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作者

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11 篇 刘长明
11 篇 赵军
10 篇 吴志明
10 篇 闫若潜
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8 篇 赵武

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重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究

重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：闫若潜闫志玲吴志明赵明军程俊贞刘梅芬赵雪丽谢彩华安春霞河南省动物疫病预防与控制中心

为了评价重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。... 详细信息

为了评价重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明:免疫后7～49d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组(第4组)鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组(p<0.01);免疫后7～35d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2(ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2)和γ干扰素(ChIFN-γ)等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组(p<0.01),α干扰素(ChIFN-α)的表达水平于免疫后14～35d期间极显著高于其他3组对照鸡(p<0.01);rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后7～14d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡(p<0.01);免疫后7～21d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组(p>0.05)。结果表明:rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。

关键词：重组鸡白细胞介素-6蛋白鸡传染性法氏囊病毒灭活疫苗免疫增强机理

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大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性

大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张建新汤炜周雪杨汐静韩冰孙虎男于立权朴范泽崔玉东黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(***)就是其中最主要的致病菌之一。***引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生素的长期广泛使用和滥用,不... 详细信息

奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(***)就是其中最主要的致病菌之一。***引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生素的长期广泛使用和滥用,不仅造成了***耐药菌株频繁出现,而且抗生素在奶产品中的残留也严重威胁着食品安全。因此,研究和使用疫苗来防控***感染已成为奶业领域的热点。已有研究证明,***灭活苗、荚膜多糖结合苗等免疫效果不理想;抗原亚单位疫苗虽然有一定免疫保护效果,但存在着细胞免疫应答弱、生产工艺复杂等诸多缺点。因此,本研究拟利用大肠杆菌Lpp’OmpA来表面展示***的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎***疫苗提供数据支持。本研究通过over-lapPCR方法融合了lpp’ompA和lpp’ompA-traP基因,利用表达载体pQE30,分别构建了质粒pLO和pLO-TRAP。利用宿主菌XL1-Blue,转化获得了XL1-Blue/pLO和XL1-Blue/pLO-TRAP菌株。XL1-Blue/pLO-TRAP经IPTG诱导表达,产生了预期大小的蛋白。经全菌体ELISA、流式细胞术检测和激光共聚焦扫描显微镜观察证明,TRAP借助Lpp’OmpA成功地展示在大肠杆菌XL1-Blue表面。将重组大肠杆菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐剂乳化后,分别免疫接种ICR小鼠,免疫后不同时间采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类;利用ELISPOT检测IL-4和IFN-γ、间接ELISA方法IL-17A;然后分别用***和HLJ23-1菌株对免疫小鼠进行攻毒。结果,XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP均能够刺激产生高水平的TRAP特异性抗体;细胞因子检测结果表明,XL1-Blue/pLO-TRAP组能刺激小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫,与TRAP免疫组相似。我们的实验结果表明,大肠杆菌表面展示的Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：奶牛乳房炎 TRAP蛋白大肠杆菌表面展示免疫保护

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中国地方黑猪血液红细胞源抗菌肽的纯化及活性鉴定

中国地方黑猪血液红细胞源抗菌肽的纯化及活性鉴定

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：尚田田王青杭柏林赵志雨张庆华徐彦召胡建和河南科技学院动物科学学院

分离纯化中国地方黑猪血液红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析。以中国地方黑猪血液为材料,于4℃700×g离心15min,弃去上层液,用灭菌生理盐水洗涤红细胞,重复3次,再用0.83%氯化铵溶液溶... 详细信息

分离纯化中国地方黑猪血液红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析。以中国地方黑猪血液为材料,于4℃700×g离心15min,弃去上层液,用灭菌生理盐水洗涤红细胞,重复3次,再用0.83%氯化铵溶液溶解红细胞(比例为3:1),然后于4℃ 700×g离心15min去除白细胞,将含血红细胞裂解的溶液经冷冻干燥,冻干物即为猪红细胞抗菌肽粗提物。通过离子交换层析法纯化抗菌肽粗提物,进样速度20mL/h,用25mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分、10%乙酸洗脱阳离子成分。紫外分光光度检测器在230nm处监测其吸光度。收集洗脱峰(5mL/管),冻干后用0.01%乙酸重悬。再用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进一步纯化分离有活性的阳离子峰抗菌肽,用梯度为30%～35%的乙腈和0.1%三氟乙酸进行洗脱。缓冲液A:5%乙腈,0.1%三氟乙酸;缓冲液B:95%乙腈,0.1%三氟乙酸。A到B的梯度为30%～35%,时间为80min。用紫外分光光度计检测器在215nm处监测其吸光度,收集峰液,冻干,用0.01%乙酸溶解。用双层琼脂糖弥散法测定其对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等受试菌株抗菌活性。结果表明,通过离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性,通过RP-HPLC对阳离子峰纯化后获得了6个峰;6个峰液对大肠杆菌和沙门氏菌均具有抗菌活性,峰液F1、F2和F3对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅峰液F1对白色念珠菌具有抗菌活性。本试验首次从中国地方黑猪红细胞中的分离出来具有抗菌活性的物质,为进一步研究猪红细胞源抗菌肽奠定基础。

关键词：抗菌肽粗提物抗菌活性阳离子猪血液金黄色葡萄球菌活性鉴定红细胞

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H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异毒株的致病性研究

H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异毒株的致病性研究

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：赵军王新卫王川庆陈陆郑鹿平王泽霖河南农业大学禽病研究所

作者在研究1998～2008年中国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株HA基因的进化时发现有2个致病性最强的毒株因HA基因第145位氨基酸的突变导致产生一个潜在的糖基化位点,从而使其不与单抗H6、F6等反应。为进一步探究这类变异毒株HA基因变异对H... 详细信息

作者在研究1998～2008年中国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株HA基因的进化时发现有2个致病性最强的毒株因HA基因第145位氨基酸的突变导致产生一个潜在的糖基化位点,从而使其不与单抗H6、F6等反应。为进一步探究这类变异毒株HA基因变异对H9亚型AIV的致病性的影响,本研究对12株具有上述血凝素分子特征的H9流行毒株进行了致病性方面的系统研究。结果显示这类毒株在HA裂解位点处仅有1个碱性氨基酸,均为典型的低致病性AIV毒株,但145位氨基酸均发生漂变(S→N),导致在145～147aa多了一个糖基化位点NGT,并丧失了与单抗的血凝抑制反应特性。该类毒株对SPF鸡胚、鸡和细胞的致病力大大增强,EID50、ELD50为10-8.0～-9.5/0.2ml,高于疫苗株1～2滴度;MDT/MLD最低,多数在60～80h;1日龄SPF鸡的ICPI为0.23～1.7,6周龄SPF鸡的IVPI为0.21～1.1,而疫苗株均为0;可以在不加胰酶的CEF、CEK、DF-1、MDCK单层细胞上不经适应而直接繁殖,12～24h出现病变。人工感染SPF鸡或免疫鸡,从第2天起均可从咽喉、泄殖腔分离到病毒,免疫抗体或同源抗体均不能阻止其攻毒后的排毒。表明这类毒株致病性的增加与HA基因的变异密切相关。因HA基因145-147aa位增加了一个NGT,蛋白结构分析显示血凝素头部蛋白减少了一个β折叠。三维空间构象的变化导致抗HA抗体作用位点的变异或缺失,并影响其邻近的受体结合位点,从而改变该毒株的抗原性和其它生物学特性。这是一类HA蛋白S145位发生变异的毒株,虽然约占当前流行毒株总数的5%-7%,但它更能抵抗机体的防御机制,因而有更大的生存空间。在强大的免疫压力和自然选择下这类毒株有可能逐步成为优势毒株,造成更大的危害,这为该病的防控提出了新的挑战。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒变异毒株 HA基因糖基化位点致病性

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猪Toll样受体配体对PRRSV免疫佐剂作用

猪Toll样受体配体对PRRSV免疫佐剂作用

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张莉莉白娟刘捷王晓晔李玉峰姜平南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室

猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)给全球养猪业造成了巨大的经济损失,目前商品化疫苗仅能提供部分保护力。近来关于人和猪的一些研究表明Toll样受体(TLR)的配体有免疫佐剂效应,如合成的双链RNA(dsRNA)[poly(I:C)]、脂磷壁酸(LTA)和CL097... 详细信息

猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)给全球养猪业造成了巨大的经济损失,目前商品化疫苗仅能提供部分保护力。近来关于人和猪的一些研究表明Toll样受体(TLR)的配体有免疫佐剂效应,如合成的双链RNA(dsRNA)[poly(I:C)]、脂磷壁酸(LTA)和CL097。为了研究这些化合物是否诱导PRRSV特异性免疫应答效果,本试验采用PRRSV灭活病毒液(KV)与TLR配体组合后皮下免疫小鼠。结果表明,单独的poly(I:C)和CL097诱导小鼠IFN-γ和PRRSV特异性抗体水平高于KV组或KV-LTA组。将20头6周龄PCV2和PRRSV抗原、抗体均阴性的断奶仔猪,随机分为4组,第1组接种由100μgpoly(I:C)、80μgDOTAP和灭活病毒配制而成的灭活苗,第2组接种8μgCL097、80μgDOTAP和灭活病毒配制而成的灭活苗,第3组接种的是灭活病毒配制而成的灭活苗,第四组接种DMEM。每头猪通过颈部肌肉进行免疫,首免后2周加强免疫一次。首免后14天和28天,采血分离血清,用于PRRSV抗体及细胞因子(IL-4和IFN-γ)的检测;同时分离外周血淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖反应,并测定细胞分泌细胞因子(IL-4和IFN-γ)的量。首免后28天,肌肉接种2×105.0TCID50 PRRSVS Y0608病毒液。攻毒后隔离饲养,每天观察仔猪临床表现,测量直肠温度。攻毒后第7、14和21天采血分离血清,用于病毒及抗体的检测。攻毒后第21天扑杀所有试验猪,采集肺脏组织,并进行病理学检查。结果为,KV混合poly(I:C)或CL097后诱导猪体产生的PRRSV特异性抗体和T淋巴细胞增殖水平高于KV组。攻毒后,与KV或对照组相比,KV-poly(I:C)或-CL097免疫组患猪产生的临床症状较轻、病毒血症更低、肺部的病理损伤更少。表明KV-poly(I:C)或-CL097能提高抵抗PRRSV的保护力。TLR3和TLR7/8的配体为新PRRSV疫苗的开发提供了候选佐剂。

关键词： PRRSV 灭活病毒(KV)疫苗 TLR配体佐剂

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Infectivity of a genotype 4 hepatitis E virus cDNA clone by intrahepatic inoculation of laboratory rats

Infectivity of a genotype 4 hepatitis E virus cDNA clone by ...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者： Yumin Zhu Xiaoming Yu Yuanshu Zhang Yanyan Ni Fusheng Si Ruisong Yu Shijuan Dong Yaowei Huang Zhen Li Institute of Animal Science and Veterinary Medicine Shanghai Academy of Agricultural Sciences Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding College of Veterinary Medicine Nanjing Agricultural University Center for Molecular Medicine and Infectious Diseases College of Veterinary Medicine Virginia Polytechnic Institute and State University

A cDNA clone of a genotype 4 swine hepatitis E virus (HEV) strain (SAAS-FX17), identified in Shanghai, has been constructed. Capped RNA transcripts were prepared in vitro and shown to be replication-competent in Huh7 cells. Sprague-Dawley (SD) rats administered the RNAtranscripts by intrahepatic inoculation developed active infections as evidenced by fecal virus shedding and sero-conversion to anti-HEV. The former was first detected between 23-30 days post-inoculation (dpi) and persisted until 45 dpi. Sera of rats inoculated with RNA transcripts became anti-HEV positive between 30 and 40 dpi, and reverted to anti-HEV negative at 52 dpi. Our data indicate for the first time that intrahepatic inoculation of rats with RNA transcripts of an HEV cDNAclone may serve as an alternative animal model for HEV research.

关键词： Hepatitis E virus (HEV) infectious clone genotype 4 rat animal model

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重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究

重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：吴志明闫若潜程俊贞赵明军刘梅芬杨晓璐张书阳河南省动物疫病预防控制中心河南科技大学动物科技学院许昌市动物疫病预防控制中心

为了研究基因工程重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2,重组复合蛋白)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将120只21日龄SPF鸡随机平均分为4组,于21日龄时进行攻毒和重组复合蛋白注射,以进行重组复合蛋白在鸡体内抗传... 详细信息

为了研究基因工程重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2,重组复合蛋白)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将120只21日龄SPF鸡随机平均分为4组,于21日龄时进行攻毒和重组复合蛋白注射,以进行重组复合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)作用实验。分别通过临床观察实验和检测4组鸡在攻毒前1d(0DPC)和攻毒后(DPC)不同天泄殖腔的排毒率、外周血中持续带毒时间、IBDV在不同组织器官的动态分布、血清中IBDV抗体水平、外周血中鸡IFN-α、IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6(ChIFN-α,ChIL-2,ChIFN-γ,ChIL-4和ChIL-6)的表达水平、外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾脏淋巴细胞增殖活性等指标以揭示重组复合蛋白的抗病毒和免疫增强作用机理。结果表明:与IBDV攻毒对照组(第2组)相比,重组复合蛋白与IBDV同时应用组(第4组)鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间显著降低,且第4组鸡的排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器管带毒时间均显著低于第2组。攻毒后7d～42(d7～42DPC),第4组鸡的IBDVELISA抗体水平极显著低于第2组(P<0.01)。3～35DPC,第4组鸡血清中ChIFN-α、ChIFN-γ和ChIL-2、ChIL-6的表达水平极显著高于其他3组对照组(p<0.01),ChIL-4表达水平于3～21DPC期间极显著高于其他3组对照鸡(p<0.01)。第4组鸡的PBLC增殖活性于7～21DPC期间、脾淋巴细胞增殖活性于7～14DPC期间均极显著高于第2组(p<0.01)。结果表明:重组复合蛋白在机体内对IBDV具有显著抑制作用;重组复合蛋白可通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。

关键词：重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白传染性法氏囊病病毒抗病毒免疫增强机理

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山东地区毛皮动物犬瘟热病毒流行病学调查及病毒H基因的遗传变异分析

山东地区毛皮动物犬瘟热病毒流行病学调查及病毒H基因的遗传变异...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：王贵升尹斐斐孙震徐鸿徐聪牛树田梁俊文王金宝田夫林山东大学生命科学学院山东省动物疫病预防与控制中心山东农业大学动物医学院山东省动物卫生监督所

2013年夏季以来,山东地区,毛皮动物疑似犬瘟热病例中主要症状以神经症状、肺出血、肠粘膜脱落和肾脏肿大为主,病死率为100%。采用RT-PCR方法,共检测40家养殖规模在3000只以上的养殖场的155份病例,包括68份棉拭子样品和87份病料。送检病... 详细信息

2013年夏季以来,山东地区,毛皮动物疑似犬瘟热病例中主要症状以神经症状、肺出血、肠粘膜脱落和肾脏肿大为主,病死率为100%。采用RT-PCR方法,共检测40家养殖规模在3000只以上的养殖场的155份病例,包括68份棉拭子样品和87份病料。送检病例中犬瘟热的检出率为63.87%。在神经症状病例中犬瘟热检出率达68.52%。病原在眼鼻分泌物和粪便中检出率低于10%,脑组织的检出率在40%以上。同时在犬瘟热阳性病例的脑组织样品中分离到大肠杆菌、克雷伯氏菌、奇异变形杆菌等细菌。对分离到的6株犬瘟热病毒的H基因进行了全基因序列的扩增。核苷酸同源性在90.6-100%之间,氨基酸同源性在89.9-99.8%之间。分离株wgswh01与wgswh02氨基酸同源性99%;wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02四毒株之间的氨基酸同源性在99%以上;与前两株的氨基酸同源性在89.4-90.2%之间。wgswh01和wgswh02株的与疫苗株OP株的核苷酸同源性98.8%,与经典野毒株CDVA75-17的核苷酸同源性为92.5%,遗传进化上与疫苗株处于同一分支。wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02四毒株在遗传进化上与野毒株处于同一分支。据报道,CDVH基因在309～311位的N-糖基化位点是野毒株所特有而疫苗株都没有的。wgswh01与wgswh02株在309～311位没有N-糖基化位点,而wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02株,在该位置都存在一个糖基化位点,NGS。提示,山东地区,2013年夏季,在以神经症状、肺脏出血、肠粘膜脱路和肾脏肿大为主要特点的毛皮动物病例中主要病原为犬瘟热病毒,且该病毒在脑组织中的检出率比较高,遗传进化上与野毒株近源。在毛皮动物犬瘟热的防治工作中,疫苗选择时应考虑毒株的更换,同时,要做好细菌病的防治。

关键词：犬瘟热病毒流行病学调查 H基因遗传进化

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猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性

猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：孙绍美张书光张云娟柴俊刘旭川张以芳云南农业大学动物科学技术学院

猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟病毒E2蛋白是它主要的保护性抗原蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,因此常选择猪瘟病毒E2蛋白作为检测猪瘟和制备其新型疫苗的首选抗原。... 详细信息

猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟病毒E2蛋白是它主要的保护性抗原蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,因此常选择猪瘟病毒E2蛋白作为检测猪瘟和制备其新型疫苗的首选抗原。乳酸菌(lactic acid bacteria)是一类能利用碳水化合物产生乳酸的益生细菌统称,可通过口服免疫动物,在动物肠内产生乳酸及其它有益物质,提高动物免疫力及抗病能力。以猪瘟病毒E2基因重组质粒转化乳酸菌构建的重组乳酸菌,具有乳酸菌自身的优良特性及表达外源目的蛋白的双重特性。本研究以pET28a-E2重组质粒为模板,应用PCR扩增得到猪瘟病毒诱变E2基因,并纯化后连接到pNZ44质粒载体中,并通过酶切及测序分析正确,表明成功构建了插入目的基因片段的pNZ44-E2重组表达质粒。重组质粒电转化入已筛选的动物源性干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)中,经培养诱导表达,超声波裂解,SDS-PAGE检测到E2蛋白目的条带,表明成功获得LV-pNZ44-E2重组乳酸菌工程菌;经免疫荧光抗体染色,能在重组菌菌体内见到特异性免疫荧光,而非重组菌菌体内没有荧光,说明E2蛋白能在乳酸菌表达并具有良好的生物学活性。将筛选到的优良重组乳酸菌作为益生菌,经口服免疫实验动物家兔;从实验动物粪便中能分离到重组乳酸菌及用PCR检测到目的基因,表明该重组工程菌能在动物肠道内定植存活。采取血清用ELISA进行特异性抗体检测,ELISA检测实验动物的血清阻断率大于40%,判定为阳性,说明有免疫动物中有猪瘟抗体存在。采抗凝全血进行淋巴细胞增殖实验,猪瘟病毒抗原对实验动物的淋巴细胞有明显的刺激增殖作用,表明口服重组干酪乳杆菌后既可引发机体的体液免疫,也可引发细胞免疫应答。本研究将为益生菌株的改造及表达猪瘟E2蛋白的重组乳酸菌作为口服疫苗防治猪瘟奠定科学的基础。

关键词：猪瘟病毒 E2基因干酪乳杆菌免疫学特性

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猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息学分析

猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息...

引用

动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：李斌卢冰霞秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲陈忠伟闭炳芬段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠黄伟坚广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西大学动物科学技术学院广西田林县动物疫病预防控制中心

为了研究开发快速、敏感、特异的猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)诊断试剂和免疫效果良好的猪JE基因工程疫苗,对2011年分离到的广西猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)FC792株的E基因进行克隆、测序及生物信息学分... 详细信息

为了研究开发快速、敏感、特异的猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)诊断试剂和免疫效果良好的猪JE基因工程疫苗,对2011年分离到的广西猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)FC792株的E基因进行克隆、测序及生物信息学分析。结果测序获得1500bp的完整FC792株E基因序列,经同源性比对及遗传进化树分析表明,FC792株为基因Ⅲ型JEV毒株,且属于弱毒株。应用在线软件SignalP4.1对FC792株E蛋白进行信号肽的预测,结果预测到FC792株E蛋白不存在信号肽。应用在线软件NetNGlyc1.0预测到FC792株E蛋白存在1个N-糖基化位点:154-NYSA,线软件NetPhos2.0预测到其存在如下磷酸化位点:丝氨酸(Ser)有10个位点;苏氨酸(Thr)有6个位点;酪氨酸(Tyr)有5个位点。应用在线免疫信息学软件预测到FC792株E蛋白有16个B细胞抗原优势表位(分值(score)≥0.85),5个CTL抗原表位,10个Th抗原表位。应用在线软件GOR4预测FC792株E蛋白的二级结构,发现α-螺旋区域占21.20%,延伸链区域占30.40%;无规则卷曲区域占48.40%。应用在线软件SWISS-MODEL对FC792株E蛋白进行三维结构预测的同源模建,结果可见FC792株E蛋白存在大量的无规则卷曲和延伸链区域,并有多个α-螺旋区域,它们螺旋扭转卷曲形成近似左右对称的2个亚基的二聚体空间立体结构。研究结果为今后研制猪JE诊断抗原和猪JE基因工程疫苗提供参考借鉴。

关键词：猪乙型脑炎病毒 E基因克隆生物信息学

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