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抗肝纤维化中药复方血清药理学研究方法与应用

抗肝纤维化中药复方血清药理学研究方法与应用

引用

第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：刘成海刘平刘成徐列明上海中医药大学肝病研究所

分离培养大鼠肝细胞及星状细胞。扶正化瘀方灌胃正常大鼠制备血清,以不同整体动物口服剂量、药物体内作用时间(取血时间)以及体外不同药物血清浓度温育大鼠肝细胞及星状细胞;或者扶正化瘀方冻干为粉末直接添加于培养细胞。通过观察细胞... 详细信息

分离培养大鼠肝细胞及星状细胞。扶正化瘀方灌胃正常大鼠制备血清,以不同整体动物口服剂量、药物体内作用时间(取血时间)以及体外不同药物血清浓度温育大鼠肝细胞及星状细胞;或者扶正化瘀方冻干为粉末直接添加于培养细胞。通过观察细胞增殖与细胞活力等功能变化,研究不同条件的药物血清对细胞功能的影响,以建立抗肝纤维化的体外给药方法-血清药理学(含药血清药理方法)方法,并将该方药物血清与拆方药物血清作用于培养细胞,观察其对细胞胶原生成与转化生长因子表达的影响等,研究扶正化瘀方的细胞与分子药理机制与组方原理。结果表明选用与细胞来源同种的动物,间隔2h二次给药再1h后取血,并56℃、30min灭活的含药血清能较好地用于抗肝纤维化的体外药理试验。该方药物血清明显抑制不同原因激活的星状细胞增殖,抑制其胶原基因表达与蛋白生成,抑制TGF-β1的基因表达与分泌,阻止细胞的自分泌活化。促进损伤肝细胞功能的功能修复,抑制其异常细胞增殖与胶原生成。提示药物血清这些作用是扶正化瘀方抗肝纤维化的主要细胞分子药理机制。扶正药抑制胶原生成作用较强,化瘀药抑制细胞增殖与活化作用较强,而全方综合效果较好,说明扶正化瘀方作为一个组方整体,具有多位点、多环节的作用特点。

关键词：血清药理学/含药血清肝纤维化肝星状细胞肝细胞细胞增殖胶原基因表达组方

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中药减轻米非司酮药流后出血量多、流血时间长的副作用的研究现状

中药减轻米非司酮药流后出血量多、流血时间长的副作用的研究现状

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：杨露彭成成都中医药大学

米非司酮(RU486)与前列腺素合并应用是一种被广泛认可的药流方法。目前存在的主要问题是流产后阴道出血量偏多,出血时间偏长,并有潜在大出血的危险,且仍存在7%—10%的不完全流产率和失败率。当前对米非司酮的作用和副作用的机理研究已... 详细信息

米非司酮(RU486)与前列腺素合并应用是一种被广泛认可的药流方法。目前存在的主要问题是流产后阴道出血量偏多,出血时间偏长,并有潜在大出血的危险,且仍存在7%—10%的不完全流产率和失败率。当前对米非司酮的作用和副作用的机理研究已较为深入。原因可能是蜕膜组织残留,子宫修复不良,而对纤溶系统的影响和继发宫内感染也起了部分作用。药流后阴道出血属中医“产后恶露不绝”:“堕胎”范畴,目前在中医理论的指导下对用中药治疗药流后阴道出血量偏多,出血时间偏长作了大量临床现察,取得了较好疗效。普遍认为其病因病机主要为“瘀”、兼有“虚”、或“寒”或“热”等特征,其治则相应采取了活血化瘀、益气养血、凉血止血、温经止通等方法。而使用动物模型对该类中药的作用有一些研究,但多集中于对药效的研究,对其作用机理的研究较缺乏。对药效的研究的结果大致有:使子宫平滑肌收缩增加,活血化瘀,补益作用,抗炎作用,促凝血作用,抗早孕作用等。研究中存在与临床更接近的动物模型欠缺,对化瘀的研究有待加强,关键性指标量化程度不够,实验技术不够先进导致对中药作用机理研究不够深入等问题。今后发展的趋势应朝建立更多与临床更相似的动物摸型,加强对本类中药活血化瘀功能的研究,并加强对指标的量化等方面发展。

关键词：中药米非司酮药物流产阴道出血病机治则动物模型

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原发性高血压病人的甘油三酯水平与空腹胰岛素、自由基代谢及凝血/纤溶活性关系的研究

原发性高血压病人的甘油三酯水平与空腹胰岛素、自由基代谢及凝血...

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：郑关毅洪华山王一波陈协兴林志颖江琼韦立新福建医科大学附属协和医院

目的:高血压病人的甘油三酯水平与空腹胰岛素(INS)、自由基代谢及凝血/纤溶活性关系。方法:以未治疗的高血压病人空腹血清甘油三酯(TG)大于1.8mmol/L为Ⅰ组,TG小于或等于1.8mmol/L为Ⅱ组,比较两组的空腹胰岛素(INS),胰岛素敏感指数(ISI... 详细信息

目的:高血压病人的甘油三酯水平与空腹胰岛素(INS)、自由基代谢及凝血/纤溶活性关系。方法:以未治疗的高血压病人空腹血清甘油三酯(TG)大于1.8mmol/L为Ⅰ组,TG小于或等于1.8mmol/L为Ⅱ组,比较两组的空腹胰岛素(INS),胰岛素敏感指数(ISI)及其丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),内皮素(ET)、一氧化氮(NO),血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其抑制剂(PAI)等指标的差异。结果:Ⅰ组的TG、INS、ET、MDA、PAI、GMP-140均高于Ⅱ组,而ISI、NO、SOD、GSH-Px、t-PA均较之为低,均P<0.05或P<0.01。结论:高血压病人伴高甘油三酯血症存在着较胰岛素抵抗,脂质过氧化反应增强,抗氧化酶活性降低,血管内皮细胞功能障碍,血小板活化,纤溶活性降低等现象,重视高血压病人伴高甘油三脂血症的治疗有助于减少其它心血管疾病及其并发症的发生。

关键词：原发性高血压高甘油三酯血症空腹胰岛素自由基代谢凝血与纤溶活性血管内皮细胞

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肝肾宝对5/6肾切除大鼠肾组织细胞外基质的影响

肝肾宝对5/6肾切除大鼠肾组织细胞外基质的影响

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：赵宗江牛建昭杨美娟赵丽云张新雪魏民贲长恩北京中医药大学

目的:研究肝肾宝对5/6肾切除(5/6NT)大鼠肾组织细胞外基质(EMC,extracelluar matrix)如纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白及其基因表达的影响。方法:采用免疫组织化学、原位杂交方法检测5/6NT组织FN、LN、ColⅣ及L... 详细信息

目的:研究肝肾宝对5/6肾切除(5/6NT)大鼠肾组织细胞外基质(EMC,extracelluar matrix)如纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白及其基因表达的影响。方法:采用免疫组织化学、原位杂交方法检测5/6NT组织FN、LN、ColⅣ及LN mRNA、FNmRNA、ColⅣmRNA,并使用TN-8502多功能图象分析系统对FNmRNA、LNmRNA、ColⅣmRNA原位杂交结果进行处理,采用SPSS统计软件统计。结果:正常对照组、假手术组,均未见FN、LN、ColⅣ蛋白及FNmRNA、LNmRNA、ColⅣmRNA阳性反应物。5/6NT组,肾小球固有细胞细胞浆,肾小管上皮细胞浆,见FN、LN、ColⅣ蛋白及FNmRNA、LNmRNA、ColⅣmRNA强阳性黄色反应物。缬沙坦组FN、LN、ColⅣ蛋白、FNmRNA、LNmRNA及ColⅣmRNA阳性反应物减少,与5/6NT组比较,P<0.05;肝肾宝组FN、LN、ColⅣ蛋白、FNmRNA、LNmRNA及ColⅣmRNA阳性反应物明显减少,与5/6NT组比较,P<0.01。结论:肝肾宝下调肾组织FN、LN、ColⅣ蛋白及LNmRNA、FNmRNA、ColⅣmRNA基因表达是防治肾纤维化作用机制之一。

关键词：肝肾宝 5/6肾切除肾纤维化慢性肾衰纤维连接蛋白层粘连蛋白Ⅳ型胶原

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中药三术减肥汤对于单纯营养型肥胖大鼠的减肥疗效观察

中药三术减肥汤对于单纯营养型肥胖大鼠的减肥疗效观察

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：王宇光徐秀荣郑州铁路中心医院B超科

目的:本课题根据中医传统理论,结合现代相关研究,就具有运脾消积法之功效的三术减肥汤对单纯营养型肥胖大鼠血清胰脂肪酶(LPS)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量的影响进行了实验研究,并对该方剂... 详细信息

目的:本课题根据中医传统理论,结合现代相关研究,就具有运脾消积法之功效的三术减肥汤对单纯营养型肥胖大鼠血清胰脂肪酶(LPS)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量的影响进行了实验研究,并对该方剂治疗单纯营养型肥胖的作用机理进行了理论研究。方法:实验选取40 只SD大鼠,雌雄各半,体重45g-55g,随机分为五组,每组8只,对于模型组采用单纯营养型肥胖大鼠的造模方法,每天给予高脂饲料喂食,45天后,缎带实验动物灌服实验药及对照药,30天后检测各组血清LPS、TG、TC、LDL、HDL含量。结果:三术减肥汤高剂量组LPS、TG、TC、LDL较月见草油组明显降低(P<0.05=,HDL明显高于月见草油组(P<0.05),两组比较有显著差异。而三术减肥汤低剂量组与月见草油组比较无明显差异,但从统计学中显示:低剂量组略优于月见草油组有,物LPS、TG、TC、LDL均低于模型空白组(P<0.01),HDL值均高于模型空白组(P<0.01),比较有显著差异。结论:三术减肥汤对血清LPS、TG、TC、LDL、HDL的影响,可以降低LPS、TG、TC、LDL水平,升高HDL水平。从而具有减轻体重,改善血脂水平的异常,对单纯营养型肥胖直到治疗作用。

关键词：胰脂肪酸(LPS) 甘油三酯(TG)胆固醇(TC)低密度脂蛋白(LDL) 高密度脂蛋白(HDL) 运脾消积法三术减肥汤单纯营养型肥胖实验研究

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阿魏酸钠对大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控

阿魏酸钠对大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控

引用

第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：祁明信黄秀榕汪朝阳王勇福建中医学院附属第二人民医院

目的:本研究旨在探讨阿魏酸钠(SF)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控。方法:将SD大鼠双眼随机分成空白对照组、过氧化氢(H2O2)组、吡诺克辛(PS)组和SF组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状... 详细信息

目的:本研究旨在探讨阿魏酸钠(SF)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控。方法:将SD大鼠双眼随机分成空白对照组、过氧化氢(H2O2)组、吡诺克辛(PS)组和SF组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体,使晶状体孵育在300μmol·L-1 H2O2培养液中复制LEC凋亡模型,同时加入终浓度为5 mmol·L-1的SF,置二氧化碳培养箱共同孵育24h。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达并进行比较。结果:(1)正常SD大鼠LEC中Bcl-2和Bax均有表达,Bcl-2表达较Bax表达强。(2)H2O2组Bcl-2表达显著下调,Bax表达显著上调(Ridit检验,P<0.01);Bcl-2/Bax比率下降。(3)与H2O2组比较,SF可明显上调Bcl-2表达,下调Bax表达(P<0.01),Bcl-2/Bax比率上升。(4)PS与SF的调节作用相似,但SF的作用强于PS(P<0.05)。本研究结果表明,SF调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达可能是SF抑制LEC凋亡的分子机制。

关键词：强迫负重游泳心气虚证动物模型血流动力学

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失血性休克-再灌注兔肠粘膜微循环血流量的变化及黄芪的影响

失血性休克-再灌注兔肠粘膜微循环血流量的变化及黄芪的影响

引用

第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：黑子清林世清刘卫峰陈秉学莫利求张辉广州中山大学附属第一医院麻醉科

目的观察兔失血性休克-再灌注肠粘膜微循环血流量的变化,探讨黄芪对其的影响。方法复制失血性休克复苏模型,新西兰大白兔22只随机分为三组,H1组(n=8):应用黄芪注射液20g/kg;H2组(n=6):应用黄芪注射液10g/kg;C组(n=8):应用等量生理盐水... 详细信息

目的观察兔失血性休克-再灌注肠粘膜微循环血流量的变化,探讨黄芪对其的影响。方法复制失血性休克复苏模型,新西兰大白兔22只随机分为三组,H1组(n=8):应用黄芪注射液20g/kg;H2组(n=6):应用黄芪注射液10g/kg;C组(n=8):应用等量生理盐水对照。分别观察放血前、休克中及复苏后的肠粘膜微循环血流量、动脉平均血压、中心静脉压及心率;再灌注60分钟后取回肠末端组织病理切片检查。结果休克再灌注后,各组血压、中心静脉压能恢复至放血前水平(P>0.05),组间比较无差异(P>0.05)。休克再灌注后各时间点肠粘膜微循环血流量:两黄芪治疗组能恢复至术放血前水平(P>0.05);对照组早期能达到一放血前水平(P>0.05),随着时间增加,肠粘膜微循环血流量逐渐降低,至再灌注60分钟,降低至再灌注前水平(P<0.05或P<0.01);三组比较,两黄芪治疗组在再灌注20、30、60分钟后肠粘膜微循环血流量明显高于对照组相应时间点值(P<0.05或P<0.01)。病理结果显示对照组肠粘膜损伤严重,黄芪小剂量组次之,黄芪大剂量组损伤轻。结论失血性休克再灌注肠粘膜微循环在20分钟后处于低复流状态,黄芪能改善失血性休克再灌注肠粘膜微循环血流量,减轻肠粘膜再灌注损伤。

关键词：肠粘膜失血性休克再灌注微循环黄芪

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淫羊藿甙逆转肿瘤细胞恶性表型的实验研究

淫羊藿甙逆转肿瘤细胞恶性表型的实验研究

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：毛海婷张玲刘倩山东省医学科学院基础所

中药单体淫羊藿甙是一种新型的生物反应调节剂和诱导分化剂。为进一步探讨淫羊藿甙抗癌作用机制,我们将淫羊藿甙作用于人高转移肺癌细胞PG,采用MTT、流式细胞术、粘附实验、运动侵袭实验等多种手段进行了检测。结果显示,淫羊藿甙虽直接... 详细信息

中药单体淫羊藿甙是一种新型的生物反应调节剂和诱导分化剂。为进一步探讨淫羊藿甙抗癌作用机制,我们将淫羊藿甙作用于人高转移肺癌细胞PG,采用MTT、流式细胞术、粘附实验、运动侵袭实验等多种手段进行了检测。结果显示,淫羊藿甙虽直接抑瘤作用较弱,但ICA处理48小时后,PG细胞膜流动性有所增加,用药96小时后,膜表面MHC-I类抗原的表达亦有明显升高,其阳性表达率从10.78%上升至37.54%。因此可从两个方面阐述ICA对PG细胞膜的影响。一方面由于PG细胞是实体瘤细胞,经ICA处理后细胞膜流动性的增加可能是诱导细胞分化的结果。另一方面,由于膜流动性的改变,会影响细胞膜上蛋白质的位置,导致细胞膜上抗原决定簇的暴露或掩盖,从而引起细胞免疫原性的改变。高转移的肿瘤细胞往往呈低免疫原性,使肿瘤对机体免疫功能的逃逸更有利于癌转移。因此,提高PG细胞膜流动性,增加膜表面MHC-I类抗原的表达,增强肿瘤细胞的抗原性,从而诱发机体的抗瘤免疫反应可能是ICA影响肿瘤细胞生长、转移能力的作用机制之一。我们的结果也表明,ICA可对PG细胞在LN基质上的粘附率产生影响,当粘附40分钟以上时,药物处理组的粘附率逐渐降低,ICA作用48小时后,侵袭细胞数从470±58.35下降为237±31.61(P<0.01),运动细胞数从520±56.90下降为354±55.81(0.05>P>0.01)。因此推测,ICA可能通过降低肿瘤细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力,逆转肿瘤细胞恶性表型,使之向正常方向分化。上述结果提示,淫羊藿甙作为一种有开发前景的抗肿瘤药物值得进一步深入研究。

关键词：肿瘤细胞胞外基质免疫原性淫羊藿甙 ICA 恶性表型

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负重强迫游泳法建立SD大鼠心气虚证动物模型

负重强迫游泳法建立SD大鼠心气虚证动物模型

引用

第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：姚立程志清唐烨霞吴玉芙龚文波浙江中医学院药学系药理教研室

目的:用控食、负重强迫游泳及大剂量心得安等复合因素建立SD大鼠心气虚证模型。方法:实验全过考是连续按基础进食量进食,每天强迫负重(按大鼠自身重量5%计)游泳至头没入水下10秒钟为耐力极限。实验16天后,第17天起每日灌服心得安溶液(4.... 详细信息

目的:用控食、负重强迫游泳及大剂量心得安等复合因素建立SD大鼠心气虚证模型。方法:实验全过考是连续按基础进食量进食,每天强迫负重(按大鼠自身重量5%计)游泳至头没入水下10秒钟为耐力极限。实验16天后,第17天起每日灌服心得安溶液(4.8mg/ml)2.4mg/100g体重,连续4天。造模结束后,于实验第21天取大鼠测定血流动力学和血浆ANP、cGMP、cAMP,血清sIgA、IgG,MDA、SOD等指标。然后将余下的大鼠作为药物反证组,灌服人参溶液0.5ml/100g体重(含生药1g/ml),连续7天,测定相关指标。结果:造模组血流动力学中的最大心室内压、平均心室内压、心室峰压平均值、发展压平均值、心率、平均dp/dtmax、平均Vpm、平均心室峰压心率等指标均小于正常组(P<0.01)。收缩间期平均值、舒张间期平均值、t-dp/dtmax、等容舒张期时间常数等指标均大于正常组(P<0.01)。cAMP明显低于正常组(P<0.05),SOD值均小于正常组和药物反证组(P<0.01),MDA值均大于正常组和药物反证组(P<0.01)。结论:用控食、强迫负重游泳加心得安等复合因素可以造成符合中医“心气虚证”特点的证候模型。左心室内压的部分指标(平均心室内压、平均Vpm、平均±dp/dtmax、等容舒张期时间常数)可作为动物心气虚模型的诊断依据,SOD、MDA、cAMP、cGMP可作为定性指标。

关键词：强迫负重游泳心气虚证动物模型血流动力学

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三仙汤对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等的实验研究

三仙汤对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等...

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第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：秦腊梅肖永华牛福铃吕浠莹杨春青王硕仁姜良铎北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室

目的研究三仙汤对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等的影响。方法68只3月龄雌性SD大鼠,随机分为7组:空白组、假手术组(Sham)、模型组(OVX)、尼尔雌醇组、三仙汤小剂量组、三仙汤中剂量组、三仙汤大剂量组。给药3个... 详细信息

目的研究三仙汤对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等的影响。方法68只3月龄雌性SD大鼠,随机分为7组:空白组、假手术组(Sham)、模型组(OVX)、尼尔雌醇组、三仙汤小剂量组、三仙汤中剂量组、三仙汤大剂量组。给药3个月后处死。测定各组大鼠左侧股骨密度(BMD);测量大鼠右侧股骨最大载荷(E)和破坏挠度(R);放射免疫法测定大鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平;并测定大鼠最后体重情况和子宫湿重。结果OVX骨密度值显著低于Sham组(P<0.05),三仙中剂量组与OVX相比,骨密度有上升趋势,其他用药各组与OVX组相比,骨密度无明显差异;OVX组较Sham组的最大载荷有下降趋势,三仙中、大剂量组与OVX组相比,其最大载荷有一定的上升趋势,尤以三仙中剂量组较为明显;OVX组破坏挠度的值较Sham组下降趋势明显,但无统计学意义,三仙小、中、大三个剂量组与OVX相比,破坏挠度值显著升高(P<0.05>,三仙中剂量组较尼尔雌醇组破坏挠度值也显著升高(P<0.05);OVX组的E2及孕酮水平显著低于Sham组(P<0.01>,尼尔雌醇组显示一定的促进E2及孕酮水平升高的趋势,而三仙汤各剂量组的E2及孕酮水平与OVX组相比无明显差异;OVX组较Sham组子宫重量显著下降(P<0.001>,三仙各组与OVX相比子宫重量无显著差别,尼尔雌醇组较三仙各组子宫湿重略有上升趋势,但无明显统计学意义;OVX组体重较Sham组显著上升(P均<0.05>,尼尔雌醇组体重较OVX组显著减轻(P<0.001>,同时明显低于三仙各组,差异显著(P<0.001),三仙各组与OVX相比,体重无明显变化。结论尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨密度和骨结构的改善无明显作用,可能主要通过提高去卵巢大鼠雌激素水平来改善骨质疏松症;三仙汤明显增加去卵巢大鼠股骨最大载荷,对最大破坏挠度也具有促进其升高趋势,能够改善去卵巢大鼠骨生物力学性能,对OVX大鼠血清雌二醇与孕酮水平、子宫湿重及体重变化则无明显影响。

关键词：骨质疏松症去卵巢大鼠骨密度骨生物力学雌激素

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