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第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：陆璐林庆玲孙芳玲李雅莉蔡彦宁李林张兰首都医科大学宣武医院药物研究室北京市老年病医疗研究中心神经变性病教育部重点实验室

目的:动物几乎所有组织都存在生物钟。随着动物的衰老,其生物钟往往也发生着改变,它对衰老及与衰老相关的病理过程的影响也越来越引起研究者的重视。时钟基因DNA启动子甲基化是基因表达调控中常见而重要的机制,参与老化及相关疾病的病... 详细信息

目的:动物几乎所有组织都存在生物钟。随着动物的衰老,其生物钟往往也发生着改变,它对衰老及与衰老相关的病理过程的影响也越来越引起研究者的重视。时钟基因DNA启动子甲基化是基因表达调控中常见而重要的机制,参与老化及相关疾病的病理过程。但其具体的分子机制还不清楚。为了阐明衰老动物时钟基因启动子甲基化在衰老中的作用机制,我们采用先进的分子生物学技术对小鼠不同组织中八种时钟基因启动子甲基化修饰进行了检测,研究动物不同组织中时钟基因启动子发生甲基化频率随年龄的特异性改变。为衰老及衰老相关疾病发生的基因表达调控机制提供依据,并为发现抗衰老药物干预新靶点提供可能。方法:甲基化特异性PCR(MSP)是近年来国际上较为先进的高效、灵敏、特异的甲基化检测法,能对基因启动子区的CpG岛(CpG island)甲基化状态进行分析。针对八种时钟基因(Per1、Per2、Bma11、Bma12、Cry1、Cry2、Clock、Npas2)启动子设计甲基化特异性(M)及非特异性引物(U),对4月龄、20月龄C57/BL小鼠胃、血管、脾、纹状体及肾组织的基因组DNA启动子区甲基化状态进行电泳鉴定。结果与讨论:我们发现衰老小鼠Cry1启动子甲基化出现在全部检测组织中,Bmal1与Per1启动子甲基化出现在胃中,Bmal2和Npas2启动子甲基化存在于脾中。几乎在所有小鼠胃中bmal1都存在着甲基化可能说明这种表观遗传修饰对bmal1表达有着重要作用。衰老小鼠时钟基因Per1启动子甲基化频率在胃显著下降,而Cry1,Bmal2和Npas2启动子甲基化频率在衰老小鼠脾中显著升高。值得注意的是,青年小鼠脾中未发现甲基化现象,可能表明脾在衰老相关的昼夜节律紊乱中起着重要作用。在时钟基因网络中,Clock、Npas2和Bmal1为正向调节因子可以上调Cry和Per表达。当Per和Cry蛋白过多聚集会抑制Clock-Bmal1和Npas2-Bmal1调节转录因子从而形成负反馈环路。由此可知,结果中衰老小鼠脾Npas2的甲基化改变该基因的表达可能影响了其异源二聚体Bmal1活性进而调节Per及Cry转录。结论:衰老小鼠不同组织的分子时钟甲基化存在着显著的差异,可能说明所构成的生物钟环路在不同组织调控不同,时钟基因启动子甲基化有一定的组织特异性。与此同时,DNA的甲基化与年龄相关的生物钟改变有着密切的联系,这对从分子方面正确分析衰老及衰老疾病有着重要的意义。Cry1,Npas2与Bmal1等时钟基因启动子的甲基化调节可能会成为抗衰老药物新的干预靶点。

关键词：基因启动子甲基化抗衰老药物特异性不同组织

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CIG抑制wortmannin和GF-109203X致细胞tau蛋白过度磷酸化机制

CIG抑制wortmannin和GF-109203X致细胞tau蛋白过度磷酸化机制

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第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：杨翠翠张丽褚思娟李雅莉张兰李林首都医科大学宣武医院药物研究室北京市老年病医疗研究中心神经变性病教育部重点实验室

目的:老年性痴呆(Alzheimer's Disease,AD)病理特征之一为脑内神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),高度磷酸化的微管相关蛋白Tau蛋白是NFTs的主要成分。蛋白磷酸酯酶和蛋白激酶与Tau蛋白磷酸化密切相关。当蛋白磷酸酯酶... 详细信息

目的:老年性痴呆(Alzheimer's Disease,AD)病理特征之一为脑内神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),高度磷酸化的微管相关蛋白Tau蛋白是NFTs的主要成分。蛋白磷酸酯酶和蛋白激酶与Tau蛋白磷酸化密切相关。当蛋白磷酸酯酶和蛋白激酶平衡时,Tau蛋白不能被磷酸化。而在AD病理条件下,这种平衡被打破,Tau蛋白被高度磷酸化。山茱萸环烯醚萜苷(Cornel iridoid glycoside,CIG)是本室从中药山茱萸中提取的有效部位。本实验探讨CIG对微管相关蛋白tau过度磷酸化的抑制作用及其药理机制。方法:采用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂wortmannin及激酶A(PKA)抑制剂GF-109203X(WT/GFX)与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH共孵育,建立微管相关蛋白tau过度磷酸化拟阿尔茨海默病细胞模型。实验分为空白对照,空白给药组(100mg/L),WT/GFX组,CIG小剂量组(50mg/L),CIG中剂量组(100mg/L),CIG大剂量组(200mg/L)。CIG与SK-N-SH细胞预孵育24 h,再用WT和GFX与SK-N-SH细胞共孵育3h。采用相差显微镜观察细胞形态结构;激光共聚焦方法观察微管形态结构;Western blotting方法观察不同位点磷酸化tau蛋白的表达水平及相关通路中P-Akt、Akt、P-GSK-3β、GSK-3β、PP2A、DM-PP2A(demethyled PP2A),PP2A甲基转移酶(LCMT)及甲基酯酶(PME1)的表达。结果:WT/GFX抑制P-Akt-ser473和P-GSK-3β-ser9、从而引起GSK-3β活性增高导致tau蛋白磷酸化。CIG中剂量和大剂量组能够明显降低模型细胞tau蛋白在Thr212,Ser214,Ser396/Ser404,Thr217,Thr205位点的磷酸化水平。本实验中发现WT/GFX破坏细胞骨架结构,导致细胞胞体变圆,突起断裂不连续,CIG能够使损伤的微管形态基本恢复正常,保护细胞形态完整,这与CIG能够抑制tau蛋白磷酸化相关。CIG对GSK-3β-ser9和P-Akt-ser473的表达没有明显改变。有研究表示GSK-3β的激活可以通过增加PP2A去甲基化引起PP2A活性明显下降。PP2A的甲基化受PME1(甲基酯酶)和LCMT(甲基转移酶)的调节。本实验中发现,WT/GFX模型组PP2A明显下降,CIG能够提高PP2A活性。CIG能够抑制去甲基化PP2A的表达,抑制PME1/LCMT的比值。虽然CIG对GSK-3β-ser9和p-Akt-ser473的表达没有明显改变,但可以显著降低PME1/LCMT的比值,减少DM-PP2A的表达,从而提高磷酸酯酶的活性,增加tau蛋白去磷酸化。结论:CIG能够降低tau蛋白在多个位点的过度磷酸化修饰,从而保护微管结构和细胞形态完整。其降低tau蛋白过度磷酸化修饰可能是通过调节PME1和LCMT的表达,从而降低PP2A的非甲基化提高PP2A活性使tau蛋白去磷酸化。CIG对tau蛋白过度磷酸化的抑制作用,对AD治疗具有广阔的应用前景。

关键词： tau 微管相关蛋白抑制作用磷酸化 wortmannin CIG GF-109203X

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中药山茱萸环烯醚萜苷抑制tau蛋白过度磷酸化的机制研究

中药山茱萸环烯醚萜苷抑制tau蛋白过度磷酸化的机制研究

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第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：张兰杨翠翠郐学先张丽李雅莉李林首都医科大学宣武医院药物研究室北京市老年病医疗研究中心神经变性病教育部重点实验室

目的:探讨山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对微管相关蛋白tau过度磷酸化的抑制作用及其药理机制。方法:细胞模型:(1)磷脂酰肌醇3激酶抑制剂wortmannin及激酶A抑制剂GF-109203X(WT-GFX)与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞共孵育致GSK-3β活性增高... 详细信息

目的:探讨山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对微管相关蛋白tau过度磷酸化的抑制作用及其药理机制。方法:细胞模型:(1)磷脂酰肌醇3激酶抑制剂wortmannin及激酶A抑制剂GF-109203X(WT-GFX)与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞共孵育致GSK-3β活性增高,从而引起tau蛋白过度磷酸化;(2)蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)与SK-N-SH细胞共孵育致PP2A活性降低,从而引起tau蛋白过度磷酸化。实验分为空白对照,CIG空白给药组(200mg/L),CIG小剂量组(50mg/L),CIG中剂量组(100mg/L),CIG大剂量组(200mg/L)。MTT法检测神经细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,western blotting方法检测tau蛋白不同位点磷酸化水平,GSK-3β,GSK-3β-ser9、GSK-3β-Y216,Akt、P-Akt-ser473,PP2A、DM-PP2A(去甲基化PP2A)的表达。GSK-3β活性测定试剂盒购自杰美基因,PP2A活性测定试剂盒购自Promega.动物模型,健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,CIG(60mg/kg)给药组,大鼠侧脑室注射WT和GFX制备拟老年性痴呆(AD)模型,假手术组注射等量生理盐水。CIG(60mg/kg)灌胃2周,其余组给予等量双蒸水灌胃;通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;western blotting方法检测各组大鼠皮层及海马tau蛋白不同位点磷酸化水平,GSK-3β,GSK-3β-ser9、GSK-3β-Y216,Akt、p-Akt-ser473,PP2A、DM-PP2A(去甲基化PP2A)的表达。结果:(1)WT/GFX模型组细胞Akt-ser473和p-GSK-3β-ser9的表达明显降低,从而引起GSK-3β活性增高;WT/GFX模型组细胞PP2A表达无明显改变,但DM-PP2A表达水平显著增高,PP2A去甲基化抑制PP2A活性;tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高。CIG中剂量和大剂量组能够明显降低模型细胞tau蛋白在Thr212,Ser214,Ser396/Ser404,Thr217,Thr205位点的磷酸化水平。虽然CIG对GSK-3β-ser9和p-Akt-ser473的表达没有明显改变,但可以显著降低DM-PP2A的表达,从而提高磷酸酯酶的活性,促进tau蛋白去磷酸化。(2)0A模型组细胞变圆,突起断裂,细胞存活率显著降低。CIG给药组细胞形态较模型组明显改善,细胞存活率上升,并具有剂量依赖性。OA模型组PP2A表达明显降低,DM-PP2A表达水平显著增高,PP2A活性下降;GSK-3β表达降低,p-GSK-3β-ser9表达增高;tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高。CIG给药组Ser199/202、Thr205、Thr212、Thr214、Thr217和Ser396位点磷酸化tau蛋白的表达随药物剂量增加而降低,具有明显的剂量依赖性;CIG给药组PP2A的表达明显升高,DM-PP2A表达显著降低,GSK-3β与p-GSK-3β-ser9表达无明显影响。(3)WT/GFX模型组大鼠水迷宫游出时间延长,GSK-3β-ser9和p-Akt-ser473的表达明显抑制,tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高。CIG可以缩短模型大鼠寻找平台时间,改善空间记忆能力;降低大鼠脑内tau蛋白在Thr212,Thr205位点的磷酸化水平,增加GSK-3β-ser9、p-Akt-ser473和PP2A的表达,降低DM-PP2A的表达。结论:CIG拮抗tau蛋白在多个位点的过度磷酸化,其主要机制为增加PP2A表达,增强PP2A甲基化修饰,从而提高磷酸酯酶PP2A的活性,促进tau蛋白去磷酸化。CIG通过对tau蛋白过度磷酸化的抑制作用,可明显改善模型动物学习记忆能力,对神经细胞的形态及存活率也有明显改善,在AD治疗中可能具有较好的应用前景。

关键词：磷酸化水平 tau 山茱萸环烯醚萜苷细胞存活率 GSK

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燕园谈艺再论道——周扬在北大谈文艺与政治之关系

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艺术百家 2012年第6期28卷 54-63页

作者：胡经之深圳大学文学院广东深圳518060

2012年秋,受中华人民共和国文化部文化科技司、中共深圳市委宣传部和《中国文化报》社华南新闻中心的盛情之邀,笔者赶赴担负当代中国再一次思想解放重任的前哨——深圳,参加了在五洲宾馆隆重举行的"深圳学派"建设学术研讨会。... 详细信息

2012年秋,受中华人民共和国文化部文化科技司、中共深圳市委宣传部和《中国文化报》社华南新闻中心的盛情之邀,笔者赶赴担负当代中国再一次思想解放重任的前哨——深圳,参加了在五洲宾馆隆重举行的"深圳学派"建设学术研讨会。在9月28日的开幕式上,我如期遇到了以深圳市社科院顾问身份参会的著名学者胡经之教授。十年之后的重逢,使得这次相见变成了对往昔的追忆和思绪的倾诉。谈起学术建设,胡经之先生拉着我的手迟迟不放,李世涛研究员对我们之间谈论的话题也不时的追问,并引来了众人的目光,新闻界的朋友们也趁机端起相机留下了值得回忆的瞬间。胡经之先生欣喜地告诉我,他正在着手准备"忆周扬系列"文章,初步的打算是先写四个部分,分别是《周扬北大讲美学》、《燕园谈艺再论道——周扬在北大谈文艺与政治之关系》、《美学分歧究何在——周扬和蔡仪》、《美学情结老犹存——周扬和朱光潜》,并且准备都要陆续发表在江苏老家的《艺术百家》杂志上。他说他要趁着身体尚好,把新中国成立60多年来自己亲身经历的学术界的珍贵瞬间和宝贵思想都一一回忆、整理、记录下来。胡先生又和我谈起办刊,在表扬和肯定了《艺术百家》杂志的现有成绩和对于当代理论建设的学术作用之后,又再次寄托了深厚的学术期望。胡经之先生祖籍苏州,1933年出生于江苏无锡。早年就参加了进步学生运动,并加入新民主主义青年团,解放后任无锡县学联主席、苏南政协委员。于1952年考入北京大学中文系,毕业后又留校攻读文艺学副博士研究生,师从杨晦先生学习文艺学,又从朱光潜、宗白华两位先生研究美学,终融文艺学、美学于一炉,倡导文艺美学。1958年始,不时发表文艺评论,著有《评〈野火春风斗古城〉》等,后被《文艺报》聘为特约评论员,参加中国作家协会。1960年研究生毕业留北大任教,在中文系讲授文学概论、文艺美学、文艺学方法论等课程。改革开放后,又在国内率先开拓文艺美学新学科,在北大设立文艺美学硕士研究生专业方向,先后为国家培育文艺美学硕士10余人,并陆续成长为20世纪80年代之后支撑这一学科发展的重要学术力量。1993年,国务院学位委员会会议通过胡经之教授为文艺学方向博士生导师,并获国务院颁发的"国家有突出贡献的专家"证书。胡经之和汤一介、乐黛云一起,在1984年受邀来深圳大学参与创建中文系,历任系主任、特区文化研究所长、深圳大学学术委员会副主任、人文社会科学委员会主任等职。胡先生积极参与深圳特区的文化建设和国内外文化交流事业,先后被选为由徐中玉、钱谷融任会长的中国文艺理论学会副会长、由钱中文任会长的中外文艺理论学会副会长、广东省美学学会会长、深圳市文艺评论家协会主席、深圳市作协名誉主席等,著有《文艺美学》、《文艺美学论》、《胡经之文丛》、《中国古典文艺学》等,主编《西方文艺理论名著教程》、《中国古典美学丛编》等。如前所述,中国艺术研究院的李世涛研究员正在加紧从事全国艺术科学"十一五"规划项目"中国当代文艺思潮、文艺理论、美学访谈与研究"的系列整理与研究,本刊编辑部刊发本次访谈,以及陆续刊登胡经之先生的"忆周扬系列"学术文章,目的在于让我们更加清晰地了解、认识和梳理研究那段筚路蓝缕的艰辛历程,同时也是对学界的学术理论建设,为实现中国特色社会主义文化的大繁荣大发展,以及进一步推动实现中华民族的伟大复兴贡献一份应有的力量。

关键词：周扬北大政治文艺中华人民共和国《中国文化报》学术研讨会美学情结

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猪饲料能量消化率全消化道体外仿生评定法评述

猪饲料能量消化率全消化道体外仿生评定法评述

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会

作者：陈亮张宏福中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京 100193

体外仿生法可快速准确地评定饲料能量消化率,而对猪饲料整个消化道进行模拟消化旨在更准确地反映饲料在猪体内的真实消化、吸收情况.本文综述了国内外模拟猪全消化道体外法的研究进展与存在问题,侧重分析了模拟猪大肠中饲料消化所选用... 详细信息

体外仿生法可快速准确地评定饲料能量消化率,而对猪饲料整个消化道进行模拟消化旨在更准确地反映饲料在猪体内的真实消化、吸收情况.本文综述了国内外模拟猪全消化道体外法的研究进展与存在问题,侧重分析了模拟猪大肠中饲料消化所选用的微生物或商品酶的利弊,为完善以程控仿生消化仪为平台建立猪饲料养分生物学效价体外仿生评定方法规程的研究提供参考.

关键词：猪饲料能量消化率全消化道模拟仿生评定

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大兴区甘薯茎线虫病为害规律及防治措施初探

大兴区甘薯茎线虫病为害规律及防治措施初探

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第十一届全国植物线虫学学术研讨会

作者：孙璐何立月张桂娟杨伍群彭德良北京市大兴区植保植检站北京102600 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

2009-2010年在北京大兴区开展了甘薯茎线虫病在土壤中的发生分布、为害规律的调查,研究了种薯中甘薯茎线虫在不同温度下的存活情况,进而探讨了温汤浸种的最佳温度与时间组合.从当地具有一定种植规模的品种中筛选出了红心王、密薯等抗茎... 详细信息

2009-2010年在北京大兴区开展了甘薯茎线虫病在土壤中的发生分布、为害规律的调查,研究了种薯中甘薯茎线虫在不同温度下的存活情况,进而探讨了温汤浸种的最佳温度与时间组合.从当地具有一定种植规模的品种中筛选出了红心王、密薯等抗茎线虫品种,并通过对7种化学药剂不同浓度的试验,筛选出了5％硫线磷GR、10％噻唑膦GR和15％阿维·丁硫ME等对其防治效果比较好的化学药剂,以期对甘薯茎线虫病的综合防控提供参考.

关键词：甘薯茎线虫病为害规律虫害防治

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饲料霉菌毒素生物降解研究进展及前景展望

饲料霉菌毒素生物降解研究进展及前景展望

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会

作者：计成中国农业大学动物营养学国家重点实验室北京 100193

霉菌毒素的高毒性和强致癌性严重威胁动物生产性能和人类健康,每年给畜牧业和食品工业带来巨大的经济损失.霉菌毒素物理和化学去毒方法存在种种应用缺陷,而生物解毒作为一种安全、高效、环保的解毒方法备受关注.本文对霉菌毒素毒理作用... 详细信息

霉菌毒素的高毒性和强致癌性严重威胁动物生产性能和人类健康,每年给畜牧业和食品工业带来巨大的经济损失.霉菌毒素物理和化学去毒方法存在种种应用缺陷,而生物解毒作为一种安全、高效、环保的解毒方法备受关注.本文对霉菌毒素毒理作用机制、国内外生物降解的研究进展进行综述,对目前生物降解研究存在的困难提出策略和建议,为饲料和食品中霉菌毒素生物解毒提供理论基础和实践依据.

关键词：环境污染霉菌毒素生物降解毒理机制

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围产期奶牛能量代谢及调控

围产期奶牛能量代谢及调控

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会

作者：李胜利黄文明田雨佳曹志军中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室北京 100193

围产前期奶牛饲喂中、高能量日粮较为普遍.但近年来,随着奶牛产奶量的升高以及产犊后奶牛高发病率和高淘汰率现象的出现,围产前期奶牛应该饲喂高能、中能还是低能日粮成为了国际上研究的热点和争论焦点.本文从围产期奶牛干物质采食量(D... 详细信息

围产前期奶牛饲喂中、高能量日粮较为普遍.但近年来,随着奶牛产奶量的升高以及产犊后奶牛高发病率和高淘汰率现象的出现,围产前期奶牛应该饲喂高能、中能还是低能日粮成为了国际上研究的热点和争论焦点.本文从围产期奶牛干物质采食量(DMI)、机体能量供给、肝脏糖异生、体脂动员和糖异生前体物对能量代谢的调控5个方面综述了围产期奶牛能量代谢特点及调控作用,旨在为后续研究和奶牛生产提供参考.

关键词：围产期奶牛能量代谢营养调控产奶量

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北京地区小麦禾谷孢囊线虫病发生动态调查

北京地区小麦禾谷孢囊线虫病发生动态调查

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第十一届全国植物线虫学学术研讨会

作者：苏致衡黄文坤郑国栋张宏嘉刘淑艳彭德良中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 吉林农业大学农学院吉林长春130118 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 吉林农业大学农学院吉林长春130118

小麦禾谷孢囊线虫病是小麦生产上的重要病害.2010-2011年对北京地区小麦禾谷孢囊线虫的发生规律进行了定期定点调查.结果表明,禾谷孢囊线虫在北京地区全年只发生一个世代,卵孵化高峰位于4月中旬,卵除夏季滞育外全年均可持续孵化;二龄幼... 详细信息

小麦禾谷孢囊线虫病是小麦生产上的重要病害.2010-2011年对北京地区小麦禾谷孢囊线虫的发生规律进行了定期定点调查.结果表明,禾谷孢囊线虫在北京地区全年只发生一个世代,卵孵化高峰位于4月中旬,卵除夏季滞育外全年均可持续孵化;二龄幼虫侵染高峰为4月上旬,三龄幼虫发育高峰为4月下旬至5月初,四龄幼虫发育高峰为5月上旬,白雌虫发育高峰为5月下旬至6月上旬,10月份播种后部分二龄幼虫就可以发生侵染并且冬前发育至三龄幼虫.本研究结果将为北方地区禾谷孢囊线虫的防治提供理论依据.

关键词：禾谷孢囊线虫北京地区发生世代

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基于调控肺泡上皮细胞介导炎症反应的补肺益肾方“谱-效”相关性研究

基于调控肺泡上皮细胞介导炎症反应的补肺益肾方“谱-效”相关性...

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第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：冯素香李娟陈玉龙李建生赵迪周悌强河南中医学院老年医学研究所

目的:以补肺益肾方为研究对象,优选该方药的提取工艺;建立补肺益肾方全方、拆方的HPLC指纹图谱;分别以香烟烟雾提取物（ColomboStock Exchange,CSE）和脂多糖（Lip Polysaccharide,LPS）刺激肺泡上皮细胞株A549细胞为研究模型,进行药效... 详细信息

目的:以补肺益肾方为研究对象,优选该方药的提取工艺;建立补肺益肾方全方、拆方的HPLC指纹图谱;分别以香烟烟雾提取物（ColomboStock Exchange,CSE）和脂多糖（Lip Polysaccharide,LPS）刺激肺泡上皮细胞株A549细胞为研究模型,进行药效学实验,阐释补肺益肾方及其拆方调控A549细胞炎症反应的效应及其特征;对得到的指纹图谱特征峰信息和药效指标数据进行相关性计算,阐明指纹图谱数据与药效特证信息的相关性,为揭示补肺益肾方的药效物质基础及作用机制提供依据。方法:1.对补肺益肾方中人参、枸杞子等药材用水提醇沉法提取,采用L（3～4）正交设计实验,以人参皂苷Rg、Re、Rb的总含量为指标,考察加水量、煎煮时间、煎煮次数及醇沉浓度对提取工艺的影响;对方中淫羊藿、赤芍等药材用乙醇回流提取,采用L（3～4）正交试验法,以淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷含量为指标,考察乙醇浓度、乙醇用量、回流时间和回流次数对醇提工艺的影响,优化提取条件。2.对补肺益肾方进行拆方,通过筛选高效液相色谱条件,根据化学指纹图谱研究的要求,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,建立补肺益肾方及其拆方的HPLC指纹图谱,并对各色谱峰进行归属,找出药材来源及所代表的化学成分。3.分别以CSE和LPS刺激A549细胞,MTT法筛选出最佳的刺激浓度后,A549细胞按孔平均分为正常组（20%正常大鼠血清）、刺激组（20%正常大鼠血清+75 pg/mLLPS或5%CSE）、用药组（20%补肺益肾各拆方组大鼠血清+75 pg/mL LPS或5%CSE）安排实验,用酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）法检测A549细胞对粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-3、IL-8、IL-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1（MMP-9和TIMP-1）、酶磷脂酸脂肪酶2B（PPAP2B）、脂肪酸转位酶CD36)、超氧化物歧化酶（SOD）的分泌及变化情况。4.采用双变量相关分析方法,将补肺益肾方各拆方组HPLC指纹图谱的峰面积进行量化,与ELISA法测得的各拆方组血清干预A549细胞炎症因子的结果相结合,计算pearson相关系数,并对相关性进行分析,构建补肺益肾方"化学谱"-"药效"关系。结果:1.补肺益肾方最佳提取工艺:人参等药材采用水煎煮提取,加12倍量水,煎煮2次,每次60 min,浓缩液加95%乙醇至含醇量为70%,静置12h,取上清液回收乙醇,浓缩;淫羊藿等药材采用乙醇回流提取,加8倍量的60%乙醇溶液,回流两次,每次60 min,回收乙醇,浓缩;合并水提和醇提浓缩液,减压干燥。2.补肺益肾方HPLC指纹图谱:十批样品指纹图谱间的相似度均达到0.90以上,全方确定了71个共有峰,其中指认出熊果酸、岩白菜素、马钱苷、芍药苷、淫羊藿苷、五味子甲素、五味子乙素、人参皂苷、贝母素甲、贝母素乙等二十个成分,并对各色谱峰的药材来源进行了归属。***测定的结果:与正常组比较,A549细胞CSE组MMP-9浓度升高（P<0.05）,IL-3、IL-8（P<0.05）和TGF-β（P<0.01）浓度降低;LPS组TIMP-1浓度升高（P<0.05）,IL-3、TGF-β浓度降低（P<0.01）。补肺益肾各拆方组均可纠正CSE对A549细胞分泌IL-1β、TGF-β、PPAP2B、CD36和LPS对细胞分泌IL-3、SOD的影响;除第11组全方外,其它各拆方组均可以纠正CSE对A549细胞分泌TNF-α和LPS对细胞分泌TNF-α、TGF-β的影响。4.谱-效相关性:补肺益肾方指纹图谱中43、55号峰（淫羊藿）、66号峰（五味子）、28、47号峰（陈皮）、27号峰（矮地茶）、9、15、24号峰（赤芍）等成分,对矫正CSE刺激下A549细胞分泌GM-CSF、IL-3、MMP-9、PPAP2B等因子的含量改变有显著的相关性;但指纹图谱中的10号峰（枸杞子）、8号峰（矮地茶）、31号峰（陈皮）、5号峰（山茱萸）等成分,对矫正CSE刺激下A549细胞分泌因子的改变作用较小或呈相反的相关性。补肺益肾方指纹图谱中28、47号峰（陈皮）、6、29号峰（矮地茶）、52号峰（人参）、68号峰（五味子）等,对矫正LPS刺激下A549细胞分泌TNF-α、MMP-9、SOD、CD36等因子的浓度变化有显著的相关性;但指纹图谱中的5号峰（山茱萸）、9号峰（赤芍）、70号峰（浙贝母）、60号峰（陈皮）等成分,对矫正LPS刺激下A549细胞分泌因子的改变作用较小或呈相反的相关性。结论:1.正交试验优选出的补肺益肾方提取工艺稳定、高效、简便易行,为

关键词：益肾方细胞因子淫羊藿苷炎症反应指纹图谱肺泡上皮细胞相关性研究

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