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6 篇 湖南中医药大学
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排序：

应用蛋白芯片研究PSP调节PBMC分泌细胞因子及信号转导机制

应用蛋白芯片研究PSP调节PBMC分泌细胞因子及信号转导机制

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：鲍依稀李雯雯赖思含徐灿卢芳重庆医科大学附属第二医院检验科

目的:在本课题组前期工作基础上,采用细胞因子抗体芯片检测云芝糖肽(PSP)对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响,并从基因水平和蛋白水平研究Toll-like蛋白受体信号转导途径中的关键基因,如:含TIR接头蛋白分子(TIR-contai... 详细信息

目的:在本课题组前期工作基础上,采用细胞因子抗体芯片检测云芝糖肽(PSP)对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响,并从基因水平和蛋白水平研究Toll-like蛋白受体信号转导途径中的关键基因,如:含TIR接头蛋白分子(TIR-containing adaptor molecule,TRIF),TRIF相关接头蛋白分子(TRIF-related adaptor molecule,TRAM),肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF-receptor associated factor,TRAF6),髓样细胞分化因子88(Myeloid different factory 88,MyD88),MyDS8接头蛋白样蛋白(MyD88 adaptor-like protein,MAL)等的表达水平,以及关键节点蛋白TRAF6,MyD88蛋白表达水平,从而探索PSP的免疫调节机制,进一步验证和探讨PSP免疫信号转导途径。方法:抽取健康成人外周血10mL,肝素抗凝,无菌条件下,Ficoll液常规方法分离PBMC,计数及活力测定,调整细胞浓度为2×10～6/mL,定量接种于两个细胞培养瓶内,分为PSP组和对照组。PSP组加入终浓度为25μg/mL的PSP药液及终浓度为100μg/mL的植物血凝素(PHA),对照组只加终浓度为100μg/mL的PHA。37℃,5%CO2条件下培养。应用细胞因子抗体芯片检测PSP作用于PBMC后分泌细胞因子的变化。采用RT-PCR、Western blot等方法进一步检测PSP对免疫信号转导途径中重要基因以及关键节点蛋白表达水平的影响。结果:在芯片所包含的23种细胞因子中,PSP组PBMC与对照组相比上调1.3倍的因子有5个:GCSF,GM-CSF,IL-1α,IL-6,IFN-γ:有所降低是:IL-2,IL-3,IL-5;对其他细胞因子的表达没有显著影响。Toll-like受体信号转导途径中TRAM、TRAF6基因表达水平显著增高(P<0.05),TRIF基因表达水平有所增高,MAL、MyD88基因表达水平有所降低,差别没有统计学意义(P>0.05)。TRAF6蛋白表达水平显著增高(P<0.05),MyD88蛋白表达水平有所降低,差别没有统计学意义(P>0.05)。结论:PSP可以调节免疫细胞的细胞因子分泌;MyD88依赖和TRIF依赖两条通路在PSP免疫信号转导中均发挥作用,其中以TRIF依赖途径为主,表明Toll-like蛋白受体途径可能是PSP免疫调节的重要信号转导通路之一。

关键词：细胞因子抗体芯片 PSP 信号转导机制

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The Expression of Neuropilin-1 and Its Correlation with Angiogenesis in Colorectal Cancer

The Expression of Neuropilin-1 and Its Correlation with Angi...

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者： Weiguo Xu~1,Xiaoqing Yang~2,Xiaodan Shi,Pengdong Zhang~1,Shizhu Hao~1,Chanchan Hu,Gang Wang 1.Department of Oncosurgery,Affiliated Hospital of North China Coal Medical College, Tangshang 06300,China 2.Department of general surgery,Weihai Municipal Hospital,Weihai 264200,China

Objective:To study the expression of NRP-lmRNA and detect microvessel density(MVD) in colorectal cancer,besides investigate the correlation between NRP-lmRNA and MVD according to know the role of NRP-1 in the process of tumor angiogenesis. Methods:In this study,45 specimens of colorectal cancer tissue and normal tissue were used *** expression of NRP-lmRNA in colorectal cancer was determined by means of reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) and MVD was figured out based on CD105 immunohistochemical staining. Results:In this study,over expression of NRP-lmRNA was found in colorectal *** positive case of NRP-lmRNA was 87.0%(39/45) in colorectal cancer,but in normal colon tissue was 6.7%(3/45).The expression of NRP-lmRNA had a good correlation with the tumor size,infiltrating depth,lymph node metastasis(p<0.05),but no correlation was found with the tumor position,histological types,differentiation degree and the gender or age of patients(p>0.05).A close positive correlation was present between NRP-1mRNA and MVD(R=0.38,p=0.01). Conclusions:NRP-1 may play a part in the angiogenesis of the colorectal cancer and its high expression represented the malignant biological behavior trend.

关键词： colorectal cancer neuropilin 1(NRP-1) microvessel density(MVD) CD105 angiogenesis

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β2受体激动剂干预癌性恶病质的实验研究

β2受体激动剂干预癌性恶病质的实验研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：姜达池菲河北医科大学第四医院肿瘤内科

目的:通过构建癌性恶病质动物模型,初步探讨β2受体激动剂早期抗恶病质作用及可能机制。方法:处死恶病质动物后用全自动生化分析仪测定恶病质小鼠营养代谢指标、放射免疫法血清细胞因子水平,显微镜观察腓肠肌纤维萎缩情况,免疫组化法测... 详细信息

目的:通过构建癌性恶病质动物模型,初步探讨β2受体激动剂早期抗恶病质作用及可能机制。方法:处死恶病质动物后用全自动生化分析仪测定恶病质小鼠营养代谢指标、放射免疫法血清细胞因子水平,显微镜观察腓肠肌纤维萎缩情况,免疫组化法测定腓肠肌中肌肉生长抑制素表达情况。结果:1一般状况及去瘤体重:最初各组小鼠体重无明显差异(P>0.05)。荷瘤15天CC组恶化最明显;MPA组、PG组、FG组去瘤体重大于CC组(P<0.05);PG组较MPA组、FG组能显著增加去瘤体重(P<0.05);FG组去瘤体重大于MPA组(P>0.05)。2生化指标:CC组小鼠血糖最低(P<0.05);MPA组血清中总胆固醇低于CC组(P<0.05);CC组总蛋白水平较HC组小鼠无明显降低(P>0.05);各荷瘤组小鼠总蛋白与HC组相比无明显差别(P>0.05)。3血清细胞因子:各组荷瘤小鼠TNF-α高于HC组(P<0.05);药物干预后MPA组、PG组、FG组小鼠血清TNF-α较CC组显著降低(P<0.05);PG组TNF-α低于MPA组(P<0.05);FG组TNF-α低于MPA组(P>0.05);PG组较FG组能明显降低TNF-α(P<0.05)。各组荷瘤小鼠IGF-1明显低于HC组(P<0.05);药物干预后MPA组、PG组、FG组IGF-1与CC组无明显差别(P>0.05)。4腓肠肌:各组荷瘤小鼠腓肠肌湿重较HC组有明显下降(P<0.05),PG组、FG组明显大于CC组、MPA组(P<0.05),PG组明显大于FG组(P<0.05);荷瘤组腓肠肌均有萎缩,横截面最大横径均小于HC组(P<0.05),药物干预后PG组、FG组明显大于CC组、MPA组(P<0.05),PG组大于FG组(P<0.05),CC组与MPA组比较无明显差别(P>0.05)。5 Myostatin表达:荷瘤小鼠Myostatin表达均明显高于HC组(P<0.05);药物干预后PG组、FG组小鼠腓肠肌中Myostatin蛋白表达量较CC组明显降低(P<0.05);MPA组与CC组比较无明显差别(P>0.05);PG组小鼠腓肠肌中Myostatin蛋白表达明显低于FG组(P<0.05)。6生存期:治疗组生存期较CC组延长(P<0.05);MPA组小鼠的生存期与PG组无明显差别(P>0.05);FG组较PG组能明显延长生存期(P<0.05)。结论:福莫特罗可以抑制骨骼肌蛋白的降解而发挥早期抗恶病质作用;醋酸甲羟孕酮降低血清TNF-α水平,调节代谢,延长恶病质小鼠的生存期。

关键词：癌性恶病质福莫特罗腓肠肌肌肉生长抑素胰岛素样生长因子-1 肿瘤坏死因子-α

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细胞因子IL-2和IL-6对肝癌细胞表达VEGF-B的调节

细胞因子IL-2和IL-6对肝癌细胞表达VEGF-B的调节

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：唐瑞峰田贵金徐卓孙超苑建磊齐帅李智峰张志明河北医科大学第四医院肝胆外科

目的原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其临床症状出现晚,症状出现后大多已是中晚期,手术切除率低,预后差。其原因是肿瘤具有强大的生长和转移能力,而侵袭和转移与VEGF家族有关。VEGF-B是VEGF家族的成员之一,通过诱导血管生成,促进... 详细信息

目的原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其临床症状出现晚,症状出现后大多已是中晚期,手术切除率低,预后差。其原因是肿瘤具有强大的生长和转移能力,而侵袭和转移与VEGF家族有关。VEGF-B是VEGF家族的成员之一,通过诱导血管生成,促进癌细胞血行扩散。VEGF家族的表达受多种细胞因子的调节,白细胞介素2、6(IL-2、IL-6)是人体中常见的细胞因子,具有非常复杂的生物学功能,可以通过影响细胞的粘附力、活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖而影响肿瘤的进展,也可以通过调节VEGF家族的表达来影响肿瘤的生物学特性。本研究的目的在于分析IL-2及IL-6对人肝癌细胞表达VEGF-B的调节,进一步明确肝癌侵袭及转移的机制,为探讨肝癌新的治疗途径提供实验基础。探讨细胞因子白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)对肝癌细胞表达VEGF-B的调节,进一步明确肝癌侵袭及转移的机制,为探讨肝癌新的治疗途径提供实验基础。方法以细胞因子IL-2或IL-6分别刺激肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7402后用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)分析其VEGF-B基因的表达。结果IL-2抑制肝癌细胞株SMMC-7721VEGF-B mRNA表达,并在0.1～200μg/L范围内随浓度的增加,抑制作用逐步增强,但与作用时间无明显关系。IL-2抑制肝癌细胞株BEL-7402 VEGF-B mRNA表达,随浓度的增加,抑制作用逐步增强,3小时组0.1μg/L与1μg/L实验组之间VEGF-B mRNA的表达无统计学差异(P=0.488),12小时组0.1μg/L与1μg/L实验组之间VEGF-B mRNA的表达无统计学差异(P=0.074)。但与作用时间无明显关系。IL-6促进肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF-B mRNA表达,并与浓度呈负相关。IL-6对肝癌细胞株BEL-7402表达VEGF-B mRNA无明显影响。结论IL-2抑制肝癌细胞VEGF-B mRNA的表达,从而抑制肝癌血行转移;IL-6促进某些肝癌细胞VEGF-B mRNA的表达,但对肝癌细胞生物学特性的影响有待于进一步深入研究。

关键词：肝癌 IL-2 IL-6 VEGF-B RT-PCR

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化疗对乳腺癌干细胞不同标志物影响的实验研究

化疗对乳腺癌干细胞不同标志物影响的实验研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：王欣荣单保恩河北医科大学第四医院科研中心

目的:肿瘤干细胞（TSC）的理论认为TSC具有自我更新和分化为各种肿瘤细胞的能力,TSC具有放疗和化疗抵抗性。有研究表明化疗后患者复发肿瘤的TSC比例增高。本研究探讨乳腺癌患者初发肿瘤及经术后化疗复发的肿瘤中各种TSC标志物的变化,并... 详细信息

目的:肿瘤干细胞（TSC）的理论认为TSC具有自我更新和分化为各种肿瘤细胞的能力,TSC具有放疗和化疗抵抗性。有研究表明化疗后患者复发肿瘤的TSC比例增高。本研究探讨乳腺癌患者初发肿瘤及经术后化疗复发的肿瘤中各种TSC标志物的变化,并利用小鼠乳腺癌模型分析化疗对乳腺癌干细胞不同标志物的影响,为不同TSC标志物在TSC的研究中的应用提供理论依据;并建立富集乳腺癌干细胞的动物模型,为靶向TSC治疗的动物实验提供实验动物。方法:乳腺癌患者初发肿瘤标本及经过化疗复发的肿瘤组织标本共22例,一一配对。普通BALB/C小鼠肩胛部接种乳腺癌4T1细胞,第二天开始根据不同分组给予高、中、低不同浓度的5-氟尿嘧啶化疗,一周一次共5次,最后一次化疗后一周取肿瘤组织标本进行检测。利用流式细胞术分别检测各标本中CD44CD24细胞比例,利用免疫组织化学方法检测ALDH1和CD55表达。ALDH1的表达采用镜下观察的方法确定ALDH1表达的阳性呈度（阴性,+,++,+++,++++）;CD55表达仅关注强表达的肿瘤细胞,计数10000个肿瘤细胞中强表达CD55的细胞数。所有资料的统计分析采用SPSS13.0软件进行。结果:临床初发肿瘤CD44CD24细胞比例为11%±5%,ALDH1表达阳性度为阴性到++,CD55强表达细胞数为0.2%～7%;化疗后复发瘤CD44CD24细胞比例为56%±9%,ADH1表达阳性度为++到++++;CD55强表达细胞数为22%～47%。各指标临床初发肿瘤与复发瘤相比均差异显著。小鼠模型未用化疗组CD44CD24细胞比例为8%,ALDH1表达为+,CD55强表达细胞数为0.6%;利用高、中、低不同浓度5-氟尿嘧啶化疗后CD44CD24细胞比例为65%～83%,ALDH1表达为++到++++,CD55强表达细胞数为34%～48%。小鼠模型化疗组各指标与未用化疗组比较差异显著,而高、中、低不同浓度组比较差异不显著。结论:化疗药物可以富集乳腺癌干细胞,经化疗后TSC比例明显增加。ALDH1和CD55作为新的TSC标志物在评价乳腺癌干细胞含量时与乳腺癌干细胞公认的标志物CD44CD24细胞数量存在相关性,可做为补充使用。利用化疗药物可以建立富含乳腺癌干细胞的动物模型,为靶向TSC的治疗实验提供动物模型。

关键词：乳腺癌肿瘤干细胞化疗 ALDH1 CD55

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Neuropilin-1、VEGF在胃癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

Neuropilin-1、VEGF在胃癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：张鹏东徐卫国贾纯亮赵建红华北煤炭医学院附属医院肿瘤外科

目的通过检测胃癌组织和癌旁组织中NRP-1、VEGF的表达情况以及MVD值,分析NRP-1和VEGF与胃癌的肿瘤血管生成之间的关系并进一步探讨其临床意义。方法RT-PCR法检测76例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中NRP-1mRNA和VEGFmRNA的表达情况,免疫组... 详细信息

目的通过检测胃癌组织和癌旁组织中NRP-1、VEGF的表达情况以及MVD值,分析NRP-1和VEGF与胃癌的肿瘤血管生成之间的关系并进一步探讨其临床意义。方法RT-PCR法检测76例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中NRP-1mRNA和VEGFmRNA的表达情况,免疫组织化学SP法检测76例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CD105标记的新生血管内皮细胞并计算MVD值,SPSS13.0软件分析NRP-1和VEGF在胃癌组织及癌旁组织中的表达以及NRP-1、VEGF及MVD之间的关系。结果1.76例胃癌组织中63例有NRP-1mRNA的表达,阳性率为82.89%,相应癌旁组织中仅有2例表达,阳性率为2.63%,二者比较差异有显著性（x=100.016,P=0.000）。胃癌组织中NRP-ImRNA的表达量为4.41e+04±1.52e+04,而相应的癌旁组织为1.19e+04±1.26e+04,二者比较差异有显著性（t=4.125,P=0.012）。胃癌组织中NRP-1mRNA的表达程度与肿瘤分期（F=2.126,P=0.033）、大小（F=2.528,P=0.024）、浸润深度（t=3.223,P=0.030）、淋巴结转移（t=2.644,P=0.010）呈正相关,与肿瘤病理分型、分化程度、患者的性别及年龄无关（p>0.05）。2.76例胃癌组织中48例有VEGFmRNA的表达,阳性率为63.16%,相应正常组织中有11例表达,阳性率为14.47%,二者比较差异有显著性（x=37.924,P=0.000）。胃癌组织中VEGFmRNA的表达量为4.11e+04±1.20e+04,而相应的癌旁组织为2.61e+04±1.32e+04,二者比较差异有显著性（t=2.424,P=0.025）。胃癌组织中VEGFmRNA的表达程度与肿瘤分期（F=2.375,P=0.028）、分化程度（F=1.745,P=0.033）、浸润深度（t=2.288,P=0.035）、淋巴结转移（t=3.288,P=0.022）呈正相关,与肿瘤大小、肿瘤生病理分型、患者的性别及年龄无关。3.76例胃癌组织的MVD值中位数为14.25±3.28,而相应的癌旁组织MVD值为9.33±1.26,胃癌组织的MVD显著高于癌旁组织（t=3.18,P=0.030）。4.胃癌组织中的NRP-1的表达与VEGF的表达呈正相关（r=0.58,P<0.01）;胃癌组织中的NRP-1的表达与MVD呈正相关（r=0.52,P<0.01）;胃癌组织中的VEGF的表达与MVD呈正相关（r=0.74,P<0.01）。结论1.胃癌组织中NRP-1、VEGF的表达升高。NRP-1和VEGF表达升高可能促进了胃癌的肿瘤血管生成,并与胃癌的局部侵润和淋巴结转移相关。***-1的表达与VEGF的表达呈正相关,NRP-1可能通过VEGF途径促进胃癌的肿瘤血管生成。***-1及VEGF的联合检测可在一定程度上判断胃癌侵袭性及预后,NRP-1有望成为一个新的抗肿瘤治疗的靶点。

关键词：胃癌 NRP-1 VEGF MVD 肿瘤血管生成

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Livin和Survivin蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义

Livin和Survivin蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：孟庆军孟宪利河北医科大学第四医院暨河北省肿瘤医院胸外科

目的:Livin蛋白(又为ML-IAP或KIA)与Survivin蛋白是与肿瘤发生发展密切相关的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apop-tosks proteins,IAPs)中的成员。Livin及其家族的存在,使肿瘤细胞对缺血、缺氧、放化疗等作用产生耐受,肿瘤细胞从而得... 详细信息

目的:Livin蛋白(又为ML-IAP或KIA)与Survivin蛋白是与肿瘤发生发展密切相关的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apop-tosks proteins,IAPs)中的成员。Livin及其家族的存在,使肿瘤细胞对缺血、缺氧、放化疗等作用产生耐受,肿瘤细胞从而得以持续生长。作为IAPs家族中的新成员,最早发现Livin在恶性黑色素瘤中高表达,之后,又在肺癌、膀胱癌、白血病等多种肿瘤组织中检测到高表达的Livin,但与之相对应的正常组织中却没有或者仅有极低水平的表达。食管癌是食管鳞状上皮的恶性肿瘤,是人类常见的恶性肿瘤之一。中国是食管癌的高发地区,也是本病死亡率最高的国家之一,年平均死亡率为14.59/10万。发病年龄多在40岁以上,男性多于女性。当前,临床治疗食管癌的方法较多,如手术、放疗、化疗、生物治疗等,但无论哪种治疗方法都有一定的局限性,单用一种方法治疗往往得不到令人满意的疗效。本研究旨在通过检测Livin和Survivin在食管鳞癌中的表达情况,来探讨Livin与Survivin对食管鳞癌发生、发展的影响,为食管癌的临床治疗研究提供科学的理论依据。方法:采用流式细胞分析技术对食管鳞状细胞癌患者的癌组织进行Livin和Survivin的计量分析。标本取自河北医科大学第四医院胸外科2008年6月到9月通过手术治疗的部分食管鳞癌患者的新鲜癌组织50例。以同期50例食管癌旁组织作为对照。用组织剪剪取新鲜标本约0.5cm×0.5cm×0.5cm大小的组织块1-2块,依次进行过滤、离心、标抗等步骤,最后用流式细胞仪对标抗好的单细胞悬液组织进行流式分析,以PBS液作为阴性对照,只加二抗(FITC)作为阳性对照,检测结果以平均荧光强度(x-mode)表示检测物中蛋白的含量。采用SPSS13.0统计软件进行分析。结果:(1)Livin蛋白在不同组织中的表达情况:与癌旁组织相比,Livin蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的平均荧光强度表达增强(165±50 vs 85±31,P<0.05)。(2)Survivin蛋白在不同组织中的表达情况:与癌旁组织相比,Survivin蛋白在癌组织中的平均荧光强度表达增强(439±53 vs 342±62,P<0.05)。(3)Livin蛋白及Survivin蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与临床病理特征的关系:Livin蛋白及Survivin蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度无关,与淋巴结转移,癌组织浸润深度及临床病理分期之间有统计学差异(P<0.05)。(4)Livin蛋白与Survivin蛋白在癌组织中的相互关系:Livin蛋白与Survivin蛋白在癌组织中的表达无相关性(r=0.205,P>0.05)结论:livin和survivin将有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点,且在食管癌的诊断,治疗和评估预后中有独立的作用,可以结合应用。

关键词：食管鳞癌远癌组织 Livin Survivin

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IL-2和IL-6对肝癌细胞表达VEGF-D的调节

IL-2和IL-6对肝癌细胞表达VEGF-D的调节

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：徐卓田贵金唐瑞峰孙超苑建磊齐帅李智峰张志明河北医科大学第四医院肝胆外科

目的:原发性肝癌是常见的消化系恶性肿瘤。血行和淋巴转移是肝癌术后高复发率的主要原因,也是影响肝癌术后生存率的主要因素。VEGF-D是血管内皮生长因子家族成员之一,研究表明VEGF-D可诱导淋巴管生成,促进癌细胞淋巴扩散,因此又被称为... 详细信息

目的:原发性肝癌是常见的消化系恶性肿瘤。血行和淋巴转移是肝癌术后高复发率的主要原因,也是影响肝癌术后生存率的主要因素。VEGF-D是血管内皮生长因子家族成员之一,研究表明VEGF-D可诱导淋巴管生成,促进癌细胞淋巴扩散,因此又被称为淋巴管内皮生长因子。白细胞介素2、6(Interleukin-2,IL-2、Interleukin-6,IL-6)是人体中常见的炎症介质,具有复杂的生物学功能,与血管内皮因子家族的表达密切相关。本研究采用RT-PCR技术检测分析IL-2及IL-6刺激肝癌细胞株前后VEGF-D mRNA的表达,探讨其对人肝癌细胞VEGF-D表达的调节,进一步明确肝癌侵袭及转移机制,为肝癌新的治疗途径提供实验基础。方法:人肝癌细胞株BEL-7402和SMML-7721常规细胞培养。然后分别更换为含有0.1μg/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L、200μg/L的IL-2或IL-6的0.1%胎牛血清的培养基作为实验组,分别培养3、6、12、24小时,以加人等剂量的磷酸钠盐缓冲液(PBS)作为对照组,用RT-PCR技术测定刺激前后肝癌细胞株VEGF-D mRNA的表达。实验数据采用SPSS13.0统计软件进行分析。结果:IL-2抑制肝癌细胞株BEL-7402 VEGF-D mRNA的表达,与IL-2的浓度及作用时间无明显关系。IL-2抑制肝癌细胞株SMML-7721 VEGF-D mRNA的表达,并在0.1～100μg/L范围内随浓度的增加,抑制作用逐步增强,但与作用时间无明显关系。IL-6促进肝癌细胞株BEL-7402VEGF-D mRNA的表达,但与作用浓度及时间无明显关系。IL-6促进肝癌细胞株SMML-7721 VEGF-DmRNA的表达,在1～200μg/L范围内,随浓度的增加,抑制作用逐步增强。1μg/L、10μg/L实验组与作用时间呈正相关,100μg/L、200μg/L实验组与作用时间无明显相关性。结论:IL-2抑制肝癌细胞BEL-7402和SMML-7721 VEGF-D mRNA的表达,从而抑制肝癌淋巴转移;IL-6促进肝癌细胞BEL-7402和SMML-7721 VEGF-D mRNA的表达,但对肝癌细胞生物学特性的影响有待于进一步深入研究。

关键词：肝癌 VEGF-D IL-2 IL-6 RT-PCR

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香加皮三萜类化合物对荷食管癌细胞裸鼠抑瘤作用的研究

香加皮三萜类化合物对荷食管癌细胞裸鼠抑瘤作用的研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：王丽芳单保恩单铁强河北医科大学第四医院科研中心

目的:观察TCCP对荷食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其体内对荷食管癌移植瘤的抑制作用。方法:将稳定表达荧光素酶基因(Luc)的人食管癌细胞株Eca109-luc细胞接种于裸鼠左侧肋腹部皮下,建立Eca109-luc细胞荷瘤裸鼠模型,待肿瘤生长... 详细信息

目的:观察TCCP对荷食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其体内对荷食管癌移植瘤的抑制作用。方法:将稳定表达荧光素酶基因(Luc)的人食管癌细胞株Eca109-luc细胞接种于裸鼠左侧肋腹部皮下,建立Eca109-luc细胞荷瘤裸鼠模型,待肿瘤生长至直径约5-7mm时,将裸鼠随机分为生理盐水处理组和TCCP(20mg/kg)治疗组,每组7只,隔日于瘤周注射生理盐水或药物一次,疗程4周。应用美国精诺真活体成像系统(Xenogen IVIS Imaging System)观察肿瘤生长情况,采用流式细胞仪分析肿瘤组织细胞的凋亡率;用RT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因Fas和Survivin的表达变化。结果:1经TCCP(20mg/kg)治疗荷Eca109-luc细胞裸鼠后,肿瘤的生长受到明显抑制,肿瘤体积明显小于盐水处理组(P<0.01);TCCP治疗组移植瘤的质量(0.82±0.14)g显著低于对照组(1.38±0.36)g(p<0.05),对肿瘤生长的抑制率为40.7%。2经精诺真体内成像系统检测结果显示,TCCP治疗前裸鼠肿瘤光子数的平均值为5.47E+06±1.12E+06,与盐水处理组相比(5.02E+06±1.03E+06)无统计学差异(P>0.05);TCCP治疗后1、2、3、4周荷瘤裸鼠肿瘤的光子数分别为7.65E+06±2.14E+06、6.18E+07±1.36E+07、1.70E+08±1.14+08、5.53E+08±1.01E+08,均显著低于同时间点生理盐水处理组(6.48E+07±1.25E+07、3.65E+08±1.42E+08、7.64E+08±3.02E+07、3.34E+9±4.78E+08)(P均<0.01)。3 FCM检测结果显示,TCCP治疗组裸鼠移植瘤细胞的凋亡率(32.5±1.2%)明显高于盐水处理组(11.6±1.0%),差异有显著性(P<0.05)。4 RT-PCR分析结果显示,TCCP治疗组裸鼠瘤组织中Fas mRNA表达水平显著高于盐水处理组(P<0.01);而TCCP治疗组裸鼠瘤组织中Survivin mRNA的表达水平则显著低于盐水处理组(P<0.01)。5 Western blot检测结果显示,TCCP治疗组荷瘤裸鼠瘤组织中Fas蛋白表达水平(0.725±0.046)明显高于盐水处理组(0.297±0.026)(P<0.01);而TCCP治疗组瘤组织中Survivin蛋白表达的水平(0.052±0.003)明显低于盐水对照组(0.387±0.016)(P<0.05)。结论:TCCP在体内能明显抑制食管癌细胞增殖,其作用机制可能是调节Fas/FasL分子表达、下调肿瘤组织凋亡抑制基因Survivin的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡有关。

关键词：食管癌细胞 Survivin 肿瘤组织肿瘤生长抑瘤作用三萜类化合物香加皮

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树突状细胞介导的特异性免疫应答和对口腔癌细胞抑制作用的机制初探

树突状细胞介导的特异性免疫应答和对口腔癌细胞抑制作用的机制初...

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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：张素欣段玉芹陈中郭兰涛陈彦平王世杰河北医科大学第四医院暨河北省肿瘤医院口腔科

目的:研究不同方式负载抗原后,外周血单个核细胞来源的树突状细胞（DC）的形态、表型和功能,探讨DC介导的特异性抗肿瘤应答机制。方法:采集健康志愿者外周血,体外诱导培养DC,并将其分为未处理组、冻融组和RNA转染组。细胞培养至第7d,检... 详细信息

目的:研究不同方式负载抗原后,外周血单个核细胞来源的树突状细胞（DC）的形态、表型和功能,探讨DC介导的特异性抗肿瘤应答机制。方法:采集健康志愿者外周血,体外诱导培养DC,并将其分为未处理组、冻融组和RNA转染组。细胞培养至第7d,检测细胞表面分子的表达情况;收集细胞毒性T细胞（CTL）细胞,以异体卵巢癌细胞作对照,检测CTL对口腔癌细胞的特异性杀伤活性及各组CTL培养上清中IFN-γ的分泌量。建立舌癌裸鼠荷瘤模型,随机分成4组,A组为阴性对照组;B组为未处理组;C组为负载肿瘤抗原组;D组为RNA转染组。接种肿瘤5周处死裸鼠,检测肿瘤组织细胞周期的改变和细胞凋亡情况,测定荷瘤鼠体内外周血中CD4和CD8T细胞表型变化。结果:人外周血单个核细胞体外诱导7d后,有明显树突状突起。不同抗原负载方式对DC细胞表型CD83、CD1a、HLA-DR、CD86和CD80的表达率的影响无显著性差异（P>0.05）。抗原负载后,IFN-γ分泌量显著增加（P<0.05）。荷瘤鼠在接受治疗后,A组肿瘤持续增长,荷瘤鼠出现形体消瘦;B组5天内肿瘤体积缩小,但一周左右肿瘤再度生长,至处死时裸鼠体内肿瘤的大小与未治疗组差异有统计学意义（P<0.05）;C组、D组肿瘤生长缓慢,至处死时两组肿瘤大小与A、B组相比有明显差异（P<0.01）,D组CTL抑瘤效果优于C组。与A组相比,B、C、D组移植瘤细胞G0/G1期细胞比率显著增多（P<0.01）,S期细胞比率无显著变化（P>0.05）,而G2/M期细胞比率和PI值显著降低（P<0.05）,且B、C、D三组之间均有显著性差异（P<0.05）;从DNA直方图上可以看出,A组瘤细胞凋亡现象不明显,而B、C、D组瘤细胞的凋亡率显著增加（P<0.01）。与A组相比,B、C、D组荷瘤鼠外周血中CD4、CD8T细胞比例均显著升高（P<0.01）,C、D组CD4T细胞标记率下降,CD8T细胞标记率上升,与B组相比差异显著（P<0.05）。结论:1用肿瘤裂解物负载和经RNA转染加载肿瘤抗原方式,均可以促进口腔癌患者外周血中DC的成熟,使其表面分子和共刺激分子等表达上调。2.负载肿瘤抗原的DC诱导产生的CTL可以有效控制荷瘤鼠体内口腔癌细胞的生长,其中RNA转染组DC的特异性杀伤活性高于肿瘤裂解物负载组。负载肿瘤抗原DC所介导的CTL特异性杀伤作用的机制之一是改变移植瘤细胞的细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡。***诱导的杀伤性T细胞中,CD4T细胞数量下降,CD8T细胞数量上升,表明在对口腔癌的特异性杀伤过程中,CD8T细胞发挥着重要作用。

关键词：舌癌树突状细胞肿瘤裂解物肿瘤总RNA 肿瘤免疫

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