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229 篇 会议

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4 篇 突变
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3 篇 qtl
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3 篇 甘蓝型油菜
3 篇 纤维发育
3 篇 ssr
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机构

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10 篇 华中师范大学
8 篇 长江大学
7 篇 中南民族大学
7 篇 中国农业科学院油...
6 篇 温州医学院
5 篇 武汉大学中南医院
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4 篇 西北农林科技大学
3 篇 西南大学
3 篇 华中科技大学附属...
3 篇 吉林省农业科学院
3 篇 bio-pharmaceutic...
3 篇 西南民族大学
3 篇 南京大学
3 篇 汕头大学
3 篇 laboratory of me...
2 篇 江西省儿童医院
2 篇 暨南大学

作者

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10 篇 丁毅
8 篇 李学宝
7 篇 李绍清
7 篇 胡骏
7 篇 吕建新
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5 篇 赵福永
5 篇 黄文超
5 篇 田志宏
5 篇 程汉华
5 篇 严寒
5 篇 刘学群
4 篇 许本波
4 篇 何光存
4 篇 刘胜毅
4 篇 杨国华
4 篇 邵锦震
4 篇 李阳生
4 篇 刘江东

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浙江省五个遗传性非综合征型耳聋家系GJB2基因突变分析

浙江省五个遗传性非综合征型耳聋家系GJB2基因突变分析

引用

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：李永燕吕建新沈智森丁禹尤俊艳管敏鑫温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室宁波李惠利医院 Department of Pediatrics University of Cincinnati College of Medicine

遗传性耳聋分为非综合征型耳聋(Nonsyndromic Hearing Impairment,NSHI)和综合征型耳聋(Syndromic Hearing Impairment,SHI)。其遗传方式可表现为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X 连锁遗传和母系遗传。NSHI 约占遗传性耳聋的70%... 详细信息

遗传性耳聋分为非综合征型耳聋(Nonsyndromic Hearing Impairment,NSHI)和综合征型耳聋(Syndromic Hearing Impairment,SHI)。其遗传方式可表现为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X 连锁遗传和母系遗传。NSHI 约占遗传性耳聋的70%,临床上以听力下降为单一症状,其中约77%的 NSHI 表现为常染色体隐性遗传。目前常染色体隐性遗传性 NSHI 中, GJB2基因约占遗传性耳聋的20%。因此对 GJB2基因的突变进行筛查及研究,对耳聋的诊断、治疗、预后,尤其是预防有着重要的意义。本研究在浙江省收集到5个遗传性非综合征型耳聋家系,对这5个家系中16名成员(6名聋病患者、10名听力正常者)进行 GJB2基因突变分析。采集外周血,提取基因组 DNA,PCR 反应扩增 GJB2基因、线粒体 DNA 12S rRNA 和 tRNASer(UCN)基因的目的片段,对扩增片段进行限制性片段多态性分析及基因测序分析。同时收集他们的临床资料,结果显示6名患者听力损失程度从中度到极重度不等。测序及限制性片段多态性分析结果表明,该5个家系中的6名聋病患者 GJB2基因中都存在235delC、 176del16bp 复合杂合突变,未检测到线粒体 DNA 12S rRNA C1494T、A1555G 及 tRNASer(UCN) G7444A、A7445G、7472insG、T7510C、T7511C 突变,而10名正常者则无此复合突变。GJB2 基因235delC、176del 16bp 复合杂合突变可能是6名患者致聋原因。176del 16bp 指176位后 16个碱基丢失,从59位密码开始移码,使得终止密码提前至75位,产生无功能的蛋白质。而235delc 突变是在编码区235处缺失、造成移码突变,使得终止密码提前至82位,翻译出含81个氨基酸的多肽,比野生型 Cx26蛋白少145个氨基酸。这两个杂合突变单独存在时不足以致聋,但同时存在时使得 GJB2基因编码 Cx26蛋白功能受损严重。在声音传导过程中, Cx26蛋白对 K+经内耳毛细胞循环同流进入耳蜗内淋巴液起调控作用,GJB2基因突变后,K+ 进入内淋巴液的循环受影响,导致感音神经性聋。

关键词： Cx26 GJB2基因线粒体非综合征型耳聋常染色体隐性遗传

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SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立及生物学特性研究

SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立及生物学特性研究

引用

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈辉金辉张钦宪高翔郑红李晓文郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室南京大学模式动物研究所

本实验构建了胃壁细胞特异性真核表达载体 pcDNA3.1(一)/HKSV,从该载体酶切回收 3.8kb 的基因片段 H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法构建转基因小鼠, PCR 和 southern 印迹检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR 检测基... 详细信息

本实验构建了胃壁细胞特异性真核表达载体 pcDNA3.1(一)/HKSV,从该载体酶切回收 3.8kb 的基因片段 H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法构建转基因小鼠, PCR 和 southern 印迹检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR 检测基因 mRNA 的表达,免疫组化检测蛋白表达,HE 染色观测胃组织形态学改变,电镜观测胃粘膜壁细胞亚显微结构的变化,小鼠胃液酸度测定检测胃酸分泌状况。出生的77只 G0仔鼠 PCR 检测发现10只首建阳性鼠。除1只不育外,其他9只共生出99只 F1代鼠,其中1个品系 F1代 PCR 检测尚未发现阳性鼠,另8个品系 PCR 和 Southern 印迹检测均有阳性鼠产生,阳性率为40.8%。RT-PCR 检测 F1代阳性鼠均仅在胃组织中有 SV40T 基因 mRNA 的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均无该基因的表达。免疫组化仅在转基因阳性鼠胃组织中检测到 SV40T 抗原的表达,阴性对照鼠胃组织和阳性鼠的其它组织均无该抗原表达。HE 染色显示转基因阳性鼠胃底腺拉长,成熟壁细胞数目减少,而其前体细胞数目增加。出生后35d、60d、120d 转基因阳性鼠相对于同龄未转基因鼠胃粘膜厚度明显增加,电镜观测转基因鼠的壁细胞相比于未转基因对照鼠壁细胞体积缩小,线粒体数目减少,胞内微管泡系统不发达甚至缺如。小鼠胃液酸度测定表明转基因鼠胃酸分泌显著降低,胃液酸度为7.1±0.4,与未转基因鼠胃液酸度 (2.06±0.5)相比具有显著性差异。转基因阳性鼠均表现为胃腺上皮增生,有些品系转基因鼠出现萎缩性胃炎,局部囊性扩张,腺体数量减少,坏死和炎性渗出等病理学改变。不育首建鼠处死解剖发现胃体出现蕈伞形肿瘤,腹腔中尚存在直径约8mm 的腹膜瘤。而该鼠食管、肝、脾、肾、心脏、胰腺、肺、十二指肠等组织未见明显病变。本实验建立的胃壁细胞定位表达 SV40T基因的转基因小鼠动物模型将为胃癌发病机理的研究、抗癌药物的筛选提供十分有用的实验动物模型。

关键词： SV40T 抗原 Southern 印迹转基因小鼠

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浙江汉族人群维生素D受体基因Tru9 Ⅰ位点多态性与前列腺癌关联性研究

浙江汉族人群维生素D受体基因Tru9 Ⅰ位点多态性与前列腺癌关联性...

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：白永恒余雅萍季敬璋翁志梁吕建新温州医学院细胞与分子研究所浙江省医学遗传学重点实验室绍兴文理学院医学院温州医学院附属第一医院泌尿外科

前列腺癌(prostate cancer,PCA)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在不同地域,不同种族人群中存在很大的差异,引起这种差异的原因目前尚不清楚。最近分子流行病学研究表明,维生素 D 受体(vitamin D receptor,VDR)基因的... 详细信息

前列腺癌(prostate cancer,PCA)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在不同地域,不同种族人群中存在很大的差异,引起这种差异的原因目前尚不清楚。最近分子流行病学研究表明,维生素 D 受体(vitamin D receptor,VDR)基因的多态性可能与前列腺癌的发病相关。为研究 VDR 基因多态性与前列腺癌易感因素的关系,揭示其发病的分子机理,我们收集中国浙江地区的前列腺癌患者、良性前列腺增生患者和正常对照人群共 300例外周血标本,提取其 DNA,应用 PCR-RFLP 和测序技术分析其 VDR 基因3'端 Tru9I 位点的单核苷酸多态性。结果显示,前列腺癌患者、良性前列腺增生患者、以及正常对照人群的 VDR 基因 Tru9I 位点的基因型分布频率符合 Hardy-Weinberg 平衡检验(P>0.05)。基因型 GG、 GA、AA 分布频率在所有样本中所占比例分别为61.33%、34.33%、4.34%;等位基因 G 和 A 分别占78.50%、21.50%,这与欧美白种人该位点基因型和等位基因分布存在差异,后者 GG 基因型和 G 等位基因所占比例更高,分别为80.1%和89.4%,这可能为不同地域、不同种族前列腺癌发病率不一致的原因之一。两两比较前列腺癌组,良性前列腺增生组和正常对照组 Tru9I 位点的基因型和等位基因分布频率,其差异均无显著性(P>0.05)。比较前列腺癌不同分化程度间的基因型分布频率,其差异存在显著性(P=0.039)。深入分析基因型内部差异,杂合子 GA 与纯合子(GG+AA)在不同分化科度腺癌中的分布频率也存在显著性著异(P=0.019)。杂合子 GA 在低分化腺癌(Gleason7～10)中分布频率较高,占82.86%,与纯合子(GG+AA) 相比,杂合子 GA 具有更强的低分化倾向(OR=3.222,95%CI=1.174-8.842)。由此表明,浙江汉族人群 VDR 基因 Tru9I 位点的基因型和等位基因分布频率与其他种族相比存在著异,且 Tru9I 位点多态性与前列腺癌分化程度有关,杂合子 GA 更易导致前列腺癌的低分化。

关键词：维生素 D 受体基因单核苷酸多态性限制性片段长度多态性前列腺癌

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Molecular structure and differential expression of genes of double minute chromosomes in UACC-1598 and cooperation of target genes in ovarian cancer

Molecular structure and differential expression of genes of ...

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：范义辉傅松滨 Laboratory of Medical Genetics Harbin Medical University Bio-pharmaceutical Key Laboratory of Heilongjiang Province

Double minute chromosomes(DMs)are extrachromosomal elements(EEs),which are considered as the cytogenetic hallmark of gene *** successfully identified a 680kb DMs DNA in ***,the 680kb DNA was composed of AmpMYCN(Chromosome 2:15790375-16073867)and AmpEIFSA2(Chromosome 3:171743080-172133335),which jointed between 5'ends by 7kb joint *** 7kb joint DNA was composed of two small amplicons (Chromosome 2:23893405-23893488;23066884-23073672),which adjoining to *** our knowledge,we first clone the complex joint sequence(about 7 KB)of two amplicons of DMs. The molecular structure of DMs is more complex than our previous *** HU treatment,the number of DMs,growth rate and migration were decreased ***, EIF5A2 and RPL expressed on *** had low expression in UACC-1598,while not on DMs. Correlation analysis showed that the CpG methylation was correlation to its genes expression,which indicated that differential expression of genes located on DMs were determined by the level of *** on ovarian patients demonstrated that MYCN,EIF5A2 and RPL played a role in ovarian cancer,indicating MYCN,EIF5A2 and RPL were the target genes of *** two small amplicons were non-genic sequences,which might be important regular *** results suggested that DMs could gather the oncogenes,resistant genes or the functional DNA sequences to perform the roles in carcinogenesis.

关键词： Double minute chromosomes molecular structure differential expression methylation

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人结直肠癌组织中线粒体基因D环区突变的研究

人结直肠癌组织中线粒体基因D环区突变的研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：方合志沈丽君魏佳丁志囡白益东吕建新温州医学院细胞与分子研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室

大量研究表明癌症的发生发展与线粒体 DNA(mtDNA)突变及其功能的改变相关。而 mtDNA D—loop 区是控制 mtDNA 复制和转录的重要区域,该区域的突变或微卫星不稳定性(MSI)都可能会影响到 mtDNA 复制和转录的能力,进而影响线粒体的功能并... 详细信息

大量研究表明癌症的发生发展与线粒体 DNA(mtDNA)突变及其功能的改变相关。而 mtDNA D—loop 区是控制 mtDNA 复制和转录的重要区域,该区域的突变或微卫星不稳定性(MSI)都可能会影响到 mtDNA 复制和转录的能力,进而影响线粒体的功能并最终影响癌的发生发展。本研究分析了结直肠癌线粒体基因 D 环区序列的体细胞性突变及微卫星不稳定性,以期能为将来进行结直肠癌的基因诊断提供参考。本文收集了36例来自温州医学院附属第一医院病理科的石蜡组织标本,所有石蜡块均为未放化疗病人的术后组织。行连续石蜡切片获取3到5张10um 厚切片,参照一张4um 切片 HE 染色结果,在显微镜下(×40)对若干张10um 切片用1ml 注射器针头分离剥取癌和癌周正常组织,并以经典的酚—氯仿法提取包含 mtDNA 的总 DNA。巢式 PCR 扩增和检测结直肠癌组织和癌周正常组织的线粒体基因 D 环区序列,并结合线粒体基因数据库进行相关多态性分析。以剑桥序列为参考,结合 mitomap,mtDB,及 GeneBank 等数据库, 未在36例组织标本中发现新的多态性位点。以癌周正常组织为对照,在8例病人的癌组织(32 %)中各发现一个体细胞突变,其中50%位于 D310区,其余4个突变均分别为 C16092T, T16184C,A178G/A 和 G/A16274G 且均为碱基转换。进一步的研究发现,在11例检测高变区Ⅱ突变频率的组织标本中发现2例组织标本(18%)存在突变,且均为 D310区微卫星不稳定性, 突变位点分别为309delC 和309insC。结直肠癌的 mtDNA D 环区是一个具有高频突变率的不稳定区域,除 MSI 外的4个点突变均为 T—C或 A—G,表明突变的发生是由线粒体内氧自由基致 mtDNA 突变所致。而癌症的发生往往伴随着线粒体内的氧自由基的累积,提示癌症的发生发展同 mtDNA 突变存在相关性。在共计36个组织标本的 D310区中共发现6个均为309位点插入或缺失的 MSI(16.6%),癌组织中309位点的突变频率远高于其他碱基位点的突变率,其机制可能是由于癌细胞不断的分裂导致含有 polyC 结构的 D310区比正常细胞更易产生复制滑移。这也表明 D310区域的微卫星不稳定性与结直肠癌存在密切的联系。

关键词：结直肠癌微卫星不稳定性 mtDNA 突变

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牛的IGF基因的(CA)微卫星断裂区“AATA interrupt”的多态性研究

牛的IGF基因的(CA)微卫星断裂区“AATA interrupt”的多态性研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：张良志陈宏蓝贤勇任刚魏天宝滑溜帅张存芳张宝赵苗郭义昆西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室徐州师范大学细胞与分子生物学研究所

胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因在调控细胞的代谢和脊椎动物的生长发育中占有很重要的作用。在家畜上,血清中的 IGF-1水平与生长发育密切相关。在人和许多动物中,IGF-1 的5'侧翼区存在由(CA)重复序列形成的微卫星区域,而该微卫星区... 详细信息

胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因在调控细胞的代谢和脊椎动物的生长发育中占有很重要的作用。在家畜上,血清中的 IGF-1水平与生长发育密切相关。在人和许多动物中,IGF-1 的5'侧翼区存在由(CA)重复序列形成的微卫星区域,而该微卫星区域却被"AATA interrupt" 打断,从而使之成为不完整的微卫星区域。本研究中采用扩增引入酶切位点(the amplification created restriction site—polymerase chain reaction,ASCR—PCR)的方法,通过引物设计,使扩增的目的片段产生 TasI 的酶切位点,从而来检测个体的"AATA interrupt"区域的多态性。本研究涉及中国的两个地方肉牛品种:南阳牛(n=216)和秦川牛(n=95)和一个奶用品种:中国荷斯坦牛(n=95),共计406份样品。在南阳牛,秦川牛和中国荷斯坦牛中均检测到了 C>A 的突变。在检测的三个品种中,A 等位基因的频率呈现渐变的趋势,在秦川牛、南阳牛、中国荷斯坦牛的 A 等位基因频率分别为0.90,0.94,0.97。根据公布的系统发育数据,"AATA interrupt"大概在19～35亿年前产生,而南阳牛和秦川牛则是中国非常古老的黄牛品种,因此等位基因 A 的频率会较低,而中国荷斯坦则是较晚产生的培育品种。这种趋势符合品种的形成历史。由于该区域位丁5'侧翼区,并且接近转录的起始位点,因此,该区域的突变可能与家畜的部分生产性状存在关联。通过关联分析显示,该区域的突变与荷斯坦牛的第三泌乳期的乳蛋白产量存在显著关联,而与南阳牛的生长和体重性状却无关联。突变对不同品种的生产性能的不同的影响可能是由于品种差异造成的。在人类中,该区域也存在等位基因频率在不同人种之间的分布差异以及相同的突变对不同人种的相同的性状影响的差异。因为在所检测的样本中,秦川牛和荷斯坦牛群体均处于哈代—温伯格非平衡状态。因此,该结果需要扩大样本量来进行验证。总之,本研究中首次采用 ASCR-PCR 方法来检测中国黄牛的 IGF-1基因的微卫星区域的"AATA interrupt"片段的多态性,并在国内外首次发现了此区域的 C>A 突变可能与中国荷斯坦牛的乳蛋白产量存在的关联性。

关键词： IGF-1基因 "AATA interrupt" ASCR-PCR 突变生产性状

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水稻细胞周期蛋白基因Orysa;CycB1;1调节胚和胚乳发育的研究

水稻细胞周期蛋白基因Orysa;CycB1;1调节胚和胚乳发育的研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：国静宋建张宪省作物生物学国家重点实验室山东农业大学生命科学学院

高等植物的细胞周期是由细胞周期蛋白(Cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs) 以及一些其他调控因子之间的协同作用来调控的。目前对拟南芥细胞周期调控机制的研究比较深入,而关于水稻细胞周期关键调控因子的功能及其作用机制的研究... 详细信息

高等植物的细胞周期是由细胞周期蛋白(Cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs) 以及一些其他调控因子之间的协同作用来调控的。目前对拟南芥细胞周期调控机制的研究比较深入,而关于水稻细胞周期关键调控因子的功能及其作用机制的研究则比较少。前期的研究工作已经从水稻基因组中得到90个细胞周期相关基因的序列(Guo et al,2007),并对其序列特征进行了详细的分析,同时通过半定量 RT-PCR 及原位杂交技术分析了细胞周期相关基因在水稻中的时空表达模式。研究结果证明水稻和拟南芥的细胞周期相关基因在结构和表达模式上具有一定的保守性。为进一步研究细胞周期相关基因在水稻发育过程中的作用,我们从中选择了细胞周期蛋白基因 Orysa;CycB1:1,构建了 Orysa;CycB1:1的 RNAi(Ubi:: Orysa;CycB1:1 RNAi)的表达载体并转化水稻,同时利用胚、胚乳特异表达启动子分别在胚和胚乳中特异抑制 Orysa:CycB1:1来研究该基因在水稻种子发育过程中的作用。对转基因植株进行表型分析发现,转化 Ubi::Orysa:CycB1:1 RNAi 表达载体的转基因植株种子形态异常。为了深入研究转基因植株种子的形态,对授粉后不同时期的种子进行了组织学分析。发现授粉后三天(3 DAP)转基因种子的胚乳发育开始异常,此时转基因的胚与对照相比没有显著差异,授粉后九天转基因种子的胚乳几乎消失,而胚与对照相比体积增加到三至四倍。细胞学分析发现。授粉后九天的转基因种子的胚细胞与对照的胚细胞相比体积增加了两到三倍。同时,转基因种子胚中淀粉的积累模式也受到了影响。表达分析显示 Orysa:CycB1:1在幼穗、发育早期的种子(1 DAP,3 DAP,and 6 DAP)以及胚(9 DAP and 15 DAP)中均有较高水平的表达。进一步的原位杂交分析显示在1-9 DAP 的胚和 2-3 DAP 的胚乳中均检测到 Orysa;CycB1:1较强的表达信号。以上研究结果表明,Orysa;CycB1:1在胚乳发育和胚胎发育过程中起重要作用

关键词：水稻细胞周期蛋白胚发育胚乳发育

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抗CDK4人源单链抗体的原核表达、纯化及活性分析

抗CDK4人源单链抗体的原核表达、纯化及活性分析

引用

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：许晶晶王磊王琪冯晶曹玉华陈勇杨丹李桂英吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室吉林大学第一医院外科

单链抗体(single chain variable fragment,seFv)以其分子量小,免疫原性小等优点,在肿瘤诊断和治疗中具有独特的优势,目前已经有多种基于单链抗体的抗肿瘤药物进入临床试验。近年来出现的胞内抗体(intrabody)技术能够把特异性针对靶抗... 详细信息

单链抗体(single chain variable fragment,seFv)以其分子量小,免疫原性小等优点,在肿瘤诊断和治疗中具有独特的优势,目前已经有多种基于单链抗体的抗肿瘤药物进入临床试验。近年来出现的胞内抗体(intrabody)技术能够把特异性针对靶抗原的单链抗体定位到细胞内的特定部位,达到了靶向治疗的效果并且拓宽了单链抗体的应用范围。细胞周期失控是造成肿瘤细胞恶性增殖的主要原因之一。周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)的时相性激活是细胞周期调控机制的核心。CDK4作为细胞进入增殖周期第一个被激活的的周期蛋白依赖性蛋白激酶,是细胞周期进程中 G1/S 期转换的限速因子。研究发现在许多肿瘤细胞中存在 CDK4过度表达和过度活化,与肿瘤的发生和发展有着密切关系,是肿瘤治疗的潜在靶点。已有研究表明失活 CDK4蛋白,能显著抑制肿瘤细胞的增殖。但目前关于采用胞内单链抗体技术来特异性失活 CDK4蛋白进行抗肿瘤研究还尚未见报道。为了获得抗 CDK4胞内单链抗体,本研究首先对抗 CDK4噬菌体人源单链抗体进行了可溶性表达、纯化及活性分析。结果表明,经 IPTG 诱导、硫酸铵沉淀及亲和层析后,在转化的大肠杆菌 HB2151的培养上清中获得了纯度约为98%的可溶性的抗 CDK4人源单链抗体,并通过 ELISA 和 Western blot 法进一步验证了纯化的抗 CDK4单链抗体与重组 CDK4蛋白在体外具有较好的结合活性, 亲和常数达到2.4×108 L mol-1,并能竞争性抑制抗 CDK4多克隆抗体与 CDK4蛋白的结合。 HeLa 和 MCF-7等肿瘤细胞爬片的免疫荧光实验及肿瘤细胞裂解液的 Western blot 结果表明, 原核表达、纯化的抗 CDK4人源单链抗体能够特异性、原位结合肿瘤细胞中表达的细胞内源性 CDK4蛋白。上述实验结果说明,本研究获得的抗 CDK4人源单链抗体不仅与重组 CDK4蛋白有较好的结合活性,而且能够特异性结合肿瘤细胞内源的 CDK4蛋白,这为后续胞内抗体抗肿瘤研究奠定了基础。

关键词： CDK4 人源单链抗体表达纯化结合活性

来源：评论

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不同激素调控紫草宁合成的靶基因位点分析

不同激素调控紫草宁合成的靶基因位点分析

引用

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：戚金亮张文举邹爱兰刘少华王小明庞延军王修强沈恒冠杨永华南京大学生命科学学院植物分子生物学研究所医药生物技术国家重点实验室

紫草作为我国重要的中药植物,其根部合成的红色萘醌类次生代谢产物(紫草宁及其衍生物)具有抗菌、消炎、活血、抗肿瘤等多种功效。研究表明,植物激素对紫草宁的合成起到显著的调控效应(如茉莉酸显著正调控、2,4-D 和脱落酸显著负调控、... 详细信息

紫草作为我国重要的中药植物,其根部合成的红色萘醌类次生代谢产物(紫草宁及其衍生物)具有抗菌、消炎、活血、抗肿瘤等多种功效。研究表明,植物激素对紫草宁的合成起到显著的调控效应(如茉莉酸显著正调控、2,4-D 和脱落酸显著负调控、乙烯在不同细胞培养体系中的调控效应可能不同等),然而其分子机制还知之甚少。目前已基本清楚了紫草宁的生物合成途径,并分离、克隆和鉴定了许多与紫草宁合成相关的代谢酶基因及其他重要相关基因,为研究激素调控紫草宁合成的靶基因位点提供了有利条件。本研究运用 Realtime-PCR 技术系统分析了紫草宁合成途径相关基因(PAL、C4H、4CL、HMGR、PGT、CYP98A6)及与紫草宁的稳定或分泌相关的基因(LEDI2、LEPS)对主要调控激素(MeJA、ABA、乙烯、 2,4-D)的早期应答(0-24h),探讨不同激素调控紫草宁合成的关键靶基因位点。结果表明, 除略微下调4CL 外,MeJA(10 uM)高效上调了其他所有基因的表达,特别是显著上调了 LEPS 的表达(20倍左右);2,4-D(1 uM)显著下调了 LEPS、4CL、CYP98A6的表达,而对合成途径关键酶基因 HMGR 和 PGT 却几乎没有调控效应;ABA(0.3 uM)同样显著下调了 LEPS 的表达,但有意思的是,尽管 ABA 降低紫草宁的合成,但却在早期(2 h 左右)显著上调了 LEDI2的表达:乙烯的前体物质 ACC(100 uM)下调了 LEDI2和 LEPS 的表达,而对其他基因影响不大,乙烯信号途径的阻断剂 Ag+(5 uM)则显著上调了 PAL、HMGR、LEDI2、LEPS 等。综合分析可以看出,尽管 HMGR 和 PGT 被认为是紫草宁合成途径的关键酶基因,并强烈响应 MeJA 的诱导,但该基因却可能不是其他激素调控的靶点:而2,4-D 降低紫草宁的合成却可能是部分通过下调非关键酶基因4CL 的表达来实现的:特别有趣的是,与紫草宁的稳定或分泌相关的两个重要基因(LEDI2、LEPS)则可能是激素作用的共同靶点。本研究结果表明, 紫草宁的合成调控是一个复杂的过程,不同的激素可能通过不同的基因靶点起到调控效应, 阐明这些基因靶点将有益于我们对紫草宁合成调控的网络分子机制的深入理解,并将为从生物工程角度高效调控紫草宁的合成奠定理论基础。

关键词：紫草宁激素生物合成靶基因

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激素调节拟南芥离体再生花序的分子基础研究

激素调节拟南芥离体再生花序的分子基础研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：程志娟朱杉杉张宪省作物生物学国家重点实验室山东农业大学生命科学学院

目前对植株上拟南芥花序发育的分子基础已有较清楚的认识,然而有关离体再生花序形成的机理了解甚少。建立一个高频的拟南芥离体再生花序系统尤其是研究其调节机制将对解释细胞全能性及花序的发育提供重要的信息。本研究在建立拟南芥离... 详细信息

目前对植株上拟南芥花序发育的分子基础已有较清楚的认识,然而有关离体再生花序形成的机理了解甚少。建立一个高频的拟南芥离体再生花序系统尤其是研究其调节机制将对解释细胞全能性及花序的发育提供重要的信息。本研究在建立拟南芥离体再生花序系统的基础上,着重研究细胞分裂素和生长素调节离体再生花序发生和发育的分子基础。利用拟南芥的雌蕊为外植体在含有高浓度的生长素培养基上诱导愈伤组织的形成,然后将这一愈伤组织转移到含有高浓度的细胞分裂素的培养基上诱导离体花序的产生。利用 RT—PCR 及 GUS 报告基因追踪发现 TFL1,LFY 基因在离体花序的形成过程中受诱导表达。为了研究离体花序发生和发育过程中干细胞的作用,对干细胞决定基因 WUS 和 CLV3在离体花序发生过程中的表达模式进行了分析。研究结果显示,在离体花序形成早期,首先检测到 WUS 基因在愈伤组织内部的一群细胞中表达.称之为组织中心的细胞。随后在组织中心上方表面1～3层细胞中出现了干细胞特征决定基因 CLV3的表达。在花序原基的发育过程中,两基因的表达均逐渐集中在花序分生组织中。如果诱导反义 WUS 基因表达,离体再生花序形成受到抑制。表明组织中心的细胞先于干细胞形成,WUS 在此过程中起关键作用。进而,研究了离体再生花序中细胞分裂素及生长素的分布。证明了在离体花序再生过程中细胞分裂素的分布模式,在未经诱导的愈伤组织中细胞分裂素均匀分布,随后细胞分裂素向着将要产生花序原基的愈伤组织细胞中集中, 最后在花序原基中表达。而生长素集中在将要产生花序原基的细胞周围,生长素的极性运输是向产生花序的愈伤组织细胞中进行。如果在诱导过程中添加生长素极性运输抑制剂或者诱导反义 PIN1基因表达,均不能产生离体花序。上述研究结果表明,在拟南芥离体花序发生和发育过程中,细胞分裂素和生长素起关键作用,它们的极性分布不仅诱导了组织中心细胞及干细胞的形成,而且启动了花序特征基因的表达,最终决定花序原基及花原基的产生,进而发育形成成熟的离体花序结构。

关键词：拟南芥离体花序生长素细胞分裂素干细胞

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