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5 篇 中国农业科学院蚕...
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作者

8 篇 华子春
5 篇 王俊
5 篇 许文荣
5 篇 钱晖
5 篇 盛晟
5 篇 谢婧婧
5 篇 何冰芳
5 篇 宋天顺
5 篇 吴福安
4 篇 周长林
4 篇 陈红霞
4 篇 孙瑜
4 篇 李越希
4 篇 齐永
4 篇 饶继先
4 篇 张玉彬
4 篇 李晓玲
4 篇 李素芹
4 篇 沈万鹏
3 篇 张源淑

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小肽模序对大肠杆菌中信号肽分泌表达的增强作用研究

小肽模序对大肠杆菌中信号肽分泌表达的增强作用研究

引用

江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：成骋崔禄鹏武玉露谢雨伶邱雨濛何国毅何冰芳南京工业大学生物与制药工程学院江苏南京210009 南京工业大学药学院江苏南京210009 南京工业大学生物与制药工程学院江苏南京210009 南京工业大学药学院江苏南京210009

大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和应用最广的经典表达系统，常用于蛋白质可溶性表达以及简化下游纯化工艺等，但是在实际应用中，除了缺少翻译后的修饰系统外，大肠杆菌在表达异源蛋白时会由于积累大量错误折叠的目的蛋白，...

大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和应用最广的经典表达系统，常用于蛋白质可溶性表达以及简化下游纯化工艺等，但是在实际应用中，除了缺少翻译后的修饰系统外，大肠杆菌在表达异源蛋白时会由于积累大量错误折叠的目的蛋白，形成难以复性的包涵体结构.为了解决这个问题，研究人员提出了一系列的解决方法，如使用不同的启动子调控蛋白的表达水平、共表达分子伴侣、降低培养温度或融合标签技术等.本研究针对偶然发现来源于Arthrobacter arilaitensis NJEM01的果糖苷酶FRU6通过自身信号肽fru的介导下，在*** BL21中实现高水平外泌表达，并且信号肽fru介导葡聚糖酶BGL也实现了胞外分泌表达.通过生物信息学分析，发现相较其他常见的信号肽，其N端区域较长，并且富含酸性和碱性氨基酸.

关键词：

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重组磷酸胆碱胞苷转移酶酿酒酵母生物合成胞磷胆碱的工艺研究

重组磷酸胆碱胞苷转移酶酿酒酵母生物合成胞磷胆碱的工艺研究

引用

江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：邓童心邱蔚然周长林中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 南通秋之友生物科技有限公司江苏南通226200 南通秋之友生物科技有限公司江苏南通226200 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

本课题涉及一种过表达磷酸胆碱胞苷转移酶酿酒酵母基因工程菌的构建和应用.该菌株是将长度为1277bp的酿酒酵母来源的编码磷酸胆碱胞苷转移酶基因cct与pYES2.0-Kanmx载体构建重组质粒，然后将其转接酿酒酵母CGMCC 2.603中，构建基因工程... 详细信息

本课题涉及一种过表达磷酸胆碱胞苷转移酶酿酒酵母基因工程菌的构建和应用.该菌株是将长度为1277bp的酿酒酵母来源的编码磷酸胆碱胞苷转移酶基因cct与pYES2.0-Kanmx载体构建重组质粒，然后将其转接酿酒酵母CGMCC 2.603中，构建基因工程菌QZ-016.通过过表达反应关键酶磷酸胆碱胞苷转移酶而提高胞二磷胆碱的转化率.该菌株的固形物对可发酵性糖的得率为45％-50％，可应用于以5'-胞苷酸和磷酸胆碱为原料，生物转化制造胞磷胆碱产品，反应7小时摩尔转化率可高达73％.在生产培养该菌株的发酵体系中，产率高.将该菌株应用于生产胞磷胆碱，具有成本低、制造能耗低、反应周期短等优点.

关键词：胞二磷胆碱酿酒酵母基因工程磷酸胆碱胞苷转移酶生物合成

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外泌体传递miR-1229在结直肠癌中转运调控机制研究

外泌体传递miR-1229在结直肠癌中转运调控机制研究

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：孙慧玲潘玉琴何帮顺王书奎南京医科大学附属南京医院中心实验室江苏南京210006

目的：随着社会经济的发展、人们的生活环境、生活方式以及膳食结构的改变,我国结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)的发病率和死亡率呈不断上升趋势,均位居恶性肿瘤的第5位[1].目前CRC的治疗主要以手术切除、术前术后化疗以及分子靶向治...

目的：随着社会经济的发展、人们的生活环境、生活方式以及膳食结构的改变,我国结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)的发病率和死亡率呈不断上升趋势,均位居恶性肿瘤的第5位[1].目前CRC的治疗主要以手术切除、术前术后化疗以及分子靶向治疗为主,但患者的复发率仍然较高.复发后未接受治疗的患者其中位生存期仅6.9个月,5年生存率极低.CRC发生发展的确切分子机制尚不清楚,可能是诸多细胞内调控网络及细胞外因素的共同作用引起[2].因此,深入研究与CRC发生发展相关的基因并探讨相关的分子机制,不仅具有重要的研究价值,而且具有巨大的临床应用前景.外泌体是细胞间通讯的新兴介体.研究表明外泌体传递的miRNAs在肿瘤的发生发展中起着重要作用.先前miRNAs微阵列芯片提示外泌体中miR-1229在结直肠癌(CRC)血清中高表达,但是其确切的临床意义和信号转导机制尚未明了.本研究旨在分析外泌体传递miR-1229在CRC中的转运调控作用,为阐明CRC发生发展的作用机制和探寻其有效诊治措施提供新的实验依据.

关键词：

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阿霉素-氯喹共载药低氧控释脂质体的构建及对肿瘤的治疗作用

阿霉素-氯喹共载药低氧控释脂质体的构建及对肿瘤的治疗作用

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：陆爱玲陈忠平李怡南通大学航海医学研究所江苏南通 226000

目的构建一种响应肿瘤低氧微环境而快速释放药物的低氧控释脂质体药物载体,提高脂质体药物对肿瘤的治疗效果.方法 (1)核磁共振氢谱确定低氧响应分子2-硝基咪唑衍生物的结构;薄膜分散法制备脂质体;紫外分光光度计及透射电子显微镜考察... 详细信息

目的构建一种响应肿瘤低氧微环境而快速释放药物的低氧控释脂质体药物载体,提高脂质体药物对肿瘤的治疗效果.方法 (1)核磁共振氢谱确定低氧响应分子2-硝基咪唑衍生物的结构;薄膜分散法制备脂质体;紫外分光光度计及透射电子显微镜考察脂质体的低氧响应性;动态光散射仪确定脂质体表征;(2)pH梯度法装载抗肿瘤药物阿霉素(Doxorubicin,DOX)及自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)得到 DOX-CQ-HR-LPs;荧光分光光度计和高效液相色谱法确定药物的包封率、载药率和释放曲线.MTT法检测DOX-CQ-HR-LPs在常氧和低氧条件下对HepG2细胞的毒性.结果 (1)HR-LPs具有低氧响应性;(2)DOX和CQ都可以通过pH梯度法载药;MTT结果表明DOX-CQ-HR-LPs比DOX-HR-LPs对低氧肿瘤细胞的毒性更强.结论 (1)所构建的低氧控释脂质体,能够选择性地在低氧肿瘤细胞内快速释放药物,显著提高对实体瘤的治疗效果.(2)DOX-CQ-HR-LPs能够进一步提高脂质体药物的抗肿瘤效果.

关键词：肿瘤低氧脂质体硝基芳烃药物控释

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高效沙门氏菌CRISPR无痕基因编辑系统

高效沙门氏菌CRISPR无痕基因编辑系统

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：韩超杨力润王萌慧周俊杰李家璜华子春南京大学生命科学学院南京210023

细菌作为抗肿瘤基因治疗载体日益成为研究热点，减毒沙门氏菌作为重要治疗菌株之一能够靶向实体瘤坏死区，其安全性在在动物模型及临床试验上得到证实，但治疗有效性需要提高.对沙门氏菌基因组进行遗传改造是进一步提升其治疗效果的重... 详细信息

细菌作为抗肿瘤基因治疗载体日益成为研究热点，减毒沙门氏菌作为重要治疗菌株之一能够靶向实体瘤坏死区，其安全性在在动物模型及临床试验上得到证实，但治疗有效性需要提高.对沙门氏菌基因组进行遗传改造是进一步提升其治疗效果的重要手段.当前沙门氏菌的遗传改造主要使用基于噬菌体来源重组酶的同源重组系统，实际应用中有获得阳性克隆数少，实验周期长和染色体上会残留"疤痕"等缺点.本研究开发了基于CRISPR-Cas9及λRed重组酶的双质粒沙门氏菌基因编辑系统.CRISPR系统切割染色体目的基因，致死野生型克隆，利用λRed提高同源重组效率，筛选出已进行同源重组修复后的改造菌株.该方法已在沙门氏菌VNP20009菌株的多个目的基因上得到验证，敲入正确率高于60％，实验周期在四天以内.本研究首次在沙门氏菌上成功建立CRISPR无痕基因编辑系统，为以后进行高效，定点改造基因组，优选菌株奠定了基础.且该系统可连续进行多基因编辑，亦有同时进行多基因编辑的潜力.

关键词：基因编辑 CRISPR 同源重组沙门氏菌

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中大医院CYP2C19基因多态性检测结果初步分析

中大医院CYP2C19基因多态性检测结果初步分析

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：陈克平叶斌东南大学附属中大医院南京210009

目的：初步总结分析中大医院细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)基因多态性检测结果,并分析性别基因型差别,根据基因型选择药物并合理调整用量,为个体化治疗提供参考.方法：选取2014年1月至2016年12月期间在东南大学附属中大医院进行CYP2... 详细信息

目的：初步总结分析中大医院细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)基因多态性检测结果,并分析性别基因型差别,根据基因型选择药物并合理调整用量,为个体化治疗提供参考.方法：选取2014年1月至2016年12月期间在东南大学附属中大医院进行CYP2C19基因检测的人群共2113名,男性1339名,女性774名.抽取外周血提取DNA,采用PCR-基因芯片法分析CYP2C19基因多态性.结果：在2113例检测标本中,共检测到CYP2C19六种基因型,CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3,*3/*3,各自对应的基因频率为：38.95％、42.64％、6.01％、9.09％、3.03％、0.28％.等位基因 CYP2C19*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3 的频率分别为 63.27％、31.92％、4.80％.结论：CYP2C19*2 为该院 CYP2C1 基因多态性检测主要突变位点,CYP2C19*1/*1与CYP2C19*1/*2为主药基因型.检测结果主要基因型分布与中国其他地区相近.性别在CYP2C19基因型分布上无统计学差异.

关键词：南京地区 CYP2C19 基因型

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使用CRISPR/Cas9双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的HeLa细胞株

使用CRISPR/Cas9双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因...

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：陈红霞孙瑜齐永李素芹饶继先沈万鹏李晓玲李越希南京军区军事医学研究所南京210002 南京医科大学基础医学院南京210029 中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 南京军区军事医学研究所南京210002 南京医科大学基础医学院南京210029 中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

目的本研究旨在使用新型基因敲除技术,即CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株,为深入研究SOSS相关蛋白功能提供细胞模型。方法利用加利福尼亚大学基因组网站确定靶标DNA的外显子和内含子序列... 详细信息

目的本研究旨在使用新型基因敲除技术,即CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株,为深入研究SOSS相关蛋白功能提供细胞模型。方法利用加利福尼亚大学基因组网站确定靶标DNA的外显子和内含子序列及分布,利用麻省理工学院的CRISPR靶序列设计网站针对单个外显子逐一进行序列比对筛选,定位符合要求的靶标特异向导RNA(Single guide RNA,sgRNA),遴选评分较高的sgRNA序列,在5'端加入特异的粘性末端街头设计引物(除两端接头不同外,正向引物与反向引物互补),以用于退火后插入带有与之末端互补的PX462载体。

关键词： CRISPR/Cas9双切口酶 SOSS 基因编辑

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使用CRISPR/Cas-D10A双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2 和 SOSSC 基因的 HeLa 细胞株

使用CRISPR/Cas-D10A双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2 和 SOS...

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：孙瑜陈红霞齐永李素芹饶继先沈万鹏李晓玲李越希南京医科大学基础医学院南京 210029 南京军区军事医学研究所南京210002 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009 南京医科大学基础医学院南京 210029 南京军区军事医学研究所南京210002 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009

目的使用CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株。方法设计成对的向导RNA(Single guide RNA,sgRNAs),靶向基因的外显子,PX462为载体,构建重组真核表达质粒。重组真核质粒的鉴定为酶切和测序,鉴... 详细信息

目的使用CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株。方法设计成对的向导RNA(Single guide RNA,sgRNAs),靶向基因的外显子,PX462为载体,构建重组真核表达质粒。重组真核质粒的鉴定为酶切和测序,鉴定结果正确时将质粒和载体按照一定比例转染进HeLa细胞中,使用相应浓度的嘌呤霉素筛选阳性细胞,挑选并培养筛选出的单克隆细胞。使用Western blot实验对敲除效果进行鉴定。结果成对的sgRNA成功插入到PX462载体中,质粒的酶切和测序鉴定表明其序列正确,重组载体质粒转染入HeLa细胞中并筛选单克隆细胞,未检测出SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白的表达。结论敲除SOSSB1、SOSSB2、SOSSC基因的HeLa细胞株构建成功。

关键词： CRISPR/Cas9双切口酶 SOSS 基因编辑 HeLa细胞株

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粪味梭菌还原CO2产化学品研究

粪味梭菌还原CO2产化学品研究

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：刘海霞王光荣宋天顺费康清王浩绮谢婧婧南京工业大学生物与制药工程学院江苏南京211816

将CO2转化为高附加值产品具有重要的环境和经济意义.目前微生物电合成是研究的热点技术,在生物电化学系统中将CO2转化为有机化学品.在本研究中,粪味梭菌是一株严格厌氧菌,首次在MES系统中被证明可以作为生物催化剂固定CO2.随着MES系统... 详细信息

将CO2转化为高附加值产品具有重要的环境和经济意义.目前微生物电合成是研究的热点技术,在生物电化学系统中将CO2转化为有机化学品.在本研究中,粪味梭菌是一株严格厌氧菌,首次在MES系统中被证明可以作为生物催化剂固定CO2.随着MES系统的阴极电势从-0.6V降低到-1.2V(相对于Ag/AgCl),MES的电流密度和有机化学品浓度也随之增加.将遗传分析与实验室实验结果相结合,我们认为在阴极电位为-0.6V时粪味梭菌可以直接从阴极接受电子,将CO2还原为有机化合物,在该电位下乙酸和丁酸的最大值分别达到0.03g/L和0.01g/L,总库仑效率的最大值约为84％.在MES系统中随着阴极电势的减小,直接电子转移和外源电子穿梭,H2有可能被粪味梭菌利用.当MES系统电位设置为-1.2V时,在阴极室检测到乙酸,丁酸和乙醇的最大值分别为0.44g/L,0.085g/L和 0.015g/L.由于阴极室中粪味梭菌浮游细胞的H2利用率低,所以MES系统的总库仑效率降至37.8％.

关键词：粪味梭菌微生物电合成二氧化碳

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重组人血管内皮抑素(Rh-Endostatin)的基础与临床研究

重组人血管内皮抑素(Rh-Endostatin)的基础与临床研究

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江苏省生物化学与分子生物学学会第十届会员代表大会暨学术交流会

作者：徐根兴南京大学生命科学学院江苏南京210023 江苏省基因药物工程技术研究中心江苏苏州215128

1997年Cell杂志发表了 O'Reilly等发现小鼠血管内皮瘤(EOMA)细胞系的培养液能够抑制血管内皮细胞的增殖,通过分离纯化得到一种新的蛋白质,命名为鼠的Endostatin,后来翻译成血管内皮抑制素(简称内皮抑素).1997年9月10 日,我们申请了... 详细信息

1997年Cell杂志发表了 O'Reilly等发现小鼠血管内皮瘤(EOMA)细胞系的培养液能够抑制血管内皮细胞的增殖,通过分离纯化得到一种新的蛋白质,命名为鼠的Endostatin,后来翻译成血管内皮抑制素(简称内皮抑素).1997年9月10 日,我们申请了人内皮抑素的发明专利(Z197107112.8),2001年1月10日获得专利授权.内皮抑素是人胶原蛋白十八基因1503-2055表达的蛋白活性片段,分子量20KD,184个氨基酸,与小鼠内皮抑素氨基酸序列有85.33％的同源性,并且同国内外的类似临床品种在氨基酸序列、蛋白性质、纯化方法、抗体产生种类和药代动力学等方面都有明显差异.20年来,我们从基础到临床进行了一系列研究,证明内皮抑素可以抑制内皮细胞增殖、迁移;内皮抑素对新生血管生成有明显的抑制作用;内皮抑素对肿瘤生长和转移有明显的抑制作用,可以促进肿瘤细胞凋亡;内皮抑素能克服或避免肿瘤的抗药性,可以在维持治疗中发挥单药作用.

关键词：内皮抑素 endostatin 重组蛋白内皮细胞肿瘤非小细胞肺癌

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