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奇壬醇诱导人类慢性髓原白血病细胞K562凋亡的研究

奇壬醇诱导人类慢性髓原白血病细胞K562凋亡的研究

引用

第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：卢月付宏征陈英玉钱瑞琴 Department of Integrated Chinese Traditional with Western Medicine Peking University Health Science Center State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs Peking University Department of Immunology Peking University Center for Human Disease Genomics Peking University

目的研究奇壬醇对人类慢性髓原白血病细胞K562凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法 MTT法检查K562细胞增殖;细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻分析细胞凋亡情况;Hoechst-33342染色观察细胞核片段化;流式细胞仪检测细胞周期,线粒体膜电位和活性氧... 详细信息

目的研究奇壬醇对人类慢性髓原白血病细胞K562凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法 MTT法检查K562细胞增殖;细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻分析细胞凋亡情况;Hoechst-33342染色观察细胞核片段化;流式细胞仪检测细胞周期,线粒体膜电位和活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的水平;体外检测半胱天冬酶Caspase-3和Caspase-9的活性;Western Blot检测Caspase-3、Caspase-8、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（Poly-ADP-ribose polymerase,PARP）、细胞色素C、Bcl-2、Bid、Bax、p53、磷酸化p53（Ser 6和Ser 37）、p21蛋白的表达。结果 1、奇壬醇在24、48和72h的半数抑制浓度(IC)分别为53.05μg/ml、18.19μg/ml和15.08μg/ml。2、奇壬醇导致细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,活性氧（ROS）累积,线粒体膜电位的降低,细胞色素C释放,下调Bcl-2的表达,上调Bax和tBid的水平。3、奇壬醇不影响Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和PARP的活性或水平。4、奇壬醇诱导细胞周期阻滞在S期。5、奇壬醇上调磷酸化p53（Ser 6和Ser37）和p21蛋白水平。结论奇壬醇可以抑制K562细胞增殖、阻滞细胞周期于S期、诱导其凋亡。奇壬醇可不依赖Caspase,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。奇壬醇可促进K562细胞中ROS的累积,导致线粒体膜电位下降,诱导细胞色素C的释放,下调Bcl-2水平,上调Bax和tBid的表达。奇壬醇还可以促进K562细胞中磷酸化p53（Ser6和Ser 37）和p21蛋白的表达。

关键词：奇壬醇人类慢性髓原白血病 K562细胞凋亡

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补阳还五汤对脑缺血后抑郁大鼠海马区Cyclin D1、Cdk2的影响

补阳还五汤对脑缺血后抑郁大鼠海马区Cyclin D1、Cdk2的影响

引用

第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：侯菊花刘圆月李灿邓叔华刘柏炎益阳医学高等专科学校湖南中医药大学

目的探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血后抑郁大鼠海马区Cyclin D1、Cdk2的影响。方法采用大脑中动脉局灶性永久性线栓法结合慢性不可预见温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)及孤养法制备脑缺血后抑郁模型,将动物随机分为假... 详细信息

目的探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血后抑郁大鼠海马区Cyclin D1、Cdk2的影响。方法采用大脑中动脉局灶性永久性线栓法结合慢性不可预见温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)及孤养法制备脑缺血后抑郁模型,将动物随机分为假性手术组、脑缺血组、卒中后抑郁组、脑卒中后抑郁+氟西汀组(以下简称氟西汀组)和脑卒中后抑郁+补阳还五汤组(以下简称补阳还五汤组)五组,分别给予不同处理,在7、14、21 d不同时间点处死动物,采用免疫组织化学法观察Cyclin D1、Cdk2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠海马神经细胞出现退化、变性、坏死等病理改变,海马神经细胞凋亡数量增加;在正常大鼠海马内有少量Cyclin D1和Cdk2阳性细胞;脑缺血后海马区Cyclin D1和Cdk2阳性细胞增加与模型组比较,氟西汀组、补阳还五汤均能显著降低Cyclin D1和Cdk2的表达。结论脑缺血后cyclin D1、Cdk2的异常表达可能诱发了缺血神经细胞的死亡,补阳还五汤可能通过抑制cyclin D1、Cdk2的表达而减少缺血后神经细胞的损害。

关键词：脑缺血后卒中/中医药疗法 Cyclin D1 Cdk2 补阳还五汤大鼠

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预知子籽抑制肝癌细胞恶性增殖的作用及机制研究

预知子籽抑制肝癌细胞恶性增殖的作用及机制研究

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第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：方肇勤任红艳梁超张园园吴中华上海中医药大学

目的观察预知子籽提取物及与细胞毒抗生素G418联用对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用,及其可能的作用机制。方法采用MTT检测、细胞形态学检查等技术,观察预知子籽乙醇提取物及其联合G418对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用;采用Affymetri... 详细信息

目的观察预知子籽提取物及与细胞毒抗生素G418联用对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用,及其可能的作用机制。方法采用MTT检测、细胞形态学检查等技术,观察预知子籽乙醇提取物及其联合G418对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用;采用Affymetrix Human Gene 1.1 STArray Strip基因芯片检测给药后差异表达的基因。结果预知子籽提取物对肝癌细胞恶性增殖具有显著地抑制作用(P<0.01),其半量与G418半量联合用药对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用明显优于其足量(P<0.01);预知子籽提取物给药后肝癌细胞充满大量空泡,出现了严重的内质网应激;基因芯片检测发现,49个与细胞内质网应激相关高表达基因发生了差异性表达,包括HSPA5在内一致下调的基因计31个,一致上调者5个,互有差异者13个。结论预知子籽提取物具有抑制肝癌细胞恶性增殖的作用,与细胞毒抗生素联用具有减量增效作用,其作用发挥与其抑制肝癌细胞包括HSPA5在内的与内质网功能密切相关基因表达有关,由此选择性地诱导了肝癌细胞内质网应激。提示预知子籽提取物具有在恶性肿瘤防治方面的广阔前景。

关键词：肝癌 SMMC7721肝癌细胞预知子籽 MTT 内质网应激基因表达调控

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补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经及跟腱中IGF-1的影响

补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经及跟腱中IGF-1的影响

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第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：李丽鹏陈泽奇

目的观察中药补肝汤对实验性糖尿病大鼠跟腱及坐骨神经中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的干预作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。用1%链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,血糖≧16.7mmol/l为造模成功。治疗组... 详细信息

目的观察中药补肝汤对实验性糖尿病大鼠跟腱及坐骨神经中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的干预作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。用1%链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,血糖≧16.7mmol/l为造模成功。治疗组予补肝汤28.6g/kg.d连续灌胃4周,模型组则予同等剂量的生理盐水。4周末测量FBG、体重后处死大鼠,用免疫组化技术检测各组大鼠坐骨神经中IGF-1的蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定坐骨神经及跟腱组织中IGF-1含量。结果 (1)补肝汤对STZ诱导的糖尿病大鼠体重和血糖无改善(P>0.05)。(2)坐骨神经IGF-1(ELISA+免疫组化):模型组和中药治疗组大鼠坐骨神经IGF-1表达均低于正常组(P<0.01),治疗组优于模型组,结果有统计学意义(P<0.05)。(3)跟腱IGF-1(ELISA):模型组和治疗组大鼠跟腱IGF-1含量均高于正常组(P<0.05),治疗组与模型组之间无明显差异(P>0.05)。结论 (1)高血糖情况下,坐骨神经中IGF-1下降,神经修复能力减弱,可能是导致周围神经病理改变的机制之一。(2)补肝汤可提高糖尿病大鼠坐骨神经中IGF-1含量,通过激励IGF-1的保护作用而对坐骨神经起一定保护作用。(3)高血糖条件下,跟腱中IGF一1含量提高,本实验中未观察到补肝汤对跟腱IGF-1有影响,阴性结果考虑与模型检测时间点偏早及标本检测时间点偏少有关。

关键词：补肝汤糖尿病 IGF-1 坐骨神经跟腱大鼠

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葛根素在颈部交感神经节P2X3受体介导的心肌缺血引发交感反射中的作用研究

葛根素在颈部交感神经节P2X3受体介导的心肌缺血引发交感反射中的...

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第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：刘双梅李桂林宋渺渺彭力超吴炳梁尚栋

目的探讨葛根素在颈上、星状交感神经节细胞P2X3受体介导的心肌缺血伤害性信息引发交感反射中的作用。方法建立心肌缺血大鼠模型,应用葛根素处理后,整体水平观察大鼠血压和心率,心电图变化;原位杂交、免疫组化方法和蛋白印迹技术了解葛... 详细信息

目的探讨葛根素在颈上、星状交感神经节细胞P2X3受体介导的心肌缺血伤害性信息引发交感反射中的作用。方法建立心肌缺血大鼠模型,应用葛根素处理后,整体水平观察大鼠血压和心率,心电图变化;原位杂交、免疫组化方法和蛋白印迹技术了解葛根素对心肌缺血大鼠颈上、星状交感神经节细胞P2X受体mRNA和蛋白表达的影响;全细胞膜片钳技术观察葛根素对P2X受体激动剂激活电流的作用。结果葛根素可以降低心肌缺血大鼠颈部交感神经节细胞P2X受体表达,使心肌缺血大鼠升高的血压下降、加快的心率及呼吸减慢,改善心肌缺血大鼠的心电图,降低心肌缺血大鼠颈部交感神经节P2X受体激动剂激活电流。结论葛根素可能通过作用于颈上、星状交感神经节细胞P2X受体抑制心肌缺血伤害性信息引发的交感兴奋反射。

关键词： P2X3受体交感反射颈上神经节星状神经节葛根素

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加减逍遥散对慢性心理应激T2DM小鼠GR表达的影响

加减逍遥散对慢性心理应激T2DM小鼠GR表达的影响

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第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：朱艳芳徐志伟敖海清周江霞高晓玲富文俊王文广州中医药大学

目的观察比较慢性心理应激对T2DM小鼠胰岛及肝细胞GR表达的影响及加减逍遥散干预作用。[方法]以自发性糖尿病（KK）小鼠为研究对象,采用高糖高脂饲料喂养8周以复制T2DM小鼠模型。采用电击,夹尾,禁食,禁水,合笼饲养等应激刺激复制慢性心... 详细信息

目的观察比较慢性心理应激对T2DM小鼠胰岛及肝细胞GR表达的影响及加减逍遥散干预作用。[方法]以自发性糖尿病（KK）小鼠为研究对象,采用高糖高脂饲料喂养8周以复制T2DM小鼠模型。采用电击,夹尾,禁食,禁水,合笼饲养等应激刺激复制慢性心理应激模型。102只小鼠随机分为空白对照组、应激对照组、逍遥散组、应激加逍遥散低剂量组及应激加逍遥散高剂量组等五组。采用ELASA法检测糖化血红蛋白（-HbA1c）,免疫荧光法检测GR的表达。结果与空白对照组相比较,应激对照组小鼠HbA1c值升高（P<0.01）,胰岛细胞内GR表达无统计学差异,肝细胞内GR表达则明显下降（P<0.01）;逍遥散组小鼠HbA1c值降低（P<0.01）,胰岛细胞与肝细胸内GR表达均明显下降（P<0.01）。与SC组相比较,应激加逍遥散低剂量组小鼠HbA1c值降低（P<0.01）,胰岛细胞GR表达明显下调（P<0.01）,而肝细胞内GR.表达无统计学差异;应激加逍遥散高剂量组小鼠HbA1c值明显降低(p<0.01),胰岛细胞内GR表达明显下调（P<0.01）,而肝细胞内GR表达则明显上调（P<0.01）。结论加减逍遥散能够降低T2DM小鼠的HbA1c并且对抗慢性心理应激对T2DM小鼠的HbA1c影响,其作用机制可能与加减逍遥散调节T2DM小鼠胰岛与肝细胞内GR的表达有关。

关键词：加减逍遥散慢性心理应激 2型糖尿病糖皮质激素受体

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加味五子衍宗方防治MCI的神经保护作用研究

加味五子衍宗方防治MCI的神经保护作用研究

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第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：黎巍威王学美北京大学第一医院中西医结合研究室

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,简称AD)是一种以进行性记忆认知障碍、行为异常、人格改变为主要特征的神经退行性疾病,目前全球对AD的治疗效果不佳,其原因主要在于AD发病因素复杂,干预过晚,越来越多的学者提出治疗AD应及早着手... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,简称AD)是一种以进行性记忆认知障碍、行为异常、人格改变为主要特征的神经退行性疾病,目前全球对AD的治疗效果不佳,其原因主要在于AD发病因素复杂,干预过晚,越来越多的学者提出治疗AD应及早着手,多靶点干预。本课题组在中医"补肾益精促智"和"未病先防"原则的指导下,采用现代生物医学技术,对补肾益精促智方"加味五子衍宗方"防治阿尔茨海默病前期——轻度认知功能障碍(Mild cognitive impairment,MCI)的作用及机理进行了深入研究。临床疗效观察和随访研究证实加味五子衍宗方可改善MCI患者的临床症状,延缓MCI患者向AD发展,其机理与抑制乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AchE)活性、减少线粒体DNA氧化损伤、降低血清中Aβ的水平有关。影像学证据还揭示该方可减小MCI患者的海马指数和颞角宽度,防治海马体积萎缩,为该方药效学评价提供了临床依据。通过建立高效液相色谱-光电二极管阵列检测器-串联质谱的分析方法,本课题组对加味五子衍宗方的主要成分进行检测分析,共检出58种成分,均对其饮片来源进行了归属。鉴定或推测了其中51种成分的结构,建立了加味五子衍宗方的HPLC指纹图谱。为阐明该方的作用机理提供了科学依据。进一步的体内及体外实验证实加味五子衍宗方及其有效组分可有效改善AD大鼠的行为学症状,并可从多条通路、多个靶点发挥调节中枢胆碱能系统,拮抗Aβ神经毒性、氧化应激损伤及炎症损伤等AD致病因素的作用,这为该方的科学应用及开发提供了实验室依据。

关键词：加味五子衍宗方总黄酮有效组分主要成分王学美 MCI 氧化应激损伤神经保护作用

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补肾生髓方和益气活血方对脑缺血损伤大鼠Nogo-A、OMgp、MAG蛋白表达的影响

补肾生髓方和益气活血方对脑缺血损伤大鼠Nogo-A、OMgp、MAG蛋白...

引用

第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：江爱娟叶铭钢王浩胡建鹏安徽中医学院研究生部

目的观察补肾生髓方和益气活血方对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带Nogo-A、OMgp、MAG表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组及益气活血方组。脑缺血2h,分别再灌注3d... 详细信息

目的观察补肾生髓方和益气活血方对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带Nogo-A、OMgp、MAG表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组及益气活血方组。脑缺血2h,分别再灌注3d、7d、14d,采用免疫组化检测Nogo-A、OMgp和MAG的表达水平。结果再灌注3d、7d、14d补肾生髓方组,再灌注14d益气活血方组,Nogo-A阳性表达较模型组显著减弱(P<0.05或P<0.01);再灌注7d、14d时补肾生髓方组Nogo-A表达较益气活血方组减弱(P<0.05或.P<0.01)。再灌注14d补肾生髓方组,再灌注3d、7d、14d益气活血方组,OMgp阳性表达较模型组显著减弱(P<0.05或P<0.01);再灌注各时间点两复方组间OMgp阳性表达无显著差异(P>0.05)。再灌注3d、7d、14d补肾生髓方组,再灌注3d、7d益气活血方组,MAG阳性表达较模型组显著减弱(P<0.05或P<0.01);再灌注3d时益气活血方组MAG表达较补肾生髓方组显著减弱(P<0.05)。结论益气活血方与补肾生髓方可促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能回复,其作用机制可能与下调Nogo-A、OMgp、MAG的表达有关,提示在脑缺血再灌注早期,益气活血方优于补肾生髓方,后期补肾生髓方优于益气活血方。

关键词：脑缺血再灌注 Nogo-A OMgp MAG 补肾生髓方益气活血方

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益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠Notch-3和Frizzled2基因及其蛋白表达的影响

益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠Notch-3和Frizz...

引用

第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：吕磊胡建鹏王键徐伟谭辉张红梅王丽娜何玲安徽中医学院省部共建新安医学教育部重点实验室

目的探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch-3和Frizzled2基因及其海马CAl区蛋白表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组。脑缺血2小时... 详细信息

目的探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch-3和Frizzled2基因及其海马CAl区蛋白表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组。脑缺血2小时,再灌注1周,采用PCR Assay检测额顶叶皮质Notch-3和Frizzled2基因表达,免疫组化Envision两步法检测海马CA1区Notch-3和Frizzled2蛋白表达积分光密度值。结果模型组Frizzled2基因表达显著高于假手术组(P<0.05);益气活血方组Notch3基因表达显著高于模型组(P<0.05),补肾生髓方组Frizzled2基因表达显著低于模型组(P<0.05);益气活血方组Frizzled2基因表达显著高于补肾生髓方组(P<0.05)。模型组海马CA1区Notch-3和Frizzled2蛋白表达积分光密度值均高于假手术组(P<0.05);两种中药复方组Notch-3和Frizzled2蛋白表达积分光密度值均高于模型组(P<0.05);补肾生髓方组Notch-3蛋白表达积分光密度值高于益气活血方组(P<0.05)。结论两种中药复方多能通过增强额顶叶皮质或海马CA1区Notch-3基因及其蛋白表达,降低Frizzled2基因及其蛋白表达,调节Notch信号转导通路。

关键词：益气活血方补肾生髓方脑脑缺血 Notch信号转导通路

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肠易激综合征的舌象研究

肠易激综合征的舌象研究

引用

第九次全国中西医结合基础理论研究学术研讨会

作者：徐志伟吴皓萌史亚飞敖海清周江霞

目的研究肠易激综合征的中医证候和舌象,实验室指标和舌象的关系。为肠易激综合征的中医辨证论治提供依据,同时丰富中医舌象的微观研究。方法检测肠易激综合征患者的实验室指标,运用spss 19.0统计分析它们与IBS舌象的关系,并统计分析中... 详细信息

目的研究肠易激综合征的中医证候和舌象,实验室指标和舌象的关系。为肠易激综合征的中医辨证论治提供依据,同时丰富中医舌象的微观研究。方法检测肠易激综合征患者的实验室指标,运用spss 19.0统计分析它们与IBS舌象的关系,并统计分析中医证候和舌象的关系。结果①燥苔,舌边红,暗舌在IBS肝郁脾虚证中P<0.05。润苔在IBS肝郁气滞证中P<0.05。薄苔,滑苔,齿痕在脾胃虚弱证P<0.05。裂纹,厚苔,舌下络脉青紫、暗舌在IBS脾肾阳虚证中P<0.05。腻苔,黄苔,红舌在IBS脾胃湿热证中P<0.05。润苔,黄苔在IBS肠燥津伤证中P<0.05。齿痕,厚苔在IBS寒湿困脾证中P<0.05。其余舌象在各证型间P>0.05。②ACTH、MT、NP-Y与IBS患者舌象的相关性P>0.05。5-HT与胖大舌的相关性P<0.05。NO与苔白、舌尖红、苔白罩黄的相关性P<0.05。E2和齿痕舌、苔白罩黄、苔腻的相关性P<0.05。睾酮与淡红舌的相关性P<0.05。TNF-a与苔薄、苔黄、舌滑、裂纹、厚苔的相关性P<0.05。HCY与嫩舌、胖大舌、齿痕舌的相关性P<0.05。结论①IBS肝郁脾虚证的主要舌象有燥苔,舌边红,暗舌。IBS肝郁气滞证的舌象主要有润苔。脾胃虚弱证的主要舌象有薄苔,滑苔,齿痕。IBS脾肾阳虚证的主要舌象有裂纹、厚苔、舌下络脉青紫、暗舌。IBS脾胃湿热证的主要舌象有腻苔、黄苔、红舌。IBS肠燥津伤证的主要舌象有黄苔。IBS寒湿困脾证的主要舌象有齿痕、厚苔。②ACI、H、MT、NP-Y与IBS患者的舌象不相关。5-HT是IBS中胖大舌的的物质基础之一。T是IBS中淡红舌的物质基础之一。TNF-a是IBS中黄苔和舌滑的物质基础之一。HCY是IBS中嫩舌、胖大舌、齿痕舌的物质基础之一。NO是IBS中苔白的物质基础之一。

关键词：肠易激综合征舌象实验室指标相关分析

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