一氧化氮（Nitric oxide,NO）是一种重要的生物信使分子。它在维持机体正常新陈代谢,炎症反应,病毒感染与免疫防御等诸多生命活动及药物治疗过程中发挥着重要生理功能。因此对动物体内在各种生理、病理条件下所释放的 NO 进行定量检测...
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一氧化氮（Nitric oxide,NO）是一种重要的生物信使分子。它在维持机体正常新陈代谢,炎症反应,病毒感染与免疫防御等诸多生命活动及药物治疗过程中发挥着重要生理功能。因此对动物体内在各种生理、病理条件下所释放的 NO 进行定量检测具有重要的理论意义和较强应用价值。在诸多 NO 检测方法中, 荧光法因其灵敏度高和特异性好等特点而得到了广泛应用。1,3,5,7-四甲基-2,6- 二甲酰乙酯-8-（3’,4’-二氨基苯）-二氟化硼-二吡咯甲烷（DAMBO-COEt）是一种直接检测 NO 的新型特异性荧光探针。它具有的量子产率高,光稳定性好,pH 适用范围广,对 NO 检测的高灵敏度和高选择性,具有较长激发和发射波长（≥ 500nm）从而可有效排除生物样品中内源荧光物质的干扰等诸多特性和优点,使其非常适合用于生物活体及细胞释放 NO 的实时原位监测研究。本研究利用 DAMBO-COEt 探针结合96-与384-微孔板技术建立了生物学样品的高通量 NO 荧光检测技术。分别对衍生体系和微孔板检测体系的反应条件进行了系统优化。结果表明:反应生产的强荧光三唑产物的荧光响应值和NO的浓度在2.1×10- 3.0×10mol L范围呈良好线性相关性（R>0.9998）,检测底限达到2.5×10mol L（S/N=3）。我们对采集自医院的乙肝病毒（HBV）,丙肝病毒（HCV）及 A 型流感病毒感染及肺结核患者的血液样本,实验室采集的不同滴度禽流感病毒 （AIV,高致病性 HN亚型）不同感染时间后的宿主细胞,及对上述患者及 AIV 感染宿主细胞施加相应治疗药物后患者的血液样品及宿主细胞内所释放的 NO 进行了实时跟踪监测。结果表明:病毒感染后患者血液内 NO 的量增高50-250 倍,AIV 感染后宿主细胞释放 NO 量剧增（Max=3.72μM/μg protein）;施药后血液和胞内 NO 释放量均有不同程度地降低。本方法的日内相对标准偏差为1.22%, 日间相对标准偏差为2.78%。上述实验结果表明本研究所建立的方法灵敏、精确、可靠,可作为临床病毒感染的诊断,抗病毒药物药效评价及药代动力学研究的常规方法使用。
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