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4 篇 中国药品生物制品...
4 篇 中国药品生物制品...
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作者

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我国HIV-1CRF01AE和CRF07BC亚型流行株全长基因组克隆的构建

我国HIV-1CRF01AE和CRF07BC亚型流行株全长基因组克隆的构建

引用

第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：韩婧婉王铮李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所

目的构建HIV-1 CRF01AE和CRF07C亚型流行毒株的全长基因组克隆。方法 HIV的基因组较长,需用MLU1酶将其分为两个半分子（2.9kb和6.9kb）进行扩增,然后利用低拷贝质粒pLG338为载体构建HIV-1YA001毒株（CRF01E亚型）和YA004毒株（CRF07C亚... 详细信息

目的构建HIV-1 CRF01AE和CRF07C亚型流行毒株的全长基因组克隆。方法 HIV的基因组较长,需用MLU1酶将其分为两个半分子（2.9kb和6.9kb）进行扩增,然后利用低拷贝质粒pLG338为载体构建HIV-1YA001毒株（CRF01E亚型）和YA004毒株（CRF07C亚型）的全长基因组克隆,将克隆所得全长基因组进行测序并进行序列分析。结果得到CRF01E和CRF07C亚型毒株的全长基因组克隆各4株,并通过测序得到模板毒株YA001和YA004的全部序列信息及其系统进化分析和重组分析结果 ,但TCID50和p24抗原测定结果显示,实验所得的全长基因组克隆还不具备感染性。结论得到在我国广泛流行的HIV-1 CRF01E和CRF07C亚型毒株的全长基因组克隆,鉴定了毒株的基因组序列和重组特征,但尚未获得由全长基因组克隆包装出来的感染性病毒,可能由于基因突变导致了感染性缺失,下一步将纠正序列可能存在的突变,并改进转染方法 ,以获得这两株病毒的感染性克隆。

关键词：人类免疫缺陷病毒CRF01AE CRF07BC全长基因组克隆序列分析

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快速梅毒螺旋体抗体检测试验的实验室初步评价

快速梅毒螺旋体抗体检测试验的实验室初步评价

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：尹跃平施美琴王洪春余艳华中国医学科学院皮肤病研究所中国疾病预防控制中心性病控制中心

目的对不同国家生产的7种快速梅毒螺旋体抗体检测试验效果进行实验室评价,筛选敏感、特异、快速、简便、价廉的快速特异性梅毒螺旋体抗体检测方法。方法以世界卫生组织推荐的TPPA方法作为"金标准",采用盲法,分别对92份TPPA阳... 详细信息

目的对不同国家生产的7种快速梅毒螺旋体抗体检测试验效果进行实验室评价,筛选敏感、特异、快速、简便、价廉的快速特异性梅毒螺旋体抗体检测方法。方法以世界卫生组织推荐的TPPA方法作为"金标准",采用盲法,分别对92份TPPA阳性血清和阴性血清进行快速试验检测,检测结果由2位观察人员分别判读纪录,并在第一次判读结果后一小时读取第二次结果 ,以评价7种快速试验的敏感性、特异性、结果判读的一致性以及稳定性等。结果 7种快速试验的敏感性为70.8%～97.9%,其中三种快速试验的敏感性较高,与另外四种统计学分析比较有显著性差异;7种方法的特异性为89%～95%,统计学分析各方法之间均无显著性差异;所有结果判读的一致性及稳定性都很高。结论实验室对7种快速特异性梅毒螺旋体抗体检测试验效果的实验室评价结果表明:Determine(Abbott,美国)及Bioline(Standard,韩国)有较高的敏感性和特异性,且操作简便、相对价廉,可望作为理想的梅毒螺旋体抗体快速检测试剂推广应用。

关键词：梅毒快速试验免疫层析

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河南某农村艾滋病患者劣势耐药毒株的进化及原发耐药研究

河南某农村艾滋病患者劣势耐药毒株的进化及原发耐药研究

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：李韩平郭伟朱新鹏王哲刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病源微生物生物安全国家重点实验室河南省疾病预防控制中心

目的了解河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗效果及耐药发生情况,分析劣势耐药毒株在该人群本底存在情况。方法以河南某农村149名初始接受抗病毒治疗的艾滋病患者为研究对象,采用自建(In-house)基因型耐药检测方法分析抗病毒治疗失败患者HI... 详细信息

目的了解河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗效果及耐药发生情况,分析劣势耐药毒株在该人群本底存在情况。方法以河南某农村149名初始接受抗病毒治疗的艾滋病患者为研究对象,采用自建(In-house)基因型耐药检测方法分析抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药发生情况,对抗病毒治疗后产生耐药的病例采用等位基因特异性实时定量ASPCR(Allele-specific real-time PCR)方法检测其抗病毒治疗前样本劣势耐药毒株存在情况。结果抗病毒治疗后患者的HIV-1病毒载量显著下降(t=275,p=0.0001),但CD4+T淋巴细胞绝对数无明显变化(t=1.765168,p=0.0852)。抗病毒治疗失败患者中耐药的发生率为4.88%,ASPCR检测发现,在调查基线时,7例耐药患者全部存在劣势M184V突变、5例存在劣势K103N突变。结论河南省部分未治疗的艾滋病患者存在HIV-1原发性耐药毒株,劣势耐药突变可能发展为优势耐药毒株并影响抗病毒治疗的效果。

关键词：抗病毒治疗原发耐药 In-house ASPCR

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磁珠法快速提取乙型肝炎病毒DNA的研究及其在诊断试剂中的应用

磁珠法快速提取乙型肝炎病毒DNA的研究及其在诊断试剂中的应用

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：陆佳飞周克隆王缦华东理工大学生物工程学院生物化学与分子生物学上海科华生物工程股份有限公司

目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度的血液病毒核酸的提取方法。使之在充分保留了现有煮沸法便捷特性的情况下,增强其抗干扰性能力,为核酸定量检测的全自动化提供有效支撑。方法以乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的提取为例,研制出... 详细信息

目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度的血液病毒核酸的提取方法。使之在充分保留了现有煮沸法便捷特性的情况下,增强其抗干扰性能力,为核酸定量检测的全自动化提供有效支撑。方法以乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的提取为例,研制出一套快速的、适用于临床诊断的磁珠抽提方法。通过平行检测100例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、灵敏度、特异性、精密度等方面与已在临床广泛应用的、成熟的煮沸法进行相关性分析;并用肝素钠、乳糜、EDTA对两种方法进行抑制物干扰实验和线性分析。结果磁珠法在精密度、灵敏度、特异性等方面都优于煮沸法,但两种方法在常规标本的检测中无显著的差异;在抑制物方面,当肝素钠浓度达到62.5U/ml后,对煮沸法提取的高低浓度的HBV-DNA阳性样本有明显的抑制作用,而磁珠法并不显著;血脂对两种方法提取的HBV-DNA含量干扰不明显,EDTA对高浓度的阳性标本有很明显的抑制作用。结论采用以磁珠法为基础的核酸提取方法 ,核酸得率高,具有较宽的检测范围和定量准确性,操作简单,可做为实验室首选的核酸提取方法 ,并可应用于临床诊断。

关键词：磁珠法煮沸法HBV-DNA PCR

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国产甲型肝炎灭活疫苗接种2岁以上人群的安全性和免疫原性研究

国产甲型肝炎灭活疫苗接种2岁以上人群的安全性和免疫原性研究

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：黄腾李艳萍万宗举刘幼平蔡祥勇李荣成董延秀广西壮族自治区疾病预防控制中心中国药品生物制品检定研究院广西梧州市疾病预防控制中心广西苍梧县疾病预防控制中心广西岑溪市疾病预防控制中心

目的比较长春百克甲肝灭活疫苗(Vero细胞)与市售甲肝灭活疫苗在2岁以上人群中的安全性和免疫原性。方法采用随机、研究者设盲的对照研究方法 ,按照3:2的比例分别给予2100名2岁以上健康人(按年龄分为2组:2～17岁儿童组1200名,≥18岁成人... 详细信息

目的比较长春百克甲肝灭活疫苗(Vero细胞)与市售甲肝灭活疫苗在2岁以上人群中的安全性和免疫原性。方法采用随机、研究者设盲的对照研究方法 ,按照3:2的比例分别给予2100名2岁以上健康人(按年龄分为2组:2～17岁儿童组1200名,≥18岁成人组900名)接种长春百克生物科技有限公司生产的甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)(简称百克甲肝疫苗)和北京科兴生物技术有限公司生产的甲肝灭活疫苗(简称科兴甲肝疫苗),观察接种日和接种后30天内的局部反应和全身反应;采用酶联免疫吸附试验方法 (ELISA)检测接种对象免疫前后的甲肝抗体(HAV-IgG)滴度。结果两组疫苗的局部反应和全身反应相似,均未见局部和全身严重不良反应。于免疫前后分别对1143人和782人采血做ELISA试验,成人和儿童百克组免后血清抗体阳转率为99.61%和99.53%;科兴组分别为99.41%和100.00%。百克组非劣效于科兴组。成人和儿童百克组免后抗体浓度为8009.72 mIU/ml和4178.13 mIU/ml;科兴组为7642.83 mIU/ml和8655.88 mIU/ml。成人组间无统计学差别(p>0.05);儿童的百克组低于科兴组(p<0.05)。结论 2岁以上人群对长春百克甲肝灭活疫苗耐受性良好,抗体应答与市售的国产同类疫苗相似,可以推广使用。

关键词：甲肝疫苗安全性免疫原性

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毕赤酵母表达RANKL-HBsAg作为治疗性骨质疏松症疫苗的研究

毕赤酵母表达RANKL-HBsAg作为治疗性骨质疏松症疫苗的研究

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：何成楼觉人上海生物制品研究所

目的用毕赤酵母表达的RANKL-HBsAg免疫小鼠,诱导其产生针对RANKL的中和抗体,考察免疫血清对于RANKL/RANK信号通路的阻断作用以及RANKL-HBsAg免疫后对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型症状的影响。方法将RANKL融合于HBsAg基因片段的N端,用... 详细信息

目的用毕赤酵母表达的RANKL-HBsAg免疫小鼠,诱导其产生针对RANKL的中和抗体,考察免疫血清对于RANKL/RANK信号通路的阻断作用以及RANKL-HBsAg免疫后对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型症状的影响。方法将RANKL融合于HBsAg基因片段的N端,用毕赤酵母胞内表达系统进行高拷贝数克隆的构建和表达。重组菌体诱导后,经过纯化,用纯化后样品对Balb/c小鼠进行免疫,检测其免疫血清中抗RANKL抗体生成情况。检测免疫血清对RANKL诱导RAW264.7细胞分化和增殖抑制作用的影响,以考察抗RANKL抗体的体外中和活性。用RANKL-HBsAg免疫OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型,通过测定和观察骨密度、骨力学参数和骨微结构等来评估RANKL-HBsAg对骨质疏松症的体内治疗效果。结果构建完成了毕赤酵母重组RANKL-HBsAg高拷贝数表达菌株,并通过SDS-PAGE、ELISA、Western Blot电镜和N端测序等手段证实了RANKL-HBsAg得到正确表达并能自发形成病毒样颗粒。菌体样品经过一系列步骤的纯化获得了RANKL-HBsAg。通过对Balb/c小鼠进行免疫,证实RANKL-HBsAg能够诱导机体产生针对RANKL的抗体。免疫产生的抗RANKL抗体能够阻断RANKL诱导的RAW264.7细胞分化和增殖抑制现象。在OPG基因敲除小鼠的治疗实验中,免疫组的骨密度与对照组相比并无显著性差异,而在骨生物力学参数和骨微结构方面有所改善。结论毕赤酵母重组表达的RANKL-HBsAg能够诱导机体产生抗RANKL抗体,所产生的抗体具有针对RANKL的中和活性,能够阻断RANKL/RANK通路。在对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型进行的治疗实验中,部分骨质疏松特征得到改善,其治疗效果还需进行进一步的评估。

关键词： NF-κB受体激活因子乙肝表面抗原毕赤酵母骨质疏松症

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河北省36例抗HIV治疗患者耐药状况分析

河北省36例抗HIV治疗患者耐药状况分析

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：赵宏儒路新利赵翠英李保军陈志强李巧敏刘丽花白广义河北省疾病预防控制中心石家庄市疾病预防控制中心

目的研究河北省HIV/AIDS患者基因的耐药突变情况。方法选取2008年参加抗病毒治疗的HIV/AIDS患者36例,从血浆中提取病毒RNA,运用RT-PCR和套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增HIVpol区基因片段,并对扩增的目的片段进行测序,将测序结果提交We... 详细信息

目的研究河北省HIV/AIDS患者基因的耐药突变情况。方法选取2008年参加抗病毒治疗的HIV/AIDS患者36例,从血浆中提取病毒RNA,运用RT-PCR和套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增HIVpol区基因片段,并对扩增的目的片段进行测序,将测序结果提交Web站点http://***分析耐药性突变。结果在36例HIV感染者/AIDS患者中,有28例发生了主要耐药突变。36例患者中HIV-1亚型分布为:4例CRF01-AE亚型和32例B亚型。并发现TAM突变(M41L、D67N、K70R、L210W)和Q151复合体突变(A62V、V75I、F116Y和Q151M)。病毒耐药结果显示出现了对非核苷类逆转录酶抑制剂类药物(DLV、EFV和NVP)和核苷类逆转录酶抑制剂类药物(3TC、FTC)具有高度耐药性的毒株,及对蛋白酶抑制剂(PI)具有低度耐药性的毒株。结论 36例参加抗病毒治疗的HIV/AIDS患者中,蛋白酶抑制剂突变率和逆转录酶抑制剂突变率分别为27.78%(10/36)和77.78%(28/36)。耐药性严重影响治疗效果,研究结果对指导HIV/AIDS患者的临床用药具有重要的意义。

关键词：艾滋病病毒Ⅰ型耐药检测抗病毒治疗

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禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

引用

第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：杨忠东王石磊许文婷李冬梅上海生物制品研究所第六研究室上海生物制品研究所第四研究室

目的观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫后对异亚型病毒攻击后的保护情况。方法用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免... 详细信息

目的观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫后对异亚型病毒攻击后的保护情况。方法用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免疫雌性BALB/c小鼠,同时分别以H5N1灭活疫苗免疫小鼠以及PBS腹腔注射处理小鼠作对照。采用ELISA方法分别对各组小鼠免疫后血清特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a水平进行检测;以PR8病毒鼻腔攻击后观察小鼠体重变化情况和生存率。结果与PBS处理组相比,无论以何种方式免疫H5N1疫苗,免疫后特异性IgG及其亚类水平均明显升高(t=7.4004,P<0.01),以联合MF59后诱导的特异性抗体水平最高。其中疫苗单独免疫组和联合M59免疫组IgG2a水平升高明显,联合纳米化MF59免疫小鼠后IgG2a水平有所下降,IgG1水平有所升高;联合铝佐剂组以IgG1升高为主。攻毒后各组小鼠体重均出现下降,但疫苗单独免疫小鼠以及疫苗与佐剂联合免疫小鼠于攻毒后期体重恢复接近正常或者正常。PBS处理组小鼠攻毒后全部死亡,佐剂联合免疫组小鼠存活率100%,而疫苗单独免疫小鼠存活率为70%。结论 H5N1疫苗无论是单独免疫或是联合不同佐剂免疫均可诱导较高水平的特异性抗体产生,有非常好的免疫原性。H5N1灭活疫苗诱导的抗体亚类以IgG2a为主,MF59以及纳米化MF59也以诱导IgG2a亚类为主,但纳米化MF59可诱导更均衡的免疫应答。联合铝佐剂或纳米化铝佐剂免疫小鼠后均可诱导以IgG1亚类为主的抗体应答。联合两种佐剂均可对小鼠产生很好的异亚型保护。

关键词：流感病毒A型 H5N1亚型佐剂,免疫流感疫苗 MF59

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两种甲型肝炎病毒抗原检测方法的建立及应用效果

两种甲型肝炎病毒抗原检测方法的建立及应用效果

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：龙润乡谢忠平杨蓉李华白慧珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)ELISA检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab... 详细信息

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)ELISA检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲肝抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素做放大系统建立的HAV-Ag(BA-ELISA)检测法,较双抗体夹心检测方法灵敏度高1-2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论利用生物素标记甲肝抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统,建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法 ,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。

关键词：甲型肝炎病毒 ELISA检测生物素-亲和素检测系统 BA-ELISA

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小动物分子成像技术在病毒性肝炎实验动物模型研究中的应用

小动物分子成像技术在病毒性肝炎实验动物模型研究中的应用

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：詹林盛军事医学科学院野战输血研究所

生物发光和荧光成像作为近年来新兴的活体动物体内光学成像技术,以其操作简便及直观性成为研究小动物活体成像的一种理想方法 ,在生命科学研究中得以不断发展。利用这种成像技术,可以直接实时观察标记的基因及细胞在活体动物体内的活动... 详细信息

生物发光和荧光成像作为近年来新兴的活体动物体内光学成像技术,以其操作简便及直观性成为研究小动物活体成像的一种理想方法 ,在生命科学研究中得以不断发展。利用这种成像技术,可以直接实时观察标记的基因及细胞在活体动物体内的活动及反应。利用光学标记的转基因动物模型可以研究疾病的发生发展过程,进行药物研究及筛选等。目前在体内光学成像示踪主要采用的标记为化学标记物(荧光染料、荧光量子点等),以及生物报告基因标记物(绿色荧光蛋白、萤火虫荧光素酶等)。活体动物光学成像技术能够观察活体动物体内的基因表达和细胞活动,是将分子及细胞生物学技术从体外研究发展到活体动物体内的强有力手段,正在被越来越广泛地应用于生物学研究领域。相对于其他非侵入性观察手段,如CT、MRI,及PET等,生物光学成像技术检测灵敏度极高,且操作简单,费用相对低廉,为研究人员提供了广阔的应用空间。它成功地将最优秀的荧光基因标记技术、成像技术及计算机软件技术完美结合。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据,得到多个时间点的实验结果。相比之下,可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录,跟踪同一观察目标(标记细胞及基因)的移动及变化,所得的数据更加真实可信。

关键词：实验动物模型活体动物光学成像技术分子成像

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