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奶牛氨基酸营养及其应用

奶牛氨基酸营养及其应用

引用

全国养牛科学研讨会暨中国畜牧兽医学会养牛学分会第六届会员代表大会

作者：冯仰廉中国农业大学动物科技学院

现行的奶牛蛋白质营养体系主要以小肠可消化总氨基酸为基础,例如美国(NRC,1996、2001)、英国(AFRC,1993)的可代谢蛋白质,法国(INRA,1989)和荷兰(Tamminga等,1994)的小肠可消化真蛋白质、北欧(Bickel等,1987)的小肠可吸收氨基酸等。但这... 详细信息

现行的奶牛蛋白质营养体系主要以小肠可消化总氨基酸为基础,例如美国(NRC,1996、2001)、英国(AFRC,1993)的可代谢蛋白质,法国(INRA,1989)和荷兰(Tamminga等,1994)的小肠可消化真蛋白质、北欧(Bickel等,1987)的小肠可吸收氨基酸等。但这些体系均未反应各种氨基酸之间的平衡,为此,INRA(1995)经研究提出,因赖氨酸和蛋氨酸为第一限制性氨基酸,而将小肠可消化真蛋白中的这两种氨基酸的比例作为氨基酸平衡的基础,赖氨酸和蛋氨酸的阈值分别为6.8%和2.0%,理想值为7.3%和2.5%,已编制成软件在法国推广应用。美国NRC(2001)亦提出相似的建议。澳大利亚(CSIRO,1990)和我国(2000)采用的小肠可消化粗蛋白体系,尚未包括氨基酸营养。因小肠可消化粗蛋白由瘤胃微生物蛋白和饲料非降解蛋白组成,我国已对瘤胃微生物蛋白合成量的估测和微生物蛋白的氨基酸组成,以及饲料进入小肠的非降解氨基酸进行了较系统的研究,为奶牛以小肠可消化粗蛋白为基础的赖氨酸和蛋氨骏平衡营养打下了基础。建议奶牛小肠可消化粗蛋白中的赖氨酸和蛋氨酸含量以6%和1.9%为宜,瘤胃微生物蛋白和饲料非降解蛋白的氨基酸组成采用我国的平均参数。奶牛赖氨酸和蛋氨酸的需要按小肠可消化粗蛋白需要量中的比例进行计算。

关键词：奶牛小肠可消化蛋白质氨基酸赖氨酸蛋氨酸

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远程医疗技术在载人航天中的应用与发展

远程医疗技术在载人航天中的应用与发展

引用

中国空间科学学会第16届空间生命学术研讨会

作者：王爱华总装备部航天医学工程研究所

远程医疗是通过远程通信系统为交通不便的偏远地区或缺乏医疗设施的地区的患者提供医疗保健服务的一种方式。远程医疗技术是远程通信技术、计算机技术和医学技术的综合。自载人航天开始以来,美俄均在开展载人航天计划之初就开始利用遥... 详细信息

远程医疗是通过远程通信系统为交通不便的偏远地区或缺乏医疗设施的地区的患者提供医疗保健服务的一种方式。远程医疗技术是远程通信技术、计算机技术和医学技术的综合。自载人航天开始以来,美俄均在开展载人航天计划之初就开始利用遥测技术监测和管理航天飞行对飞行乘组人员的生理及医疗保健的影响,远程医疗技术实际是随着载人航天计划的发展而发展起来的,是载人航天飞行计划成功的一项关键技术,也是为航天计划提供卫生保健服务的体系的重要组成。远程医疗技术被运用于航天飞行已走过50个年头,NASA是被公认的远程医疗技术发展的带头羊。NASA的很多部门都在研究远程医疗技术和应用。目前正在研究支持目前航天飞机和国际空间站计划的技术,同时也在研究保障未来行星际探索如火星计划的新兴医疗系统和技术手段。NASA的远程医疗技术已通过许多应用为地球上的人提供卫生保健服务,尤其是在救灾方面的应用显示了它的实用性和先进性。NASA还通过在地面的各种努力评价和验证了远程医疗技术。约翰逊航天中心及其他NASA机构与其他联邦机构、企业界和学术界在全球范围内密切合作。在NASA与俄罗斯航天局为实施国际空间站计划打前站的“航天飞机. 和平号站”联合飞行计划中,逐渐形成了后来用于国际空间站计划的“最佳医疗实践”。虽然俄罗斯的远程医疗的开展始于45年前的前苏联,但却是在最近十年加速成长起来和特别富有成效的。这十年见证了俄罗斯远程医疗从使用尚未成熟的遥测技术到建立一个结构完善的广泛的国家远程医疗网和综合联邦远程医疗体系的成长历程。本文将就远程医疗在航天计划中的发展史、实际应用,目前技术水平和未来发展战略等方面进行综述。

关键词：医疗技术卫生保健服务应用与发展

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H5N1亚型HPAIV人工感染家猫和小鼠的初步研究

H5N1亚型HPAIV人工感染家猫和小鼠的初步研究

引用

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：夏咸柱高玉伟杨松涛邹啸环常爽赵宏霞段铭岳玉环吉林大学畜牧兽医学院军事医学科学院11所军事医学科学院2所吉林大学第一医院儿科

WHO已经确认,H5N1亚型高致病性禽流感病毒HPAIV已经跨越种间屏障,可以使人类感染发病甚至死亡。为给人类该病毒感染建立动物模型,本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源HPAIVA/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1ml... 详细信息

WHO已经确认,H5N1亚型高致病性禽流感病毒HPAIV已经跨越种间屏障,可以使人类感染发病甚至死亡。为给人类该病毒感染建立动物模型,本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源HPAIVA/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1ml。分别经气管和鼻腔接种家猫和小鼠,进行该病毒的家猫和小鼠的初步人工感染实验。实验于BSL Ⅲ动物实验室中进行,观察期为21天。实验结果如下:1、家猫人工感染实验:选取对该病毒HI抗体小于1:2的3月龄健康家猫6只,随机分为A、B两组,每组3只。A组为实验组,每猫气管内注射该病毒的稀释液1ml,含毒量为106个TCID50;B组为对照组,每猫气管内注射PBS 1ml。结果:实验组的3只家猫于实验的第3-4天,开始出现精神沉郁,食欲下降和体温升高,并分别于第7和第10天各病死1只,余下1只耐过。尸检发现肺表面有大片暗红色实变灶;病理组织学光镜观察,见有弥漫性肺泡损伤,肺泡腔内有较多量巨噬细胞浸润和少量蛋白样浆液渗出;用所制备的该病毒单克隆抗体和生物素标的山羊抗小鼠二抗,进行死猫肺标本的免疫组织化学染色,结果在支气管上皮细胞和少数肺泡巨噬细胞的胞浆中见到该病毒的抗原阳性染色颗粒;用SPF鸡胚从2只死亡猫肺标本中均分离回收到了所接种的HPAIV;在耐过康复猫血清中,检出1:32的该病毒HI抗体,而3只对照猫始终未见异常。2、小鼠人工感染实验结果:取18-20克普通1级雄性昆明小鼠55只,随机分成11组,每组5只,第1-10组为实验组,经乙醚麻醉后,分别滴鼻接种10-1-10-10的该病毒稀释液50ul/只,于P3实验室的负压隔离器中隔离饲养观察。结果:第1-6组实验小鼠,从实验的第2-3天,开始出现食欲减少,体重下降,至第5-6天出现死亡;第7、8组实验小鼠部分死亡,体重下降不明显,第9-10组小鼠无1例死亡,体重持续增加。死亡小组用Reed-Muench法计算,其LD50为10-7.25/0.05ml;尸检第1-7组实验小鼠肺炎病变严重,肺指数(肺重/体重)达2-3%,病理组织学光镜观察,肺泡间隔增宽,肺泡腔内有较多量的炎性细胞和蛋白样浆液渗出;用H5N1亚型HPAIV单克隆抗体和生物素标山羊抗小鼠二抗做死亡小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑免疫组织化学染色,结果在其肺和肾标本中发现该病毒抗原阳性染色颗粒;分别用ICAM-1/CD18/CD11b的单抗和生物素标记的山羊抗小鼠二抗做死亡小鼠肺的ICAM-1及其受体的免疫组织化学检查,结果发现其表达与肺炎病变呈正相关。在肺的超薄切片标本中,在透射电子显微镜下,于小鼠肺泡扁平上皮细胞表面和肺泡腔中发现流感病毒样颗粒。用SPF鸡胚从死亡小鼠的肺、脑标本中分离到了所接种的HPAIV;在第7、8组耐过小鼠和第9-10组小鼠血清中,检出1:2-8的该病毒HI抗体。对照组小鼠始终未见异常,体重持续增加,血清HI抗体均小于1:2。上述试验初步表明,H5N1亚型HPAIV可感染家猫和小鼠,这两种动物可用于该病毒的动物模型研究。

关键词： H5N1流感病毒人工感染小鼠家猫

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各国食物成分数据表达的调查及其应用研究

各国食物成分数据表达的调查及其应用研究

引用

中国营养学会公共营养分会第六届学术研讨会

作者：杨月欣韩军花潘兴昌中国疾病预防控制中心营养与食品安全所中国疾病预防控制中心营养与食品安全所中国疾病预防控制中心营养与食品安全所

通过国内外数据的对比研究和新食物样品的重新测定,促进我国食物成分表的合理化和与国际接轨,并开发一种面向大众的膳食营养计算器。方法:1)食物成分数据的调查:选择英国、美国等发达国家和日本、韩国等周边国家共11个国家(含中国)的近... 详细信息

通过国内外数据的对比研究和新食物样品的重新测定,促进我国食物成分表的合理化和与国际接轨,并开发一种面向大众的膳食营养计算器。方法:1)食物成分数据的调查:选择英国、美国等发达国家和日本、韩国等周边国家共11个国家(含中国)的近年来出版的食物成分表及46位从事食物成分数据研究及应用工作的国内外专家,以确定我国有关食物成分数据表达的方式。2)食物样品的采集与分析:在北京的4个市场上采集我国居民消费量较大的食物和新品种食物原料的样品100种,按照GB或AOAC的方法重新测定其食物各种营养成分。3)数据的比对研究:将新检测样品的食物成分数据与1991年版食物成分表中相同食物的营养成分数据进行比对;并抽取我国1991年版的食物成分表中的部分食物与英、美、日、韩等国的相同食物的进行营养成分数据比对,了解我国食物成分数据的特异情况。4)数据的应用研究:选择新编辑整理的食物成分数据以及2000年中国营养学会制订的《中国居民膳食营养素参考摄入量》中的推荐摄入量(RNI)和适宜摄入量(AI)数据建立标准数据库,使用Delphi5.0软件语言编程,开发膳食营养计算器。结果:1)食物描述的调查:各国所分的食物类别数目从11类到28类不等,我国食物成分表中的食物分类同国内相关食品行业的食物分类方法也有一定的差异。2)食物成分表达的调查:各国食物成分表中对于矿物质的表达基本一致,个别维生素不一致,而对于宏量营养素的表达则明显不同。其主要差别在于碳水化合物的计算方法、碳水化合物能量折算系数的使用以及脂肪酸的表达形式和计算方法上。3)食物成分数据的比对研究:通过新食物成分数据分析和比对,发现多数新检测的食物的铁含量和部分动物性食物视黄醇含量与1991年版中相应食物的成分数据相比有降低的趋势,因此有必要对这种差异进行进一步的研究。4)我国食物成分数据表达的研究:采用“食物类和亚类的双级分类方法”(对部分亚类再划分属性类别)对我国食物成分表中的食物进行分类和编码;同时按照当前各国较为通用的方法对我国食物营养成分的表达方式进行了调整。5)食物成分数据的应用研究:将本研究确定的食物描述和成分表达的方法应用于我国新版食物成分表——《中国食物成分表2002》的编辑和整理,提高了我国食物成分数据表达的科学性和参与国际交流的可行性。研制开发的膳食营养计算器为居民开展膳食营养素计算提供了可能。

关键词：食物成分比对研究分类方法数据表达

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基质吸力变化时非饱和土的一维本构模型及其应用

基质吸力变化时非饱和土的一维本构模型及其应用

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第二届全国非饱和土学术研讨会

作者：李顺群栾茂田杨庆大连理工大学土木水利学院岩土工程研究所(辽宁大连) 大连理工大学海岸和近海工程国家重点实验室(辽宁大连) 辽宁工学院土木建筑系(辽宁锦州) 大连理工大学土木水利学院岩土工程研究所(辽宁大连) 大连理工大学海岸和近海工程国家重点实验室(辽宁大连) 中国科学院武汉岩土力学研究所(湖北武汉) 大连理工大学土木水利学院岩土工程研究所(辽宁大连) 大连理工大学海岸和近海工程国家重点实验室(辽宁大连)

当地下水位上升或地面遇水浸润时,土的饱和度将因毛细作用而变化,以此使土体产生变形.其中由于含水量增加而使土的比重增大,从而引起压缩变形;同时含水量的增加而使基质吸力下降,从而引起土的回弹变形,因此最终变形取决于上述两种变形... 详细信息

当地下水位上升或地面遇水浸润时,土的饱和度将因毛细作用而变化,以此使土体产生变形.其中由于含水量增加而使土的比重增大,从而引起压缩变形;同时含水量的增加而使基质吸力下降,从而引起土的回弹变形,因此最终变形取决于上述两种变形趋势的综合效应.根据广义Hook定律、Fredlund的双应力状态变量及Brooks和Corey关于基质吸力与饱和度之间的经验关系,建立了K<,o>状态下非饱和土的一维本构模型.将这一模型与分层综合法相结合,可以计算基质吸力变化时土的竖向变形.通过研究发现,非饱和土的地面变形不仅取决于土的性质与土层的厚度,而且依赖于土中吸力变化前后的分布及应力状态等因素.所建议的一维本构模型可以用于非饱和土地基上基础的沉降估算.

关键词：非饱和土基质吸力本构模型饱和度

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羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

引用

第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会

作者：季宇彬高世勇哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站

目的羊栖菜(Sargassum fusiforme(Harv．)Setchel)为褐藻门马尾藻科(Sargasaceae)植物,在我国各主要海域均有生长,资源丰富。有报道称其应用于肿瘤治疗效果显著。由于其水煎液中主要有效成分为羊栖菜多糖 (sargassum fusiforme polysacc... 详细信息

目的羊栖菜(Sargassum fusiforme(Harv．)Setchel)为褐藻门马尾藻科(Sargasaceae)植物,在我国各主要海域均有生长,资源丰富。有报道称其应用于肿瘤治疗效果显著。由于其水煎液中主要有效成分为羊栖菜多糖 (sargassum fusiforme polysaccharide,SFPS),因此本研究通过体外抗肿瘤实验观察羊栖菜多糖对6种不同组织肿瘤的抑制作用,观察其对肿瘤治疗的组织特异性,并揭示其作用机制。方法采用MTT法和集落形成实验法对人肝癌Bel-7405、人宫颈癌克隆cc-801、人乳腺癌MCF-7、人直肠癌COLO-205、人胃癌SGC-7901、人食管癌Eca-109等6个细胞株进行实验,测定SFPS对各细胞株的IC50和克隆形成率(％),观察SFPS的体外抗肿瘤作用;以人胃癌SGC-7901为研究对象,分为空白对照组和给药组,给药组药物终浓度为50μL／mL,对照组加入等量的培养液, 给药后4,8,12,24和48h各组分别取样,以9体积70％乙醇于-20℃固定12h后离心、PI染色30min,流式细胞仪测定,计算凋亡指数(APO％),观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 SFPS对上述6中细胞株的IC50(μ／mL) 分别为人肝癌Bel-7405(71．71),cc-801(23．41),MCF-7(44．32),COLO-205 (16．95),SGC-7901(10．14)和Eca-109(29．71):SFPS在0．10,0．05 mg／mL 剂量下对人胃癌SGC-7901细胞集落形成率分别为84．45±5．61％和89．88±5．81 ％,对人直肠癌COLO-205的集落形成率为83．36±7．78和90．79±7．97,与空白对照组比较有显著降低(P<0．01或P<0．05):通过对给药后4、8、12、24、48五个时间段细胞凋亡的观察,发现羊栖菜多糖组各时间段G0／G1期细胞都多于阴性对照组,即羊栖菜多糖能够阻滞肿瘤细胞由G0／G1期进入S期,诱导细胞凋亡,我们所测的细胞凋亡指数也反应出这一特点,羊栖菜多糖给药12h、24h和48h测定细胞凋亡指数(％)分别为12．17±0.88、20．33±0．69和18．77±0．68,与相应时间段空白对照组比较明显升高(P<0．01)。羊栖菜在中药中以“海藻”入药,有多年的应用历史,用其治疗肿瘤的方剂也很多,许多记载表明其方剂对肝癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌、肠癌等有较好疗效,以前我们曾对羊栖菜的体内抗肿瘤作用及免疫功能的影响作了一些研究,发现其对S180A、EAC及白血病L615小鼠肿瘤有较好的抑制作用,为了进一步观察其对人肿瘤的组织特异性,我们进行了本次实验研究并发现羊栖菜多糖对6种人胃癌细胞株均有一定的抑制作用,而尤以对人胃癌(SGC-7901)和直肠癌(COLO-205)效果最为明显;细胞凋亡又叫细胞程序性死亡,目前认为很多肿瘤的发生是由于其细胞凋亡通路受阻而引起的,因此诱导肿瘤细胞凋亡是一条抗肿瘤的有效途径,近年研究发现多种抗癌药物可以引起一个共同的细胞死亡模式——细胞凋亡,即凋亡是不同作用机制抗癌药物殊途同归的结果,而本实验结果表明羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞内G0／G1期进入 S期,升高细胞凋亡指数(APO%),提示其具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。结论羊栖菜多糖对人胃癌(SGC-7901)和直肠癌(COLO-205)作用较强,而诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之一。

关键词：羊栖菜多糖 SGC-7901 人胃癌细胞株细胞凋亡抗肿瘤

来源：评论

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羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

引用

第八届全国中药和天然药物学术研讨会暨第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会

作者：季宇彬高世勇哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心哈尔滨150076 哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站哈尔滨150076

目的:羊栖菜(Sargassumfusiforme(Harv.)Setchel)为褐藻门马尾藻科(Sargasaceae)植物,在我国各主要海域均有生长,资源丰富.有报道称其应用于肿瘤治疗效果显著.由于其水煎液中主要有效成分为羊栖菜多糖(sargassumfusiformepolysaccharide,SFPS),因此本研究通过体外抗肿瘤实验观察羊栖菜多糖对6种不同组织肿瘤的抑制作用,观察其对肿瘤治疗的组织特异性,并揭示其作用机制.方法:采用MTT法和集落形成实验法对人肝癌Bel-7405、人宫颈癌克隆cc-801、人乳腺癌MCF-7、人直肠癌COL0-205、人胃癌SGC-7901、人食管癌Eca-109等6个细胞株进行实验,测定SFPS对各细胞株的IC50和克隆形成率(﹪),观察SFPS的体外抗肿瘤作用;以人胃癌SGC-7901为研究对象,分为空白对照组和给药组,给药组药物终浓度为50μL/mL,对照组加入等量的培养液,给药后4,8,12,24和48h各组分别取样,以9体积70﹪乙醇于-20°C固定12h后离心、PI染色30min,流式细胞仪测定,计算凋亡指数(APO﹪),观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响.结果:SFPS对上述6中细胞株的IC50(μg/mL)分别为人肝癌Bel-7405(71.71),cc-801(23.41),MCF-7(44.32),COLO-205(16.95),SGC-7901(10.14)和Eca-109(29.71);SFPS在0.10,0.05mg/mL剂量下对人胃癌SGC-7901细胞集落形成率分别为84.45±5.61﹪和89.88±5.81﹪,对人直肠癌COLO-205的集落形成率为83.36±7.78和90.79±7.97,与空白对照组比较有显著降低(P＜0.01或P＜0.05);通过对给药后4、8、12、24、48五个时间段细胞凋亡的观察,发现羊栖菜多糖组各时间段G0/G1期细胞都多于阴性对照组,即羊栖菜多糖能够阻滞肿瘤细胞由G0/G1期进入S期,诱导细胞凋亡,我们所测的细胞凋亡指数也反应出这一特点,羊栖菜多糖给药12h、24h和48h测定细胞凋亡指数(﹪)分别为12.17±0.88、20.33±0.69和18.77±0.68,与相应时间段空白对照组比较明显升高(P＜0.01).羊栖菜在中药中以"海藻"入药,有多年的应用历史,用其治疗肿瘤的方剂也很多,许多记载表明其方剂对肝癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌、肠癌等有较好疗效[7],以前我们曾对羊栖菜的体内抗肿瘤作用及免疫功能的影响作了一些研究,发现其对S180A、EAC及白血病L615小鼠肿瘤有较好的抑制作用,为了进一步观察其对人肿瘤的组织特异性,我们进行了本次实验研究并发现羊栖菜多糖对6种人胃癌细胞株均有一定的抑制作用,而尤以对人胃癌(SGC-7901)和直肠癌(COL0-205)效果最为明显;细胞凋亡又叫细胞程序性死亡,目前认为很多肿瘤的发生是由于其细胞凋亡通路受阻而引起的,因此诱导肿瘤细胞凋亡是一条抗肿瘤的有效途径,近年研究发现多种抗癌药物可以引起一个共同的细胞死亡模式--细胞凋亡,即凋亡是不同作用机制抗癌药物殊途同归的结果,而本实验结果表明羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞内G0/G1期进入S期,升高细胞凋亡指数(AP0﹪),提示其具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用.结论:羊栖菜多糖对人胃癌(SGC-7901)和直肠癌(COLO-205)作用较强,而诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之一.

关键词：羊栖菜多糖 SGC-7901 人胃癌细胞株细胞凋亡抗肿瘤

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中国马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆的构建

中国马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆的构建

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：王晓钧魏丽丽相文华张晓燕吕晓玲赵力平朱远茂邵一鸣沈荣显中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

马传染性贫血病毒(Equine Infectious AnemiaVirus,EIAV)是反转录病毒科慢病毒属的重要成员,是引起马属动物传染性贫血病的病原。该病以间歇热,贫血、消瘦为特征,呈慢性进行性,终生持续感染,以死亡而告终,少数病例可发生急性死亡。二十... 详细信息

马传染性贫血病毒(Equine Infectious AnemiaVirus,EIAV)是反转录病毒科慢病毒属的重要成员,是引起马属动物传染性贫血病的病原。该病以间歇热,贫血、消瘦为特征,呈慢性进行性,终生持续感染,以死亡而告终,少数病例可发生急性死亡。二十世纪七十年代沈荣显等通过体外细胞传代致弱路线研制成功了马传贫驴白细胞弱毒疫苗,并以之成功控制了马传贫在中国的流行,是迄今为止世界上唯一大规模应用的慢病毒疫苗。该疫苗具有良好的安全性和有效性,成为研究包括艾滋病毒在内的慢病毒疫苗的良好模型。我国马传贫弱毒疫苗致弱路线是:将一株来源于马体的EIAV超强毒力毒株LN经过驴体连续传代100余代使病毒毒力增强后获得了驴强毒株DV(对马和驴均100%致死),然后将DV连续通过驴白细胞进行体外培养驯化,使得病毒毒力完全丧失,而保持了良好的免疫原性,最终培育成功EIAV驴白细胞弱毒疫苗DLA(沈荣显等,1979),DLA进一步通过驴胎皮肤细胞培养驯化,获得了皮肤细胞弱毒疫苗株FD。本实验中将EIAV驴强毒DV体外感染驴白细胞培养物,一定时间后收获病毒(本文中简称DV116),提取EIAV前病毒DNA,以PCR法分别扩增并克隆了包含全长基因的三段前病毒DNA片段,将包含全基因片段的三个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到载体pTZ18R上,构建了4个全长基因的分子克隆,分别命名为pD30343、pD70333、pD70343、pD70344,其中两个转移到低拷贝载体pLG338上,命名为pLGD30343、pLGD70344。将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞,连续盲传三代并检测反转录酶活性,电镜观察病毒粒子,获得了一株具有感染性的EIAV病毒粒子,命名为pD70344V。将此衍生病毒第四代驴白细胞培养物(反转录酶相对含量400pg/ml)静脉接种两匹健康驴(每头驴2ml),可引起动物典型发病。两头驴(编号03008和03009)分别在接种后第9天和第14天体温升高40℃以上,稽留数日,产生急性病毒血症,其中一头于发热后期实施迫杀,另一头驴在第一次发热后自然死亡,病原学和病理学检查判定为急性马传贫。这一结果说明本文所构建的感染性分子克隆株pD70344V具有其亲本DV株的基本生物学性状,是一株具有高致病力的衍生病毒。该分子克隆的建立为进一步考察病毒的毒力与基因的关系提供了良好的平台。

关键词：马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆

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表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的免疫效力研究

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的免疫效力研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：王云峰孙永科田占成智海东刘胜旺王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

传染性支气管炎(IB)是鸡的主要呼吸道疾病之一,给养鸡业造成了巨大的损失。弱毒活疫苗和灭活油佐剂疫苗的应用对该病的控制发挥了十分重要的作用,但随着养鸡规模的日益扩大,病毒变异株和引起不同病变类型和组织嗜性的毒株不断出现,危害... 详细信息

传染性支气管炎(IB)是鸡的主要呼吸道疾病之一,给养鸡业造成了巨大的损失。弱毒活疫苗和灭活油佐剂疫苗的应用对该病的控制发挥了十分重要的作用,但随着养鸡规模的日益扩大,病毒变异株和引起不同病变类型和组织嗜性的毒株不断出现,危害也更为严重,给该病的防制工作带来了重重困难,现有的疫苗研究进度已经难以满足兽医临床的需要。分子生物学技术的出现及其普及为这类危害大、血清型众多的疾病的控制带来了契机,其中禽痘病毒载体疫苗的研究就是现代分子生物学技术在动物疾病控制方面应用的典范。为此,本室构建了能够表达传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒,将其免疫SPF鸡,观察其对免疫鸡的免疫保护作用,同时考察重组鸡Ⅱ型干扰素对活疫苗免疫效果的影响。将80只4周龄的SPF鸡分平均为5组,每组16只。分别接种亲本鸡痘病毒(S-FPV-017接种组)、共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡Ⅱ型干扰素基因重组鸡痘病毒(rFPV—IFN—Ⅱ—S1接种组)、表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒(rFPV—IBVS1接种组,所有禽痘病毒免疫组接种途径均为翅皮下无血管处接种,接种剂量为5×106PFU)、传染性支气管炎弱毒疫苗接种组(IB弱毒苗接种组),并设立非免疫鸡为对照。疫苗和重组鸡痘病毒接种后每周采血,分离血清,采用间接ELISA方法测定抗传染性支气管炎病毒抗体效价,并于疫苗和重组鸡痘病毒接种后的28 d,以103 EID50的IBV XJ3强毒株进行点眼滴鼻攻击,从攻毒后第二天观察记录发病和死亡情况。结果表明,接种后7 d开始出现抗体反应,接种后21 d达到峰值,但各组之间的抗体水平略有差异,弱毒疫苗的抗体水平最高,接种后21 d的血清平均OD值为0.32,其次是rFPV—IBVS1接种组,最低的是rFPV—IFN—Ⅱ-S1接种组,接种后21 d的血清平均OD值仅为0.15,但要高于S—FPV—017接种组和非免疫对照组(血清平均OD值低于0.1)。在传染性支气管炎强毒攻击后,rFPV—IFN—Ⅱ—S1提供的保护力最好,有15/16的免疫鸡能够获得保护,其次是rFPV—IBVS1(保护率12/16)和IB弱毒苗(保护率13/16)。攻毒后的病毒分离、间接免疫荧光检测和PCR检测结果表明:rFPV—IFN—Ⅱ—S1接种组在第8天就为病毒阴性,rFPV—IBVS1接种组和IB弱毒苗免疫组在第10 d为病毒阴性,而S—FPV-017和对照组在第12 d才全部为病毒阴性,非免疫对照组则可在强毒攻击后的20 d仍能检测到IB病毒的存在。在对攻毒后肝、脾、肾、支气管和肺的组织学观察表明,随着时间的推移,各组的病变程度呈下降趋势,但是免疫组和非免疫组织间的差异比较显著。在攻毒后第7 d,S—FPV-017免疫组和空白对照组鸡的病变非常严重,空白对照组病变持续了至少20d,S—FPV-017免疫组在攻毒后的16 d肾脏和气管仍有病变;其它免疫组病变较轻,rFPV—IBVS1和IB弱毒苗免疫组病变持续到攻毒后的13d,rFPV—IFN—Ⅱ—S1免疫组病变轻微,仅能在攻毒后的第10d时观察到病变。综合以上研究结果,表达传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒、共表达鸡IFN—Ⅱ和IBV S1基因的重组鸡痘病毒均能有效保护免疫鸡免受IBV的攻击,减轻疫苗接种的副反应,有望被开发为抗IB基因工程疫苗,为控制IBV的发生和流行提供新手段

关键词：重组鸡痘病毒 IFN 鸡传染性支气管炎病毒免疫效力

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超声生物显微镜在眼科的基础研究和临床应用

超声生物显微镜在眼科的基础研究和临床应用

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作者：王宁利刘文陈伟蓉吴河坪赖铭莹叶天才陈秀琦郑东健中山大学中山眼科中心

1994年6月1日～2000年12月1日,自选课题,进行了研究。超声生物显微镜(Ultrasound Biomicrocopy,UBM)是利用高频超声对眼前节的组织结构进行类似显微检查的一种实时、定量提供二维图像的影像学检查方法,为此探索了其诊断术。一、诊断应... 详细信息

标准号: 0501820056

1994年6月1日～2000年12月1日,自选课题,进行了研究。超声生物显微镜(Ultrasound Biomicrocopy,UBM)是利用高频超声对眼前节的组织结构进行类似显微检查的一种实时、定量提供二维图像的影像学检查方法,为此探索了其诊断术。一、诊断应用技术：设计UBM图像计算机辅助测量系统,进行实时活体人眼虹膜、睫状体等形态、位置及厚度测量。设计UBM暗室激发试验和明暗环境下房角动态观察,实现了房角状态实时动态观察,并提高了暗室激发试验的特异性和敏感性。适用于原发性闭角型青光眼发病机制的研究。经改进操作技术,使UBM的观察范围从眼前段延伸至锯齿缘及附近组织,使此技术成为研究前段增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的重要工具。二、原发性闭角型青光眼房角关闭机制：从中国原发性闭角型青光眼房角关闭机制呈多样性及中国多数慢性闭角型青光眼,房角关闭是由瞳孔阻滞及非瞳孔阻滞等多种因素所致理论基础上,提出中国原发性闭角型青光眼以房角关闭机制为依据的分类体系。将中国闭角型青光眼分为瞳孔阻滞型、非瞳孔阻滞型、多种机制共存型。并制订了分类体系指导下的临床诊治原则。三、恶性青光眼：用眼科A型、B型超声诊断仪及UBM观察证实,33.3％恶性青光眼睫状环阻滞机制的假说。另外66.7％恶性青光眼属非睫状环阻滞型,均发生在过滤术后,且对侧眼解剖结构与正常人相同。四、原发性先天性青光眼：UBM实时观察对比发现,其特征为：巩膜突缺乏正常三角形嵴突样高回声;虹膜厚度较正常对照组薄;睫状体较正常眼小。提示虹膜基层、睫状体发育不良可能在原发性先天性青光眼发病机制中起一定作用。五、视网膜脱离及前段PVR：用改良的UBM技术,对前段PVR进行UBM分型。发现眼前段PVR的UBM图像为玻璃体内增殖呈点状和条索状图形,视网膜反光增强,前移的视网膜呈凹槽状、“L”和“Z”形折叠状改变。UBM结合B超检查可提高网脱的检出率及其严重程度。六、白内障手术及人工晶体植入手术：因人工晶体材料的高反射性可在UBM检查中显影,故UBM技术用于评价后房型人工晶体植入术后房角改变、晶体襻位置及晶体皮质转归的观察。提出囊袋内植入人工晶体为最理想的术式,术中尽量将晶体皮质抽吸干净,以减少并发症的发生。在原发性闭角型青光眼合并白内障患者在白内障摘除及人工晶体植入术后房角形态变化规律的研究中,UBM检查发现不同类型的闭角型青光眼合并白内障患者术后房角改变不同的状况,提出闭角型青光眼患者行青光眼合并白内障摘除术作两阶段手术的论点,即在白内障术后,对房角状态、眼压水平重新评价后,再决定是否作青光眼手术,并确定手术量的大小。该研究结果对控制手术质量具有重要意义。七、眼外伤：UBM能清晰显示房角后角、虹膜根部离断、睫状体分离、玻璃体疝等病变,能显示传统B超不能显示的睫状体和脉络膜浅脱离。UBM对眼前节钝挫伤及眼前节周边非金属异物的诊治,较既往检查工具有独特作用。医师可据此及时对睫状体浅脱离或分离,进行不同的治疗,以提高疗效。八、眼肿瘤：UBM可清晰显示虹膜痣、虹膜和睫状体较小肿瘤,并能较好地区分囊性和实性,进行定位和定量检测,还可对疗效进行动态观察,以及时调整治疗方案。九、视网膜光凝术对眼前段影响。UBM检测并定量分析视网膜光凝术后眼前段变化,发现术后睫状体和前段脉络膜脱离程度与年龄呈显著正相关。提出老年患者光凝术时应适当减少每次激光量和延长两次光凝术间的时间,以提高疗效,减少并发症的发生。十、推广应用：系列研究在国内外专业杂志上发表论文19篇,论文被国内外专业期刊引用30次,撰写3本专著的章节。有关原发性闭角型青光眼的诊断分型已被中华眼科学会青光眼学组的“青光眼诊断标准”和亚洲青光眼循证医学指导小组的“青光眼分类标准”采用。经全国眼科专题讲座及研讨会,研究成果已在上海、天津、辽宁、河北等12个省、市、自治区的22所医院中推广应用。

关键词：超声生物显微镜眼疾病超声检查

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