背景:CMTM(CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing family)是本实验室于2...年在国际上首次报道的新基因家族,在人类,该家族包括9个基因,即CKLF和CMTM1-8。CMTM3是其成员之一,定位于抑癌基因富集区域16q2...,其编码产物具有MARVEL(MAL Related proteins for Vesicle trafficking and membrane Link domain)结构域。CMTM3在原发性胃癌组织和胃癌来源的细胞系中表达下调或缺失,其启动子区存在甲基化修饰;临床病理参数分析显示,CMTM3的表达与性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分期和肿瘤分化具有相关性,CMTM3阳性表达患者的生存预后显著优于阴性表达者。在胃癌细胞系中恢复其表达,可以显著抑制细胞迁移和侵袭,抑制MMP2...及活性。相关结果发表于Cancer Res、Cancer Sci。目的:进一步研究CMTM3的生理功能,探索恶性胃肿瘤的发病机制,寻找新的癌症防治靶标,为癌症的防控和治疗提供理论依据。方法:我们通过包装Lentivirus感染CMTM3表达较高的胃癌细胞系SGC-7901,筛选并获得了敲减效率最高的两条sh RNA,构建稳定敲减CMTM3的SGC-7901细胞株,通过CCK8实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验研究敲减CMTM3对胃癌细胞增殖能力的作用;通过划痕实验、Transwell实验研究敲减CMTM3对胃癌细胞迁移能力的影响;利用Transwell实验研究敲减CMTM3对胃癌细胞侵袭能力的作用。通过Western blot检测相关关键信号通路;检测敲减CMTM3后基质金属蛋白酶MMP2...情况,并通过明胶酶谱实验检测MMP2...。利用裸鼠腹膜转移模型研究敲减CMTM3后的体内作用,统计小鼠体重变化并于四周后处死小鼠,统计并比较两组小鼠腹膜内肿瘤结节数。结果:获得敲减效率最高的两条sh RNA:sh391、sh393,其在mR NA和蛋白质水平均能有效抑制内源性CMTM3表达,敲减效率大于80%;敲减CMTM3对胃癌细胞增殖能力没有明显作用,但在体内与体外均可以显著促进胃癌细胞的迁移及侵袭能力;促进ERK1/2...T及STAT3的磷酸化;上调MMP2...及活性。结论:抑癌基因CMTM3抑制胃癌细胞系SGC-7901的迁移、侵袭能力
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