目的STAT3(Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号途径已被确认是多种人类肿瘤干预治疗的有效分子靶标。香加皮杠柳苷(Periplocin of Cortex Periplocae,CPP)是本实验室与华药合作研究工作中发现的具有...
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目的STAT3(Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号途径已被确认是多种人类肿瘤干预治疗的有效分子靶标。香加皮杠柳苷(Periplocin of Cortex Periplocae,CPP)是本实验室与华药合作研究工作中发现的具有抗肿瘤作用天然抗肿瘤活性成分。本研究探讨该成份对癌细胞内STAT3信号通路的影响,为阐明杠柳苷的抗肿瘤作用机制和香加皮的二次开发奠定理论基础。本研究还将探讨CPP联合RNA干扰(RNA interference,RNAi)的抗肿瘤效果和作用机理,为肿瘤临床治疗提供新的资料。方法应用Western blot、流式细胞术分析SMMC772...中STAT3的表达及酪氨酸磷酸化情况;构建针对STAT3基因的三个特异性siRNA重组质粒及无关序列重组质粒HK-shRNA,应用Western blot、RT-PCR方法筛选最有效抑制STAT3表达的质粒表达载体用于后续实验;以CPP和/或STAT3 siRNA处理SMMC772...,MTT法、流式细胞术、透射电镜进行CPP及STAT3 siRNA诱导SMMC772...凋亡的研究;应用Western blot、RT-PCR检测CPP及STAT3 siRNA对SMMC772...STAT3信号通路相关分子的影响;观察CPP和/或STAT3 siRNA对SMMC772...荷瘤裸鼠抑瘤作用,流式细胞术检测CPP及RNAi对肿瘤细胞周期和凋亡的影响,Western blot及免疫组化分析JAK1-STAT3信号通路中JAK1、P-JAK1、STAT3、P-STAT3的表达变化,免疫细胞化学法分析CD34表达的变化。结果SMMC772...存在STAT3蛋白的表达,P-STAT3呈高表达;成功构建针对STAT3基因的三个特异性siRNA重组质粒及无关序列重组质粒HK-shRNA,筛选出最有效抑制STAT3表达的质粒表达载体Pgenesil-1-STAT3-1用于后续实验;RNAi、CPP、RNAi+CPP作用SMMC772...48h后,细胞增殖受到不同程度的抑制,RNAi+CPP组抑制率明显高于RNAi组、CPP组(P<0.05),G0/G1期细胞较对照组明显增多(P<0.05),S期和G2...细胞则显著减少,PI值显著下降,其中RNAi+CPP组变化最为明显,各处理组凋亡率均明显增高(P<0.05),以RNAi+CPP处理组凋亡率为最高,同时在G/G峰之前出现典型的亚二倍体凋亡峰,上述各指标在HK组和空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),透射电镜观察, RNAi、CPP、RNAi+CPP组SMMC772...可见典型凋亡细胞超微结构变化;各处理组细胞中JAK1的表达无显著性差异(P>0.05),RNAi、CPP、RNAi+CPP组细胞的P-JAK1表达水平降低,RNAi、RNAi+CPP组细胞STAT3表达显著降低,RNAi、CPP、RNAi+CPP组细胞P-STAT3表达水平显著降低,RNAi、CPP、RNAi+CPP组Suvivin、Bcl-2...NA及蛋白的表达显著下降,其中RNAi+CPP组下降更为明显,Bax mRNA及蛋白的表达上升,RNAi+CPP组上升最为明显,上述指标与空白对照的差异均具有统计学意义(P<0.05),HK组细胞各分子表达较空白对照组无明显改变(P>0.05),说明插入无关序列重组质粒(HK)对STAT3通路相关分子的表达无干扰效应;模型对照和HK质粒对照组裸鼠的肿瘤持续增长,增长速度、瘤重及肿瘤体积显著大于其它组(P<0.05), RNAi、CPP组裸鼠的肿瘤生长缓慢,而RNAi+CPP组瘤体较原来逐渐缩小,模型对照和HK质粒对照组之间无显著性差异(P>0.05),RNAi、CPP组无显著性差异(P>0.05),CPP+RNAi组抑瘤率显著高于RNAi、CPP组(P<0.05),RNAi、CPP和RNAi+CPP组荷瘤裸鼠肿瘤组织中G/G期细胞明显增多,S期和G/M期细胞明显减少,与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05),其中以RNAi+CPP组变化最明显,RNAi、CPP和RNAi+CPP组荷瘤裸鼠肿瘤组织细胞的凋亡率与对照组相比均显著增高(P<0.05),并在G/G峰之前可见典型的亚二倍体凋亡峰,而且以RNAi+CPP组的作用最为明显,各处理组JAK1的表达水平均无显著性差异(P>0.05),与模型对照组相比,CPP和RNAi+CPP组移植瘤细胞P-JAK1的表达水平明显降低,RNAi、RNAi+CPP组中移植瘤细胞STAT3的表达水平明显降低,RNAi、CPP和RNAi+CPP组移植瘤细胞P-STAT3的表达水平明显降低,R
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