冷冻保存在体细胞胚胎工程中具有重要的作用,一个成功和可持续的体细胞胚胎发生体系必然包含一个成熟的低温冷冻保存技术体系,它有效地保存了体胚材料的发育潜能,且以最少的量和最低的风险保持保存材料的完整性。冷冻保存操作能否成功的关键是降低保存材料的水含量,使被保存的材料在进入冻存的各个阶段均不形成致命的冰晶。目前针叶树的胚性组织和细胞系,通常采用慢冻法进行冷冻保存(H(?)ggman et al.,2000)。尽管不同的植物有其特定的冻存方法,但是在慢冻过程中都会使用冷冻保护剂和渗透剂进行预处理,然后以0.2-10℃/min到温度(-30℃--40℃)的温度梯度程序降温慢冻组织。在材料被放入液氮后,可以进一步降温保存。冷冻保存的细胞团在实用时,通过以适当步骤快速加温恢复到常温条件下所具有的活力状态,并在适当的培养基上恢复胚性培养。黑云杉胚性细胞利用慢冻法冻存有成功的报道(Klimaszewska et al.1992;Adams et al.1994),Cyr(2000),H(?)ggman et al.(2000)报道了多项涉及针叶树胚性组织冷冻保存技术。
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