤维又叫做白肌纤维,染色呈弱阳性,直径最粗,染成淡蓝色,颗粒分散,多位于肌膜下,性质上属于快收缩易疲劳型肌纤维,代谢上属于酵解型。各组选取10个低倍视野后用。ImageJ软件统计三型肌纤维比例并作统计分析,可见实验组 PTMG大鼠和对照组EOM相比,各型肌纤维比例差异显著,Ⅰ型纤维比例下降,ⅡA型纤维比例上升。透射电镜观察神经肌接头的超微结构变化可见:与对照组相比,实验组神经肌接头的突触后膜皱褶分级明显减少,皱褶明显短缩变直,突触间隙略变宽,突触后膜相对变得平坦。电镜观察发现实验组PTMG眼外肌神经肌接头突触皱折短缩,数量减少,突触间隙略增宽,证实了本研究的PTMG模型眼外肌神经肌接头处也发生了MG患者相似的病理改变,证实了在这种类似全身型MG 的动物模型上眼外肌常首先被累及。(3)重症肌无力眼外肌基因表达变化。扫描分析后F344大鼠实验组眼外肌与对照组眼外肌基因出现差异表达,其中在出现明显差异表达的55条基因中,2...上调,2...下调基因。其上、下调的基因功能有待于进一步研究阐明,特别是与眼外肌无力可能相关的基因功能。

关键词：重症肌无力实验组眼外肌肌纤维机制研究

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甲氯芬酯治疗脑卒中后遗症的疗效观察

甲氯芬酯治疗脑卒中后遗症的疗效观察

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第九次全国神经病学学术大会

作者：赵关培上海医药工业有限公司

目的:脑卒中病患者中有相当部份病人,由于多种原因,失去了在超早期(发病1-6小时之内)最佳治疗的时间窗,而使缺血区半暗带神经细胞处于日趋凋亡状态,致使脑功能障碍。在临床表达为多种脑卒中后遗症,例如:头痛、眩晕、乏力、失语、肢体麻... 详细信息

目的:脑卒中病患者中有相当部份病人,由于多种原因,失去了在超早期(发病1-6小时之内)最佳治疗的时间窗,而使缺血区半暗带神经细胞处于日趋凋亡状态,致使脑功能障碍。在临床表达为多种脑卒中后遗症,例如:头痛、眩晕、乏力、失语、肢体麻木、尿便失禁、记忆减退。在临床应用脑细胞代谢功能活化剂“甲氯芬酯(Meclofenoxate)”治疗脑卒中后遗症,取得比较明显疗效。甲氯芬酯近期药理研究,该药物具有多元性综合性药理作用特点:1、清除羟自由基作用,并使大脑组织中超氧化物岐化酶含量明显升高,增强了脑组织清除自由基能力,从而有利于保护神经细胞,减少凋亡。2...加大脑皮质、下丘脑、脑干、基底节等区的血流量,改善脑血液循环,促进微循环,使缺血周边半暗带区逐步改善血供状况。3、促进神经细胞氧化还原代谢,增加对葡萄糖摄入与利用,增强脑组织对氧的摄入量,对赋活脑细胞代谢与恢复神经元正常功能具有直接关联作用。4、提高中枢神经胆碱能系统的功能,甲氯芬酯药物的分子结构中侧链(二甲氨基乙醇)具有拟胆碱结构,与提高脑内神经递质乙酰胆碱水平有关,对学习记忆障碍有一定的改善作用,由其是近期记忆障碍改善比较明显。5、兴奋中枢神经系统,提高中枢神经系统功能,可振奋精神,减少疲劳,提高工作效率。尤其对处于抑制状态中枢神经系统兴奋作用明显,可由抑制状态转入觉醒状态。其甲氯芬酯综合性药理作用为治疗脑卒中后遗症提供参考。方法:脑卒中后遗症病人186例,治疗方案:病人初始口服甲氯芬酯(剂型:胶囊0．1克／粒)。一次0．1克,一日3次。连续服药一周后,服药剂量增加至一次0．2...3克,一日3次,饭后服药,服药疗程为三个月。对患有高血压病人必需配合服用对症治疗的降压药。如若对吞服胶囊有困难病人,可将胶囊内甲氯芬酯药粉倒入5-10ml蜂蜜内混和后口服。结果:甲氯芬酯治疗脑卒中后遗症病人各类症状有效率:头痛78％,眩晕75％,乏力76％,失语53％,肢体麻木65％,尿便失禁76％,记忆减退73％。结论:甲氯芬酯对脑卒中后遗症病人的多种症状有比较明显的改善和治疗效果,提高了病人日常生活自理能力。该药物毒性低微:小鼠LD50 (mg／kg),口服1750,静注330,腹腔845。对病人肝肾功能、血象、骨髓均未见有害的变化。药物不良反应少见,精神过度兴奋病人慎用。

关键词：甲氯芬酯卒中后遗症神经细胞

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