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2 篇 浙江省农业科学院...
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作者

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4 篇 陈柳
4 篇 倪征
3 篇 余斌
3 篇 华炯钢
3 篇 张永普
3 篇 杨佳
3 篇 云涛
3 篇 张加勇
2 篇 李树然
2 篇 陆祎玮
2 篇 钱冬
2 篇 徐丽华
2 篇 李双茂
2 篇 郑善坚
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2 篇 袁秀芳
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37 篇 中文

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兔出血症病毒次结构蛋白(VP2)的生物学功能研究

兔出血症病毒次结构蛋白(VP2)的生物学功能研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘光清倪征陈柳中国农业科学院上海兽医研究所浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

兔出血症病毒(RHDV)的基因组仅编码两个结构蛋白,其中一种为衣壳蛋白(VP60),另一种为次结构蛋白(VP2)。目前,对衣壳蛋白的生物学功能已基本清楚。但是,关于次结构蛋白的生物学功能还不是很清楚。为此,本研究利用反向遗传学技术结合体外... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)的基因组仅编码两个结构蛋白,其中一种为衣壳蛋白(VP60),另一种为次结构蛋白(VP2)。目前,对衣壳蛋白的生物学功能已基本清楚。但是,关于次结构蛋白的生物学功能还不是很清楚。为此,本研究利用反向遗传学技术结合体外表达技术,系统研究了该蛋白的生物学功能。研究结果表明,RHDV的基因组缺失次结构蛋白(VP2)后,病毒的侵染性有所降低,但是病毒基因组的复制能力和衣壳蛋白的表达水平有所提高,说明VP2不是维持RHDV侵染性所必需的蛋白。体外研究也表明,VP2的缺失并不影响病毒样颗粒的组装,提示该蛋白不是组成病毒衣壳的组成成分。通过对接种VP2的细胞进行DAPI染色和DNA片断分析研究,发现VP2具有诱导宿主细胞凋亡的功能.由此,可以推测VP2可能在RHDV的致病机制过程发挥重要作用.

关键词：结构蛋白基因组 VP2 兔出血症病毒生物学功能

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兔病毒性出血症病毒次结构蛋白(VP12)的细胞内定位研究

兔病毒性出血症病毒次结构蛋白(VP12)的细胞内定位研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：陈柳刘光清倪征余斌云涛华炯钢李双茂浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点实验室

目的)VP12是兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)一种次要结构蛋白。本文旨在构建VP12与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,进而利用它研究VP12在细胞内的定位情况。(方法)首先在大肠杆菌中表达了GST-VP12融合蛋白,然后... 详细信息

目的)VP12是兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)一种次要结构蛋白。本文旨在构建VP12与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,进而利用它研究VP12在细胞内的定位情况。(方法)首先在大肠杆菌中表达了GST-VP12融合蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗VP12的抗血清。再利用该抗体对转染pEGFP-VP12的BHK-21细胞进行检测,以研究VP12蛋白在细胞内的定位情况.(结果)结果表明,pEGFP-VP12转染BHK-21细胞后,不仅VP12蛋白得到了成功表达,而且通过检测偶联的绿色荧光蛋白可判断Vp12在细胞内的定位。检测结果显示,VP12蛋白主要分布于BHK-21细胞的细胞质.(结论)成功构建了VP12与绿色荧光蛋白融合的表达载体,并在真核细胞内实现了表达,通过检测荧光蛋白,发现VP12主要在细胞质内表达并分布,本研究为深入探讨VP12的生物学功能奠定了基础。

关键词：兔出血症病毒 VP12 次级结构蛋白细胞内定位

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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：袁秀芳刘邓徐丽华王一成浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起仔猪腹泻和死亡的主要病因之一,本实验根据TaqMan探针荧光定量分析原理,设计两对引物和两条探针,分别以FAM和JOE标记探针。以T7体外转录试剂盒得到的RNA为标准品,通过对反应条... 详细信息

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起仔猪腹泻和死亡的主要病因之一,本实验根据TaqMan探针荧光定量分析原理,设计两对引物和两条探针,分别以FAM和JOE标记探针。以T7体外转录试剂盒得到的RNA为标准品,通过对反应条件的优化,建立了一步法TaqMan双重实时荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测PEDV和TGEV的方法。该方法具有良好的敏感性、重复性和特异性,能够检测到2×10～0拷贝/ul的病毒RNA,重复性试验中Ct值变异系数CV%均不超过2%,对猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒进行FQ-RT-PCR,均检测不到荧光信号。应用本方法对浙江省176份病料进行检测时,其中PEDV阳性率97.7%,TGEV阳性率6.3%,混合感染率6.3%,表明浙江省猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎均有发生,但以猪流行性腹泻为主。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR

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检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：沈婷周斌南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

本实验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集到的739份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清... 详细信息

本实验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集到的739份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查,检测结果JEV抗体阳性率为78.9%,其中,种猪JEV抗体阳性率为85.7%,商品猪JEV抗体阳性率为67.3%.从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,两种方法的符合率为95.6%.与NSI蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%.同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果.表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查.

关键词：乙型脑炎病毒间接ELISA 血清流行病学

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2008年8省11株PRRS病毒分离株NSP2、ORF5、ORF7基因序列分析

2008年8省11株PRRS病毒分离株NSP2、ORF5、ORF7基因序列分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李吉达尹燕博孙亭亭张毅刘兴彩韩丽敏郭妍妍青岛农业大学动物科技学院青岛澳兰百特生物工程有限公司中国农业大学动物医学院

本实验室自2008年1月到2008年11月,对辽宁、吉林、河北、山东、河南、江苏、浙江、广西、等省蓝耳病疫情进行跟踪调查,共连续分离和鉴定出11株PRRS病毒。应用RT-PCR的方法对这11株病毒的NSP2基因、ORF5基因、ORF7基因进行了全基因序列... 详细信息

本实验室自2008年1月到2008年11月,对辽宁、吉林、河北、山东、河南、江苏、浙江、广西、等省蓝耳病疫情进行跟踪调查,共连续分离和鉴定出11株PRRS病毒。应用RT-PCR的方法对这11株病毒的NSP2基因、ORF5基因、ORF7基因进行了全基因序列扩增、克隆测序,并利用分子生物学软件对测序结果进行了序列比对.通过对序列的同源性及遗传发育进化分析,我们发现本次试验分离到的11株病毒同属于美洲株,并且与国内高致病性JXA1株高度同源。这些毒株均在NSP2基因处缺失了90个碱基,表明2008年的PRRSV流行株仍然以基因缺失株为主;我们发现这11株病毒在E蛋白的信号肽区以及跨膜区有着较为一致的突变,结合临床中传统PRRSV疫苗株对于当前流行毒株免疫保护性差的事实,由此提示或许应当从病原上寻找原因;分离株N蛋白Pat7基序的突变是一致的,这是否会影响到PRRSV的核定位,还需要进一步的研究去验证。

关键词：蓝耳病病毒序列分析

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*** LTb与PRRSV gp5融合基因原核表达及小鼠免疫效果研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：袁秀芳刘焕王一成徐丽华张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

采用PCR重叠延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,经15%SDS-PAGE电泳... 详细信息

采用PCR重叠延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为26KD.经WesternBlotting分析,表达蛋白均能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.为了比较猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的原核表达蛋白gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白的免疫效果.将表达产物gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白免疫6-8周龄ICR小鼠,并设对照组,用间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T,B淋巴细胞增殖功能.结果gp5蛋白以肌肉注射途径免疫效果较好;三免后抗体达到较高水平,其中LTb-gp5 IM与gp5乳化组之间差异不显著,而这两组与gp5 IM差异显著;LTb-gp5 IM、gp5乳化组和gp5 IM均能够诱导脾脏T,B淋巴细胞增殖.

关键词： LTb PRRSV gp5 克隆表达免疫

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中国部分地区猪流感病毒的遗传演化分析

中国部分地区猪流感病毒的遗传演化分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：于海周艳君李国新闫丽萍陈宗艳童光志中国农业科学院上海兽医研究所猪病研究室

猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体,具有感染禽流感和人流感病毒的能力,被认为是新型流感病毒产生的"混合器"和古老流感病毒长期在猪体内存在的"贮存器"。近年来,为了更好防控猪流感,我们开展了中... 详细信息

猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体,具有感染禽流感和人流感病毒的能力,被认为是新型流感病毒产生的"混合器"和古老流感病毒长期在猪体内存在的"贮存器"。近年来,为了更好防控猪流感,我们开展了中国部分地区的猪流感流行病学调查.2006和2007年我们在广东省和浙江省的猪群中各分离到1株人源H1N1亚型和欧洲系禽源H1N1亚型SIV,并首次在中国进行相关报道;2007年我们从上海的猪群中分离到1株新型三源重组的H1N2亚型SIV,基因进化树分析表明,我们分离株的HA、NP、M和NS基因起源于古典的H1N1亚型SIV,PB2和PA基因来源禽流感病毒,NA和PB1基因来源于人流感病毒;2005和2006年我们分别在黑龙江和广东省的猪群中分离到4株人源H3N2亚型SIV病毒,在此基础上,进行了1970～2006年的44株H3N2亚型SIV进行了遗传演化分析;2007年我们从广西省猪群中分离到了4株H9N2亚型SIV,进而进行了禽源H9N2亚型SIV的分子进化研究.所有这些研究使我们对我国SIV的分子进化有了全新的理解,为猪流感疫情监测及预防控制提供理论依据.

关键词： H1N1亚型SIV H1N2亚型SIV H3N2亚型SIV H9N2亚型SIV 遗传演化

来源：评论

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