颞叶癫痫是最常见的难治性癫痫类型之一。应用匹鲁卡品诱导的癫痫模型与人类TLE癲痫高度相似,已广泛应用于TLE研究中。癫痫与睡眠障碍密切相关,二者相互促进,常形成恶性循环,在TLE尤为突出。癫痫发作易出现在NREM睡眠期,在REM睡眠期十分稀少。癫痫患者常出现NREM睡眠期延长,REM睡眠期缩短,从而促进癫痫发作。臂旁核是睡眠调节的核心脑结构,损毁MPB会增加动物REM睡眠。本研究主要探讨TLE是否引起内侧臂旁核神经元兴奋性增高,由此缩短REM睡眠,促进癫痫发作。方法本研究首先建立匹鲁卡品小鼠TLE癫痫模型。然后在造模成功后lh和3d制备离体MPB脑片,采用全细胞式膜片钳技术检测MPB神经元内在兴奋性。最后米用免疫荧光染色和Western blot技术检测MPB神经元活动标志c-Fos和反应性星形胶质细胞增生标志物GFAP的表达变化。结果(1)腹腔注射匹鲁卡品成功建立了小鼠TLE模型,最终造模成功率为56%。(2)膜片钳技术检测MPB神经元兴奋性:①动作电位发放数目:与对照组相比,神经元动作电位发放数目EPlh组和EP3d组均显著増多。②动作电位半宽:与对照组相比,EPlh组和EP3d组神经元动作电位半宽均明显变窄。③动作电位最大上升斜率:与对照组相比,EPlh组和EP3d组神经元动作电位最大上升斜率均显著升高。④动作电位最大下降斜率:与对照组相比,EPlh组和EP3d组神经元动作电位最大下降斜率均显著升高。⑤动作电位峰值幅度:与对照组相比,EPlh组和EP3d组神经元动作电位峰值幅度均显著升高。(3)免疫荧光染色检测c-Fos和GFAP蛋白表达:c-Fos阳性细胞数与对照组相比,EPlh组显著增高,EP3d组无明显变化。GFAP阳性染色面积与对照组相比,EPlh组和EP3d组GFAP显著增加。(4) Western blot检测c-Fos和GFAP蛋白表达:c-Fos蛋白表达水平与对照组相比,EPlh组显著升高,EP3d组无明显变化。GFAP蛋白表达水平与对照组相比,EPlh组和EP3d组均显著升高。结论1.匹鲁卡品腹腔注射可以成功诱导出癫痫模型。2.癫痫急性期小鼠内侧臂旁核区神经元兴奋性增强,神经元活动增强,可能与癫痫导致的REM睡眠期缩短有关。3.癫痫急性期小鼠内侧臂旁核区存在星形胶质细胞増生。
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