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19 篇 河北医科大学第四...
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12 篇 广州中医药大学
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6 篇 湖南中医药大学
6 篇 河北医科大学第二...
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5 篇 华北制药集团新药...
5 篇 河北省肿瘤研究所
5 篇 福建省中医药研究...
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作者

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结直肠癌相关蛋白和基因的临床应用和研究

结直肠癌相关蛋白和基因的临床应用和研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：于跃明王贵英李会欣周超熙丁瑞刘鸿章河北医科大学第四医院外二科保定市第三医院

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,它的发生是一个长达10-15年的多阶段的发展过程,这为我们提供了一个早期发现甚至预防的机会。分子标志物为早期诊断、早期发现转移和复发、评定疗效等方面提供了帮助。许多分子标志物例如CEA CA199 CA242 ... 详细信息

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,它的发生是一个长达10-15年的多阶段的发展过程,这为我们提供了一个早期发现甚至预防的机会。分子标志物为早期诊断、早期发现转移和复发、评定疗效等方面提供了帮助。许多分子标志物例如CEA CA199 CA242 P53 Ras等都有临床应用。到目前,CEA是唯一的结直肠癌肿瘤标志物,应在术后至少3年内每2-3个月监测。由于缺乏敏感性和特异性,在对结直肠癌的筛查和诊断上,血清标记物应用很少,一种较有希望的途径是应用多种标记物联合检测,在结直肠癌中我们建议联合检CEA,CA19-9,CA242和TPS,近些年临床工作中人们越来越多的重视微转移的检测,研究了许多新技术新方法,其中RT-PCR技术最有效最实用。微转移的检测起到了准确分期、评估预后和指导治疗等作用。到目前没有足够的证据证明MSI、RAS、P53、DCC等基因在预测预后和治疗疗效方面有显著作用,其中最近一些文献研究显示K-ras基因可用于对一些单克隆抗体如西妥昔单抗、帕尼单抗等疗效的评价,这些药物是针对EGFR胞外配体结合域,其结果是阻断细胞内影响细胞凋亡、增殖、分化的主要下游信号传导途径。随着分子生物学技术的发展,新的肿瘤标记物及基因肿瘤标记物对结直肠癌诊断的研究取得很大的进展。我们需要继续努力研究新的更好的分子标志物。本文主要总结结直肠癌相关蛋白和基因的临床应用和研究进展,以指导临床和科研工作。

关键词：结直肠癌肿瘤标志物 CEA

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肝纤维化细胞模型的建立

肝纤维化细胞模型的建立

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：肖定璋广东省医学科学院医学研究中心

肝纤维化是肝脏受到各种慢性刺激后的一种创伤-愈合过程的结果。病毒感染,尤其是丙型肝炎病毒感染,以及其他各种慢性炎症是肝纤维化的主要诱因。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一个重要的炎性因子,最近发现它与肝纤维化的发生有关。在肝... 详细信息

肝纤维化是肝脏受到各种慢性刺激后的一种创伤-愈合过程的结果。病毒感染,尤其是丙型肝炎病毒感染,以及其他各种慢性炎症是肝纤维化的主要诱因。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一个重要的炎性因子,最近发现它与肝纤维化的发生有关。在肝硬化的发展过程中,肝脏的肌成纤维细胞主要来源于骨髓(BM)。然而,肝纤维化的形成机制来源于机体的活检研究,其发生过程的分子机制仍然不明。为了建立肝纤维化细胞的模型,本研究着重研究了炎性因子、骨髓间充质干细胞(MSCs)与纤维化的关系。首先,我们将人肝星状细胞LX-2与rMIF共培养,以诱导其活化(iLX-2);随后,将iLX-2细胞与人骨髓来源的hMSCs或人羊水来源的间充质干细胞(hAFMSCs)共培养。Western结果发现MSCs纤维相关分子如转化生长因子TGF-β1、转化生长因子受体TGFβRII、肌动蛋白α-SMA以及结缔组织生长因子CTGF表达明显增加,证明间充质干细胞(MSCs)被诱导成纤维样细胞。进而,我们将丙型肝炎核心蛋白基因HCV-core转染诱导后的成纤维样细胞(iMSCs),建立稳定表达HCV-core的细胞株(iMSCs-HCV-core),同时以转染空载体作为对照。结果发现HCV-core促进了细胞的氧化应激反应,上调了纤维生成因子的表达。更重要的是,我们发现HCV-core是通过激活细胞分裂素-活化蛋白激酶(MAPK)这一信号通路起作用的,其中涉及p38以及黏着斑激酶活化信号通路(FAK-PI3K-Akt-p70S6K)。由此,我们建立的肝纤维化细胞模型,并证明间充质干细胞(MSCs)、炎性因子(MIF)和丙肝病毒蛋白HCV-core均参与了肝纤维化的形成过程,为下一步抗纤维化中药的研究打下了基础。

关键词：肝纤维化炎性因子间充质干细胞 MIF 细胞模型 HCV

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人乳腺癌细胞中IL-2受体信号转导通路的研究

人乳腺癌细胞中IL-2受体信号转导通路的研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：刘伟单保恩艾军马鸣河北医科大学第四医院科研中心

目的:研究乳腺癌细胞MDA-MB-231中IL-2受体α、β、γ的表达和人重组IL-2(recombinant human interleukin-2,rhIL-2)对MDA-MB-231细胞增殖的影响,以及对IL-2受体信号转导途径下游基因STAT5表达的影响。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(rev... 详细信息

目的:研究乳腺癌细胞MDA-MB-231中IL-2受体α、β、γ的表达和人重组IL-2(recombinant human interleukin-2,rhIL-2)对MDA-MB-231细胞增殖的影响,以及对IL-2受体信号转导途径下游基因STAT5表达的影响。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(revers transcription PCR,RT-PCR)、蛋白质印记技术(Western blot)分别检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中IL-2受体(α、β、γ亚基)的表达。采用RT-PCR和ELISA方法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中内分泌型IL-2的表达。采用MTT法分析不同浓度rhIL-2对MDA-MB-231细胞增殖反应的影响。用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析rhIL-2对MDA-MB-231细胞周期、凋亡的影响。用RT-PCR方法检测不同浓度rhIL-2作用乳腺癌细胞MDA-MB-231 48h后对IL-2R信号转导通路下游相关基因STAT5表达的影响。结果:通过RT-PCR、Western blot方法检测,结果显示MDA-MB-231细胞IL-2受体β、γ表达阳性,且γ链的表达要强于β链的表达。两种方法均未检测出α链的表达。RT-PCR和ELISA方法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中内分泌型IL-2的表达阴性。MTT检测结果显示,不同浓度的rhIL-2(50、100、250、500、1000、2500、5000、10000u/ml)对MDA-MB-231细胞增殖有明显抑制作用。FCM结果显示IL-2可诱导MDA-MB-231细胞周期阻滞和细胞凋亡。RT-PCR结果显示rhIL-2作用48 h后,MDA-MB-231细胞中STAT5基因转录水平明显下降。结论:MDA-MB-231细胞中IL-2受体α和内分泌型IL-2表达阴性;IL-2受体β、γ表达阳性。rhIL-2对MDA-MB-231细胞的增殖有一定的抑制作用,并且可以下调STAT5的表达。

关键词：人重组IL-2 IL-2受体信号转导通路 MDA-MB-231细胞 STAT5

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五味子提取物对小鼠辐射损伤的免疫保护作用及其机制研究

五味子提取物对小鼠辐射损伤的免疫保护作用及其机制研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：刘登湘刘丽华单保恩河北省邢台市人民医院肿瘤科河北医科大学第四医院科研中心

目的:研究五味子提取物对小鼠胸腺组织细胞凋亡、相关基因表达的影响及其作用机制,分析其对电离辐射所致小鼠免疫功能损伤的保护作用,方法:将48只BALB/c小鼠随机分为五味子（SchisandraChinensis,SC）预防治疗组（五味子灌胃+照射）,每... 详细信息

目的:研究五味子提取物对小鼠胸腺组织细胞凋亡、相关基因表达的影响及其作用机制,分析其对电离辐射所致小鼠免疫功能损伤的保护作用,方法:将48只BALB/c小鼠随机分为五味子（SchisandraChinensis,SC）预防治疗组（五味子灌胃+照射）,每天给予五味子提取物（4g/kg体重）灌胃一次,连续7天;生理盐水组（NS+照射）和正常对照组（不照射）,均给予等量的生理盐水灌胃,每天一次,连续7天,灌胃后禁食水30分钟。最后一次给药结束后1h给予Co-γ线照射。用血细胞计数仪检测小鼠外周血白细胞总数及分类变化,用流式细胞术检测小鼠外周血CD3、CD4、CD8T细胞绝对值和小鼠胸腺组织细胞凋亡率变化,用免疫浊度法检测小鼠血清IgG及C3含量。用Gimsa染色显微镜观察胸腺组织细胞形态学,半定量RT-PCR法检测各组小鼠胸腺组织bcl-2和Fas mRNA表达变化。免疫组化染色法检测小鼠胸腺组织bcl-2和Fas蛋白表达变化。结果:与正常组小鼠相比,经Co-γ照射24h后,NS对照组小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数量均明显下降（P<0.01）;外周血CD3、CD4和CD8T细胞绝对值、IgG及C3水平明显降低（P<0.01）;小鼠胸腺细胞减少,胸腺细胞凋亡率升高,P<0.01;小鼠胸腺组织bcl-2 mRNA及蛋白表达水平较正常组小鼠降低,Fas mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）;SC预防治疗组小鼠较NS对照组小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数量均明显升高（P<0.01）;外周血CD3、CD4和CD8T细胞绝对值、IgG及C3水平均明显升高（P<0.01）,小鼠胸腺细胞增多,胸腺细胞凋亡率降低,P<0.01,胸腺组织bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高,Fas mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）;但SC预防治疗组小鼠的上述指标与正常组小鼠比较,无显著性差异（P>0.05）。结论五味子提取物可抑制Co-γ辐射所致的小鼠胸腺细胞凋亡,对Co-γ辐射所致小鼠免疫损伤有预防作用,该作用可能通过促进小鼠胸腺细胞Bcl-2表达,降低Fas表达有关。

关键词：五味子提取物辐射损伤免疫保护

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As2O3对淋巴瘤Raji细胞抑制效应研究

As2O3对淋巴瘤Raji细胞抑制效应研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：曲凡赵春华刘翠萍赵孝先刁玉巧朱秀丽陈健李梅江莲金江河北医科大学第四医院河北肿瘤医院儿科

目的:探讨AsO对恶性淋巴瘤的作用及其治疗恶性淋巴瘤的可能机制。方法:体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞株Raji细胞,设对照组及用不同浓度的AsO且不同作用时间处理Raji细胞的实验组。应用MTT比色法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM... 详细信息

目的:探讨AsO对恶性淋巴瘤的作用及其治疗恶性淋巴瘤的可能机制。方法:体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞株Raji细胞,设对照组及用不同浓度的AsO且不同作用时间处理Raji细胞的实验组。应用MTT比色法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM）分析AsO对细胞周期的影响并检测细胞凋亡。结果:1 MTT比色试验结果表明:AsO各浓度组作用于Raji细胞24h、48h、72h后抑制率逐渐上升,（12.15%～92.17%）。各实验组作用于Raji细胞24h、48h、72h后吸光度值与对照组相比均有显著性差异（P<0.05）,同时各浓度组之间以及时间组之间有显著性差异（P<0.05）。2流式细胞术检测结果显示:AsO各浓度组作用于Raji细胞48h后出现明显的凋亡峰,对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰。用最小显著差法两两比较,各实验组与对照组相比均具有显著性差异（P<0.05）。经单因素方差分析,各浓度组间AsO对细胞凋亡率的影响有显著性差异（P<0.05）。3流式细胞术分析结果显示:AsO各浓度组作用于Raji细胞48h后,各处理组G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例与对照组相比,AsO各实验组细胞周期发生明显变化（P<0.05）。经单因素方差分析,各浓度组间AsO对细胞周期的影响有显著性差异（P<0.05）。结论1 AsO体外对Raji淋巴瘤细胞生长具有明显的抑制作用,呈时间、剂量依赖性。2 AsO能诱导Raji细胞凋亡,且使G0/G1期细胞比例增加,同时S期及G2/M期细胞比例减少。

关键词： As2O3 淋巴瘤凋亡细胞周期

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熟地黄不同极性提取物对T细胞亚群特征性因子表达的影响

熟地黄不同极性提取物对T细胞亚群特征性因子表达的影响

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：姚成芳郭钰琪郝钰王丽周宪宾李霞山东省医学科学院基础医学研究所国家中医药管理局免疫药理三级实验室肿瘤免疫与中药免疫重点实验室

目的:熟地黄是中医滋阴补血、益精添髓的常用组方用药。六味地黄丸、左归丸、右归丸等经典补肾中药方剂均采用熟地黄作为配伍君药,发挥调节免疫、滋阴补血等作用。以往针对地黄的免疫药理研究多采用复方或地黄的水、乙醇等极性较大的提... 详细信息

目的:熟地黄是中医滋阴补血、益精添髓的常用组方用药。六味地黄丸、左归丸、右归丸等经典补肾中药方剂均采用熟地黄作为配伍君药,发挥调节免疫、滋阴补血等作用。以往针对地黄的免疫药理研究多采用复方或地黄的水、乙醇等极性较大的提取物,对其他极性部位的免疫药理机制尚不清楚。本研究采用不同溶剂分离熟地黄的不同极性部位,探讨其对免疫调节主体细胞-T细胞亚群特征性细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、TNFα等表达能力的影响,以初步探明熟地黄不同有效成分靶向T细胞的免疫药理机制,为熟地的临床应用提供科学的实验依据。方法:采用MTT、RT-PCR、FACS等方法观察熟地黄及不同极性部位体内外对小鼠淋巴细胞增殖及其Th1/Th2/Treg/Th17等细胞亚群增殖的影响。结果:小鼠经灌胃熟地黄乙醇提取物7天后,脾脏T细胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-17、TNFα等细胞因子的能力明显降低。采用不同极性溶剂分离熟地黄的不同极性部位,体外干预ConA诱导的小鼠脾脏T细胞增殖,发现熟地黄A、D部位能明显降低T细胞增殖能力;而B、C、E提取物对T细胞的增殖有促进作用。RT-PCR检测结果显示:熟地黄A、D提取物可下调Th1/Th2/Treg特征性因子IFN-γ、IL-2、IL-4、FoxP3、TGF-β的表达水平,与对照组表达水平有显著性差异(P<0.05);而B、C、E可上调Th1、Th2、Treg类特征性因子的表达。体内试验进一步验证了熟地黄一单体成分对T细胞亚群细胞因子分泌能力的抑制作用。结论:熟地黄不同极性提取物对小鼠Th1/Th2/Treg类细胞因子表达影响不同,其中A、D部位是熟地黄抑制T细胞亚群增殖和细胞因子分泌的物质基础。

关键词：熟地黄滋阴补血细胞亚群性因子

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穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞活化及特异性抗体应答的影响

穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞活化及特异性抗体应答的影响

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：王维王静刘春红 ITALIANI,Paola BORASCHI,Diana 马世平瞿涤中国药科大学中药药理教研室复旦大学上海医学院生物医学研究院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室病复旦大学上海医学院原微生物研究所医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室复旦大学上海医学院病原微生物研究所

目的:研究穿心莲内酯对小鼠天然免疫和适应性免疫应答的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,经LPS诱导向M1活化或IL-4诱导向M2活化,同时以穿心莲内酯(10μg/ml)处理;利用real-time PCR检测巨噬细胞活化相关的M1和M2类细胞因子基因转... 详细信息

目的:研究穿心莲内酯对小鼠天然免疫和适应性免疫应答的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,经LPS诱导向M1活化或IL-4诱导向M2活化,同时以穿心莲内酯(10μg/ml)处理;利用real-time PCR检测巨噬细胞活化相关的M1和M2类细胞因子基因转录水平(M1:IL-1β,IL-18,IL-12等;M2:IL-1Ra,IL-18B P,IL-10等),流式细胞术检测巨噬细胞活化及抗原提呈功能相关的细胞表面分子(CD40,CD80,CD86,MHC等)。用乙肝表面抗原(HBsAg)免疫小鼠,同时腹腔注射给予穿心莲内酯(1mg/kg);利用ELISA方法检测anti-HBsAg,ELISPOT法检测分泌IL-4的脾淋巴细胞数量。结果:穿心莲内酯单独处理巨噬细胞24小时后使其偏向M2活化(IL-12/IL-10比例从0.78降低至0.12),处理LPS激活的巨噬细胞抑制其向M1分化(IL-12/IL-10比例从30.97降低至10.77),处理IL-4激活的巨噬细胞促进其向M2分化(IL-12/IL-10比例从0.32降低至0.15);并且穿心莲内酯下调了LPS激活的巨噬细胞表面分子CD40,CD80,CD86及MHC I的表达。HBsAg免疫的小鼠给予穿心莲内酯后血清特异性抗体anti-HBs滴度下降,分泌IL-4的脾淋巴细胞数量减少。结论:穿心莲内酯可调节小鼠的天然免疫和适应性免疫应答,调节巨噬细胞的活化并减少特异性抗体的产生。

关键词：穿心莲内酯免疫调节巨噬细胞细胞因子抗体

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MMP-2和TIMP-2单核苷酸多态性与肺癌关系的研究

MMP-2和TIMP-2单核苷酸多态性与肺癌关系的研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：丁翠敏贾书霄彭景翠郑新华河北医科大学第四医院河北省肿瘤医院呼吸科

目的:基质金属蛋白酶(matrixmetall oproteinases,MMPs)是一组依赖于锌离子的内切蛋白水解酶,通过降解细胞外基质和基底膜、调节细胞粘附、促进新生血管形成等,与肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关。MMP-2是MMPs家族的重要成员之一,... 详细信息

目的:基质金属蛋白酶(matrixmetall oproteinases,MMPs)是一组依赖于锌离子的内切蛋白水解酶,通过降解细胞外基质和基底膜、调节细胞粘附、促进新生血管形成等,与肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关。MMP-2是MMPs家族的重要成员之一,而金属蛋白酶组织抑制剂-2(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-2,TIMP-2)是一种重要的内源性MMP-2抑制剂,它们的异常表达可能与肿瘤的发生发展密切相关,研究发现,位于MMP-2基因启动子区的C-735T和TIMP-2基因启动子区的G-418C多态均可通过改变基因的转录活性而影响蛋白的表达水平,进而与肿瘤的发生发展密切相关。本研究拟探讨MMP-2和TIMP-2单核苷酸多态性与中国汉族北方人群肺癌易感性和淋巴结转移的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpolymorphism,PCR-RFLP)方法检测370例肺癌患者和436例健康对照个体的MMP-2 C-735T和TIMP-2G-418C基因多态性位点的基因型。结果:MMP-2 C-735T和TIMP-2 G-418C多态的基因型及等位基因频率在病例组和对照组分布均无显著性差异(P>0.05),但根据病理类型分层分析发现,携带MMP-2-735C/C基因型有增加鳞癌发病风险的趋势(OR=1.46,95%CI=1.00～2.14);携带TIMP-2-418G/G基因型有降低鳞癌发病风险的趋势(OR=0.76,95%CI=0.53～1.10);MMP-2 C-735T和TIMP-2 G-418C的基因型分布在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组相比,无显著性差异(P=0.92和P=0.18)。结论:MMP-2C-735T、TIMP-2G-418C多态可能与不同病理类型肺癌的发病风险有关,而与肺癌患者的淋巴结转移风险无关。

关键词： MMP-2 TIMP-2 单核苷酸多态性肺癌易感性淋巴结转移

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microRNA-152和-185在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗中的表达变化

microRNA-152和-185在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗中的表达变化

引用

第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：赵晓云王超邢邯英刘敏河北省人民医院河北省老年医学实验室

目的microRNAs(miRNA)是一类进化上保守的非编码小分子RNA,靶向作用于人类近三分之一的基因,在细胞分化和生长发育等方面发挥重要作用。目前miRNA在代谢相关疾病中的研究尚少。本研究旨在阐明miRNA-152和-185在脂肪细胞分化过程中及胰... 详细信息

目的microRNAs(miRNA)是一类进化上保守的非编码小分子RNA,靶向作用于人类近三分之一的基因,在细胞分化和生长发育等方面发挥重要作用。目前miRNA在代谢相关疾病中的研究尚少。本研究旨在阐明miRNA-152和-185在脂肪细胞分化过程中及胰岛素抵抗大鼠脂肪组织中的表达变化。方法3T3-L1前脂肪细胞状态良好时接种于培养板,待细胞融合2d后,加入分化诱导液(含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中加入0.5mmol/LIBMX、1 mol/L地塞米松、2 mol/L胰岛素),培养48h后,换成含有10%胎牛血清和2 mol/L胰岛素的DMEM/F12培养基,再培养48h后,换成仅含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,于诱导分化后0,3,6,9,12d收取细胞;应用高浓度胰岛素(100ng/ml)作用48h,诱导成熟脂肪细胞形成胰岛素抵抗。采用Real Time PCR检测miRNA-152和-185的表达水平。结果3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中由梭型逐渐变为圆形,分化6d后可见细胞内出现圆形脂滴,分化12d后可见85%～95%的3T3-L1细胞都分化为成圆形脂肪细胞,经油红染色可呈现鲜艳的红色;Real Time PCR检测显示:miRNA-152及-185在脂肪细胞分化过程中表达上调,其中miRNA-152在脂肪细胞分化第6d上调3.5倍,miRNA-185表达上调1.6倍(P<0.01)。成熟脂肪细胞形成胰岛素抵抗后miRNA-152及-185表达上调,分别为对照组的1.5倍和1.2倍。结论microRNA-152和-185参与脂肪细胞分化及胰岛素抵抗形成,其分子机制需进一步探讨。

关键词：胰岛素抵抗成熟脂肪细胞细胞分化 microRNA-152

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香加皮宝霍甙-Ⅰ诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡作用及其机制研究

香加皮宝霍甙-Ⅰ诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡作用及其机制研究

引用

第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：刘晓霞单保恩河北医科大学第四医院科研中心

目的:研究中药香加皮提取物宝霍甙-Ⅰ对食管癌细胞株Eca-109增殖、凋亡、细胞周期以及对Wnt/β-catenin信号转导通路相关基因的影响。方法:用MTT法分析不同浓度宝霍甙-Ⅰ作用不同时间后,对Eca-109细胞增殖反应的影响。采用逐步分离法、... 详细信息

目的:研究中药香加皮提取物宝霍甙-Ⅰ对食管癌细胞株Eca-109增殖、凋亡、细胞周期以及对Wnt/β-catenin信号转导通路相关基因的影响。方法:用MTT法分析不同浓度宝霍甙-Ⅰ作用不同时间后,对Eca-109细胞增殖反应的影响。采用逐步分离法、凝胶层析、高效液相色谱法等对香加皮提取物肿瘤活性成分进行分离与纯化。应用薄层层析和电喷雾质谱分析进行成分鉴定,得到宝霍甙-Ⅰ。应用光学显微镜、电子显微镜观察宝霍甙-Ⅰ对Eca-109细胞形态、超微结构的影响。用流式细胞术和RT-PCR法分析不同浓度（12.5 50 g/ml）宝霍甙-Ⅰ对Eca-109细胞周期、细胞凋亡、Cyclin B表达、Wnt/β-catenin信号转导通路中β-catenin、β-catenin/TCF及其下游基因Cyclin D、Survivin mRNA和蛋白表达的影响。结果:电喷雾质谱分析结果显示,香加皮正丁醇部分的10个成分中流分2中是一个活性成分,分子量为514。经氢谱和碳谱(HNMR和CNMR)验证,该种化合物为宝霍甙-Ⅰ（baohuoside-Ⅰ）。25、50 g/ml宝霍甙-Ⅰ作用48h后,能明显抑制Eca-109细胞增殖（P<0.01）,呈浓度及时间依赖性,可使细胞发生皱缩变圆,体积缩小,胞浆浓缩,核染色质固缩,边集于核膜下,胞浆出现空泡,形成凋亡小体和多核瘤巨细胞等;使Eca-109细胞的G/G期细胞比率下降（p<0.01）,G/M期细胞比率增高（p<0.01）,S期的比率降低,但变化不明显（P>0.05）;使Eca-109细胞Cyclin B蛋白表达水平降低（p<0.01）;诱导Eca-109细胞凋亡（p<0.01）,随宝霍甙-Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率明显增加。宝霍甙-Ⅰ作用48h后,Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D和Survivin mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论:宝霍甙-Ⅰ是香加皮正丁醇部分的抗肿瘤活性成分,可抑制Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡、发生G/M期阻滞。该作用可能与其下调Eca-109细胞Cyclin B、Cyclin D、Survivin表达,即通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路发挥抗肿瘤作用。

关键词：宝霍甙-Ⅰ Eca-109 细胞周期细胞凋亡 Wnt/β-catenin信号转导通路 Cyclin D1 Survivin

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