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文献类型

200 篇 会议

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200 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

186 篇 医学
- 93 篇 临床医学
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- 5 篇 中药学(可授医学、...
- 4 篇 药学(可授医学、理...
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- 1 篇 生物医学工程（可授...
3 篇 理学
- 3 篇 生物学

主题

10 篇 细胞因子
5 篇 流式细胞术
5 篇 白细胞抗原
4 篇 hbv
4 篇 端粒酶活性
4 篇 白血病
4 篇 itp
4 篇 肿瘤细胞
4 篇 dna
4 篇 急性早幼粒细胞白...
4 篇 强直性脊柱炎
4 篇 移植
4 篇 生长因子
4 篇 小鼠
4 篇 mif
4 篇 hla
3 篇 初步研究
3 篇 肝癌细胞
3 篇 乙型肝炎病毒
3 篇 反义基因

机构

47 篇 山东大学
22 篇 济南市中心医院
20 篇 山东省医学科学院...
14 篇 潍坊医学院
13 篇 济南军区总医院
12 篇 泰山医学院
12 篇 山东农业大学
9 篇 山东省立医院
8 篇 山东大学齐鲁医院
6 篇 山东省千佛山医院
5 篇 山东省肿瘤生物治...
4 篇 山东省医科院基础...
4 篇 山东肿瘤生物治疗...
4 篇 山东省医学科学院...
4 篇 山东大学医学院山...
3 篇 山东省医科院基础...
3 篇 山东中医药大学
3 篇 山东医科大学附属...
2 篇 山东省肿瘤生物治...
2 篇 山东省血液中心

作者

24 篇 田志刚
19 篇 汪运山
15 篇 马春红
15 篇 肖东杰
14 篇 孙汶生
13 篇 姜国胜
12 篇 宋静
12 篇 任海全
12 篇 唐天华
12 篇 张利宁
12 篇 王郡甫
12 篇 张玉昆
11 篇 曹英林
11 篇 曲迅
9 篇 魏海明
9 篇 冯永堂
9 篇 于修平
9 篇 宋文刚
8 篇 侯桂华
8 篇 申红

语言

200 篇 中文

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利疸口服液抑菌效果的实验研究

利疸口服液抑菌效果的实验研究

引用

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：张显忠邢国庆邓文邱玉芳张彬彬宋文刚徐英萍李松曲迅泰山医学院免疫学教研室泰山医学院机能实验室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院机能实验室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室

目的:观察利疸口服液(LDKFY)的体外和体内抗菌活性,为临床应用提供依据。方法:1、体外抑菌实验采用琼脂二倍稀释法测定了利疸口服液对临床分离的105株临床常见的革兰氏阳性,包括金黄色葡萄球菌15株、表皮葡萄球菌12株、肠球菌9株及革兰... 详细信息

目的:观察利疸口服液(LDKFY)的体外和体内抗菌活性,为临床应用提供依据。方法:1、体外抑菌实验采用琼脂二倍稀释法测定了利疸口服液对临床分离的105株临床常见的革兰氏阳性,包括金黄色葡萄球菌15株、表皮葡萄球菌12株、肠球菌9株及革兰氏阴性菌,包括大肠埃希氏菌15株、铜绿假单胞菌12株、产气肠杆菌12株、肺炎克雷伯氏菌12株、奇异变形杆菌12株、不动杆菌6株,的体外抗菌活性。2、利疸口服液体内抑菌实验选择了金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌及粪肠球菌四种临床常见的革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌,做小鼠体内细菌感染的保护试验。通过与利胆片(以下简写为LDP)比较分析。结果:1、体外抑菌实验发现对不同的菌种有不同的抑菌或杀菌效果。对革兰氏阳性球菌(不含肠球菌)的MIC范围均在0.98-15.62mg/ml之间,MIC50为3.91mg/ml,革兰氏阴性杆菌的MIC范围在3.91-1000mg/ml之间,MIC50为7.81-250mg/ml,对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和不动杆菌、奇异变形杆菌作用为最强,MIC50分别为3.91mg/ml和7.81mg/ml,肠球菌作用次之,MIC50为31.25mg/ml,对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌的作用较弱,MIC50为125-250mg/ml。通过LDKFY对11株细菌的MBC测定可以看出,LDKFY对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、奇异变形杆菌有较好的杀灭作用,对其它细菌有一定的抑制作用。2、通过金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌及粪肠球菌,四种临床常见的革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌的体内抑菌实验可以看出,随着用药剂量的增加,感染死亡时间延迟。LDKFY对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌体内感染有较好的保护作用。结论:LDKFY对临床常见大部分革兰氏阳性及少数革兰氏阴性菌具有较强的杀灭或抑制作用,抗菌谱较为广泛。对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌有较好的体内保护作用,而对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的体内保护作用较弱。比较更显示LDKFY的体内和体外的抗菌活性明显强于LDP(见图),并且所选的这些菌株对各种西药具有各种不同的多重耐药性,这种耐药性与LDKFY抗菌活性无相关性。具有很好的临床开发和临床应用前景,特别是在目前耐药菌株猪獗的情况下,中药可能是解决这一难题的有利武器。

关键词：利疸口服液细菌抗菌活性

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中国人(山东地区)HLA-DPB1基因单核苷酸多态性的初步研究

中国人(山东地区)HLA-DPB1基因单核苷酸多态性的初步研究

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：克丙申张胜兰邢万佳黄象艳周仲玲徐军齐发莲济南军区总医院济南军区总医院济南军区总医院济南军区总医院济南军区总医院济南军区总医院济南军区总医院

目的研究中国人的HLA-DPB1基因,为建立适合中国人的HLA-SBT基因定型方法做技术准备。方法使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,由PCR技术扩增HLA-DPB1基因第二外显子。产物纯化后,直接核酸序列分析确定个体的HLA-DPB... 详细信息

目的研究中国人的HLA-DPB1基因,为建立适合中国人的HLA-SBT基因定型方法做技术准备。方法使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,由PCR技术扩增HLA-DPB1基因第二外显子。产物纯化后,直接核酸序列分析确定个体的HLA-DPB1外显子核酸序列。与由国际上公布的HLA-DPB1核酸序列比较,确定多态性位点。结果研究结果提示中国人HLA-DPB1第二外显子基因序列与国际上公布的序列基本一致,但有不同之处,多处存在单核苷酸多态性（SNP）,提示存在有新的等位基因。对51例个体研究显示,出现频率最高的等位基因是DPB102012。讨论由于HLA（human leucocyte antigen）与人的多种疾病的发生、发展、器官移植的存活等高度相关,该领域的研究是国际上的热点之一。尽管由于技术及其它方面的原因,目前HLA-DPB1基因分型尚未直接用于临床,但到1998年国际上已经公布了83种HLA-DPB1等位基因的核酸序列资料,1999年底,国际上已经公布了93种HLA-DPB1等位基因的核酸序列资料。这些序列资料大部分来自高加索人,中国人HLA基因的研究较薄弱,与国外同类研究相比较,有关的核酸序列资料几乎没有。HLA-DPB1的核酸序列资料亦未见报道。我们使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,用PCR技术获得了一些山东籍个体的HLA-DPB1第二外显子基因片段,经核酸序列分析获得了一些序列资料。分析了个体等位基因型。虽然这些标本多数来自糖尿病患者,不能正确代表全部的中国人的HLA-DPB1基因信息,但可略见一斑。初步反映出中国人群中可能具有一些新的等位基因,或者是新的单核苷酸多态性位点。本文使用了PCR产物直接核酸序列分析技术,部分PCR产物使用了双向测序方法,尽管PCR方法产生的模板中,会有少数片段中存在有错误硷基,但是由于错误硷基数量很少,使用PCR产物直接核酸序列分析时,不能发现这样的错误。但使用克隆技术测序量,必须注意这一问题。使用SNP标记来描述HLA基因的高度多态性,会成为描述高度多态性的HLA基因的一种新方法。本研究提示中国人群中可能存在一些新的等位基因,这些新的等位基因有待进一步研究确定。

关键词：白细胞抗原 HLA-DPB1 SNP 单核苷酸多态性

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针对HBVⅩ基因区三个关键位点的反义寡核苷酸体内抑瘤研究

针对HBVⅩ基因区三个关键位点的反义寡核苷酸体内抑瘤研究

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：刘素侠曹英林张利宁马春红丁培芳孙汶生山东大学医学院医学免疫学研究所山东大学医学院医学免疫学研究所山东大学医学院医学免疫学研究所山东大学医学院医学免疫学研究所山东大学医学院医学免疫学研究所山东大学医学院医学免疫学研究所

目的X基因区为乙型肝炎病毒(HBV)的重要开放读码框之一,其编码蛋白HBx具反式激活作用,X基因的整合与肝细胞肝癌密切相关。本实验室的前期工作表明,针对HBV基因区的三个关键位点-X基因翻译起始区(Xp)、顺向重复序列DR2、增强子ENⅡ的反... 详细信息

目的X基因区为乙型肝炎病毒(HBV)的重要开放读码框之一,其编码蛋白HBx具反式激活作用,X基因的整合与肝细胞肝癌密切相关。本实验室的前期工作表明,针对HBV基因区的三个关键位点-X基因翻译起始区(Xp)、顺向重复序列DR2、增强子ENⅡ的反义寡核苷酸(as-Xp、as-DR2、as-ENⅡ)具有良好的体外抗病毒作用。本课题进一步研究此三种反义寡核苷酸以一次性作用方式在体内对人肝癌裸鼠模型的抑制瘤细胞生长及抗HBV抗原表达作用。方法PCR分别合成了as-Xp、as-DR2、as-ENⅡ及无关对照序列,进行硫代化修饰,以HBV DNA转染的HepG22.15细胞5×10～6接种BALB/C-nu裸鼠,24h内同部位一次性用药100μg,观察并记录三种反义硫代寡核苷酸及对照序列作用的裸鼠的出瘤时间、出瘤率及瘤体生长情况。ELLSA法检测反义核酸作用裸鼠血清中HBsAg和HBeAg含量的变化,每份血清标本均设3个复孔,结果取平均值,对病毒抗原的抑制率由下述公式计算:抑制率=[(对照组P/N值-实验组P/N值)/(对照组P/N值-2.1)]×100%。P/N=标本OD值/阴性对照OD,以P/N值大于2.1为病毒抗原表达阳性。。结果结果判定标准:以于皮下触及瘤体为出瘤阳性,瘤体直径>0.5cm为成瘤阳性。HepG2.2.15细胞接种裸鼠后的第二天(24h内)同部位给药100μg,二周后无关序列对照组与生理盐水对照组在出瘤时间与出瘤率上无明显差别,出瘤率均为100%(8/8),as-Xp、as-DR2、as-ENⅡ作用二周后的出瘤率均为0(0/8),4周后出瘤率分别为25%(2/8)、12.5%(1/8)、25%(2/8),且瘤体生长缓慢,6周后出瘤率分别为75%(6/8)、50%(4/8)、62.5%(5/8),8周后均全部出瘤。as-Xp、as-DR2、as-ENⅡ各作用组间对裸鼠出瘤的影响无显著性差异(P>0.05)。此结果显示,as-Xp、as-DR2、as-ENⅡ一次性用药方式可抑制瘤细胞生长,表现为出瘤潜伏期延长,出瘤率明显低于未用药瘤细胞对照组(P<0.05),且瘤体生长缓慢。互补于Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸一次性给药方式对荷瘤鼠HBsAg和HBeAg的表达无明显抑制作用;无关序列不影响荷瘤鼠瘤体生长及HBV抗原表达。反义核酸作用的裸鼠,其饮食、活动均正常,生活习性无明显改变。取裸鼠心脏、肝脏和肾脏做病理切片,没有观察到明显的病理损伤性改变,说明反义寡核苷酸药物对裸鼠无毒。结论针对HBV Xp、DR2、ENⅡ区等关键部位的反义寡核苷酸可抑制荷瘤裸鼠人肝癌的生长,为HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。

关键词：乙型肝炎病毒反义寡核苷酸裸鼠

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尖锐湿疣患者组织中HPV感染与细胞免疫功能关系的研究

尖锐湿疣患者组织中HPV感染与细胞免疫功能关系的研究

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：张彬彬宋文刚杨美香李松徐英萍曲迅泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室

目的探讨尖锐湿疣（CA）患者组织中人乳头瘤状病毒（HPV）感染类型与细胞免疫功能的关系,并为其免疫治疗提供实验依据。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术对142例CA组织和59例假性湿疣（PCV）组织进行HPV DNA检测和HPV分型,流式细胞仪检... 详细信息

目的探讨尖锐湿疣（CA）患者组织中人乳头瘤状病毒（HPV）感染类型与细胞免疫功能的关系,并为其免疫治疗提供实验依据。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术对142例CA组织和59例假性湿疣（PCV）组织进行HPV DNA检测和HPV分型,流式细胞仪检测外周血T细胞亚群,ELISA法检测血清中细胞因子。结果142例CA患者组织经PCR检测,136例HPV阳性,总阳性率为95.8%,其中HPV6型96例（70.59%）,HPV11型95例（69.85%）,HPV16型10例（7.35%）,HPV18型8例（5.88%）;经x检验HPV6和HPV11与HPV16和HPV18之间的阳性率有非常显著性意义（x=91.52,P<0.01）;HPV复合感染率为45.59%,以HPV6、HPV11型复合感染为主,在复合型感染中有14例与HPV16、HPV18型的复合感染。59例PCV组织检测出7例HPV阳性,阳性率为11.9%,与CA组织之间比较,差异有非常显著性意义（x=142.96,P<0.001）;其中HPV6型4例,HPV11型3例,未见HPV16、HPV18型,未见复合型感染。随机抽取20例CA患者（HPV6/11型10例,HPV16/18型10例）,20例PCV患者,20例正常体检者外周血（年龄均为25～35岁,男女各半,一年内未使用免疫调节剂）,CA组外周血CD、CD、CD/CD分别为51.23±5.51%、23.52±4.90%、0.90±0.84%均低于PCV组60.31±9.46%、35.13±5.94%、1.55±0.77%（P<0.01）和正常体检对照组61.01±9.21%、36.46±6.04%、1.59±0.78%（P<0.01）;CA组外周血CD为25.98±5.78%高于PCV组22.67±2.94%（P<0.05）和正常体检对照组22.86±3.01%（P<0.05）;PCV患者外周血T细胞亚群与正常体检对照组比较无差异,HPV6/11型感染的CA患者与HPV16/18型感染的CA患者之间外周血CD、CD、CD、CD/CD无差异。CA患者血清中IL-10水平比PCV患者和正常体检对照组显著升高,IL-12水平比PCV患者和正常体检对照组显著降低。结论CA患者外周血CD/CD比值、白介素12下降,免疫抑制性因子IL-10升高,CA患者存在细胞免疫缺陷。不同类型HPV感染的CA患者之间细胞免疫功能无差异。细胞因子及其平衡在机体抗病毒免疫应答过程中起重要作用,IL-10和IL-12是调节细胞因子网络平衡的重要因子,IL-12由巨噬细胞和DC等非T细胞分泌,促进CD4+细胞分化成Th1细胞,后者释放IL-2,IFN-γ等,促进细胞免疫,有利于机体排斥HPV。IL-10是由Th2细胞亚群分泌,促进体液免疫,抑制细胞免疫,能抑制Th1细胞产出细胞因子及下调单核巨噬细胞的功能,可通过下调APC上B7分子的表达减少T细胞的共刺激信号,从而导致效应T细胞无能,诱导宿主免疫耐受,导致一系列细胞免疫反应抑制效应,包括在HPV（特异性抗原）早期感染时,不能有效地启动Th1型细胞对HPV抗原的应答反应以及增强T细胞和自然杀伤细胞活性,在尖锐湿疣发病机理中起着重要作用。

关键词：尖锐湿疣人乳头瘤状病毒 T细胞亚群细胞因子细胞免疫

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一种新的中药提取物AT-1抗肿瘤效应的实验研究Ⅰ:AT-1对肿瘤增殖及侵袭转移性的影响

一种新的中药提取物AT-1抗肿瘤效应的实验研究Ⅰ:AT-1对肿瘤增殖...

引用

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：曲迅宋文刚邓文张显忠魏然徐英萍李松夏丽英泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室山东中医药大学中西医结合肿瘤防治研究室

目的:肿瘤转移是肿瘤病人死亡最主要的原因之一。肿瘤转移过程通常伴有血栓形成,且瘤拴周围血栓形成是恶性肿瘤的重要病理表现和转移条件之一。因此目前临床上有人用小剂量的阿斯匹林进行抗肿瘤转移的治疗。AT—1系从传统化瘀作用的名... 详细信息

目的:肿瘤转移是肿瘤病人死亡最主要的原因之一。肿瘤转移过程通常伴有血栓形成,且瘤拴周围血栓形成是恶性肿瘤的重要病理表现和转移条件之一。因此目前临床上有人用小剂量的阿斯匹林进行抗肿瘤转移的治疗。AT—1系从传统化瘀作用的名方中一味具有明显的抗血小板聚集作用的药物全草经分离、提取及初步精致得到的药物有效成分。在对该药的体内外试验研究中发现其有效部位（醇溶部分）具有显著的抗血栓形成作用,基于此研究背景,我们进行了AT—1抗肿瘤的实验研究,旨在探讨AT—1的抗肿瘤效果与机制,为该药物的开发应用提供理论依据。方法:于小鼠右前肢腋下接种S肉瘤细胞,（1×10～8个/ml,0.2ml/只）,接种后第2天开始给不同剂量的AT—1（5mg/kg、2.5mg/kg、1.25mg/kg）,第15天处死小鼠,称取瘤重（g）,计算肿瘤抑制率;于C57BL/6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞（2×10～7个/ml）0.2ml,接种后第2天开始按上述剂量给药,第15天处死小鼠,在解剖显微镜下计数肺转移结节,计算肺转移率（自发转移）;取对数生长期H肝癌细胞,配成2×10～8个/ml细胞悬液,接种于小鼠右足跖（肿瘤淋巴道转移模型）,接种后24hr开始给药,第21天处死小鼠;或尾静脉接种瘤细胞悬液（肿瘤血道转移模型）0.2ml（2×10～7个细胞/只）,于接种后第15天处死小鼠。取双肺分别计数肺转移结节,计算肺转移率与肺转移指数;制备小鼠荷瘤及肿瘤血道与淋巴道转移模型,通过检测对瘤体的重量计算AT-1对小鼠抑瘤率的影响;通过计数小鼠肺转移结节数检测AT-1对肿瘤血道与淋巴道转移的影响;利用细胞穿越Matrigel、Fibronectin的试验,测定AT-1对PG细胞侵袭性的影响。结果:AT-1对荷S肉瘤小鼠的抑瘤率无明显的影响,实验组的抑瘤率分别为32.4%±11.37（高）、28.3%±13.04（中）、18.31%±8.46（低）、Mit-C 47.73%±16.31;但与对照组比其高剂量（5mg/kg）与中剂量（2.5mg/ml）治疗组对种植性Lewis肺癌小鼠的肿瘤自发肺转移与种植性H肝癌小鼠的肿瘤细胞血道、淋巴道转移较均有明显下降。其肿瘤转移率分别为对照组:38.62%±5.86（自发转移）,2.11%±0.94（淋巴道转移）,18.31%±8.46（血道转移）;（P<0.05）。AT-1高剂量组:4.3%±2.23,0.61%±0.18,4.46%±1.89;AT-1中剂量组:12.44%±4.31,1.04%±0.48,8.13%±2.66,与对照组比较均P<0.01。体外试验显示,一定浓度的AT-1（100 ug/ml、50ug/ml、25ug/ml）与PG细胞作用48hr后,有侵袭与运动力并能穿过人工基底膜及FN的细胞数呈显著减少（P<0.05）。结论:近年来关于荷瘤机体血液流变学变化的研究表明,恶性肿瘤患者伴有血液粘度的增高和组织间血栓的形成,AT-1对肿瘤的主要恶性表型之一,侵袭与转移性有显著的抑制效应,因此AT-1可能通过降低肿瘤细胞的侵袭与迁移能力而发挥其抗肿瘤效应,其进一步的抗肿瘤机制的研究正在进行。

关键词：中药 AT-1 抑瘤率抗肿瘤转移

来源：评论

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人脐血、外周血树突状细胞的体外扩增及抗肿瘤效应的研究(Ⅰ)

人脐血、外周血树突状细胞的体外扩增及抗肿瘤效应的研究(Ⅰ)

引用

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：叶欣曲迅刘爱华孙玉兰张军杨宪勇张彬彬泰安市中心医院肿瘤内科泰山医学院免疫学教研室泰安市中心医院中心实验室泰安市中心医院肿瘤内科泰安市中心医院中心实验室泰安市中心医院中心实验室泰山医学院免疫学教研室

目的树突状细胞(dendritic cells,DC)是机体功能最强的专职抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),也是唯一能激活初始型T细胞(naive T cell)的APC,处于免疫反应的中心地位。应用各种形式的肿瘤抗原(瘤细胞冻融物、照射灭活瘤苗、... 详细信息

目的树突状细胞(dendritic cells,DC)是机体功能最强的专职抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),也是唯一能激活初始型T细胞(naive T cell)的APC,处于免疫反应的中心地位。应用各种形式的肿瘤抗原(瘤细胞冻融物、照射灭活瘤苗、肿瘤抗原多肽、编码肿瘤抗原的DNA、RNA等)在体外冲击致敏DC,然后将负载肿瘤抗原的DC作为新型瘤苗回输或接种机体,均可以诱导机体产生肿瘤特异性CTL,达到特异性治疗肿瘤的目的,显示了其极好的临床应用价值,为此也越来越受人们的重视。在DC细胞抗肿瘤的临床基础研究中,如何制备出高肿瘤抗原呈递性的DC细胞是事关其抗肿瘤疗效的关键所在。研究人脐血、外周血来源的DC诱导与不同肿瘤抗原负载方法对其抗肿瘤效应的影响,旨在探索最为有效、临床应用方便且能有效诱导出机体抗肿瘤特异性免疫应答的DC瘤苗制备方法,为肿瘤抗原负载的DC的临床应用提供可实施的技术方案。本文动态观察人脐血、外周血来源的DC的体外增殖,测定其表型及其T细胞刺激活性。方法人脐血、外周血经淋巴细胞分层液离心分离的界面细胞,贴壁培养2h,除去非贴壁细胞,即获得贴壁细胞,脐血经GM-CSF(100ng/ml)+TNF-α(100ng/ml)+IL-4(20ng/ml)体外培养,外周血经GM-CSF(100ng/ml)+IL-4(20ng/ml)体外培养,3d后取悬浮细胞,以后隔日半量换液,培养7天收集悬浮细胞;在DC发育过程中,光镜和电镜观察DC形态学变化;流式细胞仪(FACS)检测共刺激分子CD80、CD86、CD 40,Ⅱ类分子HLA-A,B,C、HLA-DR,黏附分子CD54的表达;allo-MLR测定DC刺激同种T细胞增殖,以及抗原提呈功能水平;ELISA法检测DC分泌的细胞因子。结果DC培养第4天出现悬浮毛刺状细胞,随着培养时间的延长,此类细胞数量增多,至第7天,悬浮细胞均为形态不规则的毛刺状细胞并聚集成簇,为典型DC形态;扫描电镜显示细胞表面粗糙,有大量皱折和不规则突起;透射电镜可见DC伸展的突起,胞内线粒体丰富。FACS显示培养7天的悬浮细胞高表达DC相对特异性标志CDIa,共刺激分子CD80、CD86、CD 40,黏附分子CD 54,高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子;提示DC提高共刺激功能和黏附功能。少量DC能够对同种T细胞具有很强的刺激增殖作用,DC胞内高表达IL-12P40。结论从30ml人脐血经GM-CSF(100ng/ml)+TNF-α(100ng/ml)+IL-4(20ng/ml)诱导能分离到1×10～7DC,从100ml正常人外周血获取的单个核细胞经GM-CSF(100ng/ml)+IL-4(20ng/ml)诱导能分离到1×10～7DC,可满是临床肿瘤治疗的应用。

关键词：树突状细胞抗原提呈粒细胞-巨噬细胞集落因子肿瘤坏死因子α 白细胞介素4

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一种新型双启动子DNA疫苗载体的构建及在人乳头瘤病毒新型疫苗研究中应用

一种新型双启动子DNA疫苗载体的构建及在人乳头瘤病毒新型疫苗研...

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：卞继峰于修平赵蔚明杨海宁于瑾耿昭张茂修山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心山东大学医学院医学分子生物学研究中心

目的:DNA疫苗或者称为基因免疫被称为疫苗研究中继死疫苗、减毒活疫苗之后的的第三次革命,最近病原体疫苗研究中的两个重大进展均是基于DNA疫苗,即Ebola病毒和HIV病毒DNA疫苗的应用研究已经取得了令人鼓舞的研究成果,以上成果均发表于... 详细信息

目的:DNA疫苗或者称为基因免疫被称为疫苗研究中继死疫苗、减毒活疫苗之后的的第三次革命,最近病原体疫苗研究中的两个重大进展均是基于DNA疫苗,即Ebola病毒和HIV病毒DNA疫苗的应用研究已经取得了令人鼓舞的研究成果,以上成果均发表于国际著名的《Nature》和《Science》杂志上,由于DNA疫苗的接踵途径是将真核表达质粒直接接种于机体的肌肉和皮下,其中大部分质粒被体内的酶降解,且质粒在体内存在时间短暂,明显影响了DNA疫苗的疗效。以减毒沙门氏细菌做为DNA疫苗的载体成功解决了以上问题。但目前作为DNA疫苗真核表达质粒并不能在沙门氏细菌中表达外源蛋白,并没有充分利用沙门氏细菌作为基因原核细胞表达场所的特点。基于以上的认识,我们拟构建一种与减毒沙门氏细菌匹配的新型DNA疫苗载体,这种载体含有两种启动子,即真核细胞表达启动子(HCMV IE)和沙门氏细菌厌氧环境诱导启动子(nir),使其即可在沙门氏细菌菌体厌氧环境中自然表达外源基因,又可在真核机体细胞中表达外源基因,充分利用了沙门氏细菌原核质粒表达场所、DNA疫苗载体和粘膜免疫佐剂的特点。方法:设计一种厌氧诱导启动子,含有启动子的基本结构如TATA、S-D序列,为了增加启动子有效表达真核细胞基因,特在S-D下游一定位置增加一个Kozak序列,将设计的启动子置于一个真核表达载体HCMV IE启动子的下游的一个内含子区域,构建成一种携带原核细胞和真核细胞双启动子的载体pCMVnir,并切有原核细胞和真核细胞两种转录终止子。然后将人乳头瘤病16型L1-E7基因插入pCMVnir,构建成一种与减毒沙门或细菌匹配新的HPV16 L1-E7双启动子DNA疫苗质粒。结果:经限制性核酸内切酸酶切、DNA序列分析证明pCMVnir载体nir启动子结构与设计一种,没有引入位点突变,HPV16 L1-E7基因插入方向正确。将pCMVnir16L1-E7导入减毒沙门式细菌中,经厌氧诱导可表达HPV16 L1-E7蛋白,证明构建的nir启动子能够有效表达外源基因,因CMV启动子没有进行改动,理论上CMV启动子应该可以在真核细胞中有效表达外源基因,目前正在进行这方面的验证,以及动物实验。结论:本研究构建成功一种与减毒沙门式细菌匹配的新型双启动子DNA疫苗载体,能够在沙门式细菌中表达外源基因,并成功将HPV16 L1-E7基因插入pCMVnir载体表达HPV16 L1-E7蛋白质。本研究制备携带乳头瘤病毒L1E7-CTA2B融合基因HPV新型双启动子DNA疫苗,研究其诱导机体产生保护性免疫的作用。目前尚没见类似的研究思路,pCMVnir将在DNA疫苗中具有重要的应用价值,并成功用于开发价廉有效的防治HPV感染的新措施。

关键词：人乳头瘤病毒 DNA疫苗新型载体双启动子

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全反式维甲酸对急性早幼粒细胞白血病TNF和IL-6活性的影响

全反式维甲酸对急性早幼粒细胞白血病TNF和IL-6活性的影响

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：姜国胜唐天华张玉昆任海全任青华委枫勤李秀松吴文孙关林毕可红郭桂月刘秀兰田志刚山东省医学科学院血液肿瘤学研究室山东省医学科学院血液肿瘤学研究室山东省医学科学院血液肿瘤学研究室山东省医学科学院血液肿瘤学研究室山东省医学科学院血液肿瘤学研究室山东省医学科学院血液肿瘤学研究室上海市血液病研究所上海市血液病研究所上海市血液病研究所山东省千佛山医院血液科山东省千佛山医院血液科山东省千佛山医院血液科山东省医学科学院血液肿瘤学研究室

我国学者1986年首次用全反式维甲酸(all trans reetinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)获得成功,成为肿瘤诱导分化治疗模式最为有效的范例,并由此被国际上称之为白血病治疗史上的一场“中国... 详细信息

我国学者1986年首次用全反式维甲酸(all trans reetinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)获得成功,成为肿瘤诱导分化治疗模式最为有效的范例,并由此被国际上称之为白血病治疗史上的一场“中国革命”。然而,随着临床应用病例的不断扩大,逐渐发现该方法可以引起某些较严重的并发症,严重时能够导致死亡。如治疗后发生的白细胞明显升高或高白细胞征(hyperleukocytosis)是最为常见的不良反应之一,是近几年国内外学者广泛关注的热点与难点。尽管已经从多个环节作了相应的探讨,但在特殊现象发生机理方面,仍然没有取得令人十分信服的解释。因为细胞因子在白细胞或白血病细胞增殖分化调节中起着重要的作用,尤其是白血病细胞的TNF和IL-6等细胞因子自分泌作用,在白血病细胞增殖调控中起到重要作用,所以某些细胞因子的变化,可能在ATRA诱发APL患者发生的白细胞升高中起到作用。为了明确这种可能性,本研究选择了正向造血调控因子白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)和负向造血调控因子肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF),对ATRA治疗后APL患者的血清和WBC胞浆中TNF或IL-6活性进行了动态测定,并进行了它们与白细胞变化关系的分析,以期揭示此两种细胞因子在高白细胞血症发生中所起作用。现将具体结果报道如下。目的:检测急性早幼粒细胞白血病患者经过全反式维甲酸治疗后血清和白细胞胞浆内TNF和IL-6活性水平的变化与意义。方法:TNF活性应用传统的生物学结晶紫法测定。采用IL-6依赖细胞株MH60-BSF2进行IL-6的生物学方法的测定。半固体琼脂法检测L-CFU和GM-CFU集落形成数量变化。结果:治疗前的APL患者血清TNF和IL-6血清活性水平均高于对照组的相应水平(P<0.01)。白细胞升高期的血清TNF和IL-6活性出现降低趋势,但只有IL-6的变化具有统计学意义(P<0.05)。完全缓解后的APL,患者血清TNF和IL-6活性明显下降(P<0.05),并与正常对照的相应水平比较无明显差异(P>0.05)。治疗前白细胞胞浆TNF和IL-6活性平均水平明显高于对照组,以TNF变化明显(P<0.05),但在治疗过程中没有明显的变化。相关性分析结果表明,血清TNF和IL-6活性的变化与APL患者外周血白细胞数量无明显相关性,血清TNF变化与骨髓L-CFU数量具有明显相关(P<0.05)。结论:全反式维甲酸治疗虽然影响APL患者血清TNF和IL-6水平,但与该组患者的外周血白细胞数量变化无线性关系。

关键词： TNF IL-6 全反式维甲酸急性早幼粒细胞白血病

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FHIT基因的克隆与逆转录病毒表达载体的构建

FHIT基因的克隆与逆转录病毒表达载体的构建

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：曲迅宋文刚邓文李松栾旭东朱长军泰山医学院免疫教研室泰山医学院免疫教研室泰山医学院免疫教研室泰山医学院免疫教研室 Albert Einstein Medical College 泰山医学院免疫教研室

目的肿瘤是一种多基因表达异常的疾病。迄今,人们已经发现上百种癌基因和几十种抑癌基因,这些基因的发现不仅为探讨肿瘤发病机理提供新的思路,同时也为肿瘤的基因治疗奠定理论基础。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因... 详细信息

目的肿瘤是一种多基因表达异常的疾病。迄今,人们已经发现上百种癌基因和几十种抑癌基因,这些基因的发现不仅为探讨肿瘤发病机理提供新的思路,同时也为肿瘤的基因治疗奠定理论基础。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因是Ohta等克隆的一个新的抑癌基因,大量研究表明FHIT基因在多种肿瘤均存在不同程度的缺失、突变。我们从人正常阑尾组织克隆出FHIT基因全长,并以此构建FHIT基因的逆转录病毒表达载体,为深入研究FHIT的抑癌作用提供可靠的分子工具。方法首先利用TRIzol试剂提取人正常阑尾组织总RNA,经逆转录反应得到cDNA库,再用FHIT基因的PCR引物扩增得到目的基因FHIT。使用pGEM-T easy vector system试剂盒构建FHIT的克隆载体pGEM-FHIT,经PCR扩增筛选,EcoRⅠ、HindⅢ酶切鉴定后进行DNA测序。将pGEM-FHIT与pLXSN质粒DNA分别进行EcoRⅠ完全酶切,回收纯化目的基因FHIT片段及载体pLXSN/EcoRⅠ片段,并用碱性磷酸酶对pLXSN/EcoRⅠ片段进行5’突出末端去磷酸化处理;以目的基因与载体5:1(分子摩尔比)比例连接FHIT与pLXSN/EcoRⅠ片段,转化后挑选阳性菌落进行PCR扩增筛选,EcoRⅠ、HindⅢ酶切鉴定。结果以FHIT的PCR引物对人正常阑尾组织总RNA进行RT-PCR扩增得到FHIT片段,大小为908bp。经T-A克隆后,目的基因FHIT插入质粒pGEM-Teasy DNA两个EcoRⅠ酶切位点之间,因此用EcoRⅠ酶切pGEM-FHIT DNA可重新得到FHIT片段;由于pGEM-T epsy质粒DNA无HindⅢ酶切位点,而FHIT引物有HindⅢ酶切位点,故用HindⅢ酶切pGEM-FHIT质粒DNA可得到线性DNA片段,大小为3923bp左右,而pGEM-Teasy质粒DNA不能被HindⅢ酶切,但可以被EcoRⅠ酶切得到线性DNA,大小为3015bp。经测序证实pGEM-FHIT质粒中FHIT序列与报道相同。将pGEM-FHIT质粒DNA EcoRⅠ酶切,获得FHIT基因片段并与去磷酸化处理的pLXSN/EcoRⅠ片段连接转化后挑选8个阳性菌落,用FHIT引物进行扩增,其中5个菌落获得特异性DNA片断。由于插入的FHIT基因片断起始密码子上游含有HindⅢ酶切位点,故以正向插入得到的pLXSN-FHIT质粒DNA经HindⅢ酶切后可得到一条大小约1237bp的片断,相反以反向插入的pLXSN-FHIT质粒DNA经HindⅢ酶切后仅得到一条大小约365bp的片断。经HindⅢ酶切后,5个菌落中有3个为正向插入,余2个菌落为反向插入。结论我们实验室从人正常阑尾组织中克隆出FHIT基因的全长,并将其亚克隆于逆转录载体pLXSN质粒中。载体pLXSN质粒属于一种逆转录病毒表达系统,该质粒不仅含有外源基因表达的启动子、原核复制筛选标志,还含有逆转录病毒包装信号元件及新霉素抗性基因筛选标志。利用此质粒携带外源基因转染包装细胞PT67或PA317即可获得携带外源基因的逆转录病毒,进而可应用于感染其他细胞以研究外源基因的功能。我们应用分子克隆技术成功获得FHIT基因的克隆载体pGEM-FHIT及其逆转录病毒表达载体pLXSN-FHIT,为深入研究FHIT的抑癌作用及肿瘤治疗的新靶点提供了可靠的生物工程载体。

关键词： FHIT基因克隆载体逆转录病毒表达载体

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肿瘤细胞培养上清对小鼠骨髓来源的树突状细胞分化发育的影响

肿瘤细胞培养上清对小鼠骨髓来源的树突状细胞分化发育的影响

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山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：宋文刚于益芝曲迅刘书逊李松曹雪涛泰山医学院免疫学教研室第二军医大学免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室第二军医大学免疫学教研室泰山医学院免疫学教研室第二军医大学免疫学教研室

目的探讨肿瘤细胞对树突状细胞（DC）分化发育的影响。方法在诱导小鼠骨髓来源DC发育过程中,加入肿瘤细胞培养上清,观察DC生成情况,并与正常培养条件下的DC比较共刺激分子、Ⅱ类分子、黏附分子的表达、刺激同种T细胞增殖,以及抗原提呈... 详细信息

目的探讨肿瘤细胞对树突状细胞（DC）分化发育的影响。方法在诱导小鼠骨髓来源DC发育过程中,加入肿瘤细胞培养上清,观察DC生成情况,并与正常培养条件下的DC比较共刺激分子、Ⅱ类分子、黏附分子的表达、刺激同种T细胞增殖,以及抗原提呈功能水平。ELISA法检测肿瘤细胞分泌的细胞因子。结果正常培养的小鼠DC在第5天出现毛刺状细胞,随着培养时间的延长,此类细胞数量增多,至第8天,悬浮细胞均为形态一致的毛刺状细胞并聚集成簇;在肿瘤细胞上清培养的DC中,B16细胞上清对DC的分化发育有明显的抑制作用,表现为毛刺状细胞和聚集体的数量明显减少;但3LL细胞的上清对DC的数量有轻度的抑制作用。正常培养的小鼠DC在第12天既能表达中等程度的共刺激分子CD80、CD86、CD40,黏附分子CD54,高表达MHC-Ⅱ类分子Ia-K;而经肿瘤上清培养的DC表达CD80,CD86,CD54的水平显著降低,此外B16细胞上清还能够抑制DC表达CD40分子、MHC-Ⅱ分子,3LL肿瘤细胞上清对CD40分子、MHC-Ⅱ类分子的表达没有显著影响;提示3LL,B16细胞可能抑制小鼠DC的共刺激功能和黏附功能。利用小鼠对OVA抗原特异性的T细胞杂交瘤,检测了B16,3LL细胞上清培养的DC的抗原提呈能力,结果显示,经OVA或OVA冲击的常规培养的成熟DC能够分别刺激对OVA特异的MHC-Ⅰ限制性的T杂交瘤细胞-RF33.70或OVA特异的MHC-Ⅱ限制性的T杂交瘤细胞-MF2.2D9分泌高水平的IL-2,分别为1 492±1.68 pg/ml和237±23 pg/ml;而经这2种肿瘤上清培养的DC刺激RF33.70和MF2.2D9分泌的IL-2水平明显降低,B16上清处理组DC刺激RF33.70分泌IL-2水平为792±1.34 pg/ml,MF2.2D9为145±18 pg/ml;3LL上清处理组DC刺激RF33.70分泌IL-2水平为172±71pg/ml,MF2.2D9为123±13 pg/ml （p<0.05）;从而提示3LL和B16细胞能够分泌某种因子抑制DC的抗原提呈功能。正常成熟DC能够对同种T细胞具有很强的刺激增殖作用,用B16细胞上清培养的小鼠DC的这种混合淋巴细胞反应的功能明显降低（p<0.05）,但3LL细胞分泌上清对小鼠DC刺激同种T细胞增殖的能力没有影响,此结果与B16和3LL细胞上清对DC表达MHC-Ⅱ分子的不同影响一致。在体内,DC经抗原刺激后,能够通过分泌IL-12,促进Th0细胞分化为Th1细胞,从而诱导Th1型细胞介导的免疫反应。利用OVA抗原体外冲击DC后,检测了DC分泌IL-12的水平,结果表明,常规培养的小鼠DC,能够分泌相当水平的IL-12（200±1.9pg/ml）,而经B16和3LL细胞上清培养的小鼠DC分泌IL-12的水平明显降低,分别为140±1.5pg/ml和150±1.3pg/ml（P<0.05）。B16,3LL细胞中表达相当水平的IL-10分别为345±31pg/ml和263±25pg/ml,间接提示B16,3LL细胞通过分泌IL-10抑制的抗原提呈功能。结论在肿瘤组织的微环境中存在免疫抑制性因子,对DC分化发育和抗原提呈功能起负性调节作用。

关键词：树突状细胞肿瘤细胞抗原提呈免疫耐受

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