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229 篇 会议

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142 篇 农学
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6 篇 多态性
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4 篇 基因突变
4 篇 突变
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3 篇 基因克隆
3 篇 qtl
3 篇 基因表达
3 篇 甘蓝型油菜
3 篇 纤维发育
3 篇 ssr
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机构

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7 篇 中南民族大学
7 篇 中国农业科学院油...
6 篇 温州医学院
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4 篇 湖北中医学院
4 篇 西北农林科技大学
3 篇 西南大学
3 篇 华中科技大学附属...
3 篇 吉林省农业科学院
3 篇 bio-pharmaceutic...
3 篇 西南民族大学
3 篇 南京大学
3 篇 汕头大学
3 篇 laboratory of me...
2 篇 江西省儿童医院
2 篇 暨南大学

作者

11 篇 朱英国
10 篇 丁毅
8 篇 李学宝
7 篇 李绍清
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7 篇 吕建新
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5 篇 赵福永
5 篇 黄文超
5 篇 田志宏
5 篇 程汉华
5 篇 严寒
5 篇 刘学群
4 篇 许本波
4 篇 何光存
4 篇 刘胜毅
4 篇 杨国华
4 篇 邵锦震
4 篇 李阳生
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海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：林伯坤伦镜盛谢伟胡忠广东汕头大学生物学系

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生... 详细信息

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生质体、筛选信号肽序列等。目前的琼胶酶主要来自海洋细菌。本文在海藻养殖区采集海底沉积物和富含琼胶的红藻样品,从中筛选得到多株产琼胶酶的海洋细菌,并主要研究了其中两株菌株 HZ105 和 ZC1。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、部分生理生化性质表明,菌株 HZ105归属于 Agarivorans,命名为 Agarivorans ***105。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、全细胞脂肪酸组分、碳源利用、部分生理生化性质、基因组 GC 含量等分析表明,菌株 ZC1应属于新种。此外初步优化了该两株菌的生长和产琼胶酶条件,其中菌株 HZ105在 pH7-10、NaCl 浓度为1-3 %范围内培养16h 产琼胶酶最好,说明菌株 HZ105偏好碱性环境,其所产琼胶酶也可能耐碱性。此外,菌株 HZ105的胞外琼胶酶粗酶液在室温存放2天后还能保持90.9%的酶活力。菌株 ZC1在 pH7-8、NaCl 浓度为2-3%范围内产琼胶酶最好。菌株 ZC1的营养需求比较特别,只能利用 Biolog 系统的 GN2板95种碳源中葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉、糊精等少数碳源, 但是在上述碳源培养下,菌株 ZC1亦可以产生琼胶酶,并不依赖于琼脂诱导。采用从聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶回收蛋白的方法分离纯化了菌株 HZ105的三个胞外琼胶酶,并通过 SDS-PAGE 电泳测得了其分子量54kDa、58kDa、105kDa,接着进一步运用串联质谱技术鉴定了该三个琼胶酶,发现这三个酶均为β琼胶酶,属于糖基水解酶50家族。根据琼胶酶的串联质谱结果, 通过 PCR 克隆了其中分子量为105kDa 的琼胶酶的基因,成熟蛋白编码序列长2931bp。目前正在努力实现该基因的高效重组原核表达

关键词：琼胶酶海洋细菌琼胶寡糖编码基因海洋微生物

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Formation of double minutes in UACC-1598 cells by nonhomologous end-joining

Formation of double minutes in UACC-1598 cells by nonhomolog...

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：朱静傅松滨 Laboratory of Medical Genetics Harbin Medical University Bio-pharmaceutical Key Laboratory of Heilongjiang Province

Double minutes(DMs)are cytogenetic hallmark bearing extrachromosomaily amplified genes in cancer or drug resistant ***,comprehensive analysis of DNA sequence of DMs is hampered because of the difficulty in purification of *** of polymerase chain reaction(PCR) supports us a sensitive and strategic method to detect the rearrangements of the chromosome-originated fragments and the recombination among the amplicons on *** on our previous work which identified two amplicons about 300kb in size and the approximate 10kb boundaries of each amplicon in human ovarian cancer cell line UACC-1598,we performed a series of semi-quantative PCR to determine the boundaries within much more precise region(about 500bp). This work was accomplished taking advantage of the published human genomic DNA sequence. Further,by long range PCR and chromosome walking,we successfully obtained five recombination junctions among the two fundamental amplicons and two small newly-found *** results suggested that nonhomologous end-joining(NHEJ)was a common mechanism for the formation of DMs in UACC *** details,among the five junctions,three junctions had a few base pairs DNA insertion of unknown origin,one was recombined with blunt end and only one junction was found to be mediated by 4-bp-long microhomology-based nonhomologous recombination,supporting the proposal that microhomology-based NHEJ was not the only mechanism accounted for the fusion of free ends of ***,a 24-bp-long palindrome structure was formed after the insertion of 17-bp-long sequence into the *** rearrangements,including deletion,insertion, and duplication were involved in the formation of *** happened both between the amplicons and inside the amplicons making it more complex than previous *** more junctions information and further acquiring the complete sequence of DMs is therefore in need and will be of great significance for understanding t

关键词： Double minutes long range PCR chromosome walking nonhomologous end-joining

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白细胞介素15/链亲和素融合蛋白的制备及活性测定

白细胞介素15/链亲和素融合蛋白的制备及活性测定

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：高基民吕建新浙江省温州医学院茶山高教园区浙江省医学遗传学重点实验室

我们利用了细胞膜表面易生物素化和生物素与链亲和素能高效、几乎不可逆的结合——这两个特性建立了新型蛋白质锚定生物技术平台。即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞膜进行高效的锚定修饰。该平台可使多种具有免疫协作作... 详细信息

我们利用了细胞膜表面易生物素化和生物素与链亲和素能高效、几乎不可逆的结合——这两个特性建立了新型蛋白质锚定生物技术平台。即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞膜进行高效的锚定修饰。该平台可使多种具有免疫协作作用的基因重组细胞因子同时固定在肿瘤病灶及其周围从而促进机体产生更为有效的抗肿瘤免疫反应。白细胞介素 15(IL-15)/链亲和素(SA)融合蛋白的制备是该平台中的一个重要因子。制备白细胞介素15 (IL-15)/链亲和素(SA)融合蛋白,并对其活性进行检测,研究人源不同基因型 IL-15/SA 融合蛋白的活性,并对人源和鼠源两种 IL-15/SA 融合基因的同源性进行探讨,为我们建立的蛋白锚定技术平台提供理论和应用依据,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰。构建原核表达载体 pET24a-hIL-5-SA、pET24a-SA-hIL-15和 pET24a-mIL-15-SA 转化大肠杆菌 BL21(DE3),构建过程中我们引入甘氨酸、丝氨酸的链接肽 (L),此15肽北常灵活,有助于融合蛋白中各单元蛋白质分子的独立折叠,从而保存各自的生物活性,最终提高融合蛋白的双重活性。用 IPTG 诱导重组蛋白的表达,用 His 标签的镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,然后对其进行合理复性。用制备的 hIL-15-SA、SA-hIL-15 和 mIL-15-SA 双功能融合蛋白作用于小鼠脾细胞,同时用融合蛋白修饰的鼠 B16.F10肿瘤细胞碎片作用于小鼠脾细胞,MTT 法检测小鼠 T、B 淋巴细胞的增殖情况和细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响。结果显示三种重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的三种双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的对生物素高效特异的结合活性;IL-15的促 T、B 细胞增殖活性。对三者活性进行对比发现:hIL-15-SA 和 SA-hIL-15两种融合蛋白对比,在以鼠力实验动物的体外测活实验中, SA 在 N 端的融合蛋白(即 SA-hIL-15)比在 C 端的融合蛋白(即 hIL-15-SA)活性高。SA-hIL-15 和 mIL-15-SA 两种融合蛋白对比,在以鼠为实验动物的体外测活实验中,鼠源的融合蛋白(即 mIL-15-SA)活性大于人源融合蛋白(即 SA-hIL-15)的活性。二种融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,并保留其自身活性,可为肿瘤疫苗研究提供理论和应用依据。

关键词：白细胞介素链亲和素活性测定

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RUNX3 inhibits cell proliferation and induces apoptosis by TGF-beta dependent and TGF-beta independent mechanisms in the human colon carcinoma cell line HT-29

RUNX3 inhibits cell proliferation and induces apoptosis by T...

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者： TONG Dan-Dan~1 JIANG Ying~2 LI Ming~3 MENG Xiang-Ning~3 ZHAO Yu-Zhen~3 JIN Yan~3 BAI Jing~3 FU Song-Bin~(3,4) GENG Jing-Shu~5 1.Department Of Pathology,Harbin Mediacal University,Harbin 150081,China 2.The Second Affiliated Hospital,Harbin Mediacal University,Harbin 150081,China 3.Laboratory Of Medical Genetics,Harbin Mediacal University,Harbin 150081,China 4.Bio-pharmaceutical Key Laboratory of Heilongjiang Province,Harbin 150081,China 5.The Third Affiliated Hospital,Harbin Mediacal University,Harbin 150081,China

TGF-beta-resistant human colon cancer cell line HT-29 has inactivated TβRII,deficient expression of RUNX3,Bim and Smad4,which were all involved into TGF-beta signaling pathway. In present study,after RUNX3 gene expression was reinstated in HT-29/RUNX3+ cell lines,in the absense of TGF-beta,Bim was upregulated,cell growth was inhibited and apoptosis was induced. When TGF-beta was added to HT-29/RUNX3+ cells,Runx3 expression was unaffected,Bim expression was increased significantly compared to HT-29/RUNX3+ without TGF-beta,and it is time ***,Smad4 but not Smad2/3 was upregulated time dependent in the presence of TGF-beta in HT-29/RUNX3+ cells,which was not found in HT-29/RUNX3- cells with TGF-beta. As expected,TGF-beta further inhibited cell growth and induced apoptosis of HT-29/RUNX3+ cells. In short,our datas demonstrated that RUNX3 was involved into the TGF-beta independent RUNX3-Bim-ceil growth inhibition and apoptosis pathway and TGF-β-RUNX3-Smad4/Bim-cell growth inhibition and apoptosis pathway in HT-29/RUNX3+ cells.

关键词： RUNX3 Smad TGF-beta Bim apoptosis growth inhibition

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线粒体基因组D-Loop区基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

线粒体基因组D-Loop区基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈芳建俞红樊璠吕建新浙江省医学遗传学重点实验室衢州市人民医院检验科温州医学院检验医学院

探讨线粒体基因组 D—Loop 区基因多态性及与2型糖尿病之间的关系。随机选取浙江地区人群199例2型糖尿病(T2DM)患者与102例同龄正常对照,采用 PCR 扩增和基因片段直接测序方法检测线粒体基因组 D-Loop 区域的基因变异情况,并分析其与 T2... 详细信息

探讨线粒体基因组 D—Loop 区基因多态性及与2型糖尿病之间的关系。随机选取浙江地区人群199例2型糖尿病(T2DM)患者与102例同龄正常对照,采用 PCR 扩增和基因片段直接测序方法检测线粒体基因组 D-Loop 区域的基因变异情况,并分析其与 T2DM 及并发症主要临床表型指标的相关关系。结果:①线粒体基因组 D-Loop 区域为一高变异区,np73A-G、 np263A-G、np16223C—T、np16519T—C等四个高变异的位点,在 T2DM 组及对照组中变异率分别达到99.5%和88.2%、97.4%和87.3%、50.8%和49.0%、56.8%和46.0%:②线粒体基因组 D—Loop 区域发现了29个未见报道的新变异位点,其中 T2DM 组中有24个新发现的变异,正常对照组有5个新发现多态性位点:③在线粒体基因组 D-Loop 区域发现 np303～315(称 D310区)区域及 np16181～16193区域为高度变异区,在该两段区域内存在多种变异形式,统计表明 D310 区域变异发生率在 T2DM 中明显高于正常对照组(P<0.05),np16181～16193区域的变异发生率在 T2DM 和正常对照组两组间无统计学差异(P>0.05),但发现有7种变异形式仅存在于 T2DM:④np193A-G、np234A—G、np16108C—T等变异与 T2DM 家族史有关:⑤np234A-G 变异仅存在于有周围神经病变的 T2DM 患者组中(P<0.05)。结论:浙江籍汉族人线粒体基因组 D—Loop 区存在大量基因多态性现象,此区域的某些变异与糖尿病的发生等具有一定相关性。本研究初步认为 np73A-G 和 np263A—G两个位点可能是浙江地区人群中正常多态性位点:在 D310区 np16189T-C 突变,降低了应激状态下的抗氧化的作用,此突变有增加糖尿病的易感性及加重糖尿病患者的病情:np193A—G、np234A-G、np16108C—T三个位点的突变只存在于有家族史的 T2DM 病例中,提示这些突变位点的存在可能对糖尿病的发生有一定的作用:np234A-G 变异仅存在 T2DM 有周围神经病变患者组中,分析认为此变异何点可能是导致高血糖的原因, 抑或是高血糖促使其发生变异。

关键词： 2型糖尿病线粒体基因组 D—Loop 多态性

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染色体12q13缺失与肺癌发生的病理机制

染色体12q13缺失与肺癌发生的病理机制

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：梁玉蓉中科院昆明动物所

肺癌是一种常见的恶性肿瘤。近年来,随着吸烟和各种环境因素的影响,肺癌的发病率和病死率均迅速上升。据2008年4月29日卫生部公布了第3次全国死因调查结果显示:肺癌死亡率过去30年上升了465%,肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原... 详细信息

肺癌是一种常见的恶性肿瘤。近年来,随着吸烟和各种环境因素的影响,肺癌的发病率和病死率均迅速上升。据2008年4月29日卫生部公布了第3次全国死因调查结果显示:肺癌死亡率过去30年上升了465%,肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因。云南省是肺癌高发区,其中,宣威市(原宣威县)、个旧市、富源县等地的发病率、死亡率一直居首位。因此研究肺癌发生发展的分子机制,发现新的诊断、治疗方法,降低死亡率尤为重要。肿瘤的发生、发展通常伴随着染色体异常,如染色体获得、缺失、异位等。我们前期工作对4 株经典肺癌细胞系(SPC-A1,GLC-81,801D,NCI-H446)进行染色体分析,发现4株细胞系都发生了染色体畸变,所有细胞系12号染色体都获得了衍生染色体,GLC-81、801D 和 NCI —H446三株细胞系12号染色体同时又发生了部分缺失(del 12q13)。染色体的缺失与获得涉及多个基因的改变,如癌基因的扩增,抑癌基因的失活等。为了研究12号染色体变化与肺癌发生的关系,我们在12q13区域约14M 范围内不同位点选择了10组微卫星标记和20个基因,分别对4株细胞系和20多例肺癌组织标本进行杂合缺失分析和实时定量 RT—PCR 分析, 确认肿瘤组织中差异表达基因,以寻找可能的肺癌肿瘤抑制基因和肺癌细胞特异表达基因。已发现 RACGAP1、EIF4B、MCRS1基因在肺癌细胞系和肺癌肿瘤组织中高表达。CBX5,LIMA1表达降低。我们正在进行在大量肺癌肿瘤标本(30例以上)中对12q13区域内10组微卫星标记进行杂合缺失分析,找出发生 LOH 的重叠区域,绘制遗传缺失图谱,寻找可能的肿瘤抑制基因。并且对其功能进行研究:克隆所筛选的肿瘤抑制基因,对杂合缺失的肺癌细胞进行正义转染,观察肿瘤细胞的生长是否受到抑制及其它细胞行为的变化:并对正常的肺上皮细胞进行 RNAi 干扰,降低或完全抑制肿瘤抑制基因的表达,观察细胞生长,运动和凋亡等情况,以研究肿瘤抑制基因与肺癌发生的功能意义。此外我们对实时定量 PCR 检出的高表达基因进行功能研究,免疫荧光分析在细胞水平的定位(在细胞分裂中的定位,和与正常细胞相比有无异常定位等):使用正义转染或 RNAi 干扰技术升高或降低基因的表达,观察肿瘤细胞生物学行为的改变。本课题通过现代分子生物学方法,探讨肺癌发病的相关基因,以研究肺癌发病机理,对肺癌的诊断与治疗提供新的靶点。

关键词：肺癌细胞肿瘤组织细胞系染色体肿瘤抑制基因病理机制

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利用两性株培育芦笋全雄品种研究

利用两性株培育芦笋全雄品种研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈光宇周劲松罗绍春汤泳萍占丰溪朱青盛文涛江西省农业科学院生物工程中心南昌大学生命科学院

芦笋(Asparagus officinalis L.),属百合科天门冬属多年生宿根性草本植物,是一种深受消费者喜爱的营养保健型高档蔬菜,也是一种模式作物。当前我国芦笋用种几乎全依赖进口,种子问题一直是我国芦笋产业发展的瓶颈。芦笋雌雄异株,雄株产... 详细信息

芦笋(Asparagus officinalis L.),属百合科天门冬属多年生宿根性草本植物,是一种深受消费者喜爱的营养保健型高档蔬菜,也是一种模式作物。当前我国芦笋用种几乎全依赖进口,种子问题一直是我国芦笋产业发展的瓶颈。芦笋雌雄异株,雄株产量比雌株高出 25%以上。从芦笋两性株(Mm)自交(Mm×Mm→1MM+2Mm+1mm 即3♂+1♀)后代群体中筛选出超雄株(MM),以它为父本杂交可得到全雄后代(mm×MM→Mm,后代全部为雄株),从而提高芦笋产量。利用两性株培育芦笋全雄品种很有意义,可操作性强,成本低。以第三届国际芦笋品种区域试验中国区内36个芦笋新品种为试验材料,对其中的两性株进行调查。芦笋盛花时,对雌雄混合品种,一一标明其中雌株和雄株;全雄品种中标明其中混杂的雌株加以排除;对所有雄株按单株选取几朵花用 Laica S6D 立体显微镜进行花器官形态观察,具两性花的单株被视为两性株挂牌标明;座果后凡结有果实的雄株即可确定为两性株也挂牌标明;果实成熟后按单株收集两性株种子播种。观察发现,两性株所产生的两性花不仅雄蕊健全,6枚雄蕊正常发育,还有健全程度不同的雌蕊,有子房,较大,但比普通雌花小,有柱头;所结的果实较小,不够饱满,椭圆形,易脱落,果柄处往往残留有较长干瘪的花药,果实里面所含种子很少,一般1～3粒,有不少果实没有种子,且种子有的种皮不全或无种皮,裸露呈白色,粒小,不饱满,发芽率低:调查确认了芦笋两性植株共37株,自交后构建了157株芦笋两性株 S1群体;以‘Backlim'的112株两性株 S1群体为样本,对芦笋性别决定基因进行遗传分析,卡平方测验结果符合1对等位基因所表现的3:1的分离比例(χ c2=1.7500<χ 20.05=3.84),验证了前人关于芦笋性别是由一对等位基因控制的结论:截至2008年上半年, 对芦笋两性株 S1群体中提前开花的70株雄株进行了测交,收获杂交种子播种成苗,按单株提取 DNA,利用与芦笋性别决定基因紧密连锁的分子标记检测,苗期快速鉴定植株性别,统计性别分离比例,筛选超雄株;当前,已筛选鉴定出1株超雄株,以它作为父本已与6株优选的雌性单株配组杂交,共6个组合,现已进入组合比较试验,有望近年培育出我国第一个芦笋全雄品种。

关键词：芦笋两性株全雄品种

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山东部分地区灰飞虱mariner类转座子研究

山东部分地区灰飞虱mariner类转座子研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：曲志才姜曰水曲阜师范大学生命科学学院

mariner 类转座子(Transposable mariner-iike elements,MLEs)属于 DNA 转座子中的 Tcl/mariner 超家族成员,广泛存在于从细菌到真核生物的无脊椎、脊椎动物乃至人类, 分布极其广泛。目前,国外对 mariner 类转座子研究较多,主要涉及结... 详细信息

mariner 类转座子(Transposable mariner-iike elements,MLEs)属于 DNA 转座子中的 Tcl/mariner 超家族成员,广泛存在于从细菌到真核生物的无脊椎、脊椎动物乃至人类, 分布极其广泛。目前,国外对 mariner 类转座子研究较多,主要涉及结构特征、转座机制、调控机制和应用等领域:国内对 mariner 类转座子的研究较少,南京农业大学有关科研人员曾对灰飞虱和白背飞虱的 mariner 类转座子进行初步检测;山东省寄生虫病防治研究所以白端按蚊(Anopheles Albimanus)中 mariner 类转座子作为载体构建土垢分枝杆菌随机变异文库,用于筛选影响脂肪酸代谢的基因。研究发现 mariner 类转座子结构简单,转化稳定、高效,转座过程的宿主无关性使其成为转基因载体研究的焦点,目前已利用 mariner 类转座子成功构建了多个转基因载体。若把这类载体应用于转基因昆虫生产,将为灰飞虱的防治开辟新的思路。本研究通过对山东省5个地区灰飞虱体内的 mariner 类转座子结构与组成的研究, 分析它们与毛里塔尼亚果蝇 mariner 转座子的同源性,进而探讨其作为转基因载体的可能性, 期望能为这类转座子在病虫害防治中的应用提供一些理论依据。主要内容报告如下:1、根据 mariner 类转座子的转座酶保守序列设计简并引物,以山东省5个地区不同灰飞虱种群的基因组 DNA 为模板,通过 PCR 扩增分别扩增出了9个不同的 mariner 类转座子拷贝,初步证实在灰飞虱中存在 mariner 类转座子。通过片段回收、克隆和测序,获得其核苷酸序列,提交 Genbank 数据库,注册号为 EU542020～EU542028。2、利用相关软件对所获得的序列进行分析,发现序列长度集中于430bp、500bp 和800bp 左右,且各拷贝之间同源性差异较大。从 34%到99%不等。这表明灰飞虱体内的 mariner 类转座子具有序列组成的高度多样性。3、将测得的9个 mariner 类转座子拷贝与核酸数据库的 mariner 类转座子7个亚族中的19个常见序列进行系统学分析,显示 L5QFclone493拷贝属于 mauritiana 亚族,而其他8个拷贝没有明显同源的亚族,可能属于新亚族,其具体情况尚待进一步研究。4、进一步分析 L5QFclone493 序列。并对其作为转基因载体的可能性进行预测,以期为 mariner 类转座子在转基因中的应用以及病虫害的防治奠定基础。分析表明,这段序列与 mosl 的核苷酸同源性为64.15%,氨基酸序列同源性为55.32%。但该序列在核定位信号(NLS)和 D,D(34)D 等关键部位发生突变或缺失。推测可能没有转座活性。因此在转基因方法防治灰飞虱方案中,只能作为内源性的 mariner 类转座子因素加以考虑。

关键词：灰飞虱山东省 mariner 基因载体

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海洋微生物新几丁质酶编码基因的探索

海洋微生物新几丁质酶编码基因的探索

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：王海东宋小慧何腾腾胡忠广东省汕头大学生物系

几丁质(chitin)又称甲壳素、甲壳质,在自然界中的含量极为丰富,是仅次于纤维素的第二大生物资源,只是地球上的海洋环境中每年就会有超过1011吨的几丁质形成。几丁质及其衍生物有很重要的应用价值,现代医学证明,其具有三调、三降、三排... 详细信息

几丁质(chitin)又称甲壳素、甲壳质,在自然界中的含量极为丰富,是仅次于纤维素的第二大生物资源,只是地球上的海洋环境中每年就会有超过1011吨的几丁质形成。几丁质及其衍生物有很重要的应用价值,现代医学证明,其具有三调、三降、三排及三抑的功能, 三调:调节免疫、调节 pH、调节激素平衡;三降:降血脂、降血压、降血糖:三排:排胆固醇、排毒、排重金属离子;三抑:抑制癌细胞生长、抑制癌细胞转移、抑制癌细胞产生毒素: 消除自由基,防止骨质疏松,对关节炎有一定的疗效:止血、止痛、抑菌,促进伤口愈合。另外,由于几丁质及其衍生物较好的组织兼容性和良好的生物降解性等特性还被开发为医用生物支持材料,如海绵、绷带、人工皮肤等:其还可以用做生产单细胞蛋白(SCP)的原料, 成为食品的一个重要补充。由于几丁质及其衍生物广阔的开发应用前景,所以寻找活性较高的几丁质酶,应用于工业,生产有价值的几丁质衍生物一直是科研工作者努力的方向。本实验采集汕头海湾表层沉积物,提取得到宏基因组,采用 PCR 的方法,扩增几丁质酶催化区的保守序列,PCR 产物与 pUC-Tm 载体构建文库。挑取100个克隆子测序后得到63条基因片段, 其编码的蛋白序列与 NCBI 数据库信息比对后发现均与几丁质酶相关,属于18家族几丁质酶, 并且其中55条序列的最大相似比率在70%以下,只有8个克隆子的相似率大于70%,。这说明沉积物中蕴含有丰富的几丁质酶编码基因,并且大多数的几丁质酶是目前尚没有开发研究的。另外,还在汕头湾表层沉积物中分离得到69株高产几丁质酶的菌株,对其中6株形态特征差异比较明显,几丁质酶活力比较高的菌株 SWCH-1、SWCH-2、SWCH-3、SWCH-5、SWCH-6和 SWCH-9进行了16S rDNA 序列鉴定,发现它们分别归属于5个属:短芽孢杆菌属 (Brevibacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属 (Aeromonas)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas);对这6株菌的几丁质酶编码基因的催化保守区基因片段也进行了扩增利序列分析,显示其均含有18家族几丁质酶编码基因,并且其编码的蛋白序列与 NCBI 收录的蛋白序列并不完全相同,其中菌株 SWCH-1、SWCH-3和 SWCH-6 的蛋白序列相似性比较低,分别为85%、81%和96%,推测菌株可能含有比较新的几丁质酶编码基因。实验证明所采用的 PCR 方法能够有效的探索得到新的几丁质酶编码基因信息,对下一步有针对性的克隆筛选新颖的几丁质酶编码基因及表达纯化新的几丁质酶具有指导作用。

关键词：汕头湾表层沉积物几丁质酶分离鉴定

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根瘤农杆菌介导aiiA基因对大白菜的遗传转化研究

根瘤农杆菌介导aiiA基因对大白菜的遗传转化研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：田志宏钟燕华何勇严寒许本波徐锋赵福永邱永福周燚长江大学生命科学学院长江大学农学院

大白菜亦称结球白菜,是十字花科芸薹属栽培作物。由于其产量高、品质好、营养价值高,并且耐贮藏,是我国秋冬季节重要的蔬菜之一。但是软腐病对大白菜危害很大,在软腐病盛行时期,严重时可造成个别地块减产50%以上,甚至是绝产,若在窖内储... 详细信息

大白菜亦称结球白菜,是十字花科芸薹属栽培作物。由于其产量高、品质好、营养价值高,并且耐贮藏,是我国秋冬季节重要的蔬菜之一。但是软腐病对大白菜危害很大,在软腐病盛行时期,严重时可造成个别地块减产50%以上,甚至是绝产,若在窖内储藏则可造成全窖腐烂。不仅严重影响了大白菜的产量和农民的收入,而且还影响了城市蔬菜的供应。Erwinia carotovora 是大白菜软腐病的致病菌,其致病过程是受群体感应调节系统调控的,并且该系统的信号分子是 N-酰化高丝氨酸内酯(AHL)。研究者从苏云金芽孢杆菌中克隆了一个 aiiA 基因,该基因能够水解 AHL,使其失去作为信号分子的能力,从而阻断 Erwinia carotovora 的致病过程。本研究旨在通过根瘤农杆菌遗传转化技术将 aiiA 基因导入大白菜中,获得对软腐病有较高耐受力的大白菜新材料。以大白菜‘鲁白六号'5d 苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,采用 L25(56)正交设计试验探讨了4种植物生长调节剂(α-NAA、6-BA、TDZ、ABA) 和 AgNO3对不同外植体不定芽诱导的影响。结果表明:α-NAA 对子叶不定芽的诱导有一定的影响;确定以 MS+1.0mg/L α-NAA+3.0mg/L TDZ+5.0mg/L AgNO3为最佳子叶不定芽诱导培养基,不定芽诱导率最高为68.87%:MS+0.8mg/L α-NAA+5.0mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ+7.0mg/L AgNO3为最佳下胚轴不定芽诱导培养基,不定芽诱导率最高为0.49%。同样以‘鲁白六号'5d 苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,采用 L25(56)正交设计试验探讨了 4种植物生长调节剂和 AgNO3对不同外植体愈伤组织诱导的影响。结果表明:α-NAA 对子叶愈伤组织诱导具有重要的作用;确定以 MS+1.0mg/L α-NAA+1.0mg/L 6-BA+3.0mg/L TDZ+0.5mg/L ABA+10.0mg/L AgNO3为最佳子叶愈伤组织诱导培养基,出愈率最高为99.15%;MS+0.8mg/L α-NAA+2.0mg/L 6-BA 为最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基,出愈率最高为 99.54%。以工程农杆菌 Hn1301(内含 PU1301-aiiA 质粒)作为侵染菌株,采用 L9(34)正交设计试验对影响根瘤农杆菌转化效率的3个主要因素(菌液浓度 OD600、侵染时间和共培养时间) 进行优化,建立了较完整的以子叶为外植体的‘鲁白六号'遗传转化体系,即应该在菌液浓度 OD600为0.3～0.5、侵染时间为10min、共培养2d 的条件下进行遗传转化。共培养基为 MS+1.0mg/L α-NAA+3.0mg/L TDZ+5.0mg/L AgNO3+0.01962g/L AS,选择及脱菌培养基为 MS+1.0mg/L α-NAA+3.0mg/L TDZ+5.0mg/L AgNO3+400mg/L Carb+1.0 mg/L Hyg。结果再生出8株潮霉素抗性苗,经 PCR 鉴定和 gus 基因检测初步证明 aiiA 基因已经导入到大白菜‘鲁白六号'中。

关键词：大白菜 aiiA 基因遗传转化正交设计

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