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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：杜根成左松马坤胡群山虞德屏郭小参徐祥臣阮坤祥普莱柯生物工程股份有限公司

本试验选择有猪圆环病毒2型感染,而且已经表现断奶仔猪综合征(PMWS)临床症状的商品猪场(600头母猪)进行试验猪圆环病毒2型(SH株)灭活疫苗的相关研究,以评价猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪成活率、日增重、病毒血症控制、免疫副反应等指标... 详细信息

本试验选择有猪圆环病毒2型感染,而且已经表现断奶仔猪综合征(PMWS)临床症状的商品猪场(600头母猪)进行试验猪圆环病毒2型(SH株)灭活疫苗的相关研究,以评价猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪成活率、日增重、病毒血症控制、免疫副反应等指标的变化。试验结果表明:①免疫后,免疫组仔猪3周龄断奶时的成活率为91.8%,高于对照组的8.57%;4周龄成活率为98.65%,也高于对照组的90.91%;②免疫组在疫苗免疫后1天有体温略有升高,高于对照组,但在第2天后逐步恢复正常。③免疫组平均增重为0.2241Kg/头/日;对照组只有0.2052Kg/头/日。免疫组要比对照组多增重0.0189Kg/头/日。④免疫后免疫组抗体水平转阳率比对照组要高、转阳时间比对照组要早,而且第二次加强免疫后抗体转阳率更高,在49天全部转阳;并且免疫组离散度小于对照组。⑤免疫疫苗后仔猪群病毒血症阳性率会明显下降,随后与对照组一样,逐步回升,但是,相同日龄的病毒血症阳性率明显低于对照组。上述结果表明,接种猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株有助于提高仔猪成活率,提高ADG,改善仔猪生产水平。

关键词：猪圆环病毒2型疫苗田间效力评估

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甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型二联胶体金检测试剂盒的制备及应用

甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型二联胶体金检测试剂盒的制备及应用

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：明晓但汉并王盛羽金梅林华中农业大学农业微生物国家重点实验室

本研究以抗甲型H1N1病毒的单抗及抗猪流感病毒H3亚型的单抗为基础,建立了甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型二联胶体金检测试剂盒。本试剂盒以2B3喷膜作为检测甲型H1N1的检测线,以1F6和3D1喷膜作为检测猪流感病毒H3亚型的检测线,以羊抗鼠IgG... 详细信息

本研究以抗甲型H1N1病毒的单抗及抗猪流感病毒H3亚型的单抗为基础,建立了甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型二联胶体金检测试剂盒。本试剂盒以2B3喷膜作为检测甲型H1N1的检测线,以1F6和3D1喷膜作为检测猪流感病毒H3亚型的检测线,以羊抗鼠IgG喷膜作为质控线,把金标4H9、金标2B8及金标2B3涂布在结合垫上,制备了灵敏度高、稳定性高、特异性好的甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型二联胶体金检测试剂盒。此试剂盒检测甲型H1N1病毒、H3亚型病毒呈阳性,检测H5亚型流感病毒、经典H1N1猪流感病毒、H10亚型流感病毒、H9亚型流感病毒、PCV2、PRRSV、PRV、CSFV均呈阴性。此二联胶体金检测试剂盒对甲型H1N1和猪流感病毒H3亚型的诊断、监测及防控具有重要的意义,也为多联胶体金检测试剂盒的研发打下了坚实的基础。

关键词：单克隆抗体 H3亚型甲型H1N1 二联胶体金检测试剂盒猪流感病毒

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PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应

PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡崔保安河南农业大学牧医工程学院兽医微生物实验室

为了研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)免疫抑制反应,本研究采用将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(100ng/mL)和纯化鼠抗猪FcγRⅢ IgG(550μg/ml)分别处理PAM细胞;同时用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG(550μg/ml)处理PAM细胞后接种含有200个TCID50的PRRSV,并设健康细胞对照组。各组分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h后收集细胞及上清,用已经建立的绝对荧光定量PCR方法检测接毒组PAM细胞中不同时间段内PRRSV复制水平,用相对荧光定量PCR检测各组PAM细胞中IFN-α、TNF-αmRNA转录水平。结果显示,PRRSV在感染PAM细胞后12-24h期间PRRSV促进IFN-α的mRNA水平,36-72h期间PRRSV抑制IFN-α的mRNA水平,之后IFN-α的mRNA水平恢复正常;TNF-αmRNA水平在感染后12h-72h均略微上调。LPS处理PAM细胞后,IFN-α、TNF-α的mRNA水平均上调。用纯化鼠抗猪FcγRⅢ IgG处理猪PAM后,选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ,数据显示IFN-α、TNF-αmRNA水平显著下调,表明猪FcγRⅢ信号途经能够抑制宿主细胞的先天性抗病毒免疫反应;PRRSV感染选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ后显著抑制抗病毒因子IFN-α、TNF-α的转录水平,说明FcγRⅢ能够抑制PRRSV感染后的抗病毒免疫反应。

关键词：猪Fc受体猪FcγRⅢ PRRSV PAM IFN-α TNF-α

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猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：拜廷阳赵德明吴志明闫若潜赵明军刘梅芬中国农业大学动物医学院周口市畜禽改良站河南省动物疫病预防控制中心

目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的Taq... 详细信息

目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。结果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠。结论成功建立了PCMVFQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义。

关键词：猪巨细胞病毒实时荧光定量PCR TaqMan荧光探针检测应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立三十年庆典

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今日养猪业 2013年第6期 53-53页

2013年10月21-24日,中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立三十年庆典、第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会在江苏徐州隆重召开。本次大会由中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会与解放军军事医学科学院军事兽医研究所主办,三仪... 详细信息

2013年10月21-24日,中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立三十年庆典、第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会在江苏徐州隆重召开。本次大会由中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会与解放军军事医学科学院军事兽医研究所主办,三仪集团承办,江苏省畜牧兽医学会等单位共同协办。大会以＂动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康＂为主题,回顾家畜传染病学分会成立三十年来取得的辉煌成绩,

关键词：中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会员代表大会军事医学学术研讨会生态养殖疫病防控

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甲鱼源沙门氏菌的分离及耐药性研究

甲鱼源沙门氏菌的分离及耐药性研究

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：潘海建旷代杨筱薇张建民上海交通大学农业与生物学院华南农业大学兽医学院

沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病,甲鱼是沙门氏菌的健康携带者,甲鱼可在正常情况下携带沙门氏菌,但并不表现出任何的临床症状,但它会通过粪便不断地向体外排泄沙门氏菌,造成环境污染,导致其它动物和人感染沙门氏菌,从而造成严重后果... 详细信息

沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病,甲鱼是沙门氏菌的健康携带者,甲鱼可在正常情况下携带沙门氏菌,但并不表现出任何的临床症状,但它会通过粪便不断地向体外排泄沙门氏菌,造成环境污染,导致其它动物和人感染沙门氏菌,从而造成严重后果。目前为止,我国还没有关于甲鱼携带沙门氏菌的报道。我们对分离自上海地区甲鱼的82株沙门氏菌进行研究。血清型鉴定显示它们隶属于22个不同的血清型,其中***14株(17.1%),***8株(9.8%),***7株(8.5%)和***7株(8.5%)等。采用琼脂稀释法检测这些沙门氏菌的最小抑菌浓度(Minimium Inhibitory Concentration,MIC),结果显示这82株甲鱼源沙门氏菌对多种抗生素有很高的耐药性:磺胺异噁唑(100%)、甲氧芐啶/磺胺甲噁唑(96.3%)、四环素(69.5%)、氨苄西林(63.4%)、卡那霉素(62.2%)、阿莫西林/克拉维酸钾(51.2%)、氯霉素(42.7%)、链霉素(34.1%)、萘啶酮酸(26.8%)、庆大霉素(12.2%)、环丙沙星(6.1%)和头孢曲松钠(3.7%)。对左氧氟沙星和阿米卡星全部敏感。有69株(84.1%)沙门氏菌至少可抗3种或3种以上的抗生素产生耐药性。通过对甲鱼源沙门氏菌和人源沙门氏菌进行PFGE分析,发现部分甲鱼源沙门氏菌与人源菌株具有相同的PFGE模式,提示甲鱼源沙门氏菌可能是人沙门氏菌的一个重要的储存器。

关键词：沙门氏菌流行病学耐药性 PFGE 甲鱼

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猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：曲信芹何乃珠涂伟高崧刘秀梵扬州大学农业部禽用生物制剂创制重点实验室

利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达PCV2-ORF2基因,并以构建的重组杆状病毒为免疫原,通过杂交瘤技术,研制针对PCV2的单克隆抗体,为建立准确快速的PCV2诊断方法奠定基础。首先将PCV2-ORF2基因克隆到杆状病毒的转移载体pFastBacTM1... 详细信息

利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达PCV2-ORF2基因,并以构建的重组杆状病毒为免疫原,通过杂交瘤技术,研制针对PCV2的单克隆抗体,为建立准确快速的PCV2诊断方法奠定基础。首先将PCV2-ORF2基因克隆到杆状病毒的转移载体pFastBacTM1中,然后将其转化入大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中,与DH10Bac中的穿梭载体Bacmid发生转座,通过抗性和蓝白斑筛选,得到重组杆状病毒质粒reBacmid-ORF2,通过脂质体介导reBacmid-ORF2转染Sf9细胞,成功获得了表达PCV2-ORF2基因的P1代重组杆状病毒。将所获得的重组杆状病毒经Vivaflow200浓缩后,免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取其脾脏与Sp2/0细胞融合,以IFA进行筛选,经多次亚克隆后得到3株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,分别命名为5H6、4E2、5F7。通过IFA、IPMA及Western-blot试验对3株单抗特异性进行分析鉴定,结果显示,3株单抗均能与PCV2-Cap蛋白产生特异性的反应,并利用流式细胞术初步建立了对PCV2毒株感染PK15细胞的检测方法,从而为快速检测PCV2病毒奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体重组杆状病毒昆虫细胞

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伪狂犬病病毒Guizhou-DY株的分离鉴定及致病性研究

伪狂犬病病毒Guizhou-DY株的分离鉴定及致病性研究

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：汤德元郝飞李春燕曾智勇罗险峰甘振磊刘建王洪光贵州大学动物科学学院贵州省动物疫病预防控制中心

本研究通过采集疑似猪伪狂犬病流产胎儿病料,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、易感动物接种试验和病毒核酸鉴定分离到一株伪狂犬病病毒,命名为PRVGuizhou-DY株(GenBank登录号为JX417716);为了摸清其理化特性,... 详细信息

本研究通过采集疑似猪伪狂犬病流产胎儿病料,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、易感动物接种试验和病毒核酸鉴定分离到一株伪狂犬病病毒,命名为PRVGuizhou-DY株(GenBank登录号为JX417716);为了摸清其理化特性,进一步对伪狂犬病病毒Guizhou-DY分离株进行了耐热、耐酸及脂溶性敏感性实验、核酸类型鉴定及病毒毒价测定,同时进行病毒致病性试验。分离鉴定结果表明:病料接种Vero细胞盲传至第2代时产生明显CPE,盲传至第4代可出现稳定的CPE;病毒粒子在电镜下呈椭圆形、有囊膜、直径约为120～180nm,核内可见呈晶格状排列的病毒包涵体;病毒悬液接种家兔能引起家兔奇痒、麻痹死亡;理化特性研究表明:该病毒是一种耐热不耐酸且对氯仿敏感的DNA病毒,gE全基因序列与PRVGZ-Z1株、Fa株及Ea株的同源性分别为97.6%、98.9%和99.4%,其TCID50为10-9.71/100μL,PFU/mL为109。攻毒组猪只体温升高,临床症状较为明显,在攻毒后5d开始出现中和抗体,21d达到最高。该研究可为病毒病原学的研究提供参考。

关键词：伪狂犬病病毒 Guizhou-DY株分离鉴定致病性

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猪嵴病毒的分子特征及流行病学研究

猪嵴病毒的分子特征及流行病学研究

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：刘建汤德元李春燕曾智勇罗险峰甘振磊王凤郝飞王洪光贵州大学动物科学学院贵州省动物疫病预防控制中心

猪嵴病毒属于小核糖核酸病毒科Kobu病毒属成员,为单股正链RNA病毒,该病毒于2007年在匈牙利首次发现。此后,在一些亚洲和欧洲的国家不断有本病感染的报道。本文首先对Kobu病毒的由来、分类、基因组结构特征、猪嵴病毒的发现、流行病学及... 详细信息

猪嵴病毒属于小核糖核酸病毒科Kobu病毒属成员,为单股正链RNA病毒,该病毒于2007年在匈牙利首次发现。此后,在一些亚洲和欧洲的国家不断有本病感染的报道。本文首先对Kobu病毒的由来、分类、基因组结构特征、猪嵴病毒的发现、流行病学及其病原学检测等方面进行了阐述;然后利用生物信息学软件比较分析了GenBank中已公布的9株猪嵴病毒全基因组和各基因的核苷酸及推导的氨基酸的同源性,结果表明,无论是在全基因组、各基因还是氨基酸水平,分离株swine/K-30-HUN/2008/HUN和swine/S-1-HUN/2007/Hungary之间的同源性均最高。在病毒基因结构的5’-UTR区域,分离株CH/HZ/2011和XX分别存在一个连续18个核苷酸和64个核苷酸缺失;在2B蛋白编码区域,CH/HNXX-4/2012和CH/HZ/2011分离株均存在一致的连续83个核苷酸缺失。在氨基酸水平,9株PKV分离株3D蛋白的同源性为最高,而VP1蛋白的同源性最低。系统发育分析显示,9株病毒的3D和VP1基因进化方向一致。本文探讨了Kobu病毒今后需要进一步研究和解决的相关问题。

关键词：猪嵴病毒分子流行病学全基因组同源性分析病原学检测

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传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能分析

传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：马金荣欧阳伟王永山吴晓悠朱向东张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

为了提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,根据已发表的鸡源C3d序列,设计并合成在5′端添加连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglII和BamHI构建含有3拷贝C3d与VP2的的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体... 详细信息

为了提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,根据已发表的鸡源C3d序列,设计并合成在5′端添加连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglII和BamHI构建含有3拷贝C3d与VP2的的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48h后,Western blot分析表明,表达的重组蛋白为162ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d、与前期构建的真核表达质粒pcDNA-VP2免疫2周龄SPF鸡,二免14d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组,MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(P<0.05)。本研究表明C3d可增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2基因鸡补体C3d 分子免疫佐剂基因免疫

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