为建立一种简单,快速,灵敏,特异性好的猪流行性日本乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究根据Genbank登录的SA14-14-2疫苗株及SA14毒株的E基因组序列,利用在线软件Primer Explorer V3设计了6条特异性引物,优化反应体系,建立了环介导等温...
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为建立一种简单,快速,灵敏,特异性好的猪流行性日本乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究根据Genbank登录的SA14-14-2疫苗株及SA14毒株的E基因组序列,利用在线软件Primer Explorer V3设计了6条特异性引物,优化反应体系,建立了环介导等温扩增(LAMP)检测方法。该方法灵敏度高、特异性强、方便快捷,在1h～2h内即可得到结果,被用于多种病毒的检测。该方法成本低,只需一个水浴锅即可完成实验,又可省略琼脂糖凝胶电泳步骤,更适合基层实验室应用。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确诊断流行性JEV的方法。
本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布。针对IBVJin-13毒株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green I荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡1、4、7、10、14、21、28、35天后检测心脏、肝脏...
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本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布。针对IBVJin-13毒株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green I荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡1、4、7、10、14、21、28、35天后检测心脏、肝脏、脾脏、肺脏、气管、肾脏、十二指肠等内脏器官病毒载量,以研究体内病毒复制动态及分布情况。该方法在7.77×108～100copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中7.7copies/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR方法敏感100倍。结果表明鸡群从感染后第4日开始发病,各组织器官内IBV病毒含量逐渐升高,至第7日肾脏病毒含量最高达到7.13×104copies/μL,其余依次为肺脏、脾脏、心脏、肝脏。攻毒10日后各组织内含量均逐渐降低。肝脏于攻毒后21日内检测不到IBV。肾脏带毒持续到28天。心脏带毒可达35天。
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